PLoS ONE: geneettisesti koodattu FRET Lactate anturi ja sen käyttö havaita Warburg vaikutus Single syöpäsoluja
tiivistelmä
laktaatti on edestakaisin välillä ja solujen sisällä, pelaa metabolisen ja signalointi rooleja terveen kudoksen. Laktaatti on myös enne muuttunut aineenvaihdunta ja osallistuu patogeneesissä tulehdus, hypoksia /iskemia, neurodegeneraatiota ja syöpä. Monet kasvainsolut osoittavat korkeat laktaatin tuotannon hapen läsnä ollessa, ilmiö joka tunnetaan nimellä Warburg vaikutus, joka on diagnostisia ja mahdollisesti terapeuttisia vaikutuksia. Tässä artikkelissa esittelemme Laconic, geneettisesti koodattu Forster Resonance Energy Transfer (FRET) -pohjaisen laktaatin anturi suunniteltu bakteerien transkriptiotekijä LldR. Laconic määrällisesti laktaatin 1 uM 10 mM, ja ei vaikuttanut glukoosi, pyruvaatti, asetaatti, betahydroxybutyrate, glutamaatti, sitraatti, α-ketoglutaraatin, sukkinaatti, malaatti tai oxalacetate pitoisuuksina löytyy nisäkkään sytosoliin. Ilmaistaan astrosyytit, HEK-solut ja T98G glioomasolujen, anturi sallittu dynaaminen arvio laktaatin tasoa yhden soluissa. Käytetään yhdessä salpaaja monokarboksylaatti kuljettajan MCT, anturi kykeni erotellaan, onko solu on net laktaattia tuottaja tai nettomääräinen laktaatti kuluttaja. Soveltaminen MCT-lohkon protokolla osoitti, että basaalin laktaatin tuotanto on 3-5 kertaa suurempi T98G glioomasoluihin kuin normaalissa astrosyytit. Sen sijaan laktaatin kertymistä vasteena mitokondrioiden inhibition natriumatsidin kanssa oli 10 kertaa pienempi gliooma kuin astrosyytit, sopusoinnussa viallinen kasvaimen aineenvaihduntaa. Suhde välinen laktaatin tuotannon ja nopeus atsidin aiheuttama laktaatti kertymistä, jota voidaan arvioida palautuvasti ja yksittäiset solut, tunnistettiin erittäin herkkä parametri Warburg vaikutus, vastaavasti 4,1 ± 0,5 T98G glioomasoluihin ja 0,07 ± 0,007 ja astrosyytit. Yhteenvetona, tässä artikkelissa kuvataan geneettisesti koodattu anturi laktaatti ja sen käyttö mittaamaan laktaattipitoisuus, laktaatti flux, ja Warburg vaikutus yhdellä nisäkässoluissa.
Citation: San Martín A, Francisco Ceballo S, Ruminot I , Lerchundi R, Frommer WB, Barros LF (2013) geneettisesti kooditettu FRET Lactate anturi ja sen käyttö havaita Warburg vaikutus Single syöpäsoluja. PLoS ONE 8 (2): e57712. doi: 10,1371 /journal.pone.0057712
Editor: Mika Jēkabsons, University of Mississippi, Yhdysvallat