Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tutkimuksen tavoitteena on selvittää, olisiko syövän kantasoluja olemassa pahanlaatuinen ääreishermoston tuppi kasvaimet (MPNST). Solut vakiintuneiden linjat, primääriviljelmissä ja juuri leikellään kasvaimia viljeltiin seerumittomassa olosuhteissa täydennetty epidermaalisen ja fibroblastikasvutekijöiden. Yhdestä vahvistettu ihmisen MPNST solulinjassa, S462, solut täyttävät syövän kantasoluja eristettiin. Klonaaliset aloilla saatiin, joita voitaisiin siirrostettiin useita kertoja. Rikastuminen kantasolun kaltaisia ​​soluja näillä aloilla tukivat myös lisääntynyt ilmentyminen kantasolujen markkereita, kuten CD133, Oct4, nestiinifenotyypin ja NGFR, ja vähentynyttä ilmentymistä kypsän solun markkereita, kuten CD90 ja NCAM. Lisäksi solut näistä klonaalisen S462 pallojen erilaistuneet Schwannin soluja, sileän lihaksen /fibroblastien ja neuronien kaltaisia ​​soluja tietyissä erilaistumista indusoiva kulttuuriset olosuhteet. Lopuksi, ihonalaisen pallojen osaksi immuunivajaisiin nude-hiiriin johti kasvaimen muodostumisen suuremmalla nopeudella verrattuna vanhempien kiinnittyneitä soluja (66% vs. 10% 2,5 x 10

5). Nämä tulokset tarjoavat todisteita olemassaolosta syövän kantasolun kaltaisia ​​soluja pahanlaatuinen ääreishermoston tuppi kasvaimia.

Citation: Spyra M, Kluwe L, Hagel C, Nguyen R, Panse J, Kurtz A, et al. (2011) Cancer kantasolujen kaltaisia ​​soluja Johdettu pahanlaatuiset ääreishermoston Tuppi kasvaimia. PLoS ONE 6 (6): e21099. doi: 10,1371 /journal.pone.0021099

Toimittaja: Andrew Yeudall, Virginia Commonwealth University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 22 joulukuu 2010; Hyväksytty: 20 toukokuu 2011; Julkaistu: 13 kesäkuu 2011

Copyright: © 2011 Spyra et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Näitä tutkimuksia tuettiin osittain avustusta puolustusministeriön neurofibromatosis ohjelman (W81XWH-07-0359 SDR) ja ”Bundesministerium für Bildung und Forschung” (BMBF) (01GM0480 AK). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

pahanlaatuiset ääreishermoston tuppi kasvain (MPNSTs) ovat pehmytkudossarkoomien johtuvat ääreishermojen ja ovat korkeat paikallisen uusiutumisen ja hematogenous etäpesäke [1]. Niiden osuus 10% kaikista pehmytkudossarkoomien. Puolet näistä maligniteettien esiintyä potilailla, joilla neurofibromatoosi 1, kasvainsuppressorigeenin oireyhtymän esiintyvyys on noin 1 in 3000. MPNST, etenkin sellaisten, jotka liittyvät neurofibromatoosi 1, ovat yksi aggressiivinen syöpäsairauksia ihmisillä erittäin huonon ennusteen [2].

tulokset viimeaikaisten tutkimusten mukaan monet pahanlaatuiset kasvaimet sisältävät soluja, joiden ominaisuudet kantasoluja lukien itseuudistumisen, klonaalisuuden multipotenttisuus, ja korkeat kasvainmuodostusta immuunivajaissa hiirillä [3], [4 ]. Kuten alkion kantasolut, syöpä kantasolut oletetaan olevan lääkkeille vastustuskykyiset [5], [6]. Meidän viime kliinisessä tutkimuksessa käyttäen imatinibimesylaatti, tyrosiinikinaasin reseptori estäjä, useilla potilailla, joilla MPNST näytti aluksi lupaavalta vastauksia niiden kasvaimet kutistunut hyvin pieniä sydämiä. Kuitenkin uusiutuminen tapahtui kaikissa tapauksissa ja toistuva kasvaimia ei vastannut alkuperäistä hoitoa enää (julkaisemattomia havaintoja). Mahdollisesti pieni osa kantasolun kaltaisia ​​soluja karannut hoidon ja johti uusiutumisen.

Vaikka syövän kantasoluja on raportoitu ja laajasti tutkittu useita kiinteitä kasvaimia [7] – [9], ne ei ole vielä tunnistettu MPNSTs. Tässä tutkimuksessa testasimme hypoteesia, että MPNSTs sisältävät myös kantasolun kaltaisia ​​soluja, jotka voidaan rikastaa

in vitro

. Kantasolujen kaltaisia ​​soluja yhdeltä vahvistettu ihmisen MPNST solulinjassa, S462, olivat lisäksi tunnettu

in vitro

,

in vivo

ja molekyylirakennetta.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja kasvaimia

diagnoosi neurofibromatoosi 1 tehtiin mukaan National Institute of Health diagnostisten kriteerien [10]. MPNST kasvain (n = 12), plexiform (n = 3) ja ihon neurofibromas (n = 3) saatiin enimmäkseen Kirurginen ja Maxillofacial Kirurginen osastojen University Medical Center Hamburg-Eppendorf ja joitakuita neurofibromatosis Clinic, Munich. Saamisen, Kasvainten hyväksyi paikallinen kistusneuvostolta (Hampuri Ärztkammer, OB-011/07) ja kaikki potilaat kirjallisen suostumuksensa. Heti kirurgisen poiston jälkeen, näytteet pantiin Hanks puskuroidulla suolaliuoksella (Gibco, Paisley, UK). Yksi osa kustakin näytteestä käytettiin vahvistamaan patologinen diagnoosi kasvain (Institute neuropatologian, yliopistollisen sairaalan Hamburg-Eppendorf). Toinen osa on jäädytettiin nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Jäljellä oleva kudos käytettiin soluviljelmässä.

Soluviljely

Solut vakiintuneiden MPNST solulinjojen S462 ja S1507-2 kasvatettiin tavanomaisissa olosuhteissa seerumin kanssa [11]. Dissosiaation viljelemällä soluja vasta resektoitiin MPNSTs olivat kuten aiemmin on kuvattu [11].

rikastaminen kantasolun kaltaisia ​​soluja

Solut vakiintuneiden linjat, primääriviljelmissä ja tuoreiden irronneiden kasvaimia viljeltiin varsi solu olosuhteet kantasolujen väliaineessa (SCM), joka koostuu Neurobasal Medium (Invitrogen, Karlsruhe, Saksa), jossa ihmisen rekombinantti epidermaalista kasvutekijää (EGF, 20 ng /ml, R jos merkittäviä, post-hoc vertailut käyttäen Dunnin testi tehtiin. Kasvu Lisääntyvien solujen lukumäärän ajan analysoitiin käyttäen ei-parametriset toistettujen mittausten ANOVA; jos merkittäviä, post-hoc vertailtavaksi Tukeys n testi suoritettiin. Sama koe suoritettiin vertaamaan lisääntymiseen leviämisen CD133 positiivisia ja negatiivisia aloilla ajan mittaan. Erot suhteellinen määrä cDNA analysoitiin RT-PCR: llä, ja muutokset positiivisten solujen prosenttiosuuden vanhempien kiinnittyneet solut ja aloilla analysoitiin virtaussytometrialla, testattiin käyttämällä ei-parametrista Mann-Whitneyn U-testi. Erot taajuus kasvaimen muodostumisen välillä hiiriin ruiskutettiin tarttuvat solut ja palloja vastaavasti laskettiin Chi-square testi. Kaikki keskiarvoista esitetään keskiarvona ± keskivirhe keskiarvon (SEM). Arvot pidettiin merkittävinä, kun p 0,05.

Tulokset

Sphere muodostumista MPNST soluista

Sen tutkimiseksi, onko MPNSTs sisällä varsi kaltaisia ​​soluja, soluja 2 vahvistettu linjat ja 12 leikataan kasvaimia kasvatettiin seerumittomassa väliaineessa, joka sisälsi EGF: ää ja FGF. Spheres tai pallomainen aggregaatit saatiin kahdessa solulinjassa ja 10 ulos 12 leikattiin tuoreena kasvaimia. Spheres muodostuu alhaisen tiheyden, niin alhainen kuin yksi solu per kuoppa, ja lisätyistä vähintään 20 otteita perustettu MPNST solulinjassa S462. Spheres tai pallomainen aggregaatit saatiin myös toiselta perustettu MPNST linja (S1507-2) ja ensisijaisen MPNST soluista ja juuri leikellään MPNSTs; kuitenkin, he selvisivät vain 2-12 kohtia, eikä sitä voitu saadaan solutihe- alle 100 solua kuoppaa kohti. Vastaavasti, pallot tai pallomainen aggregaatit saatiin myös saatuja primääriviljelmiä plexiform neurofibromas ja ihon neurofibromas, mutta voisi ei voida kuljetettiin enemmän kuin kaksi kertaa. Lisäkokeita siten keskittynyt aloilla S462.

In vitro luonnehdinta MPNST S462 pallojen

Lapsen MPNST S462 solujen passage 35, joka standardiolosuhteissa väliaine olosuhteissa seerumia kasvavat toisissaan kiinni, muodostunut kelluva pallojen jälkeen 2 päivää alle kantasolujen olosuhteissa (Fig. 1A, B; kiinnittyneet S462 solut viittaavat vanhempien S462 solulinja). Solujen lisääntymistä in aloilla osoittivat, että nämä eivät olleet vain aggregaatit (Fig. 2A). Kun nämä ensisijainen palloja hajotettiin ja solut maljattiin erittäin alhainen tiheys kuoppiin 96-kuoppaisella levyllä, toissijainen palloja saatiin 16,7% ± 2,4 ja kuopista, jotka sisälsivät yksittäisiä soluja. Taajuus pallo muodostumisen yksittäisistä soluista lisääntyi, kun pallojen siirrostettiin edelleen (Fig. 2B). Klonaaliset palloja saatiin myös kiinnittyneet S462 soluista hyvin varhaisessa passage 2, jolla on korkeampi taajuus ensisijainen pallo muodostumisen 31.86% ± 2,50, lähes kaksi kertaa niin suuri kuin tarttuneen S462 solujen passage 35. Tähän mennessä MPNST S462 pallot ovat olleet kuljetettiin alle klonaalisia olosuhteissa yli 20 kertaa.

(A) Vanhempien S462 soluja vakio viljelyolosuhteissa seerumilla kasvavat toisissaan kiinni (passage 35). (B) Kelluva toissijainen pallo kahden viikon ajan kantasolujen olosuhteissa ilman seerumia. Pallo oli peräisin yhdestä solusta ja siten oli klonaalinen. Bars = 20 um.

bromideoksiuridiinia sisällyttäminen määritys paljasti leviämisen S462 solujen klonaalisen aloilla (toissijainen aloilla). Lisääntyminen solujen absorbanssi oli merkittävä 8, 10, ja 15 päivää SCM vs. 3 päivää (p 0,01 **). Muutokset taajuus pallo muodostumisen kuopissa, jotka sisälsivät yksittäiset solut kotoisin kiinnittynyt S462, sitten dissosioituu palloja päällystetty yksittäisinä soluina ja siirrostettiin peräkkäin. Kasvu taajuus alalla muodostumisen kasvaessa kulku oli merkitsevä (passage 1 (ensisijainen pallojen) versus käytäviä 10 (10

th palloja) ja 12 (12

th palloja), P 0,01 **, passage 2 ( toissijainen pallot) versus käytäviä 10 (10

th palloja) ja 12

th palloja), P 0,05 *).

Up-regulation kantasolujen merkkiaineiden ja alas säätely kypsä solu merkkiaineiden S462 aloilla

Real-Time PCR paljasti säätely ylöspäin kantasolujen merkkiaineiden nestiinifenotyypin, NGFR, Oct4, Notch4, Sox2, CD133 ja SOX9 in S462 aloilla käytäviä välillä 13 ja 16, verrattuna S462 tarttuvien solujen jatkuvasti SCM viljelyolosuhteissa 14-16 tuntia (Kuva. 3A, vasen). Sen sijaan, EGF-reseptori (EGFR) ja NCAM, markkeri kehittymätön Schwannin soluja, ilmaistiin alemmilla tasoilla S462 aloilla kuin niiden vanhempien kiinnittyneitä soluja (Fig. 3A, oikealla).

(A) Real -Time PCR. Expression kunkin markkerin aloilla normalisoitiin vastaan ​​ilmaus samasta merkkiluettelossa kiinnittyneet S462 soluja. Spheres kanavaissa välillä 13 ja 16. * p 0,05; kiinnittynyt versus pallo transkriptioekspressiokuvio (nestiinifenotyypin, NGFR, Oct4, Sox2, CD133, Sox9, EGFR ja NCAM). (B) virtaussytometrialla. Muutokset prosenttiosuus ilmentävien solujen kypsä ja kantasolujen progenitorimerkkiaineiden sisään tarttuneet solut ja aloilla (kohdat 8 ja 13), CD133 ja NCAM tarttuu versus pallojen p 0,05 *, CD34 ja CD90 tarttuu versus pallojen p 0,01 **, NGFR ja nestiinifenotyypin kiinnittynyt versus pallojen p 0,01 ***. EGFR, epidermaalisen kasvutekijän reseptori; NGFR, hermon kasvutekijän reseptori; NCAM, adheesiomolekyyli.

Virtaussytometria paljasti lisääntyneen ilmentymisen hermostopienasta merkkiaineiden NGFR, CD133 ja nestiinifenotyypin vuonna aloilla verrattuna vanhempien kiinnittynyt S462 soluja (Fig. 3B). Osuus ilmentävien solujen CD34 lisääntyi myös aloilla noin 50%. Lisäksi noin 60% NGFR positiivisen populaation koekspressoidusta-CD133 on kiinnittynyt S462 ja aloilla (66,84 ± 10,82% kiinnittynyt vs. 60,81 ± 12,21% aloilla, ei ole merkittävä), (Fig. 4). Käänteisesti, CD90 ja NCAM ilmaistiin harvemmin S462 aloilla kuin kiinnittyneitä soluja (Fig. 3B).

Side ja sirontamittari analyysi kiinnittyneitä soluja (vasen sarake) ja aloilla (at passage 8, oikea sarake) osoittivat erilaisia ​​soluja. Elävät solut aidatulla R1 (ylempi paneeli), ja gatings varten NGFR (R2) positiivisia soluja (keskimmäinen paneeli) esitetään oranssi. NGFR-positiivisia soluja (edustajat oranssina) sisällä CD133-positiiviset solut osoittavat koekspressoimalla CD133 /NGFR (alempi paneeli). NGFR solujen yhteistyötä ilmentävät CD133 ovat harvinaisia ​​kiinnittyvä solupopulaation ja lisääntyi aloilla. Isotyyppikontrolleja kaikille antigeenejä käytettiin perustaa neljännesten negatiivisten populaatioiden. NGFR, hermokasvutekijäreseptoria.

Korkeampi taajuus S462 pallo muodostumisen ja leviämisen CD133 + soluissa

magneettista helmi-pohjainen lajittelu, me rikastettu CD133 positiivisia ja negatiivisia soluja seerumista -cultured kiinnittyneet S462 soluja (passage 35) 90 ja 80%: lla, ja viljeltiin niitä erikseen SCM alhaisilla solutiheyteen. Enemmän palloja, jotka on muodostettu CD133 + väestön verrattuna CD133- väestöstä (35,21% vs. 18,35%). Lisäksi, solujen CD133 + aloilla lisääntyivät nopeammin kuin ne, jotka CD133- aloilla (absorbanssi 405 nm: ssä 0,7 ± 0,047 versus 0,39 ± 0,0312, p 0,001).

S462 aloilla pystyvät linjaa erilaistumisen

arvioida mahdolliset multilineage-erilaistuminen, kloonaamalla saatu palloja ja kiinnittyneet S462 solujen kulkua 35 olivat molemmat viljeltiin alustassa, joka sisälsi seerumia, joka stimuloi niiden erilaistumista. Kahden tai kolmen viikon kuluessa ilmentyminen S100 havaittiin pieni joukko soluja S462 klonaalinen aloilla, mikä osoittaa linjaa eriyttäminen Schwannin solujen kaltaisia ​​soluja. Sitä vastoin ilmaus tämä merkki ei havaittu kiinnittyneet S462-soluja (tietoja ei esitetty). Enemmän kuin 50% soluista klonaalisen aloilla ilmaistuna nestiinin, kun viljellään seerumia sisältävässä väliaineessa, verrattuna yksikään kiinnittyneet S462-soluja (tietoja ei esitetty).

lisääminen neureguliini ja forskoliinin indusoiman erityisiä erilaistumista S100 + Schwannin solut lähes kaikkien solujen klonaalisen S462 aloilla, mutta vain pieni osa kiinnittyneet S462 solut olivat todella positiivisia S100 ja näytti hiukan eri morfologia (Fig. 5A). Kaksinapaisen morfologia S100 + Schwannin solut erottuvat klonaalinen aloilla (Fig. 5A, D) oli samankaltainen kuin Schwannin solut, jotka ovat peräisin plexiform neurofibrooma (Fig. 5A insertti). Nämä erilaistuneiden solujen välillä klonaalinen aloilla myös ilmaisi Schwannin solujen markkereita neurofilamentti ja NGFR (Fig. 5A), kiinnittyneet solut ilmaistu neurofilamentin, mutta hyvin harvoin NGFR (tuloksia ei ole esitetty).

Adherentit solut (vasen sarake) ja dissosioituneen pallo solut (oikea pylväät) viljeltiin kasvutekijöiden indusoimaan erilaistumista soluihin muistuttava (A) Schwannin solut, (B) SM /Fb ja (C) neuronien, jotka ovat positiivisesti värjätään S100 /NGFR /neurofilamentti (Schwannin solut), SMA ( SM /Fb), ja MAP-2 (neuronien), tässä järjestyksessä. Insert A havainnollistaa S100 + Schwannin solut peräisin plexiform neurofibrooma kulttuuriin. (D) vaihekontrastimikroskoopilla micrographs alkaen erilaistuneita soluja alle 3 viljelyolosuhteissa tuottamaan Schwannin solujen, SM /Fb ja neuroni kaltaisia ​​soluja. Erilaistuneet solut on merkitty nuolilla ja jaksottamattomista soluissa nuolenpäin. Bars = 20 um. NGFR, hermokasvutekijä; SMA, sileän lihaksen aktiini; MAP-2, mikrotubulukseen liittyvä proteiini-2; PNF, plexiform neurofibrooma; LC, kuten-soluja.

Vastaavasti altistus bFGF ja transformoiva kasvutekijä-SS1 indusoi eriytyvät SM /Fb-, kuten solujen suuri osa solujen klonaalisen S462 aloilla, kun taas vain muutama S462 kiinnittyneet solut osoittivat sileän lihaksen aktiinin ilmentymistä ja fibroblastit morfologia (kuvio. 5B, D).

Lisäksi, syklisen AMP: n ja retinoiinihapon indusoi neurogeeninen linjan erilaistumista solujen klonaalisen aloilla, koska ne ilmaistaan ​​MAP-2 ja näytteillä neuroni-spesifinen morfologia, kuten suuri solu elimet ja neuriittien (Fig. 5C, D). Sen sijaan, kun taas tarttuvat solut ilmaisivat MAP-2 samoissa kulttuuriset olosuhteet (Fig. 5C), nämä solut eivät osoittaneet neuroni-kaltainen morfologia.

in vivo luonnehdinta S462 pallo solujen

ihonalaisen 2,5 × 10

5 solujen klonaalisen S462 palloja (n = 9) johti näkyvä kiinteä kasvain muodostuminen 1 3 kuukauden ajaksi injektion 66% nude-hiirten. Sitä vastoin havaittavissa kiinteitä kasvaimia muodostuu vain 10% nude-hiirten (n = 10), kun sama määrä tarttuneiden S462 soluja injektoitiin, tämä kasvain tarvitaan kolmen kuukauden aikana, jolloin muodostuu (Fig. 6A). Histologisesti, kasvaimet sekä tarttuvat solut ja pallojen näytteillä ominaispiirteiden MPNST: karan muotoinen, erittäin proliferatiivisen kuten on esitetty suuri määrä Ki67-positiivisten solujen ja S100 negatiivisia kasvainsoluja (kuvio 6B).

(A) Taajuus ja aika kasvaimen muodostumisen 2,5 × 10

5 kiinni (n = 10, passage 35) tai klonaalisen pallo S462 (n = 9), CD133

+ (n = 9) ja CD133

– (n = 5) subkutaanisesti injektoitujen. Kaikki alalla solut saatiin välillä kohtia 8 ja 13. Adherent vs. aloilla ja tarttuu vs. CD133 + pallojen p 0,05 *. (B) histologia kasvaimia peräisin kiinnittyneitä soluja (vasen paneeli) ja pallo solut osoittivat, että näiden kasvainten muistuttavat MPNSTs. H ja suurempi määrä soluja (5 x 10

6, n = 7) johti näkyviä kasvaimia vain 14% hiiristä ja noin 2 kuukautta injektion jälkeen.

Kun kasvaimia hiiret vastaeroteltujen ja pinnoitettu yksittäisinä solujen kantasolujen viljelyolosuhteet, pyöreä spheres esiintyi kahden päivän kuluessa (Fig. 6C). Näillä aloilla voitaisiin kasvattaa kloonaamalla yli peräkkäisen kohtia. Taajuus alalla muodostumisen solujen kasvaimia kasvatettiin hiirissä oli noin 32%, suurempi kuin kiinnittyneet S462 solujen kanavan 35 (joka oli noin 17%), kun taas verrattavissa kiinnittyneet S462 solujen kanavan 2, joka oli noin 31%.

keskustelu

tässä tutkimuksessa käytimme viljelyolosuhteet optimoitu hermo kantasoluja, että rikastuminen syövän kantasolujen kaltaisia ​​soluja MPNSTs. Onnistuimme saamaan ja rikastaa tällaisia ​​soluja yhdeltä perustettu MPNST solulinjan, S462, ja näin osoittautunut syöpää kantasolujen kaltaisia ​​soluja olemassa MPNST. Kuulat voitaisiin saada yhden MPNST S462-soluja, mikä osoittaa, että ne ovat totta lisääntyvän palloja eikä soluaggregaatit. Spheres saatiin myös ensisijainen S462 at passage 2, joissa on parillinen tiheämmin. Näin ollen on epätodennäköistä, että varsi kaltaisten solujen saimme, rikastunut ja opiskeli ovat artefaktin pitkäaikaisten kulttuuri.

Emme saaneet klonaalinen palloja, jotka voidaan siirrostettiin toisesta MPNST solulinja, useat ensisijainen MPNST kulttuureissa juuri leikellään kasvaimet tai plexiform ja ihon neurofibromas [12]. MPNST kasvaimet ovat kliinisesti, geneettisesti ja histopatologisesti hyvin heterogeeninen [1]. On mahdollista, että vain S462 linja, joka on johdettu hyvin aggressiivinen ja toistuva kasvain, sisältää riittävä osuus kantasolun kaltaisia ​​soluja, jotka ovat kehittymättömät tarpeeksi, jotta muodostuu klonaalisen pallojen valituissa olosuhteissa. Kuulat muusta MPNSTs voitaisiin siirrostettiin korkeampi tiheydet jopa 12 kertaa, mikä osoittaa jonkin verran kantasolujen kaltaisia ​​mahdollisuuksia. Viljelyolosuhteet haimme tässä tutkimuksessa eivät todennäköisesti ole optimaalinen syövän kantasolujen kaltaisia ​​soluja MPNST. Tämä voi heijastua myös vaikeudet pysyvien kulttuureissa tuoreista kasvaimista jopa vakio viljelyolosuhteissa seerumilla ([14].

S462 solut ilmensivät useita kanta- tai esisolujen markkereita, kuten nestiinifenotyypin, NFGR CD133 ja CD34 vaihtelevasti, mikä viittaa siihen, että nämä solut ovat vähemmän eriytetty ja epäkypsä. Expression näiden merkkiaineiden kasvoi merkittävästi vuonna klonaalisia aloilla tukevat hypoteesia, että varsi kaltaisia ​​soluja rikastetaan aloilla. CD133 + S462 pallojen oli suurempi taajuus pallo muodostuminen

in vitro

ja kasvainten muodostumista hiirissä verrattuna CD133- palloja. Tämä merkki siis merkitsee syövän kantasoluja kaltaisia ​​soluja MPNST jossain määrin, mutta ei yksinomaan.

hermostopienan varsi solut on kyky itse uudistaa ja erilaistua useiksi suvusta kuten neuronien, glia, ja myofibroblasteja [15], [16]. Kun läsnä vastaavien kasvutekijöiden, solut MPNST S462 klonaalisia pallojen erilaistuneet solut muistuttavat Schwannin solua, SM /Fb ja neuronien. Tällaiset linjaa eriyttäminen oli paljon vähemmän syvällisiä ja harvinaisempia kiinnittyneet MPNST soluja. Nämä havainnot viittaavat siihen, että erilaistumaton tai dedifferentoituneiden soluja, joilla on suurempi potentiaali erilaistumista kuin erilaistuneita soluja, rikastetaan klonaalisia S462 aloilla. Itse asiassa, CD34, joka on glycophosphoprotein, tavallisesti ilmaistuna kypsä endoteelisolujen, mesenkymaaliset ja hematopoieettisen kantasolujen, ja mikä tärkeämpää hermo kantasoluja on myös lokalisoitu MPNSTs kasvaimia, luultavasti endoneurial fibroblasteissa [17], [18]. Kasvu ilmaus tästä markkeri aloilla osoittaa, että yhä useammat solujen liittyy enemmän erilaistumaton fenotyyppi alla kantasolu käytetyissä olosuhteissa. On myös mahdollista, että hermo kantasolujen viljelyolosuhteiden indusoivat tai edistää erilaistamattomuuden ja S462-soluja tai proliferaation kantasolujen kaltaisia ​​soluja läsnä vanhempien väestöstä.

Self-uusiminen on yksi ominaisuuksista kantasolujen kaltaisia ​​soluja. Lisääntyminen alalla muodostelmassa johtamisella kantasolujen media viittaa siihen, että taajuus kantasolujen kaltaisia ​​soluja sisällä aloilla kasvaa kasvu, kuten olisi odotettavissa, jos nämä viljelyolosuhteet valita varten, tai tukea lisääntyvän leviämisen tai eloonjääminen, varren kaltainen solut. Siksi rikastuminen syövän kantasolujen aloilla ja vähentyneen mittasuhteet erilaistuneita soluja on todennäköinen syy lisääntynyt tuumorigeenisen teho palloja. Mielenkiintoista, kuten nähdään kotimainen MPNST, hiiri-johdettu kasvaimia osoitti jopa mitään ilmentymistä Schwannin solujen erilaistumisen merkki S100.

tulokset tarjoavat todisteita olemassaolosta syövän kantasoluja tai kantasolujen kaltaisia ​​soluja MPNST. Nämä solut kasvavat klonaalinen aloilla useita kohtia alle hermo kantasolujen kulttuuriset olosuhteet, express varsi /kantasolujen merkkiaineita ja aiheuttaa kasvainten muodostumista immunodefisienttien nude-hiiriin oleellisesti korkeammalla taajuudella kuin tarttuneet solut. Opiskelu nämä solut voivat edistää parempaa ymmärrystä biologian ja patogeneesi MPNST ja voi mahdollistaa tunnistamisen erityisiä tavoitteita kehittämiselle hoitomuotojen.

Kiitokset

Haluamme kiittää osastot neurokirurgia, Oncology ja Neuropathology (University Medical Center Hamburg Eppendorf, Hampuri, Saksa) antaa meille mahdollisuuden käyttää tiloja. Erityiset kiitokset menee Dr. H. Guenther (Department neurokirurgian), K. Kluge, A. Schaefer ja C. Horn, (virtaussytometria laitos on Syöpätautien ja hematologian) ja M. Haberkorn (Department neuropatologian) antoi meille tieteellisiä ja teknisiä neuvoja. Olemme myös hyvin kiitollisia professori R. Friedrich, tohtori M. Blessmann (Department of leukakirurgia), professori E. Yekebas ja tohtori M. Bockhorn (Department of Surgery) University Medical Center Hamburg Eppendorf ja Dr. U. Wahlländer -Danek (neurofibromatosis Clinic, Munich, Saksa), tarjoamiseksi kasvain materiaalia.