Krooninen sairaus

Epäsymmetrinen solunjakautumisen tuottaa kaksi tytärsoluksi eri solujen kohtalot. Tämä prosessi on erittäin tärkeää muodostumista ja syövän kehittymisen ja on merkittävää terapeuttista potentiaalia. Täällä tunnistamme pitkäikäisten proteiinien jakamalla soluissa ikääntymisen aikana käyttämällä orastava Saccharomyces cerevisiae. Hiiva äiti solut läpikäyvät rajoitetun määrän epäsymmetrinen rajapintoja, jotka määrittelevät Replikoitumattoman elinikä.

Ensinnäkin? Me rakentaa järjestelmä tunnistaa pitkäikäisten proteiinien. Käytimme vakaa-isotooppi Pulsechase ja koko proteomiin massaspektrometriaa tunnistamaan proteiineja, jotka olivat molemmat pitkäikäiset ja pysyy ikääntymisen äiti soluissa jälkeen? 18 solut osastojen. Havaitsimme? 135 proteiinien Microsoft nimeää pitkäikäinen epäsymmetrisesti säilytti proteiinit (LARPS).

Seuraavaksi ottaa toisen järjestelmän testata ja todentaa pitkäikäisten proteiinien. Koodaus kiinnostavan proteiinin kanssa RITE järjestelmä luo fuusioproteiinia, joka alustavasti esiin proteiini-GFP, sitten läpi estradioli-indusoituvan rekombinaatiotapahtumalla, ilmentää proteiinia-RFP. Kuvan alkuperäinen proteiini on merkitty vihreällä, ja sen jälkeen proteiinit leimataan punainen.

Lopuksi kertyminen joidenkin LARPs peräkkäiset solunjakautuminen voi johtaa tehokkaan annoksen lisääminen proteiinin vanhempien soluissa. Plasmamembraanit LARPs voidaan sekä muutettu ja nousu tasolle peräkkäisten solunjakautumisen

Pitkäikäinen proteiineja edistää ikään liittyvien fenotyyppien ja todennäköisesti olemassa muita organismeja.

PARKIN E3 UB ligaasi mutatoitunut Parkinsonin taudissa (PD) ja ohjaa mitokondrioiden autophagy. PARKIN toimintoja voidaan ohjata ns RING-hect hybridi mekanismi, jossa katalyyttinen Cys jäännös RING2 verkkotunnuksen vastaanottaa UB peräisin E2 ja siirtää sen alustaan. Täällä käytämme määrällisiä proteomiikka ja live-solukuvauksessa leikellä yksittäisiä vaiheita PINK1 kinaasilla PARKIN UB ligaasi mitokondrioiden ohjaus polku epänormaali Parkinsonin taudissa.

PARKIN aktivoitumisen PINK1 tuottaa UB ketjut mitokondrioita, ja PARKIN riippuva ketju kokoonpano vaaditaan kertymistä poly-fosfo-UB on mitokondrioita. Kymmenen-Plex tandem massa koodaus määrällinen proteomic koe paljasti kasvoi 3-kertaisesti p-S65 UB 30 min kuluttua Depolarisaatio in PINK1 + /+ hiiren alkion? Broblasts (MEF).

PINK1 edistää PARKIN yhdessä poly-UB ketjut fosforyloimalla sekä PARKIN ja poly-UB.

UB voi suorittaa ketjun pidennys seitsemän lysiiniä ja N-terminaalin metioniinia, jossa eri kohtalot eri sidos tyyppejä. PARKIN edistää synteesiä kanoninen ja kaanoniin poly-UB ketjut depolarisoituneiden mitokondriot tavalla, joka riippuu sen katalyyttinen Cys ja S65 sen UBL verkkotunnuksen.

Yhteenvetona, otamme valtaa proteomiikka ja analyysi yksittäisiä vaiheita monimutkaisissa fosforylaatio rakentuvassa UB porrastetusti. Se on hyödyllinen ymmärtämisen signalointi-ubiquitylation reittejä tulevaisuudessa.