Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tutkia BRF2 ilmentymisen potilailla, joilla on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) ja tutkia suhdetta BRF2 proteiinia ennusteeseen viittaavia tekijöitä, kasvaimen angiogeneesiä ja ennuste.

Methods

sekä BRF2 proteiinia ja kasvaimensisäisenä mikrosuonten tutkittiin immunohistokemiallisella värjäyksellä 107 ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita. Kasvaimensisäistä m icrovessel tiheys (MVD) mitattiin laskemalla CD-34 positiivista immuno- endoteelisoluissa. Western blot ja RT-PCR-analyysit käytettiin tutkimaan BRF2 ilmentymistilanne kudoksissa

Tulokset

huomattavasti korkeampi BRF2 ekspressio havaittiin NSCLC kudoksissa proteiinipitoisuuden. Lisäksi yhden ja usean analyysi osoitti, että BRF2 proteiini yliekspressio ja korkea MVD liittyi merkittävästi kasvaimen uusiutumisen. Vaikka BRF2 yli-ilmentymisen ja korkea MVD osoitti huono 5 vuoden kokonaiselinaikaa (p = 0,004 ja p = 0,019, tässä järjestyksessä), monimuuttuja-analyysi osoitti, että ainoastaan ​​BRF2 yliekspressio oli itsenäinen ennustetekijä epäsuotuisia kokonaiselinaikaa (P = 0,021).

Johtopäätökset

BRF2 on lupaava biomarkkereiden tunnistamiseen yksilöiden huono ennustetekijöiden potentiaalia ja mahdollinen kohde antiangiogeenisestä potilaille, joilla alkuvaiheen NSCLC.

Citation: Lu M, Tian H, Yue W, Li L, Li S, Qi L, et al. (2014) TFIIB liittyvä tekijä 2 Yli lauseke on ennuste Marker alkuvaiheen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä korreloi tuumoriangiogeneesi. PLoS ONE 9 (2): e88032. doi: 10,1371 /journal.pone.0088032

Editor: Kapil Mehta, University of Texas MD Anderson Cancer Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 22 elokuu 2013; Hyväksytty: 02 tammikuu 2014; Julkaistu: 11 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Lu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Project tuettu National Natural Science Foundation of China (nro 30571844), sekä tieteen ja teknologian kehityksen Foundation Shandongin maakunnassa (nro 2009GG10002007), ja National Natural Science Foundation of Shandong (nro ZR2009CM090), ja Wu Jie Ping Foundation (nro 320.6750.12393). Sponsorit ollut työosuuteensa suunnittelussa, keräämiseen, analysointiin ja tulkintaan tietojen kirjoittamisessa käsikirjoituksen; ja päätös jättää käsikirjoituksen julkaistavaksi. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tietojen keruun ja analysoinnin.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yleisin syy syövän kuolema sekä miehille että naisille kaikkialla maailmassa. Joka vuosi on 1,35 miljoonaa uutta keuhkosyöpää maailmassa [1]. Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) kattaa noin 75-80% tapauksista keuhkosyöpää [2] – [3]. Huolimatta kehitys varhaiseen havaitsemiseen, radikaali hoito toimintaa, ja multimodaalinen hoitomuotojen viime vuosikymmeninä, yleinen 5 vuoden pysyvyys keuhkosyöpään on vain 15% [4]. 30-40% vaiheen I potilaiden relapsi kirurgisen resektion [5]. Lisäksi mahdollinen satunnaistetussa tiedot osoittivat, että adjuvanttihoitoa vaiheessa IB ei ole saavuttanut merkittävää eloonjäämishyötyä ja jopa haitallinen vaikutus havaittiin vaiheessa IA [6]. Siksi on kiireesti tunnistaa uusien biomarkkereiden jotka auttavat valitsemaan potilaita, joilla on suuri mahdollisuus sairastua keuhkosyöpään uusiutumisen ja parantaa ennustetta ja yksilöllistyminen hoitoa.

RNA-polymeraasin (pol) III vastaa transkription pieni, alle 300 nukleotidia, transloitumattoman RNA: t mukaan lukien MikroRNA (miRNA) [7] – [8]. Koska niiden löytö, miRNA on patogeneesiin erilaisten ihmisen syöpien, ja miRNA ilmentymisen profilointi ihmisen kasvaimista on erityisiä allekirjoituksia liittyy diagnoosi, lavastus, eteneminen, ennusteen ja hoitovasteen [9]. Tarkka transkriptio RNA pol III vaatii TFIIIB, kun taas BRF2 (TFIIB liittyvä tekijä 2) on osa TFIIIB. Sääntely pol III on olennainen kasvulle ohjaustoiminnot RB, P53 ja c-Myc, ja TFIIIB toimintaa säätelevät tarkoin Maf1, kemopreventatiivisille aineita, onkogeenien ja tuumorisuppressoreita [10] – [15]. BRF2 on osoitettu olevan erittäin yli-ilmentynyt useissa eri syövissä, mukaan lukien mahalaukun, munuaisten ja melanoomaa syöpien [16] – [17]. Äskettäin, Lockwood et al. todettu, että yli-ilmentyminen BRF2 voisi ajaa ilmentymisen RNA pol III transkriptit, edistää okasolusyöpä kasvaimen kehittymisen, ja BRF2 on tunnistettu uusi linjan-spesifinen onkogeenin keuhkojen okasolusyöpä [18]. Kuitenkin tietojemme mukaan ilmaus BRF2 ja sen korrelaatio ennusteeseen viittaavia tekijöitä ja ennusteeseen kirurgisesti resektoitiin NSCLC ei ole tutkittu.

Tässä tutkimuksessa käytimme immunohistokemiallinen menetelmä tutkia BRF2 proteiinin ilmentymistä kliinisissä NSCLC näytteistä , ja olemme analysoineet suhteisiin BRF2 ilmaisun vaihteleva viittaavia tekijöitä ja potilaan ennustetta. Lisäksi olemme arvioineet riippumattomat ennustetekijöiden jotka vaikuttavat pitkällä aikavälillä säilyttämään NSCLC potilaiden.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

tutkimusprotokolla hyväksyi Ethics hallitusten Qilu sairaalan ja kudosnäyte hankinta toteutettiin mukaisesti institutionaalisten ohjeiden. Kaikki koehenkilöt allekirjoitettu kirjallinen lupa, ja tämä lupamenettely on hyväksynyt eettinen johtokuntien Qilu sairaalan.

Potilaat

Näytteet saatiin 107 potilasta, joilla oli diagnosoitu NSCLC välillä tammikuu 2004 ja lokakuu . 2006 laitoksella Torakaaliikirurgia, Qilu sairaalan ja käsiteltiin keuhkojen lobectomy plus alueellisen imusolmuke leikkelyn.

Kaikki potilaista ei ollut ennen leikkausta sädehoitoa tai kemoterapiaa, ja ei ollut etäinen etäpesäkkeitä. Tiedot niiden viittaavia tekijöitä ja seuranta olivat täydellisiä. 46 tapausta vierekkäisten kudosnäytteet otettiin noin 0,5 cm: n päähän ulkoreunasta keuhkojen kasvain kudoksia, ja toinen 32 tapauksessa otettiin yli 5 cm kasvaimen raja normaalien keuhkojen kudoksiin negatiivisina kontrolleina. RT-PCR ja Western blotting-analyysi, 12 pareittain kasvainten kudosten ja viereisen noncancerous kudosnäytteet saatu keuhkojen lobectomy yksilöihin potilailla diagnosoitu NSCLC heti leikkauksen jälkeen välillä syyskuu 2013 ja lokakuu 2013 meidän osastolla, ja säilytettiin -80 ° C.

kaikille potilaille, histologinen tyyppi ja arvosana syövän solujen erilaistumisen olivat uusia arvioita, määritettiin luokittelujärjestelmän Maailman terveysjärjestön muutettiin vuonna 2004, ja postsurgical patologinen lavastus määritettiin perustuu kansainväliseen lavastus järjestelmää.

immunohistokemia

Kaikki näytteet kerättiin leikkauksen aikana, vahvistettu 10% formaliinia ja upotettiin parafiiniin. Kudokset leikattiin kuin 4 um leikesarjojen, ja sitten parafiini käyttäen ksyleeniä ja nesteytyksestä kautta etanoli sarja vettä. Korkean lämpötilan antigeenin haku suoritettiin sitraattipuskurissa 25 minuuttia mikroaaltouunissa. Sitten endogeeninen peroksidaasi-entsyymin aktiivisuus estettiin käyttämällä 3% H

2O

2 metanolissa 20 minuutin ajan huoneen lämpötilassa. Levyjä inkuboitiin sitten ensisijainen kanin anti-BRF2 polyklonaalista vasta-ainetta (Abcam) ja kanin anti-CD34 monoklonaalinen vasta-aine (Santa Cruz Biotechnology), yön yli 4 ° C: ssa erittäin kosteassa kammiossa, minkä jälkeen inkuboitiin 30 min 37 ° C: ssa biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineet ja streptavidiini-peroksidaasi-kompleksi. Lopuksi 3,30-diaminobentsidiinitetrahydrokloraattia lisättiin, ja levyt vasta- värjättiin hematoksyliinillä ja kiinnitettiin neutraalilla balsamia. Negatiivisia kontrolleja varten leikkeitä inkuboitiin PBS: llä sijasta primaaristen vasta-aineiden.

arviointi BRF2 proteiinin ilmentymisen ja mikroverisuonitiheys

BRF2 värjäyksen alue diagnostiikassa teki kolme riippumatonta tarkkailijat ja toistettavissa semikvantitatiivinen menetelmä, joka pidetään molemmat värjäyksen intensiteetti (0, negatiivinen, 1, heikko; 2, kohtalainen ja 3, voimakas) ja prosenttiosuus positiivisesti värjättyjen solujen (0, 0-5%, 1, 6-25 %, 2, 26-50%, 3, 51-75%, 4, 76%) hyväksyttiin [19]. Arviointiin positiivisen värjäytymisen BRF2, vähintään 3 osia tai alueita kustakin näytteestä olisi laskettava. Ristiriitaiset tulokset ratkaistiin valitsemalla arvon johdonmukainen kahden tarkkailijaa tai antamien pisteiden keskiarvoon.

kasvaimensisäisenä mikroverisuonitiheys (MVD), pienten verisuonten kirjattiin laskemalla CD34 positiivisesti värjätään endoteelisolujen kuten descripted aiemmin [20]. Pienten suonten count (MVC) määritettiin itsenäisesti kaksi patologeja kussakin tapauksessa. Kolme edustavalla tiheä uudissuonittumisen valittiin matalan mikroskoopin teho (x 10 objektiivilinssin ja × 10 silmän linssi) ja sitten alusta laskettiin korkeammalla suurennoksella (× 20 objektiivilinssin ja × 20 silmän linssi). Keskiarvo lasketaan kolmella alalla kirjattiin. Suuria aluksia paksut, lihasten seinät jätettiin pois.

Kynnysarvo korkean ja matalan ilmentyminen määritettiin perustuu heterogeenisyys arvo mitattiin log-rank tilastollinen analyysi nähden kokonaiselossaoloaikaa [21]. Värjäytyminen indeksin 4 valittiin cutoff pisteen syrjiä BRF2 matala ja korkea ilmaisun. Ja värjäytyminen indeksin score≥4 määritelty kasvainten korkea BRF2 ilme ja värjäys indeksin 4 merkitty alhainen BRF2 ilme. Kasvaimista mikrosuonten ≥42 luokiteltiin korkea MVD, kun taas kasvaimissa, joissa pienten verisuonten 42 luokiteltiin alhainen MVD.

Reaaliaikainen PCR (RT-PCR) B

Kirurginen näytteitä käsiteltiin heti jälkeen. Yhteensä RNA: t uutettiin kudoksista käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, USA) valmistajan protokollan ja käsiteltiin RQ1 RNaasi-vapaata DNaasia (Promega) cDNA syntetisoitiin. Ilmaukset BRF2 ja HIF-1α kvantitoitiin reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) käyttäen Bio-Rad iQ5 reaaliaikainen PCR järjestelmä EvaGreen Supermixiä (Bio-Rad, Hercules, USA) mukaan käyttöohjeen. Aluke GAPDH ja BRF2 ovat seuraavat: GAPDH, forward,5′-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3′,reverse,5′-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-3′;BRF2,forward,5′-GTGAAGCTCCTGGGACTGGAT-3′,reverse, 5′-GTATTTGGCTGGCACAGAAGG-3 ’; Tulokset ovat keskiarvo ± keskivirhe keskiarvon (SEM) 3 toistetuista kokeista ja GAPDH käytettiin referenssinä transkriptio.

Western blotting-analyysi

tuoreet kudokset pestiin kolme kertaa jääkylmällä fosfaatti puskuroitua suolaliuosta (PBS) ja lysoitiin jäässä RIPA (radioimmunosaostuskoe) puskurissa (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), joka sisälsi täydellisen proteaasi-inhibiittoriseosta (Roche Applied Science, Mannheim, Saksa). Proteiini kudoksista tai soluista erotettiin SDS-PAGE: lla ja siirrettiin PVDF-kalvolle (GE Healthcare, USA). Membraanit blokattiin 5% rasvattomalla maitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, joka sisälsi 0,1% Tween-20 (TBST) 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa, kalvot inkuboitiin sitten yön yli 4 ° C: ssa anti-BRF2 (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA), tai anti-GADPH (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) vasta-aineita. Seuraaja anti- kani piparjuuriperoksidaasi konjugoitu IgG, ECL kit (GE Healthcare, USA) käytettiin havaitsemiseen.

Tilastollinen

Chi-square testiä käytettiin testaamaan korrelaatio BRF2 ilmaisun ja MVD ja assosiaatioita BRF2 ilmaisun tai MVD ja kliinis tekijöistä. Kaplan-Meier-menetelmää käytettiin laskettaessa eloonjäämiskäyrät, ja log-rank-testiä käytettiin vertaamaan ero jäänteitä potilaiden alaryhmissä. Coxin monimuuttuja regressioanalyysiä käytettiin tunnistamaan merkittäviä itsenäisiä ennustavat tekijät. Erot ryhmien välillä pidettiin merkittävinä P-arvo 0,05. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS 13.0 tilasto-ohjelmalla (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Tulokset

BRF2 ilmaisun NSCLC

Olemme havainneet ilmaus BRF2 proteiinia normaalissa keuhkojen kudoksia, viereisen ei-kasvain kudosten ja kasvainten kudokset immunohistokemiallisesti. Kuten on esitetty kuviossa. 1 A, diffuusi tumavärjäystä on BRF2 proteiinin eri intensiteettejä havaittiin syöpäsolujen, mutta BRF2 oli tuskin havaittiin normaalissa keuhkojen kudoksia. Lisäksi jotkut värjäytyminen havaittiin sytoplasmassa syöpäsoluja. Emme kuitenkaan havaittu tilastollisesti merkitseviä korrelaatiota BRF2 proteiinin ilmentymisen ja kaikki kliinis-NSCLC kudosten (P 0,05, taulukko 1). Keskiarvo BRF2 ilmentymisen 107 NSCLC kudoksissa oli 55.14%, huomattavasti korkeampi kuin viereisissä kudoksissa ja normaali keuhkojen kudoksia (36,96%, ja 34,38%: lla, P = 0,034 taulukko 2).

(A ): ilmaisu kuvio BRF2 keuhkosyövässä kudoksissa. (A) Korkea BRF2 ilmaisun keuhkoadenokarsinooma. (B): Korkean BRF2 ilmentyminen keuhkoissa okasolusyöpä kudoksiin. (C): Negatiivinen BRF2 ilmentyminen keuhkoadenokarsinooma. (D): Negatiivinen BRF2 ilmentyminen keuhkoissa okasolusyöpä kudoksiin. (E): kasvaimensisäisenä mikrosuonten värjättiin ruskeana anti-CD34 monoklonaalinen vasta-aine keuhkosyöpä kudoksissa (suurennos x 400). (B): Quantitative real-time PCR analyysejä BRF2 mRNA kahdessatoista pareina NSCLC ja noncancerous kudoksiin GAPDH latauskontrollina molemmissa paneelit. (C): Proteiini tasot BRF2 ilmentymisen arvioitiin western blottauksella välillä pariksi noncancerous kudoksesta ja NSCLC.

tutkimiseksi tilan BRF2 geeniekspression NSCLC, käytimme Real -Aika PCR mitata mRNA ilmaisun 12 paria ensisijainen syöpäkasvainten ja viereisen noncancerous yksilöitä. Verrattuna niiden vieressä noncancerous yksilöitä, 8 12 NSCLC oli sääteli ilmentymisen (Fig. 1 B ja Fig. 1 C). Johdonmukaisesti, western blot-analyysi osoitti, että 8 tapausta oli myös korkeampi BRF2 proteiinin ilmentymisen kuin viereisten kudosten.

korrelaatio MVD ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä NSCLC

kasvaimensisäisenä MVD kvantifioitiin laskemalla CD34-positiivisten endoteelin solut syöpä kudoksiin (Fig. 1A), ja värjäytymisintensiteettiä MVD vaihtelivat laajasti 12-118 mikrosuonten /200-kertainen suurennus kenttään. Huomasimme, että MVD korreloi merkitsevästi invaasio syvyys (P = 0,013), mutta ei muiden ennusteeseen viittaavia tekijöitä NSCLC (P 0,05, taulukko 1).

yhden ja usean eloonjääminen analyysi

Niistä 107 potilasta, 53 (49,5%) tapauksista kuolivat 5 vuoden käytön jälkeen, ja kasvaimen uusiutumisen kehittyi seurannan aikana 57 (53,3%) potilaista. Kaplan-Meier analyysit verrattiin log-rank-testiä käytettiin laskettaessa vaikutusta ennusteeseen viittaavia tekijöitä eloonjäämiseen ja taudista vapaan eloonjäämisen. Univariate analyysi osoitti, että korkea MVD (40,0% vs. 63,8%; p = 0,019) ja BRF2 proteiinin yli-ilmentymisen (39,0% vs.64.6%; P = 0,004) merkitsevästi ennustettu pieneni 5 vuoden pysyvyys. Lisäksi korkea MVD (65,0 vs. 38,3%; p = 0,008) ja BRF2 proteiinin yli-ilmentymisen (62,7% vs. 41,7%; p = 0,006) osoitti suurempi riski toistumisen (Fig. 2); Lisäksi monimuuttujamenetelmin tunnistettu BRF2 yliekspressio (P = 0,036) ja MVD (P = 0,034) itsenäisinä ennustavat tekijät ilman taudin etenemistä. Kuitenkin vain BRF2 yliekspressio säilyttänyt sen merkitys itsenäisenä ennustetekijä yleistä sekä ilman taudin etenemistä (P = 0,021, taulukko 3 ja taulukko 4).

tutkia korrelaatio BRF2 yli-ilmentymisen kanssa MVD, me tutki vielä selviytymisen eroja potilaiden ositettu matala MVD ja korkea MVD mukaan BRF2 proteiinin ilmentymisen tila. Potilaille ilman BRF2 yliekspressio, havaitsimme erittäin merkittävä huonompi yleistä (OS) ja Tautivapaa elinaika (PFS), vastaavasti, jos potilaalla on korkea MVD verrattuna potilaisiin, joilla on alhainen MVD (P = 0,003 OS ja P = 0,001 PFS, taulukko 5). Kuitenkin, ei ollut merkittäviä eroja eloonjäämisen välillä matalan MVD ryhmä ja korkea-MVD ryhmän potilailla, joilla BRF2 yliekspressio (P 0,05, taulukko 5). Ja tilastollinen analyysi osoitti, että oli merkitsevästi enemmän MVD kasvaimissa BRF2 proteiinin korkea ilmentyminen kuin niillä, joilla BRF2 proteiinin alhainen ilmentyminen (P 0,001, U-testi, Fig. 3).

Mann- WhitneyUtest osoittaneet, että kasvainten BRF2 proteiinin korkea ilmentymisen osoittivat merkittävästi korkeampia kasvaimensisäisenä MVD kuin kasvaimista BRF2 proteiinin alhainen ilmentyminen (P 0,001).

edelleen analysoineet ennustetekijöiden merkitystä BRF2 proteiinin valikoivaa potilasalaryhmissä ryhmiteltynä histologian tyypin NSCLC. Univariate analyysi osoitti, että koko 5 vuoden pysyvyys sairastavien potilaiden BRF2 proteiinin korkea ilmentyminen oli merkitsevästi alhaisempi kuin muut potilaat joukossa okasolusyöpä, ja löysimme myös tällainen suuntaus on adenokarsinooma, vaikka tilastollinen analyysi ei ole järkevää ; (P = 0,007 ja P = 0,130, respectly; Fig. 4).

(a): okasolusyöpä. (B): adenokarsinooma.

Keskustelu

Kyky lisääntyä hallitsemattomasti on hallitseva ominaisuus monien syöpien soluja. Arviointi molekyyli ennustetekijöiden on yksi tärkeä alue syöpätutkimukseen. BRF2 proteiinia koodaa geeni, joka sijaitsee kromosomissa 8p12 [22]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että BRF2 yliekspressoituu useiden syöpätyyppien [23], ja ehdottaa onkogeeninen rooli BRF2. Kuitenkin vain harvat tutkimukset ovat tutkineet ilmaisun ja merkityksen BRF2 NSCLC, erityisesti ennusteeseen NSCLC.

Tässä tutkimuksessa tuloksemme osoittivat, että ei ollut olemassa merkittävää korrelaatiota BRF2 ilmaisun ja kliinis-NSCLC (p 0,05). Kuitenkin korkea MVD oli merkitsevästi yhteydessä T asema NSCLC, mutta ei liittynyt ikä, sukupuoli, tupakointi, histologian ja erilaistumista. Tietyssä määrin, T vaihe on kriittinen prosessi kasvainten kehittymiseen, ja ero korrelaatio MVD ja kliinis voi heijastaa että mikroverisuonitiheys on tärkeä osa kasvaimen kehitystä. Emme kuitenkaan löytäneet mitään merkittävää eroa BRF2 ilmaisun välillä keuhkojen adenokarsinooma ja keuhkon okasolusyöpä immunohistokemiallisella värjäyksellä.

On huomattava, tuloksemme osoittivat, että BRF2 proteiini yli-ilmentyminen oli yleinen varhainen NSCLC kudoksissa ja merkittävästi liittyy lisääntynyt angiogeeninen aktiivisuus mitattuna kasvaimensisäistä MVD, mikä viittaa siihen, että BRF2 on ratkaiseva merkitys NSCLC tuumorigeneesiin induktio tai /ja edistäminen kasvaimen angiogeneesiä. Vaikka useita kasvutekijöitä on osoitettu säädellä angiogeneesiä ja verisuonten kehitys, tiedetään vähän monimutkainen sääntely mekanismi geenien ilmentymisen ja käännös [24]. Tuloksemme korostavat mahdollista roolia BRF2 kasvaimen angiogeneesiä.

selviytyminen analyysi osoitti, että korkea MVD ja BRF2 proteiinin yli-ilmentymisen merkittävästi ennustettu pieneni 5 vuoden pysyvyys ja korkeampi toistumisen korko. Tarkempi analyysi käyttäen Coxin regressiomallin vahvistaneet BRF2 ilmaisun ja MVD olivat riippumattomia tekijöitä ennustavat ilman taudin etenemistä varten pienisoluista keuhkosyöpää, mikä viittaa siihen, että BRF2 proteiinia ja MVD saattavat olla mahdollisia ennustavat tekijät uusiutumisen alkuvaiheen pienisoluista keuhkosyöpää. Kuitenkin Monimuuttuja-analyysissä vain BRF2 ilmaisu voi itsenäisesti ja merkittävästi ennustaa yleistä 5 vuoden pysyvyys, vaikka havainto, että korkea MVD oli merkitsevästi yhteydessä kasvaimen uusiutumisen. Tuloksemme osoittivat, että BRF2 yliekspressio oli ylivoimainen vaikutus OS ja PFS, kun MVD osoitti merkittävää vaikutusta OS ja PFS vain potilailla, joilla ei BRF2 yli-ilmentymisen.

Yhteenvetona tietomme tukevat oletusta, jonka BRF2 proteiini yliekspressio on yleistä alkuvaiheen NSCLC ja korreloi merkitsevästi kasvaimen angiogeneesiä ja uusiutumisen. Lisäksi BRF2 yliekspressio on riippumaton ennustetekijä varten pienisoluista keuhkosyöpää.