Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoitteena nykyisen oli tutkia ekspressiokuvion ja kliinis merkitys MTA3 potilailla, joilla on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC). Ilmaisu profiilia MTA3 NSCLC kudoksissa ja viereisten noncancerous keuhkokudokset havaittiin immunohistokemiallisesti. MTA3 oli yli-ilmentynyt 62 108 (57,4%) ihmisen keuhkosyöpä näytteitä ja korreloi p-TNM (p 0,0001), solmukohtien etäpesäkkeitä (p = 0,0009) ja huonoon ennusteeseen (p 0,05). Lisäksi ehtyminen MTA3 ilmaisun pieniä häiritseviä RNA: ita inhiboi solun kasvua ja pesäkkeiden muodostumista A549 ja H157 keuhkosyövän solulinjat. Lisäksi MTA3 ehtyminen aiheuttama solusyklin pysähtymisen G1 /S rajan. Western blotting -analyysi osoitti, että pudotus on MTA3 vähensi proteiinin tasot sykliini A, sykliini D1 ja p-Rb. Nämä tulokset osoittavat, että MTA3 tärkeä rooli NSCLC etenemiseen.

Citation: Li H, Sun L, Xu Y, Li Z, Luo W, Tang Z, et al. (2013) yli-ilmentyminen MTA3 korreloi syövän etenemisen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 8 (6): e66679. doi: 10,1371 /journal.pone.0066679

Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu ”, Italia

vastaanotettu 24. marraskuuta 2012 Hyväksytty: 09 toukokuu 2013; Julkaistu: 19 kesäkuu 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (nro 30972967) ja Erikoistunut Research Fund tohtorikoulutuskeskukseen korkeakoulutusalueen (nro 20092104110018) ja ohjelma Liaoningin Erinomainen Talents in yliopistossa. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yksi johtavista syistä kaikkien syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti ja sen esiintyvyys on kasvussa [1], [2]. Suurin osa diagnosoitu keuhkosyöpä tapauksissa ovat ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLCs). Vaikka kolme hoitomuodot (kirurgisia resektio, kemoterapiaa, ja sädehoitoa) on vahvistettu, pitkän aikavälin selviytyminen keuhkosyöpäpotilaiden on edelleen yleisesti huono [3]. Monimutkaiset geneettisten, epigeneettiset ja microenvironmental tekijät tärkeitä rooleja selviytymisen ja kolonisaatio kasvainsolujen at uuteen paikkaan [4], [5]. Parannuksia ymmärtää molekyylitason prosessien keuhkojen syövän synnyn on johtanut uusia hoitovaihtoehtoja pienten molekyylien kanssa hoito- ja rokotteet osoittavat rohkaisevia potentiaalia. Parempaa määrittelyä keuhkosyöpään synnyssä, hyödyllisiä biomarkkerit ja uudet terapeuttiset tavoitteet ovat vaativia tehtäviä.

MTA3 alunperin löytyi jäsenenä pienen proteiinin perhe (mukaan lukien MTA1, MTA2 ja MTA3), jotka kaikki toimivat alayksiköt Mi-2 /Nurd kromatiiniin remodeling kompleksin [6] – [13]. Raportit MTA3 ihmisen syöpiä aivan aluksi rajoitettava. MTA3 raportoitiin osallistua B-lymfosyyttien kehitys, plasmasytoomasolulinjat, yliekspressio BCL6 ja MTA3 vaimentua plasman solujen erilaistumista geenejä [14]. Sittemmin, ilmaus MTA3 on havaittu vähennetään rintasyöpä, kohdun limakalvon syöpä ja munasarjasyöpä [15] – [17]. MTA3 ylössäätely estää EMT suoraan tukahduttaa

Snail

ilmaisua siten gisia E-kadheriinin proteiinin tasot rintasyövän [13]. MTA3 myös tukahduttaa Wnt4 transkriptiota ja eritystä, inhiboimaan Wnt-kohdegeenien nisäepiteelisoluissa [18]. Tuoreessa tutkimuksessa todettiin, että MTA3 helpottaa G2 /M etenemisen lisääntyvissä hiiren granuloosasoluja [19]. Lisäksi MTA3 raportoitiin itsenäisenä ja epäsuotuisa ennustetekijöiden merkki kohdun kuin endometriod karsinooma [20]. Nämä tutkimukset ovat osoittaneet eri tehtäviä MTA3 erilaisissa ihmisen syövissä. Kuitenkin proteiinin ilmentymistä MTA3 perusterveydenhuollossa keuhkosyöpää ja sen suhde kliinis tekijöitä ei ole tutkittu. Siksi biologiset roolit MTA3 keuhkojen syöpäsolut ovat vielä epäselviä. Jotta edellä mainittuihin kysymyksiin, tutkimme MTA3 proteiinin ilmentymistä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä kudoksia immunohistokemiallisesti. Lisäksi selvitimme yhdistys MTA3 soluproliferaatioon useissa keuhkosyövän solulinjat.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

Tutkimus suoritettiin hyväksynnän paikallisen Institutional Review board on China Medical University. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ja kaikki kliiniset tutkimukset tehtiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistus. 108 tapausta NSCLC näytteitä saatiin ensimmäinen Affiliated sairaala China Medical University aikana 2005 2008. histologiseen diagnoosiin ja luokan kasvaimen erilaistumiseen määriteltiin läpi arvioinnin hematoksyliinillä ja eosiinilla värjätään kudosleikkeiden, mukaan luokituksen ohjeiden Maailman terveysjärjestö. Kaikki 108 näytteet arvioitiin uudelleen suhteessa niiden histologinen alatyyppi, erilaistumista tila, ja kasvaimen vaiheissa. Sillä NSCLC näytteitä, levyepiteelisyöpä ja adenokarsinooma havaittiin 44 ja 64 108 tapausta, vastaavasti. Imusolmukemetastaaseja havaittiin 43 potilaalla. P-TNM pysähdyspaikan järjestelmä International Union Against Cancer (seitsemäs painos) käytettiin luokitella yksilöitä vaiheittain I (n = 47), II (n = 36), III (n = 25).

solulinjat

A549 ja H157 solulinjat saatiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Soluja viljeltiin RPMI 1640: ssä (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), joka sisälsi 10% vasikan sikiön seerumia (Invitrogen), 100 IU /ml penisilliiniä (Sigma, St. Louis, MO, USA), ja 100 ug /ml streptomysiiniä ( Sigma). Soluja kasvatettiin steriili kudosviljelymaljoihin ja siirrostettiin välein 2 päivää käyttäen 0,25% trypsiiniä (Invitrogen).

immunohistokemia

Kirurgisesti leikattiin kasvain näytteet kiinnitettiin 10% neutraaliin formaliiniin, valettiin parafiiniin ja 4 um: n paksuisia leikkeitä valmistettiin. Immunovärjäys suoritettiin käyttämällä avidiini-biotiini-peroksidaasi-kompleksin menetelmä (Ultra Sensitive TM, Maixin, Fuzhou, Kiina). Osat poistettiin parafiini ksyleenillä, rehydratoitiin asteittai- sessa alkoholisarjassa ja keitettiin 0,01 M sitraattipuskurissa (pH 6,0) 2 minuutin ajan autoklaavissa. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin käyttämällä vetyperoksidia (0,3%), jota seurasi inkubointi vuohen normaalia seerumia voidaan vähentää ei-spesifisen sitoutumisen. Kudosleikkeet inkuboitiin MTA3 kanin polyklonaalinen vasta-aine (1:150 laimennos) (Proteintech, Chicago, IL, USA). Hiiren immunoglobuliinin käytettiin negatiivisena kontrollina. Värjäämällä kaikki primaaristen vasta-aineiden suoritettiin huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Biotinyloitu vuohen anti-hiiri-seerumin IgG, tai biotinyloitu vuohen anti-kani-seerumia IgG (ready-to-use) (Maixin, Fuzhou, Kiina) käytettiin sekundaarisena vasta-aineita. Pesun jälkeen leikkeitä inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-konjugoitua streptavidiinia-biotiini, jota seuraa 3,3′-diaminobentsidiinitetrahydrokloridilla kehittää Peroksidaasireaktio. Counterstaining jaksoissa tehtiin hematoksyliinillä, ja sitten etanoli dehydraatio suoritettiin ennen asennusta.

Kaksi itsenäistä tutkijat tutki kaikki kasvain dioja satunnaisesti. Viisi näkemyksiä tutkittiin kullekin levylle ja 100 solua havaittu per view 400 x suurennus. Immunovärjäystä MTA3 pisteytettiin puoliksi Paljousosuusmenetelmää arvioimalla edustavilla kasvaimen alueilla suurempi intensiteetti ja solujen prosenttiosuus Immunovärjäyksen kuin kontrolli soluja. Tumavärjäystä kasvaimen solut pidettiin positiivisena immunovärjäyksellä. Intensiteetti MTA3 tumavärjäystä myös pisteytettiin 0 (ei värjäystä), 1 (heikko), tai 2 (merkitty). Prosenttiosuus pistemäärät määrätty 1 (1-25% positiivinen), 2 (26-50%), 3 (51-75%), ja 4 (76-100%). Tulokset Kunkin kasvaimen näytteen kerrottiin antamaan lopullinen pistemäärä 0-8 ja koko ilmaus MTA3 määritettiin joko negatiivisia tai heikkoa ilmentymistä (-) ja pisteet 4 tai yli-ilmentyminen (+) pistemäärällä ≥4 .

Quantitative reaaliaikainen PCR (SYBR Green Method) B

Quantitative reaaliaikaisia ​​PCR suoritettiin käyttäen SYBR Green PCR master mix (Applied Biosystems) kokonaistilavuudessa 20 ui on 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems) seuraavasti: 95 ° C 30 s, 40 sykliä 95 ° C: ssa 5 s ja 60 ° C: ssa 30 s. Dissosiaa- vaihe suoritettiin tuottaa sulamiskäyrään vahvistaa spesifisyyden vahvistusta. β-aktiini käytettiin viite-geeniä. Suhteellisen geeni-ilmentymisen olivat edustettuina ACt = Ct-geenin -Ct viite, ja kertainen muutos geenien ilmentyminen laskettiin 2

-ΔΔCt menetelmällä. Kokeet toistettiin kolme kertaa. Alukesekvenssit käytettiin: MTA3 eteenpäin, 5′-CCCACCCAGTCAGAAGAAGA-3 ’, MTA3 käänteinen, 5′-TTGGACTCCCAGTGTTTCG-3′; β-aktiini eteenpäin, 5’-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3 ’, β-aktiini käänteinen, 5′-CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3′; Snail eteenpäin, 5’-CCTCAAGATGCACATCCGAAGCCA-3 ’, Snail kääntää, 5′-AGGAGAAGGGCTTCTCGCCAGTGT-3′; Slug eteenpäin, 5’-AGATGCATATTCGGACCCAC-3 ’, Slug käänteinen, 5′-CCTCATGTTTGTGCAGGAGA-3’.

Western Blot analyysi

Yhteensä proteiinien solulinjat uutettu lyysipuskuriin (Thermo Fisher tieteelliset, Rockford, IL) ja kvantitoitiin käyttäen Bradfordin menetelmällä. Viisikymmentä mikrogrammaa proteiinia erotettiin SDS-PAGE (12%). Siirron jälkeen polyvinylideenifluoridi (PVDF) (Millipore, Bedford, MA, USA) inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa seuraavilla vasta-aineilla: MTA3 (1:1000; Proteintech, Chicago, IL, USA), beeta-aktiinin ( 1:500; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), sykliini A (1:1000), sykliini B (1:1000), sykliini D1 (1:1000), CDK2 (1:1000), CDK4 (1:1000 ), CDK6 (1:1000), ja p-Rb (1:2000) (Cell Signaling Technology, Boston, MA, USA). Inkuboinnin jälkeen peroksidaasiin kytkettyä anti-hiiri-IgG ja anti-kani-IgG: tä (Santa Cruz Biotechnology), 37 ° C: ssa 2 h, sitoutuneet proteiinit tehtiin näkyviksi käyttämällä ECL (Thermo Fisher Scientific) ja detektoitiin käyttämällä Bioimaging Systems (UVP Inc., Ontario , CA, USA). Suhteellinen proteiinin tasot laskettiin perustuen β-aktiini kuin latauskontrollina.

Sirna Treatment

siRNA on MTA3 (siRNAa, 5′-CAGUGUAGAUUAUGUGCAATT-3 ’ja siRNAb, 5 ’-AGAUAAGCAUGCUAAAGAATT-3′) ja negatiivinen kontrolli siRNA (5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ’) hankittiin Genepharma (Genepharma, Shanghai, Kiina). Transfektioihin, solut ympättiin 24-kuoppalevylle 24 tunnin ajan ennen koetta. Solut transfektoitiin siRNA: illa, käyttämällä DharmaFECT 1 (0,20 ul /kuoppa; ThermoFisher Scientific) mukaan valmistajan protokollaa. MRNA ja proteiini-tasot arvioitiin 48 tuntia transfektion jälkeen.

Cell Proliferation Test ja Colony muodostumisen määritys

soluproliferaation määritys suoritettiin käyttäen Cell Counting Kit-8-liuosta (Dojindo, Gaithersburg, MD ) mukaan valmistajan protokollaa. Lyhyesti, solut ympättiin pitoisuutena 5 x 10

3 solua /100 ul /kuoppa 96-kuoppaisille viljelylevyille ja käsiteltiin 10 ul /kuoppa Cell Counting Kit-8 ratkaisu viime 4 tunnin viljelyn. Optinen tiheys hyvin mitattiin 450 nm: ssä käyttäen mikrolevylukijaa. Sillä pesäkemuodostusta, soluja istutettiin kolmeen 6 cm soluviljelymaljoille (1000 per astia A549 ja H157 solulinjoja) ja inkuboitiin 12 päivää. Levyt pestiin PBS: llä ja värjättiin Giemsa. Pesäkkeitä, joissa on enemmän kuin 50 solusta, laskettiin.

Cell Cycle Analysis

Solut (500000) ympättiin 6 cm: n kudosviljelymaljoihin. Kaksitoista tuntia myöhemmin, solut transfektoitiin osoitetuilla määrillä siRNA: iden. Solut synkronoitu jälkeen seerumistarvaatio 20 tuntia ja ajankohtina otettu 24 tunnin inkuboinnin jälkeen 10% seerumia median määrittämään vaikutuksia solusyklin. Solut kerättiin, kiinnitettiin 1% paraformaldehydi, pestiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja värjättiin 5 mg /ml propidiumjodidia PBS: ään lisättynä RNaasi A: lla (Roche, Indianapolis, IN) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Tiedot kerättiin käyttämällä BD Calibur virtaussytometrillä.

Tilastollinen analyysi

SPSS versio 16.0 for Windows käytettiin kaikissa analyyseissä. Chi-neliö testiä käytettiin tutkimaan mahdollisia korrelaatioita MTA3 ilmaisun ja kliinis tekijöistä. Kaplan-Meier menetelmää käytettiin arvioimaan todennäköisyys potilaan eloonjäämisen, ja erot selviytymisen potilasalaryhmissä verrattiin käyttämällä Mantel n log-rank-testi. Studentin t-testiä käytettiin vertaamaan muita tietoja. P-arvo perustui kaksipuolinen tilastollinen analyysi, ja p 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

1. N yli-ilmentyminen MTA3 proteiinin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä Kudokset

Analysoimme proteiinin ilmentymistä MTA3 108 NSCLC yksilöitä ja niiden vastaavat normaalit kudokset immunohistokemiallisesti. MTA3 proteiinin ilmentyminen havaittiin ydin- osastoissa kasvainsolujen, kun taas normaali keuhkoputkien epiteelin osoitti negatiivista tai matala värjäytymistä (kuvio 1A-F). Olemme tutkineet suhde koko MTA3 ilmaisun ja kliinisten parametrit. Kuten taulukossa 1 on esitetty, ei ole tilastollista eroa välillä havaittiin MTA3 yliekspressio ja ominaisuudet ikääntymisen (p = 0,1404), sukupuolen (p = 0,8683), kasvaimen tila (p = 0,1556), erilaistumista (p = 0,1985) ja kasvaimen tyyppi (s = 0,0604). Kuitenkin potilaat, joilla on korkea MTA3 ilme oli kohonnut solmukohtien etäpesäkkeitä (p = 0,0009) ja oli edennyt pitkälle NSCLC (p 0,0001). Olemme edelleen analysoineet suhdetta MTA3 proteiinin ilmentymisen ja ennusteen keuhkosyöpäpotilaiden ja totesi, että MTA3 yliekspressio korreloivat vähenemiseen kokonaiselinaikaa (p 0,05) (kuvio 2A). MTA3 yli-ilmentyminen korreloi huonon säilymisen vaiheen I potilaista (p 0,05), mutta ei potilailla, joilla on vaiheen II-III NSCLC (p = 0,17) (kuvio 2 B, C).

. Negatiivinen värjäys normaaleissa keuhkoputken epiteelin syövätöntä keuhkokudoksessa. B. Negatiivinen kontrolli käyttämällä kanin immunoglobuliini. C. Heikko MTA3 värjäytymistä keuhkoadenokarsinooma. D. Heikot MTA3 värjäystä tapauksessa okasolusyöpä. E. Positiivinen MTA3 värjäystä tapauksessa keuhkojen adenokarsinooma. F. Positiivinen MTA3 värjäystä tapauksessa okasolusyöpä.

. Yleinen eloonjääminen oli merkitsevästi pienempi potilailla, joiden positiivinen MTA3 ilme kuin potilailla, joilla ei. B. Eloonjäämisaste potilailla, joilla on vaiheen I NSCLC. C. Eloonjäämisaste potilailla vaiheen II-III NSCLC.

2. MTA3 oheneminen Estää leviämisen Lung Cancer Cell Lines

ilmentymistä MTA3 analysoitiin läpi Western blotting ja reaaliaikainen PCR paneelissa keuhkosyövän solulinjoja (kuva 3 A, B). Olemme havainneet, että taso MTA3 ilmentymistä H157 ja A549-soluja oli suurempi kuin muiden solujen lines.To tutkia biologisen toiminnan MTA3 keuhkosyövän soluja, käytimme siRNA on pudotus

MTA3

ilmentymistä sekä H157 ja A549 solulinjat. Kaksi MTA3 siRNA: t (a ja b), erilaisille

MTA3

sekvenssit, arvioitiin. SiRNAa tehokkaammin vähentämään

MTA3

ilmaisu; Näin käytimme sitä lisätutkimuksiin (kuva 3 C, D). Vahvista kyky siRNAa ja säätelevät vaimentaen MTA3 (ja siten sen transkription tukahduttamisen toiminnot) tutkimme myös ilmaus MTA3 alavirran kohdegeeneissä

Snail

ja

Slug

. Kuten odotettua, hoito MTA3 siRNAa voimistunut mRNA ilmaus

Etana

(kuvio 3E). CCK-8 testi osoitti, että MTA3 ehtyminen pienentää solun proliferaion molemmissa solulinjoissa. Pesäkkeenmuodostusta analyysi osoitti, että ehtyminen MTA3 vuonna H157 ja A549-solut johti huomattavaan vähenemiseen määrän ja koon pesäkkeitä (A549 ohjaus vs MTA3si: 275 ± 7 vs. 81 ± 10; H157 ohjaus vs MTA3si: 476 ± 10 vs. 276 ± 32), mikä viittaa siihen, että MTA3 moduloi leviämisen keuhkosyövän soluja (kuvio 4).

A ja B. Expression tasot MTA3 analysoitiin western blot ja reaaliaikainen PCR-paneelissa keuhkosyövän solulinjat. C. Western blot-analyysi kahden MTA3 siRNA tehokkuutta syöpäsoluissa. D. Reaaliaikainen PCR-analyysi kahden MTA3 siRNA tehokkuutta syöpäsoluissa. E. MTA3 siRNA hoito voimistunut etana mRNA: n ilmentymisen.

. CCK-8-määritys suoritettiin, kun MTA3 siRNA hoidon. Vähentäminen absorbanssi havaittiin (p 0,05 5. päivänä sekä A549 ja H157). B. Arvio klonogeeniset potentiaalit MTA3-köyhdytettyä syöpäsoluja. Pesäkkeiden lukumäärät laskettiin. Pesäkkeiden lukumäärä muodostuu soluissa, joita käsiteltiin MTA3 siRNA oli paljon pienempi kuin kontrollisolujen (p 0,05). Pylväät, keskiarvo; baareja, SD. * P 0,05.

3. Ehtyminen MTA3 vaimentua Cyclina ja sykliini D1 ilmentäminen Lung Cancer Cells

Cell cycle analyysit suoritettiin A549 ja H157-solujen kanssa tai ilman MTA3 Knockdown, ja totesi, että solujen prosenttiosuus G1 vaiheessa lisättiin soluissa jossa MTA3 knockdown, kun taas solujen prosenttiosuus S vaiheessa laski näissä soluissa verrattuna ohjaus (A549 ohjaus vs MTA3si: G1 vaihe: 62.59% ± 0,9 vs. 79,71% ± 1,5, S vaihe: 31.27% ± 0,52 vs. 15.21% ± 0,88; H157 ohjaus vs MTA3si: G1 vaihe: 53,83% ± 1,4 vs. 64.61% ± 1,8, S vaihe: 32,64% ± 0,8 vs. 18,59% ± 0,48). Nämä tulokset osoittavat, että ehtyminen MTA3 indusoi solusyklin pysähtymisen G1 /S rajan. Ei ollut merkittävää muutosta suhteessa G2-vaiheen soluja (kuvio 5). Tutkia mekanismia taustalla solusyklin pysähtymiseen, tutkimme tasot syklin-liittyviä proteiineja käyttäen soluja kerättiin samana ajankohtana kuin käytettävät solut solusyklin analyysi. Testasimme vaikutukset MTA3 Knockdown tasoista sykliini A, sykliini D1, sykliini B, CDK2, CDK4, CDK6 ja p-Rb. Western blotting -analyysi osoitti, että pudotus on MTA3 vähentää proteiinin tasot sykliini A, sykliini D1 ja p-RB-ilmentyminen (kuvio 6). Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että inhiboiva MTA3 ilmentyminen indusoi solusyklin pysähtymisen G1-S-siirtymä, tukahduttaa keuhko- syöpäsolujen kasvua.

prosenttiosuus G1 faasi kasvoi solujen MTA3 pudotus (H157 ja A549, p 0,05) aleni näissä soluissa verrattuna kontrollisoluihin.

Western blot-analyysi sarjasta solusyklin liittyvät tekijät osoittivat proteiini tasot sykliini A, D1 ja p-Rb pienenivät jälkeen hiljentäminen MTA3 vuonna H157 ja A549-soluja, kun taas ei ollut merkittävää muutosta sykliini B, CDK2, CDK4 ja CDK6 ilme.

keskustelu

vaimennussäätely MTA3 ilmoitettiin rintasyöpä, kohdun limakalvon syöpä ja munasarjasyöpä [15] – [17], kun taas säätelyä MTA3 ilmentyminen on liitetty ihmisen suonikalvon syövän [21]. MTA3 yliekspressio toimii ennustetyövälineenä merkkiaineena päätellen selviytymisen kohdun kuin endometriod syöpäpotilasta [20]. Ilmaisulla kuvio MTA3 sekä sen korrelaatiota kliinisten ja patologisten tekijöiden ei ollut vielä määritelty ihmisen keuhkosyöpä. Tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet, että MTA3 proteiinin ilmentyminen ihmisen keuhkojen kudoksiin on korkeampi kuin vastaavassa normaalissa keuhkojen kudoksiin. Oli läheinen korrelaatio MTA3 säätelyä pTNM vaiheessa ja solmukohtien etäpesäkkeitä. Mikä tärkeintä, pystyimme osoittamaan, että MTA3 korreloi huonon selviytymisen keuhkosyöpäpotilaita. Tämä oli sopusoinnussa aikaisempien tietojen on ehdottanut, että MTA3 tärkeä rooli keuhkosyövän etenemiseen. Validoida mahdollinen rooli MTA3 keuhkosyövän kehittämiseen, tutkimme ensin sen ilmentymistaso useissa solulinjoissa ja käyttää A549 ja H157-solut (suhteellisen korkea MTA3 tasot) lisätutkimuksiin. Meillä työskentelee siRNA on pudotus MTA3 ilmentymistä näissä kahdessa solulinjassa. Löysimme heikentynyt leviämisen kapasiteetti ja pesäkkeiden muodostumista kyky molemmissa solulinjoissa jälkeen MTA3 knockdown. Siten meidän tutkimus osoittaa, että

MTA3

toimii onkogeenin keuhkosyövän kehittämiseen.

rencent tutkimus kertoo, että t ehtyminen endogeenisen MTA3 hiiren ensisijainen granuloosasoluja vähentää merkittävästi sykliini B1 ja sykliini B2 ilmaisu, hidastaa solujen lisääntymistä ja increaseds prosenttiosuus soluja G2 /M, joka voi olla myös käänteinen, jonka ilmentäminen rinnakkain eksogeenisen MTA3 [19]. Useimmat proliferatiivinen tekijät vaikuttavat solujen kasvua vaikuttamalla solusyklin etenemisen. Siten käytimme solusyklin analyysi ja todettu kasvu MTA3-vajaiden solujen G1 faasin ja lasku S-vaiheeseen verrattuna kontrollisoluihin. Estyminen G1 S siirtyminen solusyklin etenemisen saattaisi selittää mekanismeja MTA3 vaikutukset keuhkosyöpään soluproliferaatioon.

Voit etsiä mahdollisia mekanismeja MTA3 solusyklin sääntelyn, tutkimme vaikutus MTA3 knockdown useita solusyklin liittyviä molekyylejä. Me tarkistanut Sykliini (A, B, ja D1), CDK2: n, CDK4: n, CDK6 ja p-Rb. Olemme havainneet, että tasot cyclinA, D1 ja p-Rb jälkeen vähentynyt MTA3 pudotus. Sykliini D1 vuorovaikutuksessa Cdk4 /6 muodostaen kompleksin, joka fosforyloi Rb ja säätelee solujen lisääntymistä säätelemällä etenemisensä rajoitus pisteeseen G1-vaiheen solusyklin [22]. Sykliini D1 yli-ilmentyy eri syöpien ja liittyy syöpäsolujen lisääntymistä [23] – [25]. Sykliini tarvitaan solujen edetä S-faasin [26]. Sykliini B on mitoosi sykliini ja sen kertyminen on vain osoitteessa G2-M siirtyminen [27]. Siten, tuloksemme osoittaa alentuneet sykliini A, D1, ja p-Rb korreloi alentuneet solujen S ja G2 vaiheen ja kohonneeseen solujen G1 vaiheen jälkeen MTA3 pudotus, mikä viittaa siihen, MTA3 on tärkeä rooli solusyklin kontrolli keuhko- syöpäsoluja.

Yhteenvetona tämän tutkimuksen showes että MTA3 yliekspressoituu NSCLC ja korreloi sen pitkälle ja huonon ennusteen. Tutkimuksemme osoittaa myös, että yli-ilmentyminen MTA3 voitaisiin edistää soluproliferaatiota kautta solukierron säätelyssä.

Kiitokset

Kirjoittajat haluavat kiittää tohtori Qingchang Li erinomaisesta teknisestä avusta.