Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

β1,3-N-asetyyliglukosaminyylitransferaasi -3 geeni (

B3GNT3

) koodaa jäsen B3GNT perheen, joka toimii selkäranka rakenne dimeerisen sialyyli-Lewis A ja on mukana L-selektiiniligandin biosynteesiin lymfosyyttien itseohjautuva ja lymfosyyttiliikennettä. B3GNT3 on liitetty tärkeänä osana kehitettäessä tiettyjen syöpien. Kuitenkin ominaisuudet B3GNT3 kehittämiseen ja etenemiseen syövän edelleen suureksi osaksi tuntemattomia. Siten meidän tutkimuksen tavoitteena oli tutkia ilmentymismalliin ja ennusteen arvioinnissa on B3GNT3 potilailla, joilla alkuvaiheen kohdunkaulan syöpä.

Methods

mRNA ja proteiini tasoilla

B3GNT3

ilmentyminen tutkittiin kahdeksassa kohdunkaulan syövän solulinjoissa ja kymmenen pariksi kohdunkaulan syöpä kasvaimia, käyttäen reaaliaikaista PCR ja western-blottauksella, vastaavasti. Immunohistokemiallinen (IHC) käytettiin analysoimaan B3GNT3 proteiinin ilmentymistä parafinoidut kudoksia 196 alkuvaiheen kohdunkaulan syöpäpotilaille. Tilastolliset analyysit sovellettu arvioimaan yhdistyksen välillä

B3GNT3

ilmaisun tulokset ja kliinisten parametrien sekä potilaan eloonjäämisen.

Tulokset

B3GNT3

ilme oli merkitsevästi yläreguloituja kohdunkaulan syövän solulinjoissa ja vaurioita verrattuna normaaleihin soluihin ja viereisten noncancerous kohdunkaulan kudoksissa. Vuonna 196 tapauksissa testatuista alkuvaiheen kohdunkaulan syöpä näytteiden B3GNT3 proteiini taso korreloi positiivisesti korkean riskin HPV-tyyppejä (HPV) infektio (P = 0,026), FIGO vaihe (P 0,001), kasvaimen koko (P = 0,025), kasvaimen uusiutumisen (P = 0,004), elintärkeitä tila (P 0,001), samanaikaisesti kemoterapiaa ja sädehoitoa (P = 0,016), lymphovascular tilaa osallistuminen (P = 0,003), ja mikä tärkeintä, imusolmuke etäpesäke (P = 0,003 ). Potilaat, joilla on korkea B3GNT3 ilme oli lyhyempi yleinen (OS) ja taudista vapaan eloonjäämisen (DFS) verrattuna alhainen tämän proteiinin ilmentymisen. Monimuuttujamenetelmin ehdotti, että B3GNT3 ilme on itsenäinen prognostinen indikaattori kohdunkaulan syöpäpotilaille.

Johtopäätökset

Tutkimus osoitti, että kohonnut B3GNT3 ilmentyminen liittyy lantion imusolmuke etäpesäke ja huono tulos alkuvaiheen kohdunkaulan syövän potilaille. B3GNT3 voi olla uusi ennustetekijöitä merkki ja terapeuttinen kohde varten kohdunkaulan syövän hoitoon.

Citation: Zhang W, Hou T, Niu C, Song L, Zhang Y (2015) B3GNT3 Expression on uusi Marker korreloi lantion imusolmukemääritysmenetelmä etäpesäke and Poor kliinistä hyötyä alkuvaiheen Kohdunkaulan syöpä. PLoS ONE 10 (12): e0144360. doi: 10,1371 /journal.pone.0144360

Editor: Valli De Re, Centro di Riferimento Oncologico, IRCCS National Cancer Institute, ITALIA

vastaanotettu: 16 kesäkuu 2015; Hyväksytty: 17 marraskuu 2015; Julkaistu: 28 joulukuu 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

rahoitus: kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

naisilla kohdunkaulan syöpä on kolmanneksi yleisin diagnosoitu pahanlaatuinen kasvain synnytyskanavassa maailmanlaajuisesti, osuus oli arviolta 274000 kuolemantapausta maailmanlaajuisesti vuosittain [1]. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että korkean riskin HPV-tyyppejä (HPV) -infektio on tärkein kohdunkaulan kehittämiseen, mutta se on edelleen epätyydyttävä diagnoosia ja ennustamista ennuste [2]. Edistysaskeleet terapeuttiset menetelmät ja diagnostiset välineet ovat vähentynyt ilmaantuvuus ja kuolleisuus kohdunkaulan syövän [3]. Kuitenkin se on edelleen merkittävä syy gynekologisen onkologian liittyvän kuoleman kehitysmaissa, erityisesti potilailla, joilla imusolmuke etäpesäke [4]. Lisäksi imusolmuke etäpesäke on vahvin ennustetekijä alkuvaiheen kohdunkaulan syöpä (FIGO Ib-Ha) ja se määrittää hoitostrategia kohdunkaulansyövän [5]. Altered ilmauksia onkogeenien, kuten

BMI-1

,

URG4

ja

C14ORF166

[6-8], on tunnistettu mahdollisiksi ennustetekijöitä merkkiaineiden kohdunkaulan syöpä. Kuitenkin voima monien tunnistettu biomarkkereiden ennustaa imusolmuke etäpesäke ja kliininen tulos yksittäisten kasvainten on rajallinen. Siten tunnistaminen uusia ja spesifisiä biomarkkereiden varhaistoteamiseen ja ennustaminen imusolmuke etäpesäke ja ennusteen kohdunkaulan syöpä on tärkeää.

koodaava geeni β1,3-N-asetyyliglukosaminyylitransferaasi-3 (B3GNT3), entinen kutsutaan ydin 1β3GlcNAcT, sijaitsee kromosomissa 19q13.1, ja se käsittää kolme eksonia [9]. Se on jäsen β3GlcNAcT perheen kanssa täyspitkän mRNA: n 2720 bp: n, joka koodaa erittäin konservoitunut 43-kDa: n proteiini, joka on luokiteltu tyypin II kalvon läpäisevä proteiini [10]. Β3GlcNAcT perhe käsittää vähintään kahdeksan eri β3GlcNAcTs, jotka liittyvät pahanlaatuisiin [11]. Downregulation B3GNT1 on yhteydessä huonoon tulokseen haiman adenokarsinooma [12]. Etcheverry [13] mukaan B3GNT5 yliekspressoitui kanssa hypometyloidut promoottori glioblastoma kudoksissa verrattuna ohjaus aivojen kudoksissa. Shibata [14] osoittivat, että B3GNT7, joka toimii biosynteesissä on HMOCC-1-antigeenin, on ilmaistu korkeampi ihmisen munasarjan syöpäsolujen suhteessa normaaliin munasarjat. Taso B3GNT8 transkripti lisääntyi merkittävästi, ja se voi olla mukana maligniteetti leukemia, kurkunpään karsinooma, paksusuolen ja mahalaukun syövän [15, 16, 17, 18].

B3GNT3 ilmentymistä on havaittu normaalissa kudoksessa, mukaan lukien paksusuolen, jejunum, mahan, ruokatorven, istukassa ja henkitorven [19]. Äskettäin Ho [20] kertoi, että B3GNT3 voisi olla tärkeä rooli tukahduttamaan pahanlaatuinen fenotyypit neuroblastoomasoluja, kuten maahanmuutto ja invaasio, jonka poistaminen FAK, Akt ja ERK, jotka ovat tärkeitä loppupään signalointi molekyylejä integriinien ja lukuisia kasvutekijäreseptorit . On kuitenkin raportoitu, että B3GNT3 proteiini osallistuu kehittymistä ja etenemistä ihmisen syöpien, kuten non-Hodgkin-lymfooman (NHL), paksusuolen syöpä, ruokatorven okasolusyöpä (OSCC), ja haiman ja maksan syöpien [10,19,21 ]. Esimerkiksi hän [21] Yhdistyksen välillä

B3GNT3

lokuksen CA19-9 tasoja ja sialyyli Lewis A-antigeenejä, jotka saattavat olla mahdollisia mekanismi OSCC, haiman ja maksan syövät. Etiologiassa NHL, B3GNT3 lähettää määräävän roolit L-selektiinin li- biosynteesin, joka on tärkeä kasvainsolujen eloonjäämisen ja etäpesäkkeiden [10]. B3GNT3 on todennäköisesti todennäköisin ehdokas biosynteesiin selkärangan rakennetta dimeerisen sialyyli Lewis A (Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-3GlcNAc), joka on syöpä liittyy glykosfingolipidin antigeenin ihmisen paksusuolen syövän kudosten ja koolonisyöpäsolulinja Colo205 [19]. Lisäksi, Yeh et ai. [9] kertoi, että B3GNT3 ohjaa laajentaminen ydin 1 Limaa tyyppinen O-glykaani, joka usein muodostaa 6-sulfo sialyyli Lewis x antigeenin, epitoopin ilmaistu korkean venulit (HEV) ja toimii L-selektiiniligandin tarvitaan lymfosyyttien itseohjautuva. Nämä havainnot ehdotti, että B3GNT3 voi olla erilaisia ​​rooleja kehittymistä ja etenemistä eri syöpiä. Kuitenkin tutkimukset yhdistyksen välillä B3GNT3 ja syövät ovat harvinaisia, eikä ole julkaistu raportti ominaisuuksista B3GNT3 ilmaisun ja sen kliinistä /prognostista merkitystä kohdunkaulan syövän, erityisesti korrelaatio B3GNT3 ilmaisun ja lantion imusolmuke etäpesäke (PLNM).

Tässä pyrittiin tutkimaan ekspressiokuviota B3GNT3 kohdunkaulan syövän solulinjoissa ja alkuvaiheen kohdunkaulan syövän yksilöitä. Lisäksi tutkimme suhdetta sen ja kliinis parametrit ja analysoida sen arvo ennustetta alkuvaiheen kohdunkaulan syöpäpotilaille perustuvat kliinisiä tutkimustuloksia.

Methods

Ethics selvitys

tutkimus eettinen komitea on Cancer Center, Sun Yat-Senin yliopistossa (Kiina) säädetty eettistä hyväksyntää varten tässä tutkimuksessa ja kaikille potilaille tarjotaan kirjallinen lupa. Kaikki näytteet käsitellään ja varastoidaan anonyymisti mukaan eettisiä ja oikeudellisia normeja.

Solulinjat

Kohdunkaulan syövän solulinjat saatiin American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). Kohdunkaulan syövän solulinjat, mukaan lukien HeLa, HeLa229, HCC94, SiHa-, ME-180, MS751, CaSki ja C-33A, pidettiin RPMI-1640-väliaineessa (Gibco BRL, Rockville, MD), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia ( FBS) (HyClone, Logan, UT, USA) ja 1% antibiooteilla (100 U /ml penisilliiniä ja 100 lg /ml streptomysiiniä). Ensisijainen normaali kohdunkaulan epiteelisolut (NC) eristettiin noncancerous epiteelikudokselle kohdunkaulan ja kasvatettiin täydellisessä KeratinocyteSFM väliaineessa (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Jotta käyttö kliinisen materiaalien tutkimustarkoituksiin ennen kirjallista tietoon perustuva suostumus saatiin potilailta ja hyväksyntä saatiin Sun Yat-sen University Cancer Center institutionaalisten Research eettisen komitean.

Näytteet ja kliinisiä piirteitä

Kaikki potilaat antoivat tietoisen kirjallisen suostumuksensa analyysi niiden kudosta tutkimustarkoituksiin, ja hyväksyi tutkimuksen Sun Yat-sen University Cancer Center Institutional Review Board. Kaikkiaan 193 paraffinembedded kohdunkaulansyövän näytteet saatiin laitokselta patologian Sun Yat-sen University Cancer Center vuosina 2007 ja 2009. kasvain lavastus ja kliinis luokittelu suoritettiin mukaan International Federation of Obstetrics and Gynecology, 2009 (FIGO) luokittelu karsinooma kohdunkaulan. 193 potilasta oli IB1-IIA2 vaiheessa kohdunkaulan syövän ja kaikki saivat radikaalin kohdunpoisto ja imusolmukkeiden ilman leikkausta edeltävän sädehoito, kemoterapia tai hormonihoito. Tutkimuksessamme Potilaat, joilla on jokin korkean riskin tekijöiden saivat leikkauksen jälkeisen kemoterapiaa ja /tai sädehoitoa. Yksityiskohtaisesti, ”korkean riskin” tekijöitä olivat PLNM, korkea eriyttäminen asteen, positiivinen parametrial osallistuminen, positiivinen lymphovascular tila osallistuminen, positiivinen kirurgiset marginaali, syvä strooman invaasio ja suuri kasvaimen kokoa ( 4 cm). Lisäksi potilailla, joilla on vain syvä strooman invaasio tai positiivinen kirurgiset marginaalit saivat sädehoitoa. Potilaat, joilla on vain lymphovascular tilaa osallistumista, korkea eriyttäminen asteen tai suuri kasvain koon ( 4 cm) saaneet kemoterapiaa. Kliinis tiedot kerättiin kärsimätön potilastiedot ja yhteenveto taulukossa 1. Kaikki potilaat olivat seurannan kirjaa yli 5 vuotta ja seurannasta määräaikaa päivänä tammikuuta 2014. Survival aika laskettiin alkaen leikkauksen seuraavat up määräaika, tai kuolinpäivä (yleensä seurausta syövän uusiutumiseen tai etäpesäke). Mediaani seuranta-ajan ensisijaisen kohdunkaulan syöpä kohortissa oli 51 kuukautta, ja seuranta-ajan välillä 3-99 kuukautta. Ennen leikkausta HPV testaamaan meidän sairaalassa käytettiin tutkittaessa infektiotilanteesta potilaiden oli polymeraasiketjureaktion havaitseminen HPV. Tässä kohortissa, 153 kohdunkaulan syöpää potilailla havaittiin HPV-infektion (+), kun taas 40 kohdunkaulan syöpää potilailla oli HPV-infektio (-). Kuusitoista tuore kohdunkaulan syövän ja pariksi viereisen noncancerous kohdunkaulan kudosten (ANT) kerättiin reaaliaikaiseen PCR, Western blotting ja immunohistokemia (IHC) analyysi.

qPCR

Solun kokonais-RNA eristetty viljellyistä soluista ja kuusitoista tuoretta kohdunkaulan syövän ja yhdistetty viereisen noncancerous kohdunkaulan kudosnäytteitä käyttäen TRIzol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaan. Nämä RNA-näytteet esikäsiteltiin RNaasi-vapaata DNaasia, ja 2 ug RNA: ta kustakin näytteestä käytettiin komplementaarinen deoksiribonukleiinihappo (cDNA) synteesi pohjustus satunnaisia ​​heksameerejä. Alukkeet suunnitellut Primer Express v 2.0 ohjelmisto (Applied Biosystems). Seuraavia alukkeita käytettiin: B3GNT3, 5′-GCCGGAGATACTTCATCCTG-3 ’ja 5′-GAGAGGAGCAGGTAGAGGGG-3′; glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) gene, 5’-AATGAAGGGGTCATTGATGG-3 ’ja 5′-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAA-3’. Detektioreagenssina käytetty tässä kokeessa oli SYBR Green. Kokonaistilavuus jokaisen näytteen oli 10 ui: 2 * SYBR Green mix: 5 ui; cDNA: 1UL; Forward-aluke: 0.5ul; Käänteisaluke- 0.5ul; ddH 2O: lla 3ul. PCR-välitteinen amplifikaatio B3GNT3 cDNA, ensimmäinen monistus käyttäen B3GNT3 alukkeita suoritettiin denaturaatiovaiheen 95 ° C: ssa 10 min, mitä seurasi 30 denaturointi sykliä 95 ° C: ssa 60 s, alukkeen 55 ° C: ssa 30 s, ja alukkeen pidennyksen 72 ° C: ssa 30 s. Kun loppuun pyöräily vaiheet, lopuksi jatkamisvaihe 72 ° C 5 min tehtiin ennen kuin reaktio seosta säilytettiin 4 ° C: ssa. Reaaliaikainen PCR käytettiin sitten määrittämään kertainen lisäys B3GNT3 mRNA kohdunkaulan syövän solulinjoissa suhteessa normaaliin kohdunkaulan epiteelisolut ja kunkin ensisijaisen kohdunkaulan kasvaimet suhteessa viereiseen normaaliin kudokseen otettu samasta potilaasta. Kukin koe suoritettiin kolmena rinnakkaisena ja toistettiin ainakin kolme kertaa. MRNA: n ilmentyminen B3GNT3 normalisoitiin GAPDH.

Western blotting

Yhteensä proteiini valmistettiin käyttäen solun kokonaisproteiinista uuttamalla sarjat mukaisesti valmistajan ohjeiden (Millipore, Bedford, MA). Yhtä suuret määrät kutakin proteiinia uute (30 ug) oli elektroforeettisesti erotettiin 9,5% SDS-polyakryyliamidigeeleillä. Seuraavat siirto polyvinylideenifluoridia (PVDF) (Immobilon P, Millipore, Bedford, MA) membraanit blokattiin 1 tunnin ajan huoneenlämmössä 5% rasvatonta maitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, joka sisälsi 0,1% Tween-20 (TBST) . Membraanit inkuboitiin sitten anti-B3GNT3-vasta-ainetta (1: 1000, Proteintech, 18098-1-AP) yön yli 4 ° C: ssa. Piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla anti-kani-IgG-vasta-ainetta (1: 2000, Santa Cruz, SC-2004) käytettiin määrittämään B3GNT3 ilmentymisen. Lopuksi, B3GNT3 ilmentymistä havaittiin käyttämällä ECL prime Western blotting havaitseminen reagenssia (Amersham) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Pyyhittäisiin kalvot riisuttu ja uudelleen koetettiin anti-alfa-Tubulin vasta-aineella (Sigma, Saint Louis, MO) latauskontrollina.

immunohistokemiallinen (IHC) analyysi

immunohistokemiallinen värjäys toteutettiin tarkoitus arvioida proteiinin ekspressiokuviota B3GNT3 193 parafiiniin upotetut ihmisen kohdunkaulansyövän kudoksiin. Menettelyt suoritettiin klassisen protokollia. Lyhyesti, parafiini-upotetun kudoksen korttelin päässä kohdunkaulan syövän potilaiden leikattiin 4 um: n paksuisia leikkeitä ja paistetaan 65 ° C: ssa 30 min. Leikkeet poistettiin parafiini ksyleenillä ja sen jälkeen niihin lisätään veteen. Levyt upotetaan EDTA antigeenisen haku puskuriin ja sitten mikrossa käsiteltiin antigeenin haku. Seuraavaksi endogeenisen peroksidaasin aktiivisuus estettiin 3% vetyperoksidia 15 minuutin ajan, jonka jälkeen inkuboitiin 1% naudan seerumin albumiinia estää epäspesifisen sitoutumisen. Näytteitä inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa kanin polyklonaalinen vasta-aine B3GNT3 (Upstate Biotechnology, 1: 100, Proteintech, 18098-1-AP). Negatiivisia kontrolleja, anti-B3GNT3 vasta-aine korvattiin normaalia vuohen seerumia. PBST: llä, kudos objektilasit peräkkäin inkuboitiin biotinyloidun anti-kani sekundääristä vasta-ainetta (Sigma) huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan, minkä jälkeen inkuboitiin edelleen streptavidiini-piparjuuriperoksidaasi-kompleksia (Sigma) huoneenlämpötilassa 30 min. Kudos osat upotettiin 3-amino-9- etyyli karbatsoli ja vastavärjättiin 10% Mayerin hematoksyliinillä, kuivattu ja asentaa Crystal Mount.

arviointi aste immunovärjäyksen tarkasteli ja teki itsenäisesti kaksi patologia sokko histopatologisen ominaisuuksia ja potilastiedot näytteiden. Semi-kvantitatiivisen analyysin, pisteet kunkin kudosnäytteen perustui sekä osuus positiivisesti värjättyä kasvainsolujen ja värjäyksen voimakkuuden. Immunovärjäyksen tulokset B3GNT3 pisteytettiin perustuvat seuraavat kriteerit: (i) osuus positiivisten kasvainsolujen kasvainkudoksessa: 0 (0%), 1 (1% -10%), 2 (11% -50%) , 3 (51% -75%) ja 4 (76% -100%); (Ii) värjäys voimakkuus: 0 (ei värjäystä), 1 (heikko värjäystä = vaaleankeltainen), 2 (kohtalainen värjäytyminen = keltainen ruskea), 3 (voimakas värjäytyminen = ruskea). Värjäytyminen indeksi laskettiin tuotteen osuus positiivisten solujen × värjäytymisintensiteettiä pisteet (alueella 0 12). Cutoff arvot B3GNT3 ilme valittiin sen perusteella, mitta heterogeenisyys kanssa log-rank-testi tilastollinen analyysi suhteessa yleiseen eloonjäämiseen. Optimaalinen raja-arvo saatiin seuraavat: värjäytyminen indeksin of≥ 6 pidettiin kasvainten korkea B3GNT3 ilmaisua ja ≤4 pidettiin kasvaimet matalalla ilmaus B3GNT3.

Tilastollinen

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS 16.0 tilastollinen ohjelmistopaketti (SPSS, Chicago, USA). Chi-square testi ja Fisherin testiä sovellettiin välisen suhteen arvioimiseksi B3GNT3 ilmaisun ja kliinis ominaisuudet. Bivariate korrelaatiot muuttujien laskettiin Spearmanin rank korrelaatiokertoimet. Survival käyrät piirrettiin Kaplan-Meier menetelmällä, ja erot analysoitiin käyttäen log-rank-testi. Coxin regressio suhteellisten riskien mallia käytettiin yhden ja usean analyysit määrittää riippumattoman merkityksen kliiniset kovariantteja. Arvot

P 0

.

05

kaikissa tapauksissa pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Kohonnut ekspressio B3GNT3 kohdunkaulan syövän solulinjoissa

Real- PCR ja western blotting käytettiin tutkimaan tasoja B3GNT3 ilmentymisen kahdeksan kohdunkaulan syövän solulinjat (HeLa, HeLa 229, HCC 94, C33A, CaSki, MS751, ME-180 ja SiHa) verrattuna normaalin kohdunkaulan epiteelisolulinjassa (NC ).

Western blotting-analyysi osoitti, että kaikki kahdeksan kohdunkaulan syövän solulinjat (MS751, C33A, Hela, HeLa229, SiHa-, HCC94, CaSki ja ME-180) oli merkittävästi korkeammat tasot B3GNT3 proteiinia verrattuna NC ( kuvio 1A).

B3GNT3

mRNA: n ilmentyminen oli vähintään 3,5 kertaa suurempi kohdunkaulan syövän solulinjoissa verrattuna NC (kuvio 1 B). Nämä tulokset osoittivat, että B3GNT3 ylössäädellään kohdunkaulan syövän solulinjoissa.

(a ja b) ekspressio B3GNT3 mRNA: ta ja proteiinia kohdunkaulan syövän solulinjoissa (C33A, Ca Ski, HeLa, HeLa 229, MS751, ME- 180, SiHa ja HCC 94) ja normaali kohdunkaulan soluista tutkittiin western blottauksella (a) ja kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qPCR) (b). Ilmentymistasot olivat normalisoidaan α-tubuliinin ja GAPDH, vastaavasti. Virhepalkit edustavat standardipoikkeamaa keskiarvosta (SD) laskettiin kolme rinnakkaista kokeissa. * P 0,05.

B3GNT3 on yli-ilmentynyt kohdunkaulan syövän kudoksissa

Sen jälkeen, onko B3GNT3 upregulation löytyy kohdunkaulan syövän solulinjoissa oli kliinisesti merkittävää vahvisti kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR: n (qPCR ) ja western blotting-analyysi 10 kohdunkaulan syövän kudoksiin (T) sovitettu viereisen noncancerous kudosnäytteistä (ANT). Kuten on esitetty kuviossa 2B, ilmaus

B3GNT3

mRNA oli merkittävästi korkeampi 10 kohdunkaulan syövän kudosnäytteiden kuin pariksi normaaleissa kudoksissa, jossa ero ilmentymisen taso vaihtelee 4.2- 17,4-kertaiseksi. Yhdenmukainen Näiden tulosten B3GNT3 proteiini osoitti suurempi runsaus kaikissa 10 kohdunkaulasyövän näytettä verrataan sovitetun ANT (kuvio 2A).

(a) edustaja kuvia western blotting analyysit B3GNT3 proteiinin ilmentymistä kymmenessä Hyväksytty paria kohdunkaulan syövän kudosten (T) ja viereisen noncancerous kudoksissa (ANT). a-Tubulin käytettiin lastaus ohjaus. (B) Keskimääräinen T /ANT suhteet

B3GNT3

mRNA ilmaisun pariksi kohdunkaulan syöpä (T) ja viereisten noncancerous kudokset (ANT) kvantitoitiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR (qPCR) ja normalisoidaan GAPDH. Virhepalkit edustavat standardipoikkeamaa keskiarvosta (SD) laskettiin kolme rinnakkaista kokeissa. (C) immunohistokemiallinen määritys B3GNT3 proteiinin ilmentymistä kymmenessä pareina kohdunkaulan syöpä kudoksiin. * P 0.05.

välisestä assosiaatiosta B3GNT3 yli-ilmentymisen ja kliinisiä piirteitä kohdunkaulan syövän

immunohistokemia (IHC) suoritettiin tutkimaan ekspressiokuviota B3GNT3 proteiinin retrospektiivinen kohortin 193 kohdunkaulansyövistä , mukaan lukien 85 tapausta vaiheen IB 1 (44,1%), 29 tapausta vaiheen IB2 (15,0%), 56 tapauksessa vaiheen IIA1 (29,0%) ja 23 tapausta vaiheen IIA2 (11,9%). Kuten on esitetty kuviossa 3A, immunoreaktiivisuus B3GNT3 proteiini havaittiin vaihtelevia määriä ja lokalisoitu pääasiassa solun plasmassa. Positiivinen värjäys B3GNT3 proteiinia nähtiin 78 tapauksessa (40,4%) ja 193 ilmoittautunut potilaan näytteitä, kun taas 115 tapauksessa (59,6%), värjättiin negatiivisesti tai vain heikosti varten B3GNT3 proteiinia (taulukko 1). Voimakas ilmentyminen B3GNT3 proteiinin todettiin 24,7% (21/85), 41,4% (12/29), 58,9% (33/56), ja 52,2% (12/23) kohdunkaulan syövän FIGO vaiheessa Ib1, Ib2, IIa1and IIa2, vastaavasti (

P

0,05, χ

2 -testi). Mielenkiintoista on, että kvantitatiivinen IHC värjäys data paljasti, että keskimääräinen optinen tiheys (MOD) arvot B3GNT3 värjäytymistä imusolmukkeiden etäpesäkkeiden ryhmä olivat tilastollisesti korkeampi kuin imusolmukkeiden etäpesäkkeiden-free-ryhmä (P 0,001, kuvio 3B).

Positiivinen B3GNT3 värjäytyminen havaittiin pääasiassa sytoplasmassa kohdunkaulan syövän soluja. (A) ja b, B3GNT3 ilmentymistä ei havaittu normaalissa kohdunkaulan kudoksissa; c ja d, edustavat kuvat heikko B3GNT3 värjäystä kohdunkaulan syövän kudoksissa; e ja f, edustavat kuvat kohtalainen B3GNT3 värjäytymisen kohdunkaulan syövän kudoksissa; g ja h, edustavat kuvat vahvan B3GNT3 värjäyksen kohdunkaulan syövän kudoksissa. (B) Tilastolliset analyysit keskimääräisen keskimääräinen optinen tiheys (MOD) ja B3GNT3 värjäytymistä imusolmuke etäpesäke ryhmä ja imusolmuke etäpesäke-vapaa ryhmä. * P 0,05. (C) Kaplan-Meier käyrät yhden muuttujan analyysin data (log-rank-testi) kantavassa yleiseen eloonjäämiseen (OS) ja taudista vapaan eloonjäämisen (DFS) potilaille, joilla on korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme.

IHC värjäys B3GNT3 proteiinin ekspressiotasoja analysoitiin edelleen määrittää niiden suhdetta kliinis ominaisuuksiin kohdunkaulan syöpä. Jotka esitetään taulukossa 2, korkea B3GNT3 proteiinin ilmentymisen yleensä korreloi voimakkaasti HPV-infektio, FIGO vaiheessa kasvaimen koko, kasvaimen uusiutumisen, elintärkeä asema, samanaikainen kemoterapiaa ja sädehoitoa, lymphovascular tilaa osallistuminen ja mikä tärkeintä, imusolmuke etäpesäke (taulukko 2) . Nämä tiedot vahvistettiin edelleen Spearmanin korrelaatiota analyysi (taulukko 3). Ei kuitenkaan ole merkittäviä suhteita välillä ei havaittu B3GNT3 proteiinin ilmentymisen ja potilaan ikä, histologinen eroavuus laatu, okasolusyöpä antigeeni, histologinen tyyppi, kemoterapia, säteily, myometrium invaasio, ominaisuudet kirurgisten marginaali ja suodattumista parauterine elimen potilaiden kohdunkaulan syöpä .

korkea B3GNT3 ilmaisu ennustaa huonon ennusteen potilaita, joilla alkuvaiheen kohdunkaulan syöpä

tutkimuksessamme kohortin ennustetyöväline vaikutus B3GNT3 proteiinin ilmentymistä kohdunkaulan syövän selvitettiin käyttämällä Kaplan-Meier-analyysi ja log-rank-testi. Log-rank-testi osoitti, että elinaika oli merkitsevästi erilainen matalan ja korkean B3GNT3 proteiinin ilmentymisen ryhmät (sekä P 0,001, kuvio 3C). Potilaat, joilla on korkea B3GNT3 tasoja oli huomattavasti lyhyempi yleinen (OS) ja sairauksien elinaika (DFS) kuin ne, joilla on alhainen. Kumulatiivinen OS ja DFS hinnat olivat 90,5% ja 97,2%, tässä järjestyksessä, alhainen B3GNT3 ryhmä, kun taas ne olivat vain 65,7% ja 84,7%, tässä järjestyksessä, korkean B3GNT3 ryhmä. Vahvistuspiippaus kohortti käytettiin arvioitava edelleen ennustetekijöiden arvon B3GNT3 tiettyjen potilasryhmien, joista stratifioitiin iän, HPV-infektio, FIGO Stage, PLNM, okasolusyöpä antigeeni, kasvaimen koon, erilaistuminen laatu, kemoterapia, säteily, samanaikainen kemoterapiaa ja sädehoitoa, myometrium invaasio, ominaisuudet kirurgisten marginaali, soluttautumista parauterine elimen ja lymphovascular tilaa osallistumista. Ilmentyminen B3GNT3 proteiinia voimakkaasti yhteydessä OS kesto potilailla, joilla ei PLNM (log-rank-testi, P 0,001), jossa okasolusyöpä antigeeni ≥ 1,5 ng /ml (log-rank-testi, P = 0,002), jossa HPV-infektio (log-rank-testi, P = 0,001), syvä strooman invaasio (log-rank-testi, P = 0,028), jossa on kliinisessä vaiheessa (Stage Ib1-Ib2, log-rank testi, p = 0,004; Stage IIA1-IIa2 , log-rank testi, p = 0,040), histologisia erilaistumisen luokan (luokka 1-2, log-rank testi, P 0,001; Grade 2-3, log-rank testi, p = 0,001), ja kemoterapiaa ( log-rank testi, p = 0,004) (kuvio 4). Univariate Coxin regressio analyysit paljastivat, että korkeammalla tasolla B3GNT3, PLNM, okasolusyöpä antigeeni, lymphovascular tilaa osallistumista ja toistumista ennustaa huono ennuste alkuvaiheen kohdunkaulan syöpäpotilaille (taulukko 4). Sitten, Monimuuttuja-analyysissä käyttäen Coxin suhteellisen vaarat mallin kaikkiin muuttujiin, jotka olivat merkittäviä, että yhden muuttujan analyysi paljasti, että B3GNT3 ilmaisua, PLNM ja toistuminen toimi itsenäisinä ennustavat tekijät potilaalla on kohdunkaulan syöpä (taulukko 4). Siten tuloksemme osoittivat, että B3GNT3 proteiini voi edustaa potentiaalisia prognostinen indikaattori alkuvaiheen kohdunkaulan syöpäpotilaille.

(a) yleiseen eloonjäämiseen (OS) potilaista ilman imusolmuke etäpesäke korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme . (B) OS, että potilailla, joilla on okasolusyöpä antigeeni 1.5ng /ml huipulla pieni B3GNT3 ilme. (C) OS potilaille HPV-infektio on korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme. (D) Käyttöjärjestelmä potilaille syvä strooman hyökkäyksen huipulla pieni B3GNT3 ilme. (E) Käyttöjärjestelmä potilaille vaiheissa Ib1-Ib2 korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme. (F) Käyttöjärjestelmä potilaille vaiheissa IIA1-IIa2 korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme. (G) Käyttöjärjestelmä varten potilaille eriyttäminen 1-2 korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme. (H) Käyttöjärjestelmä varten potilaille eriyttäminen 2-3 korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilme. (I) OS potilaille, joilla on korkea verrattuna alhainen B3GNT3 ilmaisua, jotka saivat kemoterapiaa.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa osoitimme, ensimmäistä kertaa, että ilmentyminen B3GNT3 proteiinin esiintyminen lisääntyy kohdunkaulan syövän ja korreloi kliinisiä piirteitä, erityisesti PLNM potilailla, joilla on varhaisen vaiheen kohdunkaulan syövän. Lisäksi korkea B3GNT3 proteiiniekspression vähensi käyttöjärjestelmän ja DFS näistä potilaista, erityisesti niillä, jotka saivat kemoterapiaa. Monimuuttuja-analyysi paljasti, että B3GNT3 ilmentyminen voi olla itsenäinen prognostinen indikaattori selviytymisen kohdunkaulan syövän potilaille.

B3GNT3 on biosynteesiin poly-N-asetyylilaktosamiinin ketjujen ja biosynteesiä selkäranka rakenteen dimeerisen sialyyli Lewis . olennainen roolit B3GNT3 kasvainten synnyssä on paljastunut viime aikoina [10, 19, 20, 21]. Shiraishi [19] osoittivat, että B3GNT3 oli hyvin ilmaistu koolonisyöpäsolulinja Colo205. He raportoivat, että ihmisen paksusuolen syöpä kudosten ja koolonisyöpäsolulinja Colo205 sisältävät syöpään liittyvän glykosfingolipidit, joissa dimeerisen Lewis antigeenejä (Galβ1-3 (Fucα1-4) GlcNAcβ1-3Galβ1-3 (Fucα1-4) GlcNAc) ja B3GNT3 todennäköisesti todennäköisin ehdokas biosynteesiin selkärangan rakennetta dimeerisen sialyyli Lewis A (Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-3GlcNAc). Cerhan [10] mukaan B3GNT3 liittyy immuunijärjestelmän toimintaa ja tulehdusta, ja sillä on tärkeä rooli lymfosyyttien ihmiskaupan ja maahanmuuton, jotka johtavat kasvainsolun eloonjäämistä ja etäpesäkkeiden NHL. Toinen tutkimus osoitti, että

B3GNT3

lokuksen liittyy CA19-9 tasojen haimasyövän [21]. B3GNT3 on β-1, 3-N-acetylglucosmaniyltransferase mukana tuotannon selkäranka rakenteen dimeerisen sialyyli Lewis A, joka on hiilihydraatti antigeeninen epitooppi CA19-9. Siksi tämä voisi olla mahdollinen mekanismi taustalla assosiaatiota varianttien

B3GNT3

lokuksen ja CA19-9 pitoisuuksia. Heidän tutkimuksessa [21] ehdotettiin, että B3GNT3 näyttelee onkogeenisessä rooli tiettyjen syöpien. Kuitenkin Ho [20] kertoi, että B3GNT3 saattaa olla ratkaiseva merkitys tukahduttamaan pahanlaatuinen ominaisuudet varhaishermosolukasvaimesta ja sen muuttunut ilmentyminen saattaisi myötävaikuttaa patogeneesiin neuroblastooma. On yleistä, että tiettyjen geenien on onkogeeninen rooleja useita erilaisia ​​syöpiä, mutta anti-onkogeenisen rooleja muiden syöpien. Esimerkiksi PTK6 yliekspressoituu invasiivisia ductal rintasyöpä, vakavien munasarjasyövän ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, paksusuolen syöpä ja pään ja kaulan alueen syöpiin [22-26]. Sen sijaan, PTK6 voi olla tärkeä tuumorisuppressori eri ihmisen syöpien, kuten ihmisen kurkunpään okasolusyöpä ja ruokatorven okasolusyöpä [27, 28]. Lisäksi rooli B3GNT3in kohdunkaulan karsinooman on epäselvä. Siksi me arvioi B3GNT3 ylössäädellään kohdunkaulan syövän ja on kliinisesti liittyy kehittymistä ja etenemistä kohdunkaulan syövän. Tutkimuksessamme olemme raportoitu, että B3GNT3 mRNA: ta ja proteiinia yli-ilmentynyt kohdunkaulan syövän solulinjoissa ja kohdunkaulan syövän näytteet (vaiheet Ib-II). Kaupallisesti saatavilla vasta-aine B3GNT3 käytettiin immunohistokemiallisesti. IHC värjäys osoitti negatiivisesti tai vain heikosti normaaleissa kohdunkaulan kudokseen. Kuitenkin positiivinen värjäys B3GNT3 proteiinia nähtiin kohdunkaulan syövän yksilöitä. Lisäksi meidän tulokset Realtime-PCR, Western blotting ja IHC olivat johdonmukaisia. Siksi tämä polyklonaalinen vasta tunnistaa spesifisesti vain B3GNT3 kohdunkaulan syövän kudoksissa. Lisäksi olemme havainneet, että B3GNT3 ilmaisu korreloi kliinisten ominaisuuksien potilailla, joilla alkuvaiheen kohdunkaulan syöpä kuten HPV-infektio, FIGO vaiheessa kasvaimen koko, kasvaimen uusiutumisen, elintärkeä asema, samanaikainen kemoterapiaa ja sädehoitoa, lymphovascular tilaa osallistuminen ja mikä tärkeintä, imusolmuke etäpesäke.