Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

JCV on DNA polyomavirus hyvin sopeutunut ihmiseen. Vaikka JCV DNA on havaittu kolorektaalisyövissä (CRC), yhdistyksen välillä JCV ja CRC edelleen kiistanalainen. Kiinassa, läsnäolo JCV infektion CRC potilailla ei ole raportoitu. Täällä tutkimme JCV infektio ja viruksen DNA kuorma Kiinan CRC potilaille ja onko JCV DNA perifeerisessä veressä (PB) voidaan käyttää diagnostisena markkerina JCV liittyvän CRC.

Menetelmät /Principal Havainnot

Tumor kudoksissa, ei-syöpäkasvain-viereisiin kudoksiin ja PB näytteet kerättiin 137 CRC potilaista. Lisäksi, 80 normaalin kolorektaalisen kudoksen näytteitä potilailta, joilla CRC ja PB näytteitä 100 Terveillä vapaaehtoisilla kerättiin myös kontrolleina. JCV DNA havaittiin perättäisen PCR ja lasilevyllä-pohjainen dot blottaus. Virus-DNA: kuormitus positiiviset näytteet määritettiin kvantitatiivisella reaaliaikaisella PCR: llä. JCV DNA havaittiin 40,9% (56/137) ja CRC kudoksia viruskuorma 49,1-10,3 x 10

4 kopiota /ug DNA: ta. Kolmekymmentäneljä (24,5%) ei-syöpä peräsuolen kudoksiin (192,9-4,4 × 10

3 kopiota /ug DNA: ta) ja 25 (18,2%) PB näytteistä (+81,3-+4,9 × 10

3 kopiota /ug DNA: ta) CRC potilaista oli positiivinen JCV. Tuumorikudoksista oli korkeampi JCV kuin ei-syöpä kudoksiin (

P

= 0,003) tai PB näytteet (

P

0,001). Ei korrelaatiota läsnäolon JCV ja demografisten tai lääketieteellisten ominaisuuksien havaittu. JCV esiintyvyys PB näytteissä oli merkitsevästi liittyy JCV asema kudosnäytteistä (

P

0,001). Yksitoista (13,8%) normaali peräsuolen kudosten ja seitsemän (7,0%) PB näytteitä terveiltä luovuttajilta oli positiivinen JCV.

Johtopäätökset /merkitys

JCV infektio on usein läsnä peräsuolen kasvain kudoksissa CRC potilailla. Vaikka yhdistys välillä JCV läsnäoloa PB näytteitä ja JCV tila kudosnäytteistä todettiin tässä tutkimuksessa, onko PB JCV havaitseminen voi toimia markkerina JCV tilan CRC vaatii lisätutkimuksia.

Citation: Mou X, Chen L, Liu F, Lin J, Diao P, Wang H, et al. (2012) yleisyys JC Virus Kiinan Potilaat, joilla on peräsuolen syövän. PLoS ONE 7 (5): e35900. doi: 10,1371 /journal.pone.0035900

Editor: Herman Tse, The University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 30 marraskuu 2011; Hyväksytty: 23 maaliskuu 2012; Julkaistu: 11. toukokuuta 2012

Copyright: © 2012 Mou et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoittivat avustusta Kiinan National Science and Technology Major hanke nro 2012ZX10002006-003, National Basic Research Program of China (973 ohjelmaa) nro 2007CB513001, ja Qiu Shi professuuri Zhejiangin yliopistossa ja CX. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

John Cunningham virus (JCV) on kaikkialla läsnä, pieni, vaipattomaan polyomavirus jossa on suljettu, pyöreä, kaksijuosteinen DNA-genomi, joka usein asuu munuaisiin terveiden yksilöiden ja erittyy virtsaan suuri osa aikuisväestöstä. JCV infektio on piilevä ja johtaa elinikäiseen latenssi, mutta se voidaan ottaa uudelleen, kun immuunijärjestelmä on heikentynyt [1] – [3]. JCV liittyy tautiin pääasiassa immuunipuutteisilla yksilöitä ja sen replikaatiota gliasoluissa voi johtaa progressiivinen multifokaalinen leukoenkefalopatia (PML), usein kuolemaan johtava sairaus keskushermostoon [4]. Kuten muutkin polyoomavirukset, JCV koodaa version suuri T-antigeeni, joka voi sitoutua ja inaktivoida tuumorisuppressorigeenin proteiinien p53 ja pRB ja häiritä useita solun signalointireittien [5] – [7]. Lisäksi JCV genomisia DNA-sekvenssejä ja T-antigeenin ekspressiota on havaittu laaja ihmisen kasvaimen solutyypit, kuten oligodendrosyyttien, astrosytoomat, glioblastoomien, ependymomas, ja useimmat muut lajit aivokasvainten [8], mikä osoittaa, että JCV infektio voi liittyä ihmisen syövän synty.

äskettäin JCV todettiin myös ei-hermo syöpien, kuten maha- [9] ja keuhkosyövässä [10]. JCV infektio raportoitiin ensimmäisen mahdollisena riskitekijä peräsuolen syöpä (CRC) on työn Laghin et al. [11], jossa todettiin, että 96% CRC kudosten oli positiivinen JCV DNA-sekvenssit. Myöhemmin muut tutkimukset on julkaistu osoittaa että JCV sekvenssit todettiin 26% -88,9% CRC kudosten näyte koot vaihtelevat 18-105 [12] – [15]. Sen sijaan muut tutkimukset ovat sittemmin osoittaneet, että mitään havaittavaa JCV DNA oli läsnä peräsuolen kudoksissa osoittaa mitään yhdistyksen välillä JCV ja paksusuolen neoplasia [16] – [17]. JCV esiintyvyys eri CRC näytejoukoille saattaa johtua eroista määrityksessä herkkyyksillä eri tutkimuksissa, saastuminen näytteiden välillä, tai maantieteelliset sijainnit valitun populaation. Vaikka osoitus läsnäolo kasvain viruksen osat on ensimmäinen askel luonnehtia roolia JCV CRC Karsinogeneesin lisätodisteita, kuten korkea virusmäärä, on tarpeen tukea syy rooli. Kuitenkin vain kaksi tutkimusta ovat maininneet viruskuorma JCV CRC [11], [15]. Ottaen huomioon kiistanalainen raportit etiologiassa JCV CRC, näyttää siltä, ​​että yhdistyksen välillä JCV infektio ja CRC on tutkittava tarkemmin.

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että JCV DNA tai antigeenejä voidaan havaita ääreisverenkierron (PB) tai seerumissa. Viral komponentteja havaita verestä on perinteisesti oletettu olevan peräisin metastasized syöpäsolujen tai viruksen sisältävä solu roskat irtoa paikalliselta infektoituneessa [18]. Vaikka kaksi mahdollisille tapausverrokkitutkimukset on tehty määrittää yhdistyksen välillä JCV seropositiivisuutena ja CRC kehittämiseen [19] – [20], ei ole raportin, jossa kuvataan läsnäolo JCV DNA veressä CRC potilaiden mennessä julkaistut. Tässä tutkimuksessa selvitimme esiintyvyys JCV Kiinan CRC potilailla määrittää mahdollisen suhteen. Lisäksi tutkimme onko JCV DNA PB soveltuu diagnostisena markkerina JCV liittyvän CRC.

Methods

Ethics selvitys

Projektin hyväksyi eettinen komitean First Affiliated sairaala, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou, Kiina. Kirjallinen suostumus saatiin potilaiden ja verrokkien.

Kliiniset näytteet

Kaikki kliiniset näytteet saatiin toukokuun 2007 lokakuuta 2011 tuotujen potilaiden ensimmäinen Affiliated sairaala, College of Medicine, Zhejiang University (Hangzhou, Kiina). Tuumorikudoksia, ei-syöpäkasvain-viereisiin kudoksiin ja PB näytteitä 137 random CRC (potilaiden keski potilaan ikä, 62,99; alue, 27-86 vuotta) kerättiin alle kolmen kuukauden kuluttua CRC diagnoosin. Potilaat, joille tehdään leikkaus uusiutumista suljettiin pois. Non-syöpäkasvain-vieruskudos kerättiin alue -15 cm kauempana kasvain. Lisäksi 80 peräsuolen kudosten ulkopuolisista patologinen limakalvolla olevia potilaita kolonoskopia arviointiin toiminnallisia häiriöitä kuten ripuli tai ummetus liity syöpään tai tulehduksellinen suolistosairaus (IBD) ja 100 PB näytteitä terveiltä luovuttajilta fyysinen tarkastus joilla ei ole ollut syöpä tai polyyppi diagnoosi kerättiin valvontaa. Kudosnäytteet jaettu; yksi osa pidettiin histopatologista analyysiä, ja toinen siirrettiin kryoputkiin, pakastettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin -196 ° C: ssa lisäanalyysiä varten. Kaikki näyte tietoja on tallennettu näytekokoelmaa tietokantaan.

DNA: n eristämiseksi

Noin 50 mg kutakin kudosta näytettä homogenisoitiin 2 ml: n steriiliin putkeen 1 ml 0,09% natriumkloridiliuosta käyttäen sähköinen homogenisaattori (PRO Scientific, Oxford, CT, USA). Minimoimiseksi ristikontaminaatiota näytteiden välillä, koetin pestiin tuoreessa steriilillä vedellä kolme kertaa, 40% vetyperoksidiliuosta kahdesti, 75% etanolilla kahdesti ja kuumennettiin 95%: sta etanolia poltin 3 min näytteiden välillä. Neljäsataa mikrolitraa kutakin PB näytettä käytettiin DNA: n eristämiseen. DNA Kunkin näytteen uutettiin käyttäen MasterPure DNA Purification Kit (Epicentre Biotechnologies, Madison, WI, USA) valmistajan ohjeita. Eheyden varmistamiseksi DNA uutettiin, PCR: llä käyttäen glyceraldehydes fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) alukkeilla suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [21].

Perättäiset PCR varten JCV genomin

Perättäiset PCR-monistus suoritettiin käyttäen joukko alukkeita T-antigeenin, kuten on kuvattu aiemmin [13]. Lyhyesti, 173 bp: n tavoite JCV T-antigeeni monistettiin ensin käyttämällä aluketta JCT-1F (5′-AGT CTT TAG GGT CTT CTA-3 ’) ja JCT-1R (5’-GGT GCC AAC CTA TGG AAC AG-3 ’). Ensimmäinen kierros PCR kunnossa denaturoitiin 95 ° C: ssa 10 min, jota seurasi 30 sykliä denaturointi 95 ° C: ssa 15 s, pariutuminen 55 ° C: ssa 30 s ja pidennys 72 ° C: ssa 30 s. Perättäiset PCR suoritettiin käyttäen 2 ui ensimmäisen kierroksen tuotetta mallina, jossa alukkeilla JCT-1F ja JCT-2R (5’-TGA AGA CCT GTT TTG CCA TG-3 ’). Nested PCR ehto denaturoitiin 95 ° C: ssa 10 min, jota seurasi 30 sykliä denaturointi 95 ° C: ssa 15 s, pariutuminen 60 ° C: ssa 30 s ja pidennys 72 ° C: ssa 30 s. Sisäkkäisiä PCR menettely monistettiin 110 emäsparin kohdesekvenssiä. Vältetään mahdolliset PCR väärät positiiviset tulokset, kaksi vettä kontrollia sisällytettiin ensimmäisen kierroksen PCR ja perättäisen PCR. Jos jompikumpi valvonta kaksi vesikontrolleilla tuotti väärän positiivisen sisäkkäisen PCR, koko joukko PCR ja sisäkkäisiä PCR aloitettiin uudelleen uusilla reagenssilla. Jokaisesta näytteestä, 1 ui DNA: ta monistettiin nested-PCR: llä. Neljä mikrolitraa kutakin monistuksen tuotteet analysoitiin elektroforeesilla 2% agaroosigeelissä ja etidiumbromidivärjäyksellä.

Lasi slide-pohjainen dot blotting

nested-PCR-tuotteet puhdistettiin MinElute PCR Purification Kit (QIAGEN, Hilton, Saksa) ja lopuksi eluoitiin 10 ul: ssa EB-puskuria (10 mM Tris-Cl, pH 8,5). Puhdistetut DNA-näytteet sekoitettiin yksi tilavuus DMSO, ja täplikäs pinnoille aminosilaania dioja (CapitalBio, Peking, Kiina) kuin kolme toistoa kanssa SmartArrayer spotter (CapitalBio, Peking, Kiina). Paiston jälkeen 1 h 80 ° C: ssa jälkeen levyt huuhdottiin 0,2% SDS: ssa 5 minuuttia ja puhdistetaan pesemällä DDH

2O. TAMRA-leimattua oligonukleotidikoettimen (JCT-koetin, 5′-GTT GGG ATC CTG TGT TTT CAT CAT C-3 ’) hankittiin Invitrogen (Shanghai, Kiina) ja laimennettiin pitoisuuteen 10 uM. Hybridisaatio suoritettiin 45 ° C: ssa 2 tuntia. Objektilasit pestiin 2 x SSC /0,2% SDS 42 ° C: ssa 5 minuutin ajan, ja lopulta DDH

2O 42 ° C: ssa 5 min. Levyjä kuivattiin sentrifugoimalla ja skannattiin GenePix 4100 skanneri (Axon, Union, USA). Kuvat analysoitiin GenePix Pro 5.0-ohjelmisto (Axon).

kvantitointi viruskuorman reaaliaikaisella PCR

SYBR Green reaaliaikainen PCR-menetelmällä käytettiin määrittämään JCV viruskuorman näytteissä kuten on kuvannut Chapagain [22]. Erityisesti, alukkeet RT-JCT-F (5′-AGA GTG TTG GGA TCC TGT GTT TT-3 ’) ja RT-JCT-R (5′-GAG AAG TGG GAT GAA GAC CTG TTT-3’) käytettiin real-time PCR kohdistaminen sekvenssin T-antigeenin geenin, joka tuottaa 78 emäsparin tuotteen reaktion aikana. JCV viruskuorman kvantitointi suoritettiin Bio-Rad CFX96 Reaaliaikainen PCR Detection System käyttää 200 ng templaatti-DNA, 10 ui SYBR Green PCR Master Mix (TaKaRa, Dalian, Kiina) ja 4 pmol kutakin eteen ja taakse alukkeita. Lämpökäsittelyyn aloitettiin ensimmäisenä denaturaatiovaiheen 95 ° C: ssa 30 s, jonka jälkeen 40 sykliä 95 ° C: ssa 5 s ja 60 ° C: ssa 15 s ja vahvistus fluoresenssia seurattiin 60 ° C: ssa lopussa kunkin sykli. Standardikäyrä konstruoitiin käyttäen sarjalaimennoksia (1,0-10

7 kopiota JCV DNA: lla) JCV T-antigeenin plasmidiin. Kolme rinnakkaista tehtiin kullekin näytteelle ja reaaliaikaisen PCR tiedot analysoitiin käyttämällä Bio-Rad CFX Manager-ohjelmisto. Keskiarvoistetut kopiomäärän näytteissä laskettiin standardikäyrältä ja olivat edustavat kopioina viruksen DNA per mikrogramma genomista DNA.

Tilastolliset menetelmät

Demografiset ominaisuudet verrattiin toisiinsa CRC potilaalla (C) ja valvonnat (CRC potilaista (n) tai terveiltä luovuttajilta (H)) käyttämällä

Studentin t

-testi numeerisiin muuttujiin ja χ

2 testi kategorisen muuttujia. Sex, tupakka altistus, alkoholin käyttö, asuinpaikka, suvussa CRC, patogeenisten vaiheessa ja kasvainpaikkaa verrattiin toisiinsa JCV-positiivisten ja -negatiivisilla CRC-potilailla käyttäen χ

2 testiä. Erilaistuminen tila verrattiin välillä JCV-positiivisten ja -negatiivisilla CRC käyttävän potilaan Fisherin testiä. Tarkka logistinen regressiomalli, ikä-, käytettiin arvioitaessa yhdistyksen välillä JCV infektio ja CRC. R tilasto-ohjelmalla (v 2.12.0, www.r-project.org/) käytettiin tilastolliseen analyysiin. Kaikissa analyyseissä,

P

-arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Demografiset ominaisuudet 137 CRC potilaista, 80 ei-CRC potilaita ja 100 terveitä luovuttajien ovat läsnä taulukossa 1. CRC potilaat olivat vanhempia kuin ei-CRC potilailla (

P

0,001), mutta ei havaittu eroja CRC potilaiden ja terveillä luovuttajilla. Suvussa CRC oli yleisempää CRC potilaiden jakeita ei CRC potilailla eikä terveillä luovuttajilla, mutta erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (

P

= 0,491 C vs N,

P

= 0,162 C vs H).

Kaikki näytteet olivat positiivisia GAPDH kontrolli, joka osoittaa riittävä eheys näytteitä. Negatiivisten kontrollien molemmissa PCR-ajoa ei todettu merkkejä reagenssia saastumista. Käyttäen sisäkkäistä PCR: JCV T-antigeenin nukleotidisekvenssin havaittiin 40,9% (56 137) kasvaimen kudokset ja 24,8% (34 137) kasvaimen-viereisiin kudoksiin CRC potilaista (kuvio 1). PCR-tuotteet vahvistettiin aito JCV sekvenssit lasi-slide erilaisia ​​analyysi (kuvio 1 B). Löysimme molemmat pareittain kasvainkudoksen ja ei-syöpäkudoksen 17,5% (24 137) CRC potilaista oli positiivinen JCV DNA. 23,4% (32 137) ja 7,3% (10 137) potilaista oli JCV DNA vain kasvainkudoksessa tai ei-syöpä kasvain-vieruskudos, vastaavasti (kuvio 1 C). 18,2% (25 137) PB näytteiden CRC potilaat olivat positiivisia JCV DNA. Huomattavan suuri JCV läsnäolo havaittiin CRC kudoksissa verrattuna ei-syöpä viereisten kudosten (OR, 2,089; 95% CI, 1,213-3,636;

P

= 0,007) ja PB näytteet (OR, 3.084; 95% CI, 1,729-5,619;

P

0,001). JCV läsnäolo PB näytteiden positiivisessa yhteydessä JCV asema kudosnäytteistä (

P

0,001); se oli kuitenkin liity potilaan ikä, sukupuoli, tupakka altistus, alkoholin käyttö, asuinpaikka, suvussa CRC, patologisen vaiheessa ja kasvainpaikkaa mutta taipumus kasvaa erilaistumista CRC kudosten, vaikka tämä suuntaus ei ollut tilastollista merkitsevä (taulukko 2 ). Verrattuna kudoksia CRC potilaista, vain 13,8% (11 80) paksusuolen kudokset kuin CRC potilailla oli havaittavissa JCV DNA. Ei-parametri tilastollinen analyysi, JCV taajuuksia CRC potilaiden ja ei-CRC potilailla olivat merkittävästi erilaiset. Koska ikä kaksi ryhmää erosivat, yhdistyksen välillä JCV infektio ja CRC arvioitiin tarkka logistinen regressioanalyysi, ikä-. OR of JCV liittyvän CRC riski oli tilastollisesti merkitsevä (OR, 6,611; 95% CI, +2,928-14,929;

P

0,001). Niistä PB näytteet 100 tervettä vapaaehtoista, huomasimme, että vain 7% (7 100) oli positiivinen JCV DNA, joka oli alempi kuin JCV positiivinen prosenttiosuus PB näytteissä CRC potilaista (OR, 0,339; 95% CI, 0,118 -0,852;

P

= 0,021).

(A) 110 bp: n fragmentti monistettiin DNA eristettiin täsmäsi näytteistä peräsuolen syöpä (ylempi) ja normaalin kasvaimen viereisiin kudoksiin (alempi) kanssa nested-PCR. M: DL 2000 DNA Marker (Takara); P: positiivinen kontrolli; N1: ensimmäisen kierroksen negatiivinen kontrolli; N2: toisen kierroksen negatiivisen kontrollin. (B) Kuvat JCV sisäkkäisiä-PCR-tuotteen taulukot. Sisäkkäiset-PCR-tuotteet kasvaimen kudokset (vasemmalla) ja normaalin kasvaimen viereisiin kudoksiin (oikealla) nähtiin pinnoille aminosilaania kalvot kolme toistoa, hybridisoitu TAMRA-leimatun oligonukleotidikoettimen ja lopulta visualisoida AXON skanneri. (C) lukumäärät JCV-positiiviset näytteet 137 pareittain kasvainkudoksen, ei-syöpä vieressä kasvainkudoksen ja PB näytteitä CRC potilaista.

viruskuormaa JCV-positiivista näytettä CRC-potilaat määritettiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR: n (qRT-PCR). Virusmäärä kasvainkudoksissa vaihteli 49,15-+1,03 × 10

4 kopiota /ug DNA: ta (keskiarvo ± SD, 3795,64 ± 3054,58). Oikeastaan ​​absoluuttinen kopiomääriin JCV DNA CRC kasvaimet olivat pienemmät kuin 1 kopio per solu. Alhainen JCV virusmäärä havaittiin 34 JCV-positiivisia, ei-syöpä, kasvain-viereisten kudosten (alue, +192,85-+4,44 × 10

3 kopiota /ug DNA: ta; keskiarvo ± SD, 1470,09 ± 887,12) ja 25 PB näytettä ( alue, +81,30-+4962,99 kopiota /ug DNA: ta; keskiarvo ± SD, 945,17 ± 1140,39). Kasvaimen kudokset oli merkittävästi korkeampi JCV DNA kuin ei-syöpäkasvaimen-viereisiin kudoksiin ja PB näytteistä (kuvio 2).

JCV positiiviset näytteet määritettiin nested PCR analysoitiin käyttämällä qRT-PCR: ää. Blots edustavat keskimäärin kappale numeroita (3 toisinto kaivot) ja JCV DNA kasvainkudoksen, ei-syöpäkudoksen ja PB, vastaavasti, ja baareja edustavat laskettu mediaanit.

P

-arvot laskettiin käyttäen Wilcoxonin testi.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa, JCV havaittiin 40,9% CRC: kudosten ja 24,8% ja ei-syöpä peräsuolen kudoksiin, jotka olivat väliasentojen T-antigeenin rate aiemmissa tutkimuksissa (taulukko 3). Useita mahdollisia syitä selittää puute yksimielisiä näistä tutkimuksista, mukaan lukien mahdollinen saastuminen näytteitä otettaessa ja prosessi aikana DNA: n eristys ja PCR-monistamisen. Monissa tutkimuksissa ei ilmoittanut mitään askel valvoa vääriä positiivisia tuloksia [11] – [12], [14]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme välttää vääriä positiivisia tuloksia mainittu edellisessä tutkimuksessa [21]. Herkkyys menetelmässä on kriittinen, sillä on alhainen JCV viruskuormaa peräsuolen kudokseen on dokumentoitu [15]. Immunohistokemia, PCR, sisäkkäisiä PCR ja q-RT-PCR on käytetty havaitsemaan JCV [11], [14] – [15], [23]. JCV DNA havaittiin 1% ja 0% CRC kudosten kahdessa laajassa tutkimuksessa [16] – [17] käyttämällä yleistä PCR-määritystä, joka on tunnetusti pienempi herkkyys. Perättäiset PCR on erittäin herkkä menetelmä havaitsemiseksi JCV. Pienemmät PCR-kohteisiin on todettu olevan helpommin monistaa kuin pitkät jaksot JCV havaitsemiseen [11]. Kuten ovat kuvanneet Hori et al. [13], käytettiin sisäkkäisiä PCR alukesarjat kohdistaminen 110 bp JCV T-antigeenin sekvenssi, joka pystyi havaitsemaan niinkin vähän kuin 1 kopio JCV DNA: ta (tuloksia ei ole esitetty). On oletettu, super- topologia on erittäin homologinen JCV DNA saattaa rajoittaa PCR-monistuksen tehokkuus [11]. Emme kuitenkaan käytä topoisomeraasi I hoitoa ennen PCR-monistuksella, kuten ovat kuvanneet Laghin et al. [11], mikä voi johtaa hieman alhaisempi JCV infektio. Ikä, sukupuoli, alue ja elämäntapa valitun populaation voisi kaikki osaltaan vaihteluista JCV infektio (taulukko 3). Amerikkalainen CRC väestö yleisimmin valittu aiemmissa tutkimuksissa, joissa JCV DNA löydettiin 0% -96% CRC kudosten [11], [14], [16] – [17], [24]. Ristiriitaisia ​​tuloksia on raportoitu kahden italialaisen tutkimusryhmää [12], [25]. Hori et al. [13] ja Lin et ai. [23] tunnistettiin JCV vuonna 26,1% ja 86,4%, tässä järjestyksessä, CRC kudokset aasialaisilla. Tutkimuksessamme JCV DNA havaittiin 49,6% Kiinan CRC potilaista.

Tutkimme lisäksi läsnäolo JCV DNA kudoksessa ei-CRC potilaille. Tietyissä korkean riskin potilailla, kuten ne, joilla polyyppi tai IBD esiintyvyys CRC on huomattavasti korkeampi. Siksi potilailla, joille tehdään kolonoskopia varten polyyppi ja IBD jätettiin ohjaus kohortin ennen näytteen keräämistä. Muut kuin ikä, ei ollut lähtötilanteessa ominaista huomattavasti toisistaan ​​CRC ja ei-CRC potilailla. Kuitenkin säätö ikä ei muuttanut yhdistyksen välillä JCV infektio ja CRC. Yhdistämällä havainto muita yleisemmin JCV kasvainkudoksessa CRC potilaista, ehdotamme, että JCV korreloi CRC ja voivat osallistua CRC karsinogeneesissä tai vaihtoehtoisesti virus tartuttaa kasvainsolujen helpommin kuin ei-syöpäsoluja.

Tässä tutkimuksessa ei korrelaatiota läsnäolon JCV ja demografisten tai lääketieteellisiä ominaisuuksia kuten ikä, sukupuoli, koulutus, kliiniseen vaiheeseen, ja kasvainpaikkaa havaittiin, joka oli yhdenmukainen muiden tutkimusten [13], [15] . Kiinnostavaa kyllä, huomasimme, että kudokset CRC potilailla, jotka saivat kemoterapiaa ennen näytteenottoa oli korkeampi esiintyvyys JCV infektion verrattuna potilaisiin ilman kemoterapiaa, vaikka ero ei ollut merkittävä (taulukko 2). Yhdistyksen välinen immunosuppression ja lisääntynyt alttius infektioille on hyvin tunnustettu. Kuten käy Selgrad et al. [26] on retrospektiivinen tutkimus keskuudessa maksansiirtopotilailla, immunosuppressiopotilaita on huomattavasti korkeampi läsnäolo JCV verrattuna immunokompetenteille valvontaa. Kemoterapia huumeet voivat estää immuunivastetta ja mahdollistavat uudelleenaktivointi mahdollisesti onkogeenisten viruksia. CRC potilaat, joiden suvussa on suurempi esiintyvyys JCV T-Ag DNA, joka on sopusoinnussa tulosten kuvanneet Vilkin et al. [27]. JCV infektio on yleensä oireeton infektio ja esiintyy yleisesti myöhemmin lapsuudessa ja nuoruudessa, minkä jälkeen virus jää piilevänä munuaisissa. Lisäksi immuuni edellä mainitun tilan, geneettinen tausta voi liittyä alttiutta JCV infektion CRC.

virusmäärä kudosnäytteistä voisivat viitata rooliin JCV CRC karsinogeneesissä. Esillä olevassa tutkimuksessa, JCV viruskuormaa positiiviset näytteet CRC potilaista määritettiin q-RT-PCR. JCV virus kopioluvut todettiin olevan suurempi tuumorikudoksissa verrattuna ei-syöpä kasvain viereisten kudosten, joka on yhdenmukainen aiempien tutkimusten kanssa [11], [15]. Kuitenkin absoluuttinen kopiomäärän kudoksissa olivat niin alhaiset, että vain pieni osa paksusuolen epiteelisolujen todettiin tartunta JCV. Tämä tulos tukee ohimenevät vaikutukset JCV solumuutoksen, koska se voidaan vaimentaa tai sen genomia voidaan kadota syövän etenemisen ( ”osuma-and-run” transformaatio) [28]. JCV infektio käyttöön T-antigeeni voi helposti selittää puhkeamista kromosomi epävakautta monivaiheisessa Karsinogeneesin kuten aiemmin ehdotettu tunnettu adenooma-karsinooma-sekvenssin [29].

parhaan tietomme tämä tutkimus on ensimmäinen analyysi JCV DNA PB CRC: tä potilasta. Osoitimme, että JCV infektio on yleinen PB näytteissä CRC potilaista ja osoitti JCV tila kudosnäytteistä. Toisin kuin aikaisemmat seroepidemiological tutkimuksissa, meidän tuloksia ei voida käyttää ennustamaan riskiä CRC koska kaikki näytteet kerättiin kolmen kuukauden kuluessa diagnoosista [19] – [20]. Lisäksi läsnäolo JCV PB CRC potilailla oli suurempi kuin PB terveiden luovuttajien. Nämä tulokset tukevat ehdotusta, jonka JCV DNA PB näytteissä voi olla pätevä biomarkkeri JCV liittyvän CRC diagnoosi. Kuitenkin lääkinnälliset ominaisuudet terveiden luovuttajien kirjattiin pääasiassa oman ilmoituksen, joka voi johtaa virheelliseen luokitteluun. Vielä tärkeämpää on, JCV melkein aina jää piilevänä munuaisissa ja voidaan helposti havaita virtsassa [1] – [3]. Vaikka virus-DNA verenkierrossa pidetään yleisesti olevan peräisin soluista irtoa kasvainkudoksen, alkuperä JCV PB näytteissä on tuntematon.

Yhteenvetona JCV infektio esittelee yleisesti CRC potilaille ja voisi olla riskitekijä CRC. Ehdotamme jatkuva molekyyli-, solu- ja

in vivo

tutkimuksissa valaista JCV syövän synnyn onko JCV on taudin aiheuttaja CRC. Vaikka löysimme JCV DNA PB näytteissä voisi toimia biomarkkeri JCV liittyvän CRC, edelleen laajamittaisia ​​väestön perustuvat tutkimukset kehotetaan arvioimaan tätä yhdistystä.

Kiitokset

Tekijät Kiitokset xiaoyi Chen, Li Yuan, Yiming Tang, ja Xutao Hong heidän teknistä tukea, Michael Brownstein hänen kriittiseen lukemiseen meidän käsikirjoituksen.