Krooninen sairaus

tiivistelmä

Koska alueelliset lääkkeen annon avulla säilyttämään korkean lääkeainepitoisuuden kasvaimiin, vertasimme plasmassa ja biologista jakaantumista ja doksorubisiini (Dox) peräisin lääkeaineella täytetyt tavanomaiset liposomit paikallisten tai systeemistä antamista. Tulokset osoittivat, että lääkepitoisuus oli parantunut merkittävästi maksassa sekä pienentää veren ja muut elimet mukaan perna injektiona matkimalla porttilaskimon verenkierron (aluehallintoa). Tutkia tarkemmin kohdennettua terapeuttista vaikutusta galaktosyloitujen liposomiin kapseloitua doksorubisiinia (Dox) alueellisten hallinto, maksa kohdistaminen liposomit valmistettiin sisällyttämällä galaktosyloitujen-DPPE tavanomaisiin liposomeihin. Liposomiottoon ja kohdentaminen todennettiin

in vitro

ja

in vivo

fluoresenssimikroskopialla ja xenogen IVIS kuvantamisjärjestelmä vastaavasti. Tulokset osoittivat, että galaktoosia kohdistettuja liposomeja esitetään vahvempaa tiettyyn soluun otto ihmisen maksasyövän HepG2-soluissa verrattuna ei-kohdistettuja liposomeja.

In vivo

fluoresenssikuvantamisella osoitti, että sisäinen maksan laskeuman tavanomaisten ja galaktosyloitujen liposomien kautta perna injektio oli enemmän kuin kautta häntälaskimoon antamista ja galaktosyloitujen liposomit olivat korkeammat fluoresoiva intensiteetti verrattuna tavanomaisiin liposomeihin maksaan post pernan hallinto . Anti-kasvain vaikutus eri lääkkeen annon reitit sekä liposomiformulaatiot arvioitiin käyttäen hiiren maksan etäpesäke malli paksusuolen syöpä. Tulokset osoittivat, että syövän etenemiseen maksassa ja suoliliepeen imusolmukkeiden merkittävästi tukahdutti Dox-ladattu galaktosyloidun liposomien kautta perna injektio, kun taas mitään merkitystä havaittiin ei-kohdennettuja muotoiluja. Tuloksemme osoittivat, että paikalliset perfuusio galaktosyloitujen liposomaalisen doksorubisiinin oli suuri lupaus hoitoon maksan etäpesäke peräisin paksusuolensyöpä.

Citation: Zhao C, Feng Q, Dou Z, Yuan W, Sui C, Zhang X, et ai. (2013) Paikallinen Kohdennettu Therapy of maksametastaasin alkaen Colon Cancer by galaktosyloidun Liposome Encapsulated doksorubisiinin kanssa. PLoS ONE 8 (9): e73860. doi: 10,1371 /journal.pone.0073860

Editor: Guillermo Velasco, Complutense University, Espanja

vastaanotettu: 11 syyskuu 2012; Hyväksytty: 30 heinäkuu 2013; Julkaistu: 11 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Basic Research Program of China 2011CB911004, Beijing Natural Science Foundation of China 7122150 ja National Novel Drug Development Foundation of China 2009ZX09303-008. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

jälkeen imusolmukkeet, maksan sijalla toinen elin korkea esiintyvyys etäpesäke. Tilastojen mukaan, on enemmän kuin 70%: lla potilaista esittää maksametastaaseja niiden primaarisyöpien sijaitsee koolon-, keuhko-, luu- tai aivojen [1], [2]. Etäpesäke pidetään yhtenä tärkeimmistä ennustavat tekijät syöpäpotilailla. Esimerkiksi 5 vuoden pysyvyys mahasyövän maksan etäpesäke on vähemmän kuin 10% [3], [4], [5], [6].

Huolimatta viimeaikaisista parannuksista ensilinjan kemoterapeuttisen strategioita hoitoon maksan etäpesäke perusopetuksesta syöpään, maksaresektio on ainoa parannuskeino mahdollisuus [7]. Kuitenkin vain noin 15% potilaista, joilla maksan etäpesäke ovat kokoisen [8], lisäksi 30% tarvitse kemoterapiaa ennen resektiota [9], [10], [11], [12]. Sen vuoksi on tarpeen kehittää tehokkaampia hoito pidentää selviytymisen maksan etäpesäkkeiden alkuperäisestä syövistä.

Muodostuu transkatetri- maksan valtimoiden chemoembolization (TAE) ja porttilaskimon kemoterapiaa, interventionaalisen kemoterapia on pidetty lupaava terapeuttinen hoito maksan metastasoituneen [13], [14]. Verrattuna systeemistä kemoterapiaa, alueellinen lääkkeen annon kautta joko valtimoiden infuusiona tai porttilaskimon mahdollistaa säilyttää korkea lääkepitoisuus ja tarjoavat korkean tason sytostaatit toimintaa kasvain [15]. On todettu, että alueelliset valtimoon kemoterapia on parantunut vaste ja elämän laadun potilaiden maksan etäpesäkkeiden kolorektaalisyövissä [16]. Tämä osoitti, että interventionaalisessa hoito on tehokas tapa vakaa etenemisen maksametastaaseihin.

Koska yksi yleisesti käytetty aineita interventionaalisen terapiassa, doksorubisiinin on vakavia systeemisiä sivuvaikutuksia, kuten kardiotoksisuutta ja Luuydinsuppressioriskin jotka rajoittavat sen kliinisessä käytössä. Tämä puute voidaan voittaa menetelmillä lisäämällä lääkeaineen kertymistä kasvaimeen tai käyttämällä tehokasta lääkettä harjoittaja, joka voi tuottaa ja vapauttaa sen lastin kohdepaikkaan. Liposomit, laajimmin tutkittu lääkeaineen antojärjestelmä, on suuri kertyminen maksaan, kun taas vähäinen immunogeenisuus, biologinen yhteensopivuus ja huumeiden suojelu [17]. Lisäksi liposomit konjugoituna ligandit voivat muuttaa farmakokinetiikkaa ja kudosjakaumasta profiilia huumeita. Tämä voi johtaa parantaa tehoa sekä vähentää toksisia sivuvaikutuksia, kasvainten kasvua estävistä lääkeaineista. Sijaitsee nisäkkään hepatosyyttiset kalvot, asialoglykoproteiinireseptorin (ASGPR) voi välittää spesifinen sitoutuminen galaktosidi-sisältävien liposomien maksasoluihin [18], [19]. Tällainen liposomiin modifioitu

β

-D-galaktoosi voivat tarjota merkittäviä terapeuttisia etuja kasvaimia maksassa johtuu aktiiviseen kohdentamiseen. Lisäksi, liposomikantajille voi esiintyä suurempi spesifisyys kohti pahanlaatuinen kasvain kudoksissa, koska ne voivat teoriassa vuotaa pois verisuonten kasvaimen ympärillä. Tämä ilmiö on tunnettu Enhanced läpäisevyys Retention (EPR) vaikutus, alias passiivinen kohdentaminen [20]. Siksi on kohtuullista olettaa, että työllistymistä Dox-ladattu galaktosyloitujen liposomit (sekä aktiivisia että passiivisia kohdistamista intrahepaattinen kasvaimia) toimenpideradiologiassa kemoterapiaa (paikallishallinto parantaa lääkeaineen pitoisuus) voi parantaa terapeuttisen tuloksen maksan etäpesäke ja kello samalla vähentää systeemisiä sivuvaikutuksia lääkkeen.

tässä tutkimuksessa ehdotimme uutta terapeuttista strategiaa, jossa yhdistyivät elin kohdistaminen huumeita (galaktosyloitujen liposomaalinen Dox) kanssa aluehallintoon. Tarkoituksena ei ollut kohdistaa maksasolusyövän (HCC), mutta maksassa, mikä saattaa johtaa laajan hoitoon etäpesäke eri kudosalkuperää maksassa. Koska on olemassa runsaasti asialoglykoproteiinireseptorin ilmentyy hepatosyyttien, galaktosyloitujen liposomi valittiin välittäjänä kohdistaa maksaan. Vaikka anti-kasvain vaikutus lääkeaineella täytetyt galaktosyloidun liposomien on maksasyövän on osoitettu riittävän prekliinisissä, ole tutkimuksia sen soveltaminen metastaattisessa maksakasvaimia on raportoitu. Kun veri sekä sisäelimet ja pernan suoritetaan normaalisti maksan kautta porttilaskimo, perna injektio valittiin jäljittelemään porttilaskimon perfuusion arvioimiseksi edut galaktosyloidun liposomaalisen Dox hoidossa maksan metastasoituneen. Ennen kohdennettujen liposomien aluehallinnossa, plasman ja biologinen jakautuminen doksorubisiinin huumeiden ladattu tavanomainen liposmes oli päättänyt arvioida paremmuudesta paikallisen yli systeemistä antoa varten kasvun lääkeaineen pitoisuus kohde- elimessä. Tämän jälkeen anti-kasvain vaikutus uusien terapeuttisten strategiaa paksusuolen syövän maksan etäpesäkkeitä tutkittiin käyttämällä eläinmallia maksan etäpesäkkeiden paksusuolen syöpä. Tietääksemme tämä olisi tähän mennessä ensimmäinen tutkimuksen tällaisen terapeuttinen strategia. Tuloksemme voivat tarjota vaihtoehdon potilaille, joilla on leikattavissa oleva maksan etäpesäke primaarikasvaimista.

Tulokset

farmakokinetiikkaa opinnot Dox-ladattu tavanomaiset liposomit

vaikutuksen arvioimiseksi erilaisten antoreittejä pitoisuudesta ja biologista jakaantumista huumeiden aiheuttama liposomikantajille, farmakokinetiikkaa tutkimukset Dox-ladattu perinteisen tehtiin. Liposomaalinen doksorubisiini at kyllästysannoksena 6 mg /kg tuotiin Balb /c-nu hiirille joko perna injektiona tai i.v. injektio. Kuten kuviossa 1, huippu plasmassa Dox pernasta injektion ryhmässä oli merkitsevästi pienempi kuin maasta i.v. injektio (p 0,01). Kaksitoista tuntia injektion jälkeen, plasman lääkkeen molempien ryhmien tuli samanlaisia. Lisäksi lääkeaineen pitoisuus merkittävästi parannettu maksassa 10 tunnin post paikallishallinto verrattuna i.v. injektio (p 0,01), kun se oli pienempi sydämen ja munuaisten. Tämä ainutlaatuinen pharmacolinetics profiili voi johtaa pidentää kliinisiä etuja tuloksena on parantunut terapeuttinen vaikutus maksansisäisestä kasvaimia ja vähentää sivuvaikutusta muihin elimiin. Nämä tulokset osoittivat, että alustava ajatus liposomikantajille yhdistettynä paikalliseen hallintoon hoitoa maksan etäpesäkkeitä oli mahdollista. Tämän perusteella seurauksena olemme edelleen suunniteltu uuden hoidon hoito Tässä tutkimuksessa, joka yhdistää kohdennettu liposomeja perna injektion tutkia, jos se voisi syntyä parempi kasvainten vastainen vaikutus. Tämän saavuttamiseksi galaktosyloitujen liposomit valmistettiin sisällyttämällä galaktosyloidun DPPE tavanomaisiin liposomeihin.

Liposomalia doksorubisiinia kyllästysannoksena 6 mg /kg tuotiin Balb /c-nu hiirille joko perna injektiona tai i.v. injektio. Lääkkeen antamisen jälkeen, veren, maksan, sydämen ja munuaisten kerättiin käsitellyistä hiiristä. Doksorubisiini pitoisuudet suhteessa aikaan plasmassa (A), maksassa (B), sydän (C) ja munuaisten (D) määritettiin HPLC: llä.

luonnehdinta galaktosyloidun DPPE (Gal-DPPE)

valmistamiseksi galaktosyloidun liposomeihin, yksi apuaineita, galaktosyloitujen DPPE, valmisti ensimmäisenä. Järjestelmä synteesiin Gal-DPPE osoitettiin olevat tiedot (Kuva S1). Välituotteen 5 (kuviossa S1) on todettu, että

1H-NMR (400 MHz, CDCI

3): δ 4,97 (br s, 1H, H-1), 4,07-4,03 (m, 2H), 3,95-3,93 (m, 1 H), 3,81 (m, 1 H), 3,72-3,64 (m, 3H), 3,57 (m, 1 H), nämä 8HS olivat CH- ja -CH

2- galaktoosia (paitsi H-1) ja -OCH

2-, 2,79 (s, 4H, -COCH

2CH

2CO-), 2,39-2,38 (t, 2 H, -CH

2COO -), 1,61-1,58 (m, 4H, -OCH

2C

H

2- ja -C

H

2CH

2COO-), 1,32 (m, 8H, 4 x -CH

2) ppm.

lopputuote Gal-DPPE on hyvin tunnettu seuraavasti.

1H-NMR (400 MHz, CD

3OD): δ 5,36-5,32 (m, 1 H, -CHOCOR), 5,30-5,18 (br s, 1 H, H-1), 4,04-3,34 (m , 16 H, -CH

2OCOR, 2 x -CH

2OP-, -OCH

2-, -CH

2N- ja CH- ja -CH

2- vuonna galaktoosi paitsi H-1), 2,35-2,11 (m, 6 H, 2 x -CH

2COO-, -CH

2CON-), 1,74-1,50 (m, 8 H, -C

H

2CH

2CON-, 2 x -C

H

2CH

2COO-, -C

H

2CH

2O-), 1,44-1,24 (m, 56 H, -CH

2), 0,93-0,86 (t, 6H, 2 x -CH

3) ppm. Tämä tulos oli periaatteessa yhdenmukainen että aiemman raportin [21]. ESI-MS: m /z laskettu C

52H

100NNaO

15P (M + H)

1032,7, havaittu 1032,0.

Liposome Characterization

tyypillisesti kaikki suulakepuristetut liposomin suspensiot osoitti partikkelikoko vaihtelee 100-140 nm, ja PDI liposomien laski alueella 0,1-0,2 (taulukko 1). Kokojakauman kunkin liposomi on esitetty tiedot (kuva S2). Halkaisija galaktosyloitujen liposomien (Gal-lipo, 130,5 nm) oli hieman suurempi kuin tavanomaiset liposomit (CL, 106,2 nm), mikä johtuu sisällyttämistä Gal-DPPE. Sekä Dox-ladattu CL (114,9 nm) ja Gal-lipo (134,8 nm) oli hieman suurempi z-keskimääräinen halkaisija arvoja kuin tyhjiä liposomeja johtuvat kapseloitu doksorubisiini molekyylejä. Kuitenkin tulokset osoittivat, että liposomit valmistetaan tässä tutkimuksessa voisi antaa lääkkeen maksaan jälkeen koko endoteelin fenestrae hiiren maksassa sinusoids on yli 140 nm [22].

liposomiottoon Analysis

vaikutus Liposomikonsentraatio on sisäänottoon ASGPR

+ HepG2-soluissa ja ASGPR

– HCT-8 solua esitetään kuviossa. 2. fluoresenssin voimakkuuden keskiarvolla solujen jälkeen 2 tunnin inkubaation liposomien määritettiin käyttäen Image-Pro Plus kuvankäsittelyohjelma (Media Cybernetics) kvantitatiivista arviointia. Erot fluoresenssi kahden solulinjoja inkuboitiin vastaavien liposomien ei voida erottaa, kun lipidien pitoisuus oli alle 100 uM (nähdään kuviossa 2B), vaikka HepG2-soluissa käsiteltiin Gal-lipo esitetty hieman korkeampi fluoresenssi-intensiteetti kuin toiset. Tämä saattaa katsoa johtuvan korkean epäspesifisen soluunottoa kun lipidien pitoisuus oli alhainen. Spesifinen sitoutuminen oli siis ei riitä näyttämään merkittäviä eroja ryhmien välillä. Kanssa lisääntynyt pitoisuus Gal-lipo (100 uM), HepG2 solut voitiin selkeästi värjätä alle fluoresenssi microcopy Ex /Em 488 nm /505 nm, joka osoitti merkittävästi korkeammat solujen sisäänottoa verrattuna fluoresenssin intensiteetti esittämä HCT-8 soluja käsiteltiin joko Gal-lipo tai CL tai HepG2-soluissa käsitelty CL samalla lipidien pitoisuus (p 0,001). Tämä osoitti, että tiettyjä otto Gal-lipo by ASGPR

+ HepG2-soluissa oli koholla yhä lipidikonsentraatio tasolle merkittävä ero. Ottoa solun sisään HepG2 ja HCT-8-soluja inkuboitiin 100 uM eri liposomien 4 tuntia havaittiin myös, ja ei havaittu mitään eroja ryhmien välillä (tuloksia ei ole esitetty). Tämä viittasi siihen, että epäspesifisen sisäänoton olisi huomattava parannus, kun oli inkuboitu aika oli riittävän pitkä, jolloin vähennetään ero fluoresenssin tuottamien erityisten otto. Konsentraatio 100 uM lipidi voitaisiin varmistaa riittävä fluoresenssisignaalit ne heijastavat reseptorivälitteisen liposomiottoon 2 tunnin ajan. Näin ollen, 100 uM Lipidikonsentraatio valittiin seuraavat kokeet.

HCT-8-soluista (ASGPR-) ja HepG2-soluissa (ASGPR +) inkuboitiin joko tavanomaisia ​​liposomeja (CL) tai galaktosyloitujen liposomien (Gal- lipo) 2 tuntia eri lipidien konsentraatio on 10 100 um. Soluunottoa liposomien visualisoitiin fluoresenssimikroskopialla vuoksi sisällyttäminen 25-NBD-kolesterolin liposomeihin. Keskimääräinen fluoresenssin intensiteetti esittämä soluihin määritettiin käyttäen Image-Pro Plus kuvankäsittelyohjelma (Media Cybernetics). A) Fluoresenssi kuvantaminen solujen liposomien ottoa. B) kvantitatiivinen analyysi keskimääräisen fluoresenssi-intensiteetin. ”*” Tarkoittaa merkitsevää eroa (p 0,001). CL: tavanomaiset liposomit; Gal: galaktosyloitujen liposomit.

Kun arvioidaan tiettyyn soluun oton, HCT-8 ja HepG2 soluja inkuboitiin CL /gal-lipo eri keston, vastaavasti. Pohjimmiltaan, inkubointi NBD-kolesterolin sisällytetty liposomeihin solujen kanssa 37 ° C: ssa johti ajasta riippuva oton (Fig. 3). HepG2-solut käsiteltiin Gal-lipo esitetään vähäinen kertymä 15 min inkuboinnin, kun taas mitään havaittiin vihreän fluoresenssin, kun HepG2-soluja inkuboitiin CL. Tällaiset fluoresenssi tuli asennus 30 min ja 1 tunnin inkuboinnin. Keskimääräinen fluoresenssi-intensiteetti HepG2-soluja inkuboitiin Gal-lipo 1 tunnin ajan oli selvästi voimakkaampi kuin muiden käsiteltyjen ryhmien (p 0,001), mikä osoittaa korkeampaa sisäänoton soluun. Päinvastoin, HCT-8-soluja inkuboitiin joko CL tai Gal-lipo tuskin aiheuttaa mikä tahansa solu ottoa koko inkuboinnin ajan. 2 tunnin inkuboinnin kohta, ei merkittävästi parannettu fluoresenssin intensiteetti havaittiin Gal-lipo käsitellyissä soluissa verrataan, että 1 tunnin inkuboinnin jälkeen (tuloksia ei esitetty). Näin ollen, 1 h inkuboinnin katsottiin olevan riittävä vastaamaan tiettyyn soluun ottoa. Tämä tulos hyvin osoitettu, että galaktosyloidun liposomit voisivat nopeasti sitoutua ASGPR

+ solujen välityksellä reseptorin mutta ei ASGPR

– soluja, mikä on tehokkaampi tapa ottoa galaktoosi kohdistettujen liposomin kuin pinosytoosiksi.

HCT-8-soluista (ASGPR-) ja HepG2-soluissa (ASGPR +) inkuboitiin joko tavanomaisia ​​liposomeja (CL) tai galaktosyloitujen liposomit (Gal-lipo) 37 ° C: ssa eri keston. Cellular liposomien ottoa leimattu 25-NBD-kolesteroli oli näkyviksi fluoresenssimikroskopian. Keskimääräinen fluoresenssi-intensiteetti edustaa Durg sisäänotto määritettiin käyttäen Image-Pro Plus Imaging ohjelmisto. A) Fluoresenssi kuvantaminen solujen liposomien ottoa. B) kvantitatiivinen analyysi keskimääräisen fluoresenssi-intensiteetin hoitoon 1 tunnin inkubaation jälkeen. ”*” Tarkoittaa merkitsevää eroa (p 0,001). CL: tavanomaiset liposomit; Gal: galaktosyloitujen liposomit.

Epäspesifinen sisäistämisen liposomien solujen kautta endosytoosin voidaan vähentää heikon sujuvuutta kalvo, joka voisi johtua muutoksista jäykkyyden lipidikaksoiskerroksen, sen toiminnallisuutta ja /tai tasoa soluenergiaa kylmällä [23]. Kuitenkin, reseptorivälitteiset välistä sitoutumista kohdesoluihin ja ligandi-konjugoidun liposomien voi tapahtua sekä 4 ° C: ssa ja 37 ° C: ssa [24]. Tämä viittasi siihen, että reseptorivälitteisen endosytoosin olisi ensisijainen reitti solun liposomien ottoa alle kylmällä säällä. Siksi kohdentaminen galaktosyloidun Liposomien tutkittiin tarkemmin päälle ASGPR

+/- soluja eri inkubaatiolämpötila. Kuten kuviossa. 4, sekä CL ja Gal-lipo ei kuljettaa fluoresenssin HCT-8-soluista sen jälkeen, kun 1 tunnin inkuboinnin 4 ° C: ssa fluoresenssimikroskopialla. HepG2-solut, kuitenkin osoitti suhteellisen heikko mutta näkyvä vihreän fluoresenssin kanssa inkuboinnin jälkeen Gal-lipo 1 tunnin ajan 4 ° C: ssa. Lisäksi fluoresenssin voimakkuuden keskiarvo Gal-lipo käsiteltyjen HepG2-soluissa oli merkittävästi voimakkaampi kuin CL käsitellyistä soluista tai Gal-lipo käsiteltyjen HepG2-soluissa (p 0,001). Tämä osoitti, että Gal-lipo voitaisiin kohdistaa HepG2-soluissa ja reseptorivälitteisen endosytoosin osaltaan tietenkin lisätä soluunottoa kohdistettuja liposomeja. Kun nostamalla lämpötila 37 ° C, heikko fluorencence kaikki kontrolliryhmän solujen voitiin havaita. Lisäksi HepG2-soluja inkuboitiin Gal-lipo ovat vahvempia fluoresenssin intensiteetti kuin 4 ° C: ssa. Nämä tiedot osoittivat, epäspesifinen liposomien sellulaariseen ottoon tapahtuisi kehon lämpötilassa.

HCT-8-soluista ja HepG2-soluja inkuboitiin joko tavanomaisia ​​liposomeja (CL) tai galaktosyloitujen liposomit (Gal-lipo) 4 ° C: ssa 1 h, ja sitten se lämmitettiin 37 ° C: ssa jatkettiin inkubointia vielä 1 tunti. Cellular liposomien ottoa leimattu 25-NBD-kolesteroli oli näkyviksi fluoresenssimikroskopian. Keskimääräinen fluoresenssi-intensiteetti määritettiin kvantitatiivisesti käyttäen Image-Pro Plus Imaging ohjelmisto. A) Fluoresenssi kuvantaminen solujen liposomien ottoa. B) kvantitatiivinen analyysi keskimääräisen fluoresenssi-intensiteetin. ”*” Tarkoittaa merkitsevää eroa (p 0,001). CL: tavanomaiset liposomit; Gal: galaktosyloitujen liposomit.

Distribution Profile CL ja Gal-lipo

tutkimiseksi kohdentamiskykyä Gal-lipo sekä liposomit leimattiin lipofiilinen fluoresoiva väriaine DiR ja käyttöön hiiriin iv ja pernan injektio, vastaavasti.

in vivo

biojakaantumi- ja reaaliaikaisen kaupan CL ja Gal-lipo visualisoitiin käyttäen eläviä fluoresenssikuvantamisella tekniikkaa. Koska se maksaisi useita minuutteja loppuun perna injektio, vain yksi hiiri oli mukana jokaisessa ryhmässä. Tämä koe suoritettiin kolme kertaa, ja edustava tulos esitetään kuviossa. 5. Havaittiin, että liposomit pääasiassa talletetaan maksan ja pernan riippumatta liposomikoostumus ja antotapa (Fig. 5A). Sisäiset maksan fluoresoiva intensiteetti vähitellen kaikilla käsitellyillä hiirillä ja huippu saavutettiin 2 tunnin post liposomaalinen hallinto seurasi lasku ajasta riippuva tavalla (kuvio. 5B). Punainen fluoresenssi maksa galaktosyloitujen liposomit eivät esittäneet ylivoima ensimmäisen havainnon ajankohta (30 min injektion jälkeen). Toisaalta, se oli pienempi kuin tavanomaisten liposomien kautta sekä häntälaskimoon ja perna injektioita. Kuitenkin sisäinen maksan fluoresoiva intensiteetti Gal-lipo oli lisääntynyt nopeasti 1 h ja ylitti CL molemmille Antoreiteiksi osoittaa, että enemmän galaktosyloidun liposomeja kertynyt maksaan kuin CL. Lisäksi fluoresoiva intensiteetti sekä liposomeja pernan injektion pidettiin korkeammalla tasolla kuin kautta häntälaskimoinjektio, mikä osoittaa, että sisäinen maksan laskeuman liposomin voitaisiin parantaa perna injektio menetelmällä. Lisäksi voimakkain fluoresenssi havaittiin hiiren injektoitu Gal-lipo kautta perna 2 tuntia injektion, mikä viittaa siihen, että molemmat elin kohdistaminen kantoaallon ja aluehallinnon reitti voisi parantaa kertyminen lääkeannostelun järjestelmä (liposomi) maksassa, joka voitaisiin tehokkaasti parantaa lääkeaineen pitoisuus kohde- elimessä.

tavanomaiset liposomit (CL) ja galaktosyloitujen liposomit (Gal-lipo) leimattiin DiR. Jokainen liposomi, joka sisältää yhteensä 200 ug lipidi ininjected Balb /c-nu hiirille joko hännän laskimoon tai pernan antoa.

in vivo

biojakaantuminen seurattiin elävän eläimen kuvantamisjärjestelmä Ex /Em 745 nm /820 nm eri tunnin kohdalla injektion. Fotoni säteily pinnalla maksan eläimen ilmoitettiin fotonien sekunnissa neliösenttimetriä kohden steradiaania (p /s /cm

2 /sr). Kuvat ovat yhdiste kuvat syntyvät Living Image ohjelmisto. A) In vivo pituussuunnassa seurantaa sekä liposomeja. B) analyysi fluoresenssikuvantamisella käyttäen Living Image ohjelmistoa.

In vivo

Studies

Tämän tutkimuksen tavoitteena on kehittää uusia terapeuttisia hoito-ohje interventio metastasoituneen maksasyövän. Strategia on kohdistaa elin-maksassa, mutta ei syöpäsoluja. Siksi keinotekoinen maksa metastaattinen malli paksusuolensyöpä määritettiin käyttäen ihmisen paksusuolen syöpäsolu HCT-8. Koska HCT-8-soluista on korkea suuruus maligniteetti, siirrostettua maksakasvain voisi entisestään etäispesäkkeitä suoliliepeen imusolmuke. Etenemisen kasvaimen arvioitiin kaksi seikkaa: 1) AS kasvain maksan esitetty muodoltaan epäsäännöllisiä, on vaikea mitata tuumorin koko tarkasti. Paino kasvain maksassa oli täten käytettiin arvioimaan maksan syövän etenemiseen; 2) paino karsinooman suoliliepeen imusolmuke. Suoliliepeen imusolmuke etäpesäke voisi löytyä 2 viikkoa sisäiset maksan soluinokulaation. Sitten etäpesäkkeistä nopeasti 3-4 päivää ja johtaa eläinten kuolemaan, jos mitään hoitoa eteni. Siksi kaikki hiiret tässä kokeessa hoidettiin käyttämällä lääkettä liposomit /vapaa Dox päivänä 8 post soluinokulaation ja lopetettiin päivänä 10, kun lääkkeen hallinnon. Lääke 6 mg /kg valittiin

in vivo

hoidossa.

Vaikka menetelmä porttilaskimoruiskeella hiiren on raportoitu [25], se on edelleen olemaan monimutkainen leikkaus ja vaikea suorittaa tehokkaasti suuri määrä eläimiä. Perna on ensisijainen imujärjestelmäelinten jonka tiedetään virtaavat maksan kautta pernan ja portaalin suonet [26]. Siksi perna injektio valittiin jäljittelemään porttilaskimon perfuusio. Tämä menetelmä oli osoittautunut tehokkaaksi tuottaa liposomien maksaan meidän aiemmissa tutkimuksissa [27].

Kuten paljasti farmakodynamiikkaan tutkimuksessa (Fig. 6), hoito vapaa Dox ollut terapeuttista vaikutusta maksan kasvain kontrolliin verrattuna PBS: ää, riippumatta siitä, lääkkeen antoreitti. Keskimääräinen maksakasvain paino vapaiden Dox hoidettujen ryhmien kautta i.v. (0,27 ± 0,14) ja pernan injektio (0,29 ± 0,1) oli verrattavissa PBS-ryhmään (0,24 ± 0,06). Samoin CL-Dox johti marginaalinen estoa maksassa syövän etenemiseen. Lääke hallinto sekä i.v. (0,23 ± 0,08) ja pernan injektio (0,27 ± 0,12) ei tehokkaasti vähentää painoa kasvain maksassa verrattuna PBS-ryhmään. Kuitenkin lääkeaineella täytetyt Gal-lipo kautta perna hallinto, kuten odotimme, havaittiin merkittävä vaikutus kannalta tukahduttaminen syövän etenemisen maksassa (0,15 ± 0,06, p

Gal /perna vs PBS = 0,015), vaikka tällaiset liposomiformulaationa kautta iv pelataan pieni rooli eston maksan taudin etenemiseen (0,22 ± 0,16). Lisäksi merkitty kasvaininhibitioaktiivisuuden voitiin havaita ryhmässä käsitelty lääkeaineella täytetyt Gal-lipo kautta perna kyseisenä ilmaisella Dox (p

Gal vs Dox /perna = 0,0011) tai CL-Dox (p

Gal vs CL /perna = 0,043). Tämä viittaa siihen, että kasvaimen vastainen vaste oli parantaa kohdennettujen liposomien ja paikallisen annon.

kolme formulaatiot (Dox yksin, CL-Dox ja Gal-Dox) tuotiin tuumoreita kantavaa hiirtä päivänä 7 post soluinokulaation kautta kaksi Antoreiteiksi häntälaskimoinjektio ja perna injektio. Lääke annos hallinnoi oli 6 mg /kg. A) syövän etenemisen maksassa arvioitiin keskiarvo maksakasvaimen painoa. B) Mesenteric imusolmuke etäpesäke arvioitiin keskipainosta Metastasoituneen peräisin suoliliepeen imusolmukkeesta. Tulokset edustavat keskiarvoa ± SE. ”*” Osoittaa merkittävää eroa (p 0,05).

Yksi käyttöaiheilla tässä kasvain malli on etäpesäkkeiden suoliliepeen imusolmuke, ja siten se on tärkeä indikaattori arvioida syövän etenemiseen. Keskimääräinen paino karsinooma metastasizing ja suoliliepeen imusolmuke ryhmistä hoitaa vapaa Dox kautta i.v. (0,86 ± 0,57 g) tai pernan injektio (0,77 ± 0,56 g) ei ollut merkittävää eroa verrattuna PBS-ryhmään (1,34 ± 0,54 g). Kapselointi Dox CL osoitti vieläkin vakavampi etäpesäke kuin käsitelty Dox. Tämä voidaan katsoa johtuvan hidastumisen lääkkeen vapautumisen liposomeista mikä vähentää vapaan lääkeaineen pitoisuus kohdepaikassa. Kuitenkin keskipaino metastasoituneen eläimistä ruiskutetaan CL-Dox kautta perna oli merkitsevästi pienempi kuin kautta i.v. (P

CL /perna vs i.v. = 0,0059). Tämä osoitti, että reitin perna injektion voisi parantaa kasvaimen vastaisen vaikutuksen. On rohkaisevaa, lääkeaineella täytetyt Gal-lipo kautta sekä i.v. (0,41 ± 0,27, p

Gal /iv vs PBS = 0,0005) ja pernan hallinto (0,3 ± 0,5, p

Gal /perna vs PBS = 0,0028) osoitti huomattavasti voimakkaampi vaikutus kannalta tukahduttaminen syövän etenemisen mesenteerisissä imusolmuke verrattuna kontrolliryhmään. Lisäksi merkittäviä eroja ei havaittu eläinten käsitelty Gal-Dox ja CL-Dox kautta joko perna injektio (p

Gal vs CL /perna 0,001) tai i.v. (P

Gal vs CL /i.v.. = 0,007) inhibitioon etäpesäkkeiden suoliliepeen imusolmuke. Nämä tulokset osoittivat, että terapeuttinen vaikutus etäpesäkkeitä maksan voitaisiin suuresti parantaa galaktosyloidun liposomi kautta perna hallinto matkimalla porttilaskimon verenkierron.

Yksi tärkeimmistä syistä rajoitetaan kliininen käyttö Doksorubisiini sen systeemisiä sivuvaikutuksia. Tämä systemaattinen myrkyllisyys voitaisiin vähentää alueellisia lääkkeen antamisesta. Koska terapeuttinen strategia on kohdistaa elin-, maksan vaurioita mahdollisesti aiheuttamista parantunut lääkepitoisuus aiheutuu paikallisesta lääkkeen antamisen ja kohdennettua lääkeväliaineesta (Gal-lipo) tulisi harkita. Siksi normaalissa maksassa kudoksissa kunkin kasvaimen joissa hiiren käsittelyn jälkeen eri lääkeformulaatioiden kautta perna injektion kerättiin ja kiinnitettiin käyttämällä 10% formaliinilla 24 tunnin ajan, ja H & E-värjäys suoritettiin. Vuodesta H & E-värjäys tulokset (kuvio 7), ei vakava maksaleesioiden voitiin havaita joukossa näytteitä ryhmistä käsitelty vapaa Dox, CL-Dox ja Gal-Dox kautta perna injektion verrattuna PBS kontrolliryhmään. Samanlaisia ​​lievä maksaleesioiden esiteltiin näytteestä, joka voitaisiin katsoa johtuvan rokottaminen kasvainsolujen maksassa. Lisäksi mitään eroa CL-Dox ja Gal-Dox ryhmä havaittu. Tämä tulos osoitti, että hoito kohdistaminen elimeen ei aiheuta vaurioita normaalien kudosten, mutta parantaa kasvaimen vastaisen vaikutuksen, vaikka lääkkeen pitoisuus sisällä maksassa lisääntyi elimen kohdennettuja liposomin ja alueellisten lääkkeen antoa.

normaali maksan kudoksissa potilailla, joita hoidettiin kolme lääkeformulaatioista kautta perna injektio ja PBS ryhmiä kerättiin ja kiinnitetään käyttäen 10% formaliinilla 24 h huoneen, ja sitten hematoksyliinillä ja eosiini värjäyksen (H & E-värjäys) suoritettiin. Suurennos = 400 x.

Keskustelu

Syöpä on yksi yleisimmistä kuolinsyistä. Kehittää tehokkaita hoitostrategioita on kohokohta biolääketieteellisen tutkimuksen. Koska pahanlaatuisuuden syöpään liittyy niiden kyky muodostaa etäpesäkkeitä, uusien menetelmien hallita etäpesäke voisi olla vaihtoehto parantaa hoitotuloksia. Tämän tavoitteen saavuttamiseksi, uskomme, kaksi näkökohtaa tulisi harkita. Yksi on lisätä tehokkaan pitoisuuden syöpälääkkeet tuhota metastaattisen microenvironment kasvain ja pidentävät viipymäaikaa huumeita. Toinen on vähentää sivuvaikutuksia lääkkeiden normaaleissa kudoksissa. Epäilemättä, liposomit ovat osoittautuneet ihanteellinen lääke kantaja, jolla on vahva vaikutus farmakokinetiikkaan ja kudosjakaumasta sisällytetty lääkkeiden johtaen parannetun tehokkuuden sekä vähentää huomattavasti järjestelmällinen myrkyllisyyden huumeita. Lisäksi alueellinen kemoterapia kuten porttilaskimon verenkierron generoi suuren lääkeaineen pitoisuutta kohdennettuja päällä ja samanaikaisesti alhaisella lääkeaineen pitoisuus verenkiertoon ja muihin kudoksiin. On arvioitava mahdollisuudet soveltaa liposomiformulaatiot paikallisten hallinnon terapiassa maksan etäpesäkekasvainten, ensin määritetään plasman ja biologinen jakautuminen doksorubisiinin huumeiden ladattu tavanomaiset liposomit. Tulokset osoittivat, että alue- liposomaalinen doksorubisiini antoa perna injektiona matkimalla porttilaskimon verenkierron esitti merkittävästi korkeampi pitoisuus maksassa mutta matalampi plasman, sydämen ja munuaisten verrattuna systeemisen annon (i.v. injektio). injektio.