Krooninen sairaus

tiivistelmä

Galectins ovat proteiineja, jotka sitovat β-galaktosidia sokerit ja tarjota uudenlaista mahdollisia biomarkkereita ja terapeuttisten kohteiden syövässä. Galektiini-1, -3 ja -9 ovat herättäneet eri tutkimusryhmien, mutta niiden ilmentymistä ja toimintaa kohdunkaulan syöpä on edelleen epäselvä. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää fenotyypin galektiini-1, -3 ja -9 ilmentävien solujen ja yhdessä kliinis-patologinen parametrit kohdunkaulan syöpä. Galektiini-ilmentyminen tekee kasvainsoluissa, kasvaimen epiteelin infiltroivien immuunisolujen ja strooman solujen levyepiteelin kohdunkaulan syöpä (n = 160). Korrelaatiot kliinis-patologinen parametrit ja selviytymisen tutkittiin mukaisesti REMARK suosituksiin. Olemme lisäksi tutkineet onko galectins ilmaistiin tuumorisolut, fibroblastit, makrofaagit ja T-solut. Galektiini-1 ja -9 molemmat ilmaisseet tuumorisolut 11% näytteistä, kun taas 84% ​​ilmaistuna galektiini-3. Vahva galektiini-1 ilmentymistä tuumorisoluissa oli itsenäinen ennustaja köyhien eloonjäämisen (riskisuhde: 8,02, p = 0,001) ja korreloivat lisääntynyt kasvaimen invaasio (p = 0,032) ja vastaanottaa leikkauksen jälkeinen sädehoidon (p = 0,020). Heikko ja positiivinen kasvainsolun galektiini-3 ilmentyminen korreloi lisätä ja vähentää kasvaimen invaasio, vastaavasti (p = 0,012). Kasvainsolun ilmentyminen galektiini-9 osoitti suuntaus parantunut eloonjääminen (p = 0,087). Hallitseva immuunijärjestelmän solutyyppi ilmentävät galektiini-1, -3 ja -9 olivat CD163

+ makrofageja. Galektiini-1 ja -3 ilmaistiin pienen T-solujen populaation. Galektiini-1 oli pääasiassa ilmaiseman fibroblastien kasvain strooman. Lopuksi, samalla kun kasvainsolujen ilmentymisen galektiini-9 näytti edustavan hyödyllinen vaste, galektiini-1 ilmaisua voidaan käyttää markkerina aggressiivisempi syövän hoitoon.

Citation: Punt S, Thijssen VL , Vrolijk J, de Kroon CD, Gorter A Jordanova ES (2015) galektiini-1, -3 ja -9 Expression ja kliinistä merkitystä Squamous Kohdunkaulan syöpä. PLoS ONE 10 (6): e0129119. doi: 10,1371 /journal.pone.0129119

Academic Editor: Pierre Busson, Gustave Roussy, FRANCE

vastaanotettu: 06 helmikuu 2015; Hyväksytty: 4. toukokuuta 2015 Julkaistu: 12 kesäkuu 2015

Copyright: © 2015 Punt et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Alankomaiden Cancer Society (https://www.kwf.nl) tukee taloudellisesti SP (myöntää UL2010-4801) ja VLT (avustus VU2009-4358) . Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kohdunkaulan syöpä aiheutuu suuri riski ihmisen papilloomaviruksen (HPV) infektio [1]. Kuolleisuus on laskenut 80% vuoden 20

luvulla, pääasiassa ottamalla käyttöön seulonta ehkäisyyn ja varhaiseen havaitsemiseen kohdunkaulan syövän [2]. Tästä edistyksestä huolimatta kohdunkaulan syöpä on edelleen toiseksi yleisin kuolinsyy syöpä nuorilla naisilla maailmanlaajuisesti. Lisätutkimuksia siis valittava prognostisia biomarkkereita ja terapeuttisia tavoitteita. Mahdolliset uudet tavoitteet ovat galectins, proteiineja, jotka sitoutuvat β-galaktosidi sisältävä glykaanien yhden tai useamman hiilihydraatin (CRD) [3]. Viime vuosina on käynyt ilmeiseksi, että galectins tärkeä rooli syövän etenemiseen säätelemällä immuunisolujen homeostaasin [4], kasvaimen etäpesäke [5], ja kasvaimen angiogeneesissä [6].

eniten tutkittu galektiini tyyppejä niin pitkälle galektiini-1, -3 ja -9. Galektiini-1 muodostuu yhdestä homodimerizing CRD, joka pariutuu ja ilmaistaan ​​useimmissa elimissä ja makrofagien, T ja B-solut [4]. Galektiini-1 lisääntyy solujen kasvua ja liikkuvuutta ja sitoutuu solujen solunulkoiseen matriisiin (ECM), sekä muihin soluihin, [7]. Vuonna kasvain microenvironment, galektiini-1 indusoi angiogeneesiä [4,8] ja voi helpottaa etäpesäkkeiden sitoutumalla kasvainsolujen endoteelisoluihin. Joka toimii heikkona T-solu-reseptorin ligandin, apoptoosin indusoituu aktivoiduissa T-soluissa [4,7]. Galektiini-3 on kimeerinen galektiini, joka sisältää CRD ja N-terminaalisen ei-CRD-domeenin. Galektiini-3 on ilmaistu makrofagit, fibroblastit, aktivoidut T-solut, eosinofiilit, epiteeli- ja kasvainsolujen, joka indusoi anti-apoptoottisen signalointi [4]. Expression liittyy eriytetyn fenotyyppiin ja ECM tartunta asetuksen [9]. Kuten galektiini-1, galektiini-3 on myös yhdistetty lisääntyneeseen angiogeneesiä [10] ja etäpesäkkeiden [11]. Ekstrasellulaarinen galektiini-3 voi sitoutua T-solujen, neutrofiilien ja makrofagien [9]. T-soluissa, galektiini-3: n ekspressio on osoitettu edistävän eloonjääminen ilmentää solunsisäisesti, mutta apoptoosin, kun läsnä solun [12]. Galektiini-9 sisältää kaksi CRD yhdistetty linkkeripeptidillä pituus vaihtelee. Galektiini-9 voidaan ilmaista epiteelisolujen sekä immuunijärjestelmän solujen, mukaan lukien T-solujen ja neutrofiilien [13]. Proteiini toimii eosinofiilien kemoattraktantti, kun solunsisäinen ilmentyminen on raportoitu indusoivan apoptoosia aktivoituneiden T-solujen, mahdollisesti kautta T-solujen immunoglobuliinin musiini-3 (TIM-3), mikä johtaa inhibitioon T-auttajasolujen 1 (Th1) ja Th17 solut ja stimulaation säätelijä-T-solujen (Tregs) [14,15]. Galektiini-9 ilmaisun on myös raportoitu endoteelisolujen mutta rooli tämän proteiinin angiogeneesi näyttää rajoittuvan [16].

osallistuminen galectins erilaisissa prosesseissa syövän etenemisen tukee raportteja, muuttaa galektiini ilme on diagnostisia tai ennusteen arvioinnissa eri syöpätyyppejä, mukaan lukien munasarja-, eturauhas-, rinta-, pään ja kaulan ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [17-26]. Vuonna levyepiteelikarsinooma kohdunkaulan syöpäpotilasta, jotka saivat sädehoitoa, tuoreessa tutkimuksessa raportoitiin, että ilmentyminen galektiini-1 kasvain oli itsenäinen ennustaja paikallisen uusiutumisen ja huono selviytyminen [27]. Expression of galektiini-1 stroomaan kohdunkaulan syöpä on myös korreloi korkeamman histopatologisten luokka [28] ja imusolmukkeen etäpesäke [29]. Tietoa galektiini-3 ja galektiini-9 ilmaisun kohdunkaulan syöpä on rajoitettu. Lee et al kuvattu käänteinen yhdistyksen välillä galektiini-3 [30] ja kasvaimen, kun taas galektiini-9 ilmentyminen on osoitettu olevan positiivinen korrelaatio kasvaimen erilaistumiseen arvosana levyepiteelikarsinooma kohdunkaulan syövän [31].

Saat parempi käsitys roolissa galectins kohdunkaulan syövän, tavoitteena oli selvittää, onko ilmentymisen galektiini-1, -3 ja -9 liittyy selviytymisen levyepiteelikarsinooma kohdunkaulan syövän kohortti (n = 160). Ilmentyminen eri galectins tuumorisoluissa ja kasvaimen epiteelin ja strooman infiltroivia soluja sijoitettiin. Tutkimme myös joka syöpään liittyvän strooman (CAS) solut (fibroblastit, makrofaagit ja T-solut) ilmaistuna nämä galectins.

Materiaalit ja menetelmät

Patient materiaali

Formaliinifiksoidusta , parafinoidut (FFPE) squamous kohdunkaulan syöpä yksilöitä saatu kaikilta potilailta, joille tehtiin ensisijaisesti kirurginen hoito kohdunkaulan syövän vuosina 1985 ja 2005 on käytettävissään riittävät tiedot analysoitaviksi edellä kuvatulla tavalla [32], haettiin arkistoista Patologian osasto , Leiden University Medical Center (n = 160). Kukaan potilaista ei ollut saanut ennen leikkausta syövän hoitoon. Tautivapaa ja tautikohtaista elinaika määriteltiin ajanjakso kuukautta leikkauksen päivämäärän uusiutumisen ja kuoleman kohdunkaulan syöpään, vastaavasti. Potilaat, jotka kuolivat muista syistä sensuroitiin pelastusveneiden analyysejä. Potilaan ja kasvainten ominaisuuksiin luetellaan S1 taulukossa. Potilas näytteet käsitellään mukaisesti lääketieteellisen eettisiä ohjeita kuvattu käytännesäännöt Oikea Toissijainen käyttö Human Tissue Alankomaiden Federation of Biomedical Scientific Societies. Potilaat saavat tietoa toissijainen käyttö kudoksen näytteitä diagnostista käyttöä ja voivat aktiivisesti vastustaa toissijaiseen käyttöön. Ohjeiden mukaan kaikki ihmisen materiaalia käytettiin tässä tutkimuksessa on anonymisoidaan. Koska nimettömäksi, retrospektiivinen tutkimus ei edellytä eettistä hyväksyntää Institutional Review Board ja yksittäisten suostumusta ei tarvita.

immunofluoresenssivärjäyksiä

Triple immunofluoresenssivärjäyksellä suoritettiin 4 um FFPE osissa kaikki näytteet. Sen jälkeen, kun antigeeni haku käyttämällä Tris-EDTA-puskuriin (10 mM TRIS, 1 mM EDTA, pH 9,0), kanin polyklonaalista anti-galektiini-1 (1: 1000, ab25138, RRID: AB 2136615, paljon GR127498-2, Abcam, Cambridge, UK) monoklonaalisia rotan anti-galektiini-3 (01:50, klooni M3 /38, RRID: AB 1134237, paljon B160878, BioLegend, Lontoo, Iso-Britannia), ja vuohen polyklonaalista anti-galektiini-9 (1: 200, AF2045, RRID: AB 2137232, paljon KNI0112011, R kaikki polyklonaalinen, 1: 200, Invitrogen). Objektilasit kiinnitettiin käyttämällä Vectashield kiinnitysväliaine sisältävä DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, USA). Normaali kohdunkaula ja ulkosynnyttimet kudosta käytettiin positiivisena kontrollina. Jättämällä yksi tai useampi ensisijainen vasta-aineiden tai korvaamalla ne vasta-aineet samaa isotyyppiä luokan tuntematon spesifisyys, käytettiin negatiivisina kontrolleina.

mikroskooppinen analyysi

Kuvia on galectins kolminkertainen värjäys oli digitoitu joiden Pannoramic Midi automatisoitu dia skanneri ja analysoitiin Pannoramic Viewer (3DHISTECH, Budapest, Unkari). Kiinteä valotusaika määritettiin per slide kullekin kolmelle fluoresoivia leimoja. Kirkkaus ja kontrasti säädettiin jokaisen dian perustuvat ei-kasvainsoluihin, joiden tiedetään värjäytymisen intensiteettiä. Ainakin kolme, mutta yleensä neljä tai viisi satunnaisia ​​kuvia otettiin klo 200x suurennos, näytteenotto yhteensä kasvaimen ala on 1,1-1,9 mm

2 jokaisen dian, joka sisältää sekä kasvain epiteelin ja strooman. Expression kasvainsolujen teki ilman tietoa kliinis-patologisten parametrit, kuten ovat kuvanneet Ruiter et ai [34]. Intensiteetti pisteytettiin poissa (0), heikko (1), kohtalainen (2) tai voimakasta (3). Kohtalainen ja voimakas värjäytymisen intensiteetti oli pidettävä vahvana. Niiden positiivisten solujen pisteytettiin 0% (0), 1-10% (1), 11-25% (2), 26-50% (3), 51-75% (4) ja 76-100% (5). Värjäys, joiden yhteenlaskettu pistemäärä yli 2 katsottiin positiiviseksi.

Koska ei vain kasvainsoluja, mutta myös CAS solujen kasvain epiteelin ja strooman ilmaisi galektiini-1, -3 ja -9, kokonaisilmentyminen sisällä kasvain epiteelin ja strooman analysoitiin talon kuva-analyysi ohjelma Pinoaa versio 2.1 (Dr. J. Vrolijk, Ing. W. Sloos, Department of Molecular Cell Biology, Leiden University Medical Center, Leiden, Alankomaat, julkaisematon ohjelmisto). Positiivinen värjäys kynnykset määritettiin vertaamalla tätä kynnystä kuvan alkuperäisen värjäytymistä Pannoramic Viewer. Stroomakasvaimet alueet merkitty ja teki erillään epiteelin. Verisuonet, autofluoresenssin ja nekroottista alueet käsin poistettiin analyysistä. Kokonaispinta-ala ja lukumäärä yhden, kahden ja kolmen positiiviset pikseliä saatiin. Kymmenen satunnaisotoksia pisteytettiin manuaalisesti prosenttiosuus yhden, kahden ja kolmen hengen positiivisten solujen kasvain epiteelin ja strooman, mikä vastasi analyysien avulla pinot.

Jakelu yhden ja kahden hengen positiivisten solujen kaksinkertainen värjäykset pisteytettiin luokkiin: 5%, 5-50%, 50% tai lähes kaikki solut positiivisia ainakin neljällä per dia käyttäen LSM700 konfokaali laserkeilauksen mikroskooppi varustettu LCI Plan-Neofluar 25x /0.8 Imm Korr DIC M27 tavoite (Zeiss, Göttingen, Saksa). Kuvat otettiin käyttäen C-Apochromat 40x /1,20 W Korr tavoite (Zeiss).

Tilastollinen

Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS versio 20,0 (IBM Corp., Armonk, USA). Korrelaatiot (R) välinen galektiini ilmaisun tulokset Sekä Ruiter ja Pinot analyysit testattiin Spearmanin rank korrelaatio rho testi. Perustuen scatterplots korrelaatiot R 0,45 pidettiin positiivisina ja korrelaatiot R 0,67 vahva. Korrelaatioita galektiini ilmaisun ja kliinis-patologisia muuttujia tutkittiin käyttämällä Pearsonin Chi-Square ja Fisherin testiä. Survival korrelaatioita testattiin käyttämällä Kaplan-Meier ja Coxin suhteellisten riskien mallia, jossa p-arvot alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

ilmentyminen galektiini tyyppien 1, 3 ja 9 squamous kohdunkaulan syövän

galektiini-1, -3 ja -9 ilmaistiin sytoplasmassa erilaisia ​​solutyyppejä (kuvio 1). Ekspressio eri galektiini tyyppejä kasvaimen epiteelisolujen kvantifioitiin Ruiter pisteet. Kasvain epiteelisolujen useimmissa näytteissä ei ilmaissut galektiini-1 (89% näytteistä) tai galektiini-9 (89% näytteistä), ks 2A. Arvioimaan kaikkia galektiini ilmentävien solujen galektiini ilmentyminen arvioitiin sekä kasvain epiteelin ja strooman lokero käyttämällä in-house kuva-analyysi ohjelma pinot. Galektiini-1 oli yleensä läsnä suuri määrä strooman soluja (kuvio 2B). Variable ilmentyminen galektiini-3 havaittiin sekä kasvainsoluissa ja strooman soluja. Expression of galektiini-3 havaittiin 84% näytteistä. Vahva kasvainsolun galektiini-3 ilmentyminen oli usein läsnä joko invasiivisia rajalla tai keskellä kasvaimen aloilla. Tuumorisoluissa, galektiini-3: n ekspressio näkyi usein toisensa poissulkevia ekspression kanssa galektiini-1 tai -9, koska sen ilmentyminen vähenee, kun ilmentymisen toisen tyyppinen galektiini oli läsnä. Jos näin oli, galektiini-3 lähinnä ilmaistu keskellä kasvain kentät, kun taas galektiini-1 ja -9 ilmaistiin klo invasiivisia rajalla. Solut, jotka ilmentävät galektiini-9 eivät yleensä olleet runsaasti joko kasvain epiteelin tai stroomasoluissa. Kun galektiini-9 ilmaistiin tuumorin epiteelisolujen, se ensisijaisesti sijaitsee invasiivisia rajoilla.

edustajan kolminkertainen värjäystä kuva käytettäessä FFPE levyepiteelin kohdunkaulan syöpä näyte, joka sisältää tuumorin epiteelisolut ilmentävät galektiini-1 (A, sininen) , galektiini-3 (B, vihreä) ja galektiini-9 (C, punainen) klo 200x suurennuksella. Kasvain epiteelin kentät on merkitty katkoviivoilla. Tyypillisesti, galektiini-1 ilmennettiin suuri määrä stroomasolujen ja voitaisiin heikosti ilmaistaan ​​kasvaimen epiteelisolujen. Galektiini-3 oli ilmaistu stroomasoluissa ja usein joko epiteelin kenttätutkimuskeskuksia (kuten kuvassa) tai pienissä ryhmissä epiteelisolujen klo invasiivisia rajalla. Galektiini-9 voitaisiin myös ilmaista sekä strooman ja epiteelin soluja. Kun galektiini-1 tai -9 esittivät epiteelisolujen, tämä havaitaan tyypillisesti rajoilla kasvaimen kenttiä, kun taas galektiini-3 ilmentyi keskustassa, kuten on osoitettu tässä kuviossa. Kasvain soluttautuminen CAS ilmentävien solujen galektiini-1, -3 ja -9 myös usein havaita kasvain epiteelin kentät.

osa näytteistä, joissa kasvainsolujen ilmaistu galektiini-1, -3 tai – 9 tai yhdistelmä on esitetty A. osa näytteistä positiivisia yhden tai ei yhtään galektiini tutkituissa on esitetty ensimmäisen prosenttiosuudet sarakkeessa, kun taas jakeet näytteiden ilmentävät kahden tai useamman galektiini tyyppejä on esitetty toisessa sarakkeessa. Yhteensä galektiini-1, -3 ja -9 yhden, kahden ja kolmen hengen positiivinen pikseleiden kasvaimen strooman ja kasvaimen epiteelin on edustettuna B. Mean ja standardi keskivirhe näytetään.

Korrelaatio galektiini-1, -3 ja -9 ilmaisun

Kaikki galektiini ilmentävät yhden, kahden ja kolmen hengen positiivisten solujen kasvaimen strooman merkittävästi korreloi saman solujen kasvain epiteelin (0,57 R 0,72, p 0,0001, S1 kuvio). Yksi positiivinen galektiini-1, -3 ja -9 eivät korreloi merkitsevästi keskenään. Vahva yhteyttä ei havaittu välillä galektiini-9 yhden positiivisia soluja ja galektiini-3/9 kahden positiivisten solujen sekä epiteelin ja stroomakasvain osaston (R = 0,706, p 0,0001; R = 0,680, p 0,0001, vastaavasti). Galektiini-3 yksittäinen positiiviset solut korreloivat voimakkaasti galektiini-1/3 kahden positiivisten solujen sisällä kasvain strooman (R = 0,693, p 0,0001). Triple positiiviset solut korreloivat voimakkaasti galektiini-1/9 kahden positiivisten solujen sisällä kasvain epiteelin (R = 0,682, p 0,0001). Triple positiivisten solujen strooman korreloivat galektiini-3/9 kahden positiivisia soluja (R = 0,704, p 0,0001).

fenotyyppi galektiini ilmentävien solujen

tutkia, makrofagien ja T solut ilmaisivat galektiini-1, -3 ja -9, suoritimme kaksinkertainen värjäykset tyypin 2 makrofagimarkkeri CD163 tai T-solujen markkeri CD3 (kuvio 3). Galektiini-1 ilmentävien soluihin eivät olleet runsaasti kasvain epiteelin, mutta kun läsnä enemmistö oli CD163

+. Vähemmistö galektiini-1 ilmentävien soluihin oli CD3

+. Useimmat strooman galektiini-1 ilmentävien solut eivät ilmennä CD163 tai CD3 ja jotka kutsutaan fibroblasteissa perustuen solun morfologiassa.

Kuvat ovat kaksinkertaisesta värjäykset of galektiini-1 ja CD163 (A) tai CD3 (B), galectin- 3 ja CD163 (C) tai CD3 (D) ja galektiini-9 ja CD163 (E) tai CD3 (F) on esitetty. Kuvat sisältävät sekä värjäykset ja DAPI näkyvät oikeassa sarakkeessa. Nuolet osoittavat esimerkkejä kaksinkertainen positiivisia soluja.

Lähes kaikki ei-epiteelisolujen ilmentävät galektiini-3 olivat CD163

+ makrofageja. Päinvastainen ei ollut totta, kuten myös havaittiin useita CD163

+ soluja, jotka eivät esittäneet galektiini-3. Pieni populaatio galektiini-3 ilmentävien solujen oli CD3

+.

Suurin osa galektiini-9 ilmentävien solujen oli CD163

+ ja lähes kaikki CD163

+ makrofagit olivat galektiini-9

+. Emme havainneet CD3

+ galektiini-9 ilmentäviä soluja.

Vaikka väliset korrelaatiot galectins ja angiogeneesin on kuvattu, emme noudata selkeää alus värjäys tai vastaavaa morfologia verrattuna värjäyksen CD105 (S2 kuvio). Koska emme myös ei löytänyt korrelaatio määrä CD105

+ alusta (tietoja ei esitetä), galektiini-1, -3 ja -9 ei ekspressoidaan runsaasti endoteelisolujen tässä tutkimuksessa kohortissa.

korrelaatio galektiini ilmaisun ja kliinis-patologisten parametrien

Squamous kohdunkaulan syöpää sairastavilla potilailla TNM I (n = 110), II (n = 44), III (n = 4) ja IV (n = 2) olivat mukana tässä tutkimuksessa. Mediaani-ikä oli 45 vuotta (vaihteluväli 22-87) ja kaksikymmentä potilasta kuoli tautiin kolmen vuoden kuluessa. Voimakas ilmentyminen galektiini-1 kasvainsolujen korreloi merkitsevästi huono tautivapaan (p = 0,0004) ja tautikohtaista eloonjäämisen (p 0,0001, kuvio 4A). Riskisuhde tautispesifisten selviytyminen tapauksessa vahvan galektiini-1 kasvain ilmentyminen oli 8,9 (95% CI: +2,961-26,717, taulukko 1). Kasvainsolun galektiini-1-ilmentyminen korreloi myös lisääntynyt kasvaimen invaasion syvyyteen (p = 0,032, taulukko 2). Luultavasti liittyy tähän, potilaille, joilla on kasvaimia ilmentävien galektiini-1 useammin saivat leikkauksen jälkeistä sädehoitoa (p = 0,020). Sädehoito annettiin 16 pois 18 potilailla, joiden ilmentymistä galektiini-1 ja kaikki kuusi potilasta, joilla on vahva ilmaus galektiini-1.

Kaplan-Meierin selviytymisen käyrän vahva verrattuna poissa heikko ilmaus galektiini -1 kasvainsolujen esitetään A. eloonjääminen analyysi vertaamalla potilaalla on läsnä vs. poissa kasvain ilmentymistä galektiini-9 esitetään B.

kasvain ilmaus galectin- 9 osoitti suuntaus parantunut eloonjääminen (p = 0,087, Kuva 4B). Kiinnostavaa kyllä, kun taas heikko kasvaimen galektiini-3: n ekspressio korreloi lisääntyneen invaasio syvyys, positiivinen ekspressio korreloi vähentynyt tuumori-invaasio (p = 0,012, taulukko 2). Sekä galektiini-3 ja galektiini-9 ilmentyminen korreloi merkitsevästi läsnäolo HPV-tyypin 16 tai 18 Kasvaimen koon ja läsnäolo verisuonten invaasio tai imusolmuke etäpesäke eivät olleet merkittävästi erilaiset näytteiden välillä tai ilman ilmentymistä galektiini-1, -3 tai -9 joko kasvain epiteelin tai strooman.

monimuuttuja-analyysi tautikohtaisia ​​eloonjäämistä suoritettiin kasvaimen galektiini-1 intensiteetin korjaamalla FIGO vaiheessa imusolmuke etäpesäke ja verisuonia invasion (taulukko 1 ). FIGO vaiheessa käytettiin, koska tämä katettu kasvaimen koon ja tunkeutumisen syvyyden ja tunnettiin suurempi määrä potilaita kuin erillisen muuttujia. Imusolmuke etäpesäke ja verisuonia hyökkäys kaksi muuta parametreja, joiden tiedetään vaikuttavan kohdunkaulan syövän potilaan ennustetta. Galektiini-1 kasvaimen voimakkuus itsenäisesti korreloi huono selviäisi, riskisuhde 8,0. Kun FIGO vaiheessa ja imusolmuke etäpesäke tila korvattiin TNM, korrelaatio edelleen tilastollisesti merkitsevä (riskisuhde: 6,84, 95% CI: +2,013-23,256, p = 0,002). Kasvain galektiini-1-intensiteetti oli myös itsenäinen ennustaja huono tautivapaan elinajan (riskisuhde: 3,41, 95% CI: 1,296-8,972, p = 0,013). Tiedot olivat käytettävissä 155 potilaalla, joista 41 pahenemisvaiheita ja 30 kuolemantapausta.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa selvitettiin korrelaatioita ilmentymistä galektiini-1, -3 ja -9 ja selviytymisen levyepiteelikarsinooma kohdunkaulan syöpä kohortti (n = 160) jälkeen REMARK suositukset ennustetekijöiden tuumorimarkkeri tutkimuksissa [35]. Galektiini ilmentymistä tuumorisoluissa ja kasvaimen epiteelin ja strooman infiltroivia solut pisteytetty kaksi täydentävää pisteytysjärjestelmiä. Tutkimme myös joka syöpään liittyvän strooman (CAS) solut (fibroblastit, makrofaagit ja T-solut) ilmaistuna nämä galectins.

Koska kasvainsolun ilmentymistä galektiini-1 ja -9 oli yleensä alhainen tai poissa, galektiini-1 ja -9 kasvaimen epiteelin pellot pääasiassa ilmaisseet kasvain epiteelin infiltroituvien immuunisolujen. Tämä selittää myös puuttuminen korreloivat kokonaisilmentyminen ja Ruiter sijoituksen galektiini-1 ja -9, kun epiteelin galektiini-3 single positiivisuus oli korreloivat voimakkaasti Ruiter sijoituksen galektiini-3. Korrelaatiot osoittavat myös, että kaksi pisteytyksen käytetyt menetelmät olivat paitsi täydentäviä myös validoitu toisiaan.

galektiini-1, -3 ja -9 odotettiin ilmaistaan ​​makrofagien, T-solut, epiteelisolut ja fibroblastit [4,13]. Useimmat galektiini-1 ilmentävien solujen soluttautuminen kasvaimen epiteelin oli makrofageja, pääasiassa CD163

+ tyypin 2 makrofageja. Pieni koostui galektiini-1 ilmentävien T-solujen, vaikkakin galektiini-1 negatiivinen T-solut olivat läheisessä kosketuksessa galektiini-1-positiivisia soluja. Tämä vastaa ehdotettua toiminta galektiini-1 indusoimisessa T-solujen apoptoosin johtaen immunosuppressioon [4,7]. Määrä galektiini-3 ilmentyminen CAS soluissa oli hyvin vaihteleva potilaiden välillä, mutta tämä galektiini tyyppiä ei käytännössä aina ilmaisseet CD163

+ tyypin 2 makrofageja. Tämä vastaa jossa

in vitro

tutkimus osoittaa, että galektiini-3 on useammin ilmaistaan ​​tyypin 2 kuin tyypin 1 makrofagien ja myös korkeampaan määrin kuin galektiini-1 [36]. Galektiini-3 oli näin ollen ilmentyy pääasiassa tyypin 2 makrofagien, mikä viittaa siihen, että kasvaimen infiltroivia soluja, jotka ilmentävät galektiini-3 saattaa liittyä kasvaimen edistämiseksi mikroympäristön. Tämä vastaa sen raportoitu toiminnot solun eloonjäämisen edistämisessä [4] ja angiogeneesissä [10]. Koska galektiini-1 oli käytännössä aina ilmaisseet kasvainta infiltroivien immuunisolujen ja galektiini-3 joukossa ei-kasvainsolujen CD163

+ makrofagien galektiini-1/3 kahden positiivisten solujen odotetaan olevan kasvaimeen epiteelin soluttautua CD163

+ makrofageissa. Pitää välillä galektiini-3 ilmentävien solujen ja T-solujen oli ilmeisempi kuin galektiini-1, joka taas saattaa aiheuttaa T-solujen apoptoosin [12]. Tekemässä tutkimuksessa HIRASHIMA et al. on kuvattu, että galektiini-9 ilmentyy T-solut ja neutrofiilit [13]. Sen sijaan, me olemme osoittaneet, että tämä galektiini ilmenee pääosin makrofagit kohdunkaulan syövän. Lisäksi lähes kaikki CD163

+ makrofagit olivat galektiini-9

+ ja emme noudata galektiini-9 ilmentävien T-solujen. Toiminta galektiini-9 kasvaimeen liittyvät makrofagit vaatii lisätutkimuksia.

galektiini-1: n on kuvattu olevan harvoin ilmaistaan ​​tuumorisoluissa [19,27,28], joka vahvistettiin olevassa tutkimuksessa. Potilaat, joilla on vahva kasvainsolun galektiini-1 ilmentymisen oli lisääntynyt kasvaimen invaasion ja saivat leikkauksen jälkeinen sädehoidon useammin. Kasvain galektiini-1 ilmentymisen oli itsenäinen ennustaja huono tautikohtaisia ​​selviytymistä. Tämä viittaa siihen, että galektiini-1: n ilmentyminen liittyy aggressiivisempi kasvaimen kasvua. Tämä vastaa tutkimuksen Huang et al., Joka raportoi korrelaation kasvaimen ilmentymistä galektiini-1 ja huono selviytymisen kohdunkaulasyövän hoidetuilla potilailla parantava-aikomus sädehoitoa [27]. Todellakin, lisääntynyt galektiini-1 ilmentyminen liittyy yleensä huonoon ennusteeseen eri kasvaintyypeissä [17,18,26,27]. Galektiini-1 voi lisätä syövän etenemiseen ja invasiivisuus [37]. Tässä tutkimuksessa suoritettiin peräkkäisen kohortin squamous kohdunkaulan syövän potilaille, osoittaa, että kasvain galektiini-1 on merkkiaine huono hengissä.

Ristiriitaiset tulokset on kuvattu galektiini-3, joka on liittynyt hyvä ennuste [17,38] sekä huonon ennusteen eri kasvaintyypeissä [24,39]. Kohdunkaulan neoplasian, galektiini-3: n on osoitettu korreloivan käänteisesti etenemiseen [30]. Tuloksemme viittaavat siihen, että vahva galektiini-3 ilmentyminen korreloi vähemmän kasvaimen kasvua, kun taas heikko galektiini-3 voidaan korreloida lisääntynyt kasvaimen kasvua. Kasvain galektiini-3 ilmentyminen voi olla tarpeen eriytetyn fenotyypin ja ECM tarttuvuus [9]. Toiminta galektiini-3 solun eloonjäämisen edistämisessä [4] ja mahdollisesti indusoimalla Chemo-resistenssi [40] ja T-solujen apoptoosin [12] voisi selittää korrelaation ilmaisun ja huonoon ennusteeseen. Koska toiminnot ja korrelaatiot kliinis-patologinen parametrit ja selviytymistä galektiini-3 ovat niin erilaisia, se on haastava käyttää tätä galektiini tyyppinen ennustetyövälineenä tai diagnostinen markkeri kohdunkaulan syövän.

ilmaus galectin- 9 kasvainsolujen on yleensä korreloi hyvän ennustetekijöiden markkereita eri kasvaintyypeissä [17,22,23,26,41]. Rooli erilaisten galectins näyttää olevan kasvaimen tyyppiriippuvainen vaikka [41], ja galektiini-9 on korreloinut huono eloonjäämisen clear-solujen munuaissyövän [42]. Kohdunkaulan syövän, korrelaatio korkea erilaistumista asteen on kuvattu galektiini-9 ilmaisun [31], kanssa suuntaus kohti parani ennusteen kuvattu tutkimuksessa. Kasvaimen galektiini-9 ilmentyminen saattaa liittyä HPV-infektio, kuten erilaisten virusten, mukaan lukien ihmisen sytomegalovirus, HIV ja influenssaviruksen on osoitettu indusoivan galektiini-9 ilmaisun [43-45]. Huomasimme, että galektiini-3 ja galektiini-9 ilmaisun molemmat korreloi merkitsevästi HPV16 tai HPV18 ilmaisua, tukee tätä hypoteesia.

Lopuksi kasvain galektiini-1 ilmaisua voidaan käyttää markkerina aggressiivisempi anti -cancer hoitoon. Galektiini-1 ja -3 todennäköisimmin koekspressoi kasvain epiteelin tunkeutuva tyypin 2 makrofageja. Kasvain galektiini-3 voi olla kaksi toimintoa, kuten heikko ilmentyminen korreloi lisääntyneeseen kasvaimen invaasio, kun taas positiivinen ekspressio korreloi vähentynyt hyökkäystä. Kasvain ilmentyminen galektiini-9 osoitti suuntaus parantunut selviytymistä, jotka saattavat liittyä viruksen aiheuttama ilme. Koska esto galektiini-1 ilmentymisen on jo osoitettu estävän kasvaimen angiogeneesiä [8] ja indusoivat T-solujen kasvain hyljinnän hiirissä [46], meidän tiedot tukevat lisätutkimuksia terapeuttista potentiaalia kohdistaminen galektiini-1 positiivisia kasvaimia.

tukeminen Information

S1 Kuva. Epiteelin Pinot vs. Ruiter tulokset.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0129119.s001

(DOCX)

S2 Kuva. Galektiini ja alus värjäystä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0129119.s002

(DOCX) B S1 Taulukko. Potilaan ja kasvainten ominaisuuksiin.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0129119.s003

(DOCX)

S2 Taulukko. Korrelaatiot galektiini ilmaisuja.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0129119.s004

(DOCX) B