Krooninen sairaus

tiivistelmä

IL-10 liittyy kasvaimen pahanlaatuisuuteen kautta immuuni paeta. Oletimme, että IL-10 haplotyyppien luokiteltuna IL-10-promoottorin polymorfismeja -1082A G, -819C T, ja -592C saattaisi vaikuttaa IL-10 ilmentyminen ja aiheuttaa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) potilaat huono tuloksia ja uusiutumisen. Keräsimme viereisten normaaleissa kudoksissa 385 pienisoluista keuhkosyöpää määrittää IL-10 haplotyyppien suoralla sekvensoinnilla ja polymeraasiketjureaktio restriktiofragmenttipituuspolymorfismin (PCR-RFLP). Niistä 385 kasvaimia, 241 oli saatavilla arvioimiseksi IL-10-mRNA ekspressiotasot reaaliaikaisella RT-PCR. Vaikutus IL-10 haplotyyppien vaikutusta yleiseen eloonjäämiseen (OS) ja uusiutumisen elinaika (RFS) määritettiin Kaplan-Meier ja monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä. Tulokset osoittivat, että IL-10-mRNA-tasot olivat merkittävästi korkeammat kasvaimissa ei-ATA haplotyyppi kuin ATA haplotyyppi (P = 0,004). Potilaat, joilla on ei-ATA haplotyyppi oli lyhyempi OS ja RFS jaksoja kuin potilaat, joilla ATA haplotyyppi. Tämä voi liittyä havaintoon, että määrä kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä oli vähentynyt kasvaimien korkeampi IL-10. Johdonmukaisesti, T-solut perifeerisestä verestä ja potilailla, joilla on ei-ATA haplotyyppi oli alttiimpi apoptoosin ja vähemmän sytotoksinen tuumorisoluille verrattuna niillä, potilailla, joilla on ATA-haplotyyppi. Tulokset viittaavat siihen, että IL-10 voi edistää kasvainten pahanlaatuisuuteen kautta edistää T-solujen apoptoosin ja kasvainsolun eloonjäämistä, ja IL-10 haplotyyppi arvioitiin PCR-RFLP tai suora sekvensointi voidaan käyttää ennustamaan selviytymistä ja uusiutumisen resektoitiin NSCLC, auttavat lääkärit tekemään tarvittavat päätökset potilaiden saamaa hoitoa.

Citation: Wang YC, Sung WW, Wu TC, Wang L, Chien WP, Cheng YW, et al. (2012) interleukiini-10 Haplotyyppifrekvenssianalyysi ennakoivia Survival ja uusiutumisen resektoitiin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 7 (7): e39525. doi: 10,1371 /journal.pone.0039525

Editor: Pan-Chyr Yang, National Taiwan University Hospital, Taiwan

vastaanotettu: 06 tammikuu 2012; Hyväksytty: 22 toukokuu 2012; Julkaistu: 27 heinäkuu 2012

Copyright: © Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ oli yhdessä tukevat avustusta National Science (NSC-96-2628-B-040-002-MY3), ja Department of Health (DOH101-TD-C-111-005) Taiwan, ROC. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

interleukiini-10 (IL-10), joka on tärkeä immunoinhibitorisen sytokiini, on osa tasapainoista verkon sytokiinien [1] – [5]. IL-10 sytokiinin tuotetaan useita soluja, mukaan lukien normaalit ja neoplastiset B-solut, stimuloitu monosyytit, makrofagit, ja osajoukko T-solujen [1] – [4]. Monet tapausverrokkitutkimukset ovat osoittaneet yhdistyksen IL-10-promoottorin polymorfismien (SNP) ihmisen syöpäriski, kuten keuhkosyövän riskiä [6] – [9]. IL-10-promoottorin SNP, niitä on -1082A G, -819C T, ja -592G ollut painopiste Viimeaikaisten tutkimusten ja fenotyypit näiden yhden nukleotidin SNP on edelleen vahvistanut funktionaalisia määrityksiä solujen mallit [10], [11].

Kasvain immuunivalvonnan tutkimukset ovat paljastaneet yhdistyksen välillä IL-10 ja inhimillisen syöpien kuten suurten B-solujen lymfooma, T-solu non-Hodgkin-lymfoomaa ja paksusuoli, eturauhasen, rinnan, mahan, myelooma, ja keuhkojen syövät [4], [6] – [9], [12] – [22]. Vuonna keuhkosyöpä tapauksissa jotkin raportit ovat osoittaneet, että menetys IL-10 keuhkokasvaimia voi edistää syövän etenemiseen ja heikentää hoitotuloksia potilaille; kuitenkin päinvastainen vaikutus on raportoitu muissa tutkimuksissa [23] – [29]. Mielenkiintoista on, että ilman IL-10 ilmentyminen on yhteydessä huonoon tulokseen vaiheessa I ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) [24], [25], kun taas myöhäisessä vaiheessa NSCLC, kun läsnä on IL-10-positiivisia makrofagit kasvaimen marginaalit voivat olla merkki huonosta prognoosi- tuloksista [23]. Lisäksi lyhyemmät elossaoloaika on raportoitu kehittyneen keuhkosyövän potilaista, joilla oli korkea seerumin IL-10 tasoa, kun verrataan vastaavien potilailla, joilla oli alhainen seerumin IL-10 tasoa [26]. Selkeä rooli IL-10 keuhkojen kasvaimien syntyyn siis vielä tunnistettu.

Tässä tutkimuksessa tutkimme normaali keuhkojen kudoksia vieressä kirurgisesti resektoitiin NSCLC kasvaimia 385 potilasta, jotta voidaan tunnistaa IL-10-promoottorin SNP at -1082A G, -819C T, ja -592C A suoralla sekvensoinnilla ja polymeraasiketjureaktio restriktiofragmenttipituuspolymorfismin (PCR-RFLP). Nämä kolme IL-10-promoottori-SNP: iden on raportoitu tuottaa pääasiassa kolmen haplotyyppien: GCC ACC ATA [30] – [33]. Esillä olevassa tutkimuksessa potilaat luokiteltiin kahteen haplotyyppien, ATA ja ei-ATA (Fig. 1), jota oli käytetty kaksi aiemmissa raporteissa [34], [35]. Me kyseenalaiseksi: 1) onko kasvaimia ei-ATA harjoittajat ovat korkeammat IL-10-mRNA-ekspressiotasot kuin kasvaimia ATA harjoittajat, 2) onko potilaalla ei-ATA haplotyyppi tai korkeamman IL-10-mRNA tasot keuhko- kasvaimet ovat suurempia kasvain immuuni valvonta, ja 3) onko IL-10 haplotyyppi tai mRNA: n ilmentymisen voitaisiin käyttää ennustamaan kokonaiselinaikaa (OS) ja uusiutumisen elinaika (RFS) in resekoituun pienisoluista keuhkosyöpää.

SNP asemissa -819 ja -592 vuonna IL-10-promoottorin olivat täydellisessä kytkentäepätasapainossa. Kolmen IL-10 haplotypes havaittiin ja esiintyminen kunkin haplotyypin tai haplotyypin yhdistelmän lueteltu tummennetut laatikot.

(A) edustaja CD3 immunovärjäyksen TIL keuhkojen kasvaimet alhaisen TIL tiheys ( 25 CD3

+ /HPF) (vasen: 100x, oikea: 400x); (B) TIL esitetty keuhkokasvaimia suuri joko TIL tiheys (≥25 CD3

+ /HPF) (vasen: 100x, oikea: 400x).

T-solujen apoptoosin määriteltiin kuten anneksiini V

+ /CD3

+ ja tuumorisolujen apoptoosin määriteltiin anneksiini V

+ /PKH26

+. (A) edustaja virtaussytometrillä SSC-FSC mittakaavan salpaamiseksi lymfosyyttipopulaatiosta, ja PKH26 jossa merkitsemiseksi syöpäsoluja. (B) edustaja virtaussytometrialla apoptoosin seurauksena CD3

+ T-solujen ja PKH26 porteilla kasvainsoluja. (C) Taso T-solujen apoptoosin jälkeen rinnakkaisviljelemällä syöpäsolujen 22 terveillä vapaaehtoisilla miehillä että tunsivat IL-10 ei-ATA haplotyyppi verrattuna IL-10 ATA haplotyyppi (T-solujen apoptoosin hinnat yhdessä viljelemisen aikana A549: 10.49 ± 3,04 vs. 8,34 ± 2,37, P = 0,011; aikana viljeltiin yhdessä TL-1: 18.30 ± 3,82 vs. 12,97 ± 2,94, P 0,01). Lisäsimme IL-10 rekombinanttiproteiini on co-kasvatusalustaa PBMC kätkeminen IL-10 ATA haplotyyppi, ja T apoptoosin nostettiin (kasvoi 7,63% yhdessä viljelemisen aikana A549, P 0,001; kasvoi 2,73% samanaikaisen -Kulttuuri TL-1, P = 0,008). Lisäsimme myös IL-10 neutraloidaan vasta yhteistyössä kasvatusalustaa PBMC kätkeminen ei-ATA IL-10 haplotyyppi, ja T apoptoosin oli pienentynyt (by 1,78% yhdessä viljelemisen aikana A549, P = 0,017; mukaan 7,75 % yhdessä viljelemisen aikana TL-1, P 0,001). (D) Korkeampi tuumorisolujen apoptoosin jälkeen rinnakkaisviljelemällä PBMC 22 terveillä vapaaehtoisilla miehillä että tunsivat IL-10 ATA haplotyyppi verrattuna ei-ATA haplotyyppi (apoptoosin A549: 16.80 ± 3.38 vs. 14,45 ± 3,78, P = 0,035; apoptoosin TL-1: 12.95 ± 3,05 vs. 8,68 ± 2,57, P 0,01). Lisäsimme IL-10 rekombinanttiproteiini on co-kasvatusalustaa PBMC kätkeminen IL-10 ATA haplotyyppi, ja kasvaimen apoptoosin oli pienentynyt (vähentynyt 4,29% A549, P 0,001; laski 1,94% TL-1, P = 0,043). Lisäsimme myös IL-10 neutraloidaan vasta yhteistyössä kasvatusalustaa PBMC kätkeminen IL-10 ei-ATA haplotyyppi, ja kasvaimen apoptoosin nostettiin (lisääntynyt 2,46% A549, P = 0,037; nousi 6,67% of TL- 1, P 0,001).

(20 ug per 3 päivää). Hiiret uhrattiin 14

th päivää. Keuhkometastaasitestissä havaittiin hiirissä, joihin injektoitiin IgG vasta-aineella (A), ja ei havaittu niillä, joilla on IL-10, neutraloimiseksi vasta-ainetta (B).

mukaan IL-10-haplotyyppi (A), IL- 10 mRNA (B), ja yhdistelmä IL-10 haplotyyppi ja mRNA (C).

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

tutkimus mukana 385 potilasta NSCLC. Kaikki potilaat eivät liittyneet kiinalaisten ja asukkaiden Keski Taiwan. Potilaat oli diagnosoitu adenokarsinooma (194; 50,4%) tai okasolusyöpä (191; 49,6%) ja tehtiin kirurginen resektio divisioonassa Torakaaliikirurgia, Taichung Veterans General Hospital, vuosina 1993 ja 2004. Näytteet pakastettiin välittömästi leikkauksen ja pidettiin -80 ° C: ssa käsittelyyn asti. Tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board (Institutional Review Board, Chung Shan Medical University Hospital. CSMUH nro: CS11177). Syöpä uusiutumisen tiedot saatiin kaavion tarkastelu ja vahvistanut rintakehä kirurgit. Kliinisten parametrien ja käyttöjärjestelmän ja RFS tiedot kerättiin kaavion arvostelut (32 potilasta ei ollut uusiutunut data) ja Taiwan Syöpärekisteri, Department of Health, Executive Yuan, ROC.

Genomisen DNA: n eristämiseksi, RNA: n uutto ja cDNA synteesi

Genominen DNA uutettiin tavanomaisilla menetelmillä. Kirurgisesti lei- kattu normaalit kudokset vieressä keuhkojen kasvain valmistettiin käyttämällä proteinaasi K: ruoansulatusta ja DNA uutettiin käyttäen fenoli-kloroformilla, minkä jälkeen etanolisaostuksella.

Kokonais-RNA uutettiin 241 käytettävissä keuhkojen kasvain kudoksia käyttäen TRIzol reagenssia ( Invitrogen). Ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi, kun läsnä on satunnaisia ​​alukkeita suoritettiin käyttäen korkean kapasiteetin cDNA käänteistranskriptio Kit (Applied Biosystems) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

PCR-RFLP-analyysin IL-10 -592C /A geneettinen SNP

genotyypit IL-10 -592C /A määritettiin PCR-RFLP, kuten ovat kuvanneet Rad et al. [36]. PCR-monistus tuotteita 50 näytettä valittiin satunnaisesti suoralla sekvensoinnilla vahvistaa genotyypin esitetty PCR-RFLP.

suora sekvensointi IL-10 -1082A /G ja -819C /T geneettinen SNP:

SNP IL-10 -1082G /A ja -819C /T määritettiin suoralla sekvensoinnilla monistetut PCR-tuotteet DNA: sta normaalien kudosten vieressä kasvaimia. DNA-näytteet valmistettiin käyttämällä proteinaasi K: ruoansulatusta ja fenoli-kloroformiuutolla, jota seurasi etanolisaostus. Alukkeita käytetään DNA: n monistuksen ja suoralla sekvensoinnilla olivat: 5′-CTCGCCGCAACCCAACTGGC-3 ’(F) ja 5′-TGGGGGAAGTGGGTAAGAGT-3’ (R). PCR-syklin olosuhteet koostuivat ensimmäinen denaturaatiovaiheen 94 ° C: ssa 10 min, jota seurasi 35 sykliä 30 s 94 ° C: ssa; 45s 56 ° C; 45s 72 ° C: ssa; ja lopullinen pidennys 72 ° C ° C: ssa 10 min. PCR-tuotteet sekvensoitiin käyttäen Applied Biosystems 3100 Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems).

Reaaliaikainen RT-PCR

Reaaliaikainen RT-PCR-monistus cDNA näytteiden suoritetussa ABI 7500 Reaaliaikainen PCR System (Applied Biosystems) ja SYBR Green väriaine mitata IL-10-mRNA-transkriptien. Reaaliaikainen RT-PCR-alukkeet olivat seuraavat: IL-10-transkriptien 5′-GGCGCTGTCATCGATTTCTT-3 ’(eteenpäin) ja 5′-TGGAGCTTATTAAAGGCATTCTTCAC-3′ (taaksepäin); 18S geenitranskriptien, 5’-TCGGAACTGAGGCCATGA-3 ’(eteenpäin) ja 5′-CCGGTCGGCATCGTTTA-3’ (reverse). Tuotteet vahvistetaan IL-10 alukkeet tarkastettu suoralla sekvensoinnilla. Määrät IL-10-mRNA-transkriptien kvantitoitiin suhteessa 18S sisäisen valvonnan mukaan valmistajan ohjeiden (Applied Biosystems).

Perifeerisen veren monosyyteistä eristäminen ja yhdessä viljelemisen kokeita

Oheislaitteet verimonosyyteissä (PBMC: t) terveiltä luovuttajilta eristettiin Ficoll-Paque (GE Healthcare) tiheys-gradienttisentrifugoinnilla kuten aiemmin on kuvattu [37]. PBMC: t, joita käytetään määritettäessä syöpäsolujen indusoiman T-solujen apoptoosia yhdessä viljelemisen keuhkosyöpä solujen suhde on 40:1 36 tunnin IL-10, neutraloimiseksi-vasta-ainetta (MAB2171, R vuorottelevat vatsaonteloon annoksina 20 ug anti-IL-10-vasta-ainetta (mAb417 R 0,05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Non-ATA haplotyyppi on yleisempää potilailla, joilla solmukohtien etäpesäkkeitä

IL-10 haplotyyppien-ATA /ATA (ATA haplotyyppi) ja ei-ATA /ATA (ei-ATA-haplotyyppi) -were luokiteltu IL-10-promoottori-SNP: itä on -1082A /G, -819C /T ja -592C /A (Fig. 1). Väliset suhteet IL-10 haplotyyppien ja kliinis parametrit 365 pienisoluista keuhkosyöpää analysoitiin tilastollisesti Chi-square testi. Kuten taulukosta 1, ei-ATA haplotyyppi esiintyi useammin potilailla, joilla solmukohtien etäpesäkkeitä (N1 ja N2) kuin ei-solmukohtien etäpesäkkeitä (N0) (62,5% vs. 50,3%, P = 0,016). Lisäksi suhteellisesti suurempi esiintyvyys tupakoimattomien nähtiin potilailla, joilla on ei-ATA haplotyyppi kuin ATA haplotyyppi (61,7% vs. 51,8%, P = 0,049). Siksi, joilla on ei-ATA haplotyyppi voi olla aggressiivisempia kasvaimia suuremmalla taipumus uusiutumisen.

Higher IL-10-mRNA tasot keuhkokasvaimia ei-ATA haplotyyppi potilailla verrattuna ATA haplotyypin potilasta johti huonompi kasvain immuunivalvonnan osittain kautta vähentynyt määrä kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä

kasvainten 385 keuhkosyöpäpotilaita, 241 oli saatavilla arviointia varten IL-10-mRNA: n ekspressiotasot. Kuten on esitetty kuviossa. 2, huomattavasti korkeampi IL-10 mRNA löydettiin kasvaimia ei-ATA haplotyyppi potilaita niinkään ATA haplotyyppi potilaista (keskiarvo ± SE, 68,51 ± 16,31 vastaan ​​12,85 ± 4,54, P = 0,004). Jakauma kasvain tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL) in keuhkokasvaimia arvioitiin IHC 87 käytettävissä keuhkojen kasvain parafiinileikkeillä. Vuonna koko tutkimuspopulaatiossa, eroa havaittiin useissa TIL keuhkojen kasvaimet ATA ja ei-ATA potilaista (taulukko 2, kuva. 3; 50,0 vs. 37,5, P = 0,236). Kuitenkin ero TIL numeroiden välillä ATA ja ei-ATA kantajia havaittiin myöhäisvaiheen potilaiden (P = 0,032, taulukko 2), mutta ei varhaisvaiheen potilailla (P = 0,988, taulukko 2). Nämä tulokset viittaavat siihen, että ei-ATA potilailla, joilla on pienemmät TIL numerot verrattuna ATA potilailla voi olla huonompi kasvain immuunivalvonnalle.

IL-10 vähentää tuumorisolujen apoptoosin kautta lisääntynyt T-solujen apoptoosin

Voit tarkistaa mahdollisuus muutosten kasvaimen immuunivalvonnan, PBMC kerättiin 22 terveistä luovuttajista ATA haplotyypin ja 22 terveen luovuttajan kanssa ei-ATA haplotyyppi. IL-10-mRNA tasot PBMC kuin ATA haplotyyppi terveistä luovuttajista korkeampi kuin ATA haplotyyppi terveiltä luovuttajilta (keskiarvo ± SE, 78,54 ± 13,18 vastaan ​​46,37 ± 3,91, P = 0,028). Nämä solut viljellä yhdessä sellaisten A549 ja TL-1 keuhkosyöpä soluja. Sytotoksisuus keuhkosyöpään solujen määritettiin virtaussytometrialla anneksiini V

+ /PKH26

+ ja T-solujen apoptoosin määritettiin anneksiini

+ /CD3

+. T-solujen apoptoosin jälkeen rinnakkaisviljelemällä A549- ja TL-1-soluissa oli pienempi PBMC ATA haplotyyppi terveiltä luovuttajilta kuin PBMC ei-ATA haplotyyppi terveiden luovuttajien (8,34 ± 2,37 vs. 10,49 ± 3,04, P = 0,012 varten A549; 12,97 ± 2,94 vs. 18,30 ± 3,82, P 0,001; Fig. 4A). Näin ollen, määrä apoptoottisten kasvainsolujen (A549 ja TL-1) oli huomattavasti suurempi, kun yhdessä viljelemisen kanssa PBMC ATA haplotyyppi terveistä luovuttajista kuin ei-ATA terveiltä luovuttajilta (16,80 ± 3,38 vs. 14,45 ± 3,78, P = 0,035 A549; 12,95 ± 3,05 vs. 8,68 ± 2,57, P 0,001; Fig. 4B). Tarkistaa, onko IL-10 oli vastuussa tämän apoptoosin T-solujen ja keuhkosyövän soluja, numerot apoptoottisten T-solujen PBMC ATA haplotyyppi terveiden luovuttajien kasvoi hoidon 100 ng /ml IL-10 (8,34 ± 2,37 vs . 15.97 ± 3,03, P 0,001 A549; 12,97 ± 2,94 vs. 15,70 ± 3,54, P = 0,008 TL-1, Fig. 4A). Toisaalta, T-solujen apoptoosin PBMC ei-ATA terveiden luovuttajien oli merkittävästi vähentynyt annoksesta riippuvalla tavalla IL-10 neutraloitiin vasta-aineella (Fig. 4A). Näin ollen apoptoosin sekä keuhkosyövän solutyyppejä väheni käsittelemällä IL-10 ja kasvoivat IL-10 neutraloitiin vasta-aineella (Fig. 4B). Yhdessä PBMC kuin ATA kantajia oli alhaisemmat apoptoottinen vaikutus keuhkosyöpään soluja kuin teki PBMC ATA kantajia, ja IL-10 oli vastuussa kasvainsolujen apoptoosin jälkeen rinnakkaisviljelemällä PBMC. Nämä tulokset osoittivat selvästi, että IL-10 vähensi kasvainsolujen apoptoosin kautta lisääntynyt T-solujen apoptoosin.

Meidän eläinkoetta, TC-1-soluissa, jotka eivät esittäneet IL-10 (ystävällisesti Dr. TC Wu, John Hopkins, Baltimore, MD, USA) injektoitiin C57BL6-hiirten häntälaskimoon. 14 päivän jälkeen, kasvaimet muodostettiin koko keuhkojen (Fig. 5). Ei kuitenkaan kasvaimia ei havaittu sen jälkeen, kun TC-1-soluja käsiteltiin hiiriä käsiteltiin IL-10 neutraloitiin vasta-aineella. Nämä tulokset näyttävät tukevan aikaisempia tutkimuksia osoittaa, että IL-10 erittyy immuunijärjestelmän solut voivat edistää keuhkojen syövän etenemistä [39].

Potilaat, joilla on ei-ATA haplotyyppi tai korkea IL-10-mRNA-tasoja oli huonompi tuloksia verrattuna potilaisiin ATA haplotyypin tai alhainen IL-10-mRNA-tasoja

Kaplan-Meier ja Coxin monimuuttuja regressio analyysit tehtiin tarkistaa, onko huonompi selviytyminen ja suurempaa uusiutumisen nähtäisiin potilailla, joilla ei-ATA haplotyyppi tai korkea IL-10 mRNA tasot keuhkokasvaimia verrattuna potilailla, joilla on ATA haplotyyppi tai alhainen IL-10 mRNA-tasoja. Eloonjäämiskäyrät ennusti Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että potilailla, joilla on ei-ATA haplotyyppi oli lyhyempi OS ja RFS jaksoja kuin potilailla, joilla on ATA haplotyyppi (P = 0,001 OS, vasen paneeli kuvion. 6A; P 0,001 RFS, oikea paneeli kuviossa. 6A). Yhdenmukainen ennustetekijöiden arvo IL-10 haplotyyppi, kohonnut IL-10 mRNA havaittiin myös osajoukko tämän tutkimuksen (n = 241), joka osoittaa, että kasvainten korkea IL-10-mRNA-tasot korreloivat huonompi OS ja RFS kuin potilailla, joiden kasvaimet olivat alhaiset IL-10-mRNA-tasoja (P = 0,001 OS, vasen paneeli kuvion. 6B; P 0,001 RFS, oikea paneeli kuviossa. 6B). Kuten odotettua, huonoin käyttöjärjestelmä ja RFS nähtiin potilailla, joilla on ei-ATA haplotyypin ja korkea IL-10-mRNA-tasoja (Fig. 6C). Nämä tulokset viittaavat siihen, että IL-10-haplotyyppi tai IL-10-mRNA: n ekspressiota keuhkoissa kasvaimia voidaan käyttää ennustamaan potilaan tuloksia.

monimuuttuja Coxin käytettiin tutkimaan, onko IL-10-haplotyyppi tai mRNA-tasoja voi itsenäisesti ennustaa potilaan lopputulokseen, säätämisen jälkeen eri muuttujat, kuten ikä, sukupuoli, tupakointi, kasvainhistologiaa, ja syöpä vaiheessa. Kuten taulukosta 3, potilailla, joilla on ei-ATA haplotyyppi oli hrs of 1.431 ja 1.556 lyhyempiä OS ja RFS vastaavasti verrattuna potilaisiin, joilla ATA haplotyyppi (95% CI, 1,104-1,856, P = 0,007 OS; 1.200- 2,018, P 0,001 RFS). Mediaani kestot OS ja RFS potilailla, joilla ei-ATA haplotyypin olivat 24,1 ja 16,8 kuukautta, vastaavasti, verrattuna 40,9 ja 30,9 kuukautta, vastaavasti, ATA haplotyypin. 5 vuoden eloonjäämisluvut potilaille, joilla on ei-ATA ja ATA haplotypes oli 28,2% vs. 43,3% OS ja 22,2% vs. 36,2% RFS. Riippumaton ennusteen arvioinnissa IL-10-mRNA-tasoja näkyi myös osajoukko Tutkimuksen väestöstä. Potilaat, joilla on korkea IL-10-mRNA-tasoja oli lyhyempi mediaanielinajassa ja 5 vuoden pysyvyys OS ja RFS kuin potilaalla on matala IL-10-mRNA-tasoja (taulukko 3; 30,2 kuukautta vs. 52,1 kuukautta, 30,7% vs. 48,7%, P = 0,017 OS; 17,2 kuukautta vs. 35,9 kuukautta, 19,2% vs. 45,1%, P = 0,001 RFS). HRS IL-10 mRNA OS ja RFS lisääntynyt suhteessa HRS IL-10 haplotyyppi (1,553 vs. 1,431 OS; 1,755 vs. 1,556 RFS). Enemmän kiinnostavaa, HRS potilaita, joilla on ei-ATA haplotyyppi plus korkea IL-10-mRNA oli kasvanut 1,431-1,892 OS ja 1,556-2,344 RFS verrattuna potilailla, joilla on ATA haplotyyppi yhdessä pienen IL-10 mRNA-tasolla. Kasvu HRS ei havaittu potilailla, joilla ATA haplotyyppi plus korkea IL-10-mRNA tai potilailla, joilla on ei-ATA haplotyypin ja alhainen IL-10 mRNA-tasolla. Nämä tulokset näyttävät viittaavan siihen, että IL-10 haplotyyppi tai IL-10 mRNA-tasolla voi itsenäisesti ennustaa selviytymisen ja uusiutumisen resekoituun pienisoluista keuhkosyöpää.

Keskustelu

SNP IL-10 -1082 G A, -819 C T, ja -592 C A GCC, ACC, ja ATA haplotyyppien vastaavasti [36], [40]. Ilmaisu IL-10-mRNA ääreisverisoluissa on korkein yksilöiden yhdellä tai kahdella GCC haplotyyppien, jonka jälkeen ACC /ACC kantajia, ja sitten ATA /ACC ja ATA /ATA harjoittajille [36], [40], [41] . Esillä olevassa tutkimuksessa ei-ATA ja ATA haplotypes luokiteltiin kolmeen GCC, ATA, ja ACC haplotyyppien IL-10-promoottori (Fig. 1). Huono ennusteen arvioinnissa OS ja RFS löydettiin GCC, ACC, ja ei-ATA harjoittajat (taulukko S1). Kuitenkin ennustetekijöitä merkitys kolmea lentoyhtiötä vasta paljastui myöhäisvaiheen potilaiden ei alkuvaiheen potilailla Tämän tutkimuksen väestöstä (taulukko S1). Toisaalta, IL-10-mRNA-ekspressiotasot olivat merkittävästi korkeammat harjoittajille ≥1 kopiomäärä GCC kuin harjoittajille ilman GCC (IL-10 mRNA GCC vs. muu GCC: 147,90 ± 56,80 vastaan ​​31,72 ± 7,91, P 0,001). Eroa IL-10-mRNA nähty ACC harjoittajien (IL-10 mRNA ACC vs. ei-ACC: 57.69 ± 15.43 vs. 31,15 ± 11,36, P = 0,166). Tämä oli yhdenmukainen aikaisemman käy ilmi, että GCC haplotyyppi kantajia oli suurempi keuhkosyövän riski kuin muut lentoyhtiöt [6]. Lisäksi IL-10-mRNA oli korkeampi ei-ATA haplotyypin kuin ATA haplotyyppi (Fig. 2). Siksi tässä tutkimuksessa, IL-10 haplotypes arvioitiin niiden ennustetekijöiden merkitys pienisoluista keuhkosyöpää.

Yhdistyksen välillä IL-10 ja syövän etenemistä on usein selitetty muutokset immunosuppression ja kasvaimen immuunivalvonnan [ ,,,0],1] – [4], [42]. Esillä olevassa tutkimuksessa, johdonmukainen havaintojen havaittiin

in vitro

kokeissa PBMC: t viljeltiin yhdessä keuhkosyövän soluja ja

in vivo

havaintoja TIL kasvainkudoksissa (Fig. 4). Aiemmat tutkimukset käyttäen siirtogeenisiä hiiriä, jotka ekspressoivat IL-10 osoitti, että näillä hiirillä kehittyi suurempia kasvaimia kuin teki ohjaus hiirillä. Tämä tulos viittaa siihen, että IL-10 estää tehokkaasti immuunivaste taudin etenemiseen [43].

Aiemmat raportit ovat osoittaneet, että IL-10 on eri ennustetekijöiden merkitys varhaisen ja myöhäisen vaiheen keuhkosyöpäpotilaita [23] – [25]. Esillä olevassa tutkimuksessa väestön huonompi OS ja RFS havaittiin myöhäisvaiheen (III) potilailla, joilla on ei-ATA haplotyypin kuin potilailla, joilla ATA haplotyyppi (HR, 1.785, P 0,001 OS, HR, 2,071, P 0,001 RFS, taulukko S1); ei kuitenkaan ennusteen arvioinnissa havaittiin alkuvaiheen (I + II) potilasta (taulukko S1). Kun verrataan koko tutkimuspopulaatiossa, myöhäisvaiheen potilailla oli korkeampi tuntiin OS ja RFS (1,785 vs. 1,431 OS; 2,071 vs. 1,556 RFS, taulukko S1). Tämä voi selittyä huomattavasti korkeammat IL-10-mRNA-tasoja in myöhäisvaiheen potilaiden ei-ATA haplotyyppi kuin ATA haplotyyppi (87,26 ± 28,83 vastaan ​​10,87 ± 4,53, P = 0,011); kuitenkin, ero ei-ATA ja ATA haplotypes niukasti havaittiin alkuvaiheen potilailla (54,13 ± 18,49 vastaan ​​14,52 ± 7,47, P = 0,050). Lisäksi ennustetekijöiden merkitys TIL OS ja RFS näkyi myös myöhäisvaiheen potilaiden ei varhaisvaiheen potilailla (P = 0,012 OS, P = 0,003 RFS, taulukko S2). Siksi ehdotamme, että ei-ATA haplotyyppi, jolla on korkeampi IL-10 mRNA ilmaisu tasolla, voi olla tärkeämpää edistää kasvaimen aggressiivisuutta myöhäisvaiheen potilailla kuin alkuvaiheen potilailla.

Yhteenvetona IL-10 haplotyyppien voidaan helposti määrittää potilaan verinäytteestä, ja se voi olla hyödyllistä ennustettaessa selviytymistä ja uusiutumisen kokoisen pienisoluista keuhkosyöpää. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen raportti osoittaa, että IL-10 haplotyyppien voidaan käyttää ennustamaan käyttöjärjestelmän ja RFS NSCLC potilailla. Siksi ehdotamme, että haplotyyppien IL-10 promoottori SNP voi olla mahdollisia biomarkkereita ennustamiseksi selviytymisen ja uusiutumisen kokoisen pienisoluista keuhkosyöpää.

tukeminen Information

Taulukko S1.

Monimuuttuja-analyysi vaikutuksesta IL-10 haplotyyppien eloonjäämiseen ja uusiutumisen elinaika ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaat mukaan vaiheeseen.

doi: 10,1371 /journal.pone.0039525.s001

(DOC) B Taulukko S2.

Monimuuttuja-analyysi vaikutuksesta kasvain soluttautua lymfosyyttimäärän eloonjäämiseen ja uusiutumisen elinaika ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita.

doi: 10,1371 /journal.pone.0039525.s002

(DOC) B

Kiitokset

FASCS Calibur suoritettiin Instrument Center Chung Shan Medical University, joka on tuettu National Science Council, opetus- ja Chung Shan Medical University.