Krooninen sairaus

tiivistelmä

Ginsenoside yhdistettä K (CK), harvinainen ginsenoside peräisin

Panax ginseng

, on havaittu omaavan ainutlaatuisia farmakologisia aktiivisuuksia, jotka on erityisesti anti-syöpä. Kuitenkin rooli sytokromi P450 -entsyymien (CYP) metaboliaan CK on epäselvä. Tässä tutkimuksessa olemme seulottu CYP aineenvaihduntaan CK

in vitro

käytettiin ihmisen maksan mikrosomeja (HLM: iä) tai ihmisen rekombinanttia CYP. Tulokset osoittivat, että CK esti entsyymin toimintaa CYP2C9 ja CYP3A4 on vuokra-asunto.

K

m

ja

V

max

arvot CK oli 84,20 ± 21,92 uM ja 0,28 ± 0,04 nmol /mg proteiinia /min, vastaavasti, että osakeyhtiöt; 34,63 ± 10,48 uM ja 0,45 ± 0,05 nmol /nmol P450 /min, vastaavasti, CYP2C9; ja 27.03 ± 5,04 uM ja 0,68 ± 0,04 nmol /nmol P450 /min, vastaavasti, CYP3A4.

IC

50

arvot olivat 16,00 uM ja 9,83 uM, ja

K

i

arvot olivat 14,92 uM ja 11.42 uM CYP2C9 ja CYP3A4, vastaavasti. Muut ihmisen CYP-isoformeja, kuten CYP1A2, CYP2A6, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19, osoitti vähän tai ei lainkaan vaikutusta CK aineenvaihduntaan. Tulokset viittasivat siihen, että CK oli alustan ja myös estäjien sekä CYP2C9 ja CYP3A4. Potilaat käyttävät CK yhdistettynä lääkeaineet, jotka ovat substraatteja CYP2C9 ja CYP3A4 eri syistä tulisi olla varovainen, vaikka estämällä teho CK on paljon köyhempi kuin entsyymi-inhibiittoreiden.

Citation: Xiao J, Chen D, Lin XX, Peng SF, Xiao MF, Huang WH, et al. (2016) seulonta Drug metaboloivia entsyymejä varten Ginsenoside yhdisteen K

In vitro

: Tehokas Anti-Cancer Aine on peräisin

Panax ginseng

. PLoS ONE 11 (2): e0147183. doi: 10,1371 /journal.pone.0147183

Editor: Olorunseun Ogunwobi, Hunter College of The City University of New York, Yhdysvallat |

vastaanotettu: toukokuu 23, 2015; Hyväksytty: 30 joulukuu 2015; Julkaistu 4 helmikuuta 2016

Copyright: © 2016 Xiao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat National Tiedesäätiö of China (Grants 81302850, 81300204, 31400306); Kiinan Postdoctoral Science Foundation (Grants 2013M531817, 2014T70793); ja Science and Technology Plan projektit Hunan (Grant 2014RS4011).

Kilpailevat edut: Kiitos Zhejiang Hisun Pharmaceutical Company Limited (Zhejiang, Kiina) tarjoamiseksi Ginsenoside yhdiste K. Lääkeyritys ei ollut rooli tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Johdanto

Panax ginseng

on täydentävä ja vaihtoehtoinen lääketiede ( CAM), jossa on useita farmakologisia toimintoja, kuten ylläpitää fyysistä elinvoimaa ja parantaa stressinsietokykyä ja ikääntyminen [1].

Panax ginseng

käytetään laajasti klinikoilla syövän ehkäisyä, erektiohäiriöt, ja lisääntyneeseen fyysiseen toimintoja, muun muassa [2]. Tärkein aktiivinen ainesosat

Panax ginseng

ovat ginsenosides, ja tähän mennessä yli 150 luonnosta peräisin ginsenosides on saatu

Panax ginseng

[3]. Tärkeimmät ainesosat käsittävät yli 80% sisällöstä

Panax ginseng

ovat RB1, RB2, RC, Rg1, ja Re. Loput tunnetaan harvinaisia ​​ginsenosides, jotka muodostavat vain pienen osan koko saponiinit, ja niillä on ainutlaatuinen farmakologinen toiminta [4].

Ginsenoside yhdistettä K (CK), tai 20-O-β- (D-glukopyranosyyli) -20 (S) -protopanaxadiol (molekyylirakenne on esitetty kuviossa 1), on luonnollisesti läsnä. Se kuuluu harvinaisten ginsenoside, joka on muuttunut ginsenosideRb1 ja Rb2 suolistobakteerien [5]. Ginsenosides imeytyvät heikosti suolistosta, kun taas niiden metaboliitin CK imeytyy. Koska lopullinen muoto, CK pelaa farmakologinen merkitys on aiheuttanut kasvavaa kiinnostusta. CK voi vastustaa kaikenlaisia ​​kasvainsolujen ja edistää solujen apoptoosia, kuten paksusuolen ja peräsuolen syövän soluja, mahalaukun syövän solut, keuhko- syöpäsoluja, ja multippeli myelooma [1, 6, 7]. CK kasvattaa vastustuskykyä koskemattomuuden toiminto pidentää siirrännäisen selviytymistä ajan sydämensiirron, on tulehdusta toiminto, vastustaa ihon vanhenemista ja suojaa sydänlihaksen [1, 8].

Ainutlaatuinen biologinen aktiivisuus CK on herättänyt paljon huomiota, ja siten sillä on laaja soveltaminen mahdollisuus. Nykyinen käyttö CAM potilailla on kasvussa [9]. Samanaikaista käyttöä CAM ja terapeuttisten lääkkeiden voi johtaa vakavaan turvallisuuskysymyksiin potilailla. CAM on potentiaalia aiheuttaa farmakokineettisiä yhteisvaikutuksia lääkeaineet. Se voi joko lisätä tai vähentää plasman terapeuttisten lääkkeiden ja aiheuttaa odottamattomia toksisuuksia tai tehon heikkenemiseen [10].

Useimmat farmakokineettisiä CAM-lääke vuorovaikutuksiin liittyy lääkkeitä metaboloivia sytokromi P450 (CYP) entsyymit [11, 12] . CYP suuri perhe lääkettä metaboloivia entsyymejä, jotka on kriittinen rooli vaiheen I lääkeainemetabolis-. Lisäksi useimmat endogeeniset ja eksogeeniset aineet ovat substraatteja CYP. Merkittävimmät CYP osallistuu metaboliaan useimmat lääkkeet ovat CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9, CYP2D6, CYP2E1, CYP2C19 ja CYP3A4, jotka edustavat yli 90%: n aineenvaihduntaa endogeenisten ja eksogeenisten aineiden [13].

CK on yksi yleisimmin käytetty CAM moniin sairauksiin klinikoilla. Koska samanaikainen ei voida välttää, miten estää CK-lääkeaineinteraktioita on tullut tärkein asia potilaiden keskuudessa. Tarjotaan rationaalinen neuvoja huumeiden käyttöön, selvitimme CYP-entsyymien aineenvaihduntaan CK tässä tutkimuksessa.

Methods

Entsyymit ja kemikaalit

Entsyymit ja kemikaalit ware laadittu edellisessä tutkimuksessa joitakin muutoksia [14]. Yhdistettiin ihmisen maksan mikrosomeissa, rekombinantti ihmisen CYP-entsyymien, ja NADPH ostettiin Cypex Ltd (UK) ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti. Ginsenoside yhdistettä K (CK, C

36H

62O

8, MW: 622,873, assay≥99.2%, Lot: P1201-1) tarjosi Zhejiang Hisun Pharmaceutical Company Limited (Zhejiang, Kiina). Furafylline, tranyylisypromiini, ketokonatsoli, sulfafenatsoli, kinidiini, kloorimetiatsoliedisylaatti hydrokloridi, ja tiklopidiinihydrokloridi hankittiin National Institutes for Food and Drug valvonta (Peking, Kiina). Fenasetiini, kumariinin, midatsolaami, tolbutamidi, S-mefenytoiinin, metoprololin, klooritsoksatsonin, ja standardeja niiden aineenvaihduntatuotteiden, kuten asetaminofeeni, 7-hydroksyyli kumariini, 1-hydroksyyli midatsolaamin, 4-hydroksyyli tolbutamidi, 4-hydroksyyli mefenytoiinin, α-hydroksyyli metoprololin , 6-hydroksyyli klooritsoksatsonin, ja irbesartaanin (sisäinen standardi), hankittiin Sigma-Aldrich (Shanghai, Kiina). Kaikki muut kemikaalit ja liuottimet olivat korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (HPLC) luokka.

Laitteet ja käyttöolosuhteet

pitoisuudet CYP-substraattien ja niiden aineenvaihduntatuotteiden kvantitoitiin menetelmän mukaisesti raportoitu edellisessä tutkimuksessa joitakin muutoksia [14]. Waters 2695 erottaminen moduuli HPLC järjestelmä kytketään Quattro mikro

™ API kolmoiskvadrupolisen tandem massaspektrometriä (Waters Corp., Milford, Massachusetts, USA), jossa on sähkö- ionisointilähteeseen käytettiin. Näytteet erotettiin HyPURITY C

18-kolonnia (150 mm x 2,1 mm, 5 um, Thermo, USA). Liikkuvat faasit koostui 20 mM ammoniumformiaattia ja asetonitriiliä suhteessa 60:40. Alikvootit 20 ui injektoitiin liikkuvana faasina virtausnopeudella 0,3 ml /min. Useita reaktio valvottiin positiivisessa tilassa, paitsi CK joka tehtiin negatiivinen tilassa (emäioni m /z 621,4 tyttärelle ioni m /z 160,8). Muut siirtymät olivat samat kuin on raportoitu edellisessä tutkimuksessa [14]. Massaspektrit muodostuvat metaboliitit inkubaatioihin olivat identtiset vastaavan aitoja standardeja.

Yleiset inkubaatio-olosuhteet

menetelmä suoritettiin mukainen edellisessä tutkimuksessa joitakin muutoksia [14] . CYP isoformi-spesifisellä koettimella reaktioita käytettiin fenasetiirii O-deethylation (for CYP1A2), kumariinin 7-hydroksylaation (for CYP2A6), tolbutamidi 4-hydroksylaation (CYP2C9), metoprololi α-hydroksylaation (CYP2D6), klooritsoksatsonin 6-hydroksylaation ( for CYP2E1), S-mefenytoiini 4-hydroksylaation (CYP2C19), ja midatsolaamin 1-hydroksylaation (CYP3A4). Kineettinen tutkimus CK toteutettiin osakeyhtiöt. 0,2 ml inkuboimalla seosta, joka koostui CK (substraattina), The vuokra-asunto (0,5 mg /ml) tai CYP-isoformeja (10 pmol) ja 0,1 M natriumfosfaattipuskuria (pH 7,4) oli esilämmitetty 5 min ajan 37 ° C. Reaktio aloitettiin lisäämällä 1 mg /ml triphosphopyridine nukleotidin (NADPH). Kaikki reagenssit liuotettiin metanoliin, ja lopullinen liuotinpitoisuus kaikissa inkuboinneissa (mukaan lukien ehkäiseminen) oli 1%. Lopullinen inkuboinnit suoritettiin ravistellen vesihauteessa (37 ° C) 30 minuutin ajan. Reaktiot pysäytettiin lisäämällä 0,2 ml jääkylmää asetonitriiliä, joka sisältää irbesartaanin (114,9 ng /ml), sisäisenä standardina. Näytteitä vorteksoitiin 5 minuuttia. Sentrifugoinnin jälkeen (12000 x g 10 min), supernatantit siirrettiin, ja alikvootit 20 ui injektoitiin HPLC-MS /MS-järjestelmään analyysiä varten.

kineettinen analyysi CK

kineettiset parametrit aineenvaihduntaan CK määritettiin inkuboimalla kasvavia konsentraatioita CK (10-100 uM) 37 ° C: n vuokra-asunto ja NADPH mukaisesti inkubaatio-olosuhteita, kuten on kuvattu yksityiskohtaisesti aiemmin [14]. Yhtälö CK reaktionopeus (

V

) on vuokra-asunto tai CYP-isoformeja ilmaistaan ​​

V = (C

0

-C

t

) /

T

/C

p

, jossa

C

0

ja

C

t

ovat alkuperäisen ja lopullisen pitoisuudet CK on inkubointiliuoksessa vastaavasti T on inkubaatioaika (min), ja

Cp

on proteiinipitoisuus (mg /ml tai nmol). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta (SD). Sisäisen puhdistuman keskiarvo rate (

CL

int

) varten

in vitro

inkubaatio arvioitiin käyttämällä

V

max

/K

m

.

erityisiä CYP-isoformien seulottiin CK aineenvaihduntaa

seulomiseksi tietyn CYP isoformia vastuussa CK aineenvaihduntaa, päätimme inhiboiva vaikutus spesifisiä inhibiittoreita aineenvaihduntaan CK on vuokra-asunto, kuten on kuvattu yksityiskohtaisesti aiemmin [14]. Estäjien furafylline (for CYP1A2), tranyylisypromiini (for CYP2A6), sulfafenatsoli (CYP2C9), kinidiini (CYP2D6), kloorimetiatsoliedisylaatti (for CYP2E1), tiklopidiini (CYP2C19), ja ketokonatsoli (CYP3A4) on erikseen inkuboitiin CK ( 50 uM), The osakeyhtiöt, ja NADPH samoissa inkubointiolosuhteissa mainittu above.The pitoisuudet estäjiä käytettiin suunnilleen omilla

IC

50

arvojen mukaan edellinen raporteissa [15-18]. Estovaikutuksia edellä spesifiset inhibiittorit on Puhdistuma CK arvioitiin erikseen seuloa CYP-isoformeja vastaavat CK aineenvaihduntaa. Suhteellinen aktiivisuus CYP-isoformien laskettiin jakamalla piikin ala CK kun inkuboidaan inhibiittorin että CK negatiivisesta valvontaa.

esto Tutkimuksia

IC

50

määritys

CK (10-100 uM) ja yhden CYP-isoformin erityisiä alustan (jonka pitoisuus samanlainen kuin sen vastaavan

K

m

arvo) käytettiin määrittämään estävä vaikutus CK tiettyihin CYP-isoformeja, kuten on kuvattu yksityiskohtaisesti aiemmin [14]. Alustoilla fenasetiini, kumariini, tolbutamidi, metoprololi, klooritsoksatsonin, S-mefenytoiinin, ja midatsolaamia käytettiin pitoisuuksina 10, 5, 100, 7,5, 40, 100, ja 5 uM vastaavasti. Kaikki inkubaatio-olosuhteet olivat samat kuin edellä on mainittu. Estovaikutus CYP-isoformeja tutkittiin erikseen inkuboimalla vuokra-asunto puuttuessa tai läsnä CK. Inkubointi ja liuotinta, jota käytettiin liuottamiseen CK pidettiin negatiivisena kontrollina, ja liuokset, jotka sisältävät tietyn estäjiä edellä mainittujen katsottiin positiivisesta kontrollista.

määritys

K

i

IC

50

määrittämisen kokeissa CK selvästi esti CYP2C9 ja CYP3A4, kun taas sen vaikutus CYP1A2, CYP2A6, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19 oli minimaalinen. Siksi Dixon käyriä eston CYP2C9 ja CYP3A4 määritettiin inkuboimalla alustan koetin useilla pitoisuuksilla tai ilman testiä estäjän kanssa osakeyhtiöt ja kofaktoreita. Esto saadut tiedot pilottikokeilujen käytettiin apuna tuottaa sopiva koetin alustan ja testi inhibiittorikonsentraatioi- määrittämiseksi

K

i

arvot kullekin CYP-isoformin . Isoformivyöhykkeet koetinta substraattikonsentraatioita käytettiin 25-200 uM tolbutamidin CYP2C9 ja 5-50 uM midatsolaamiannoksen CYP3A4. CK pitoisuudet käytettiin 10-100 uM.

määritys

K

i

’

mukaan Cornish-Bowden

et al

. [19], joka on Dixon juoni rajoittaa se, että se ei erota yksiselitteisesti välillä kilpailukykyinen ja sekoitetaan estäjiä ja, seka- tai kilpailukyvyttömien estäjiä, se tarjoaa mitään toimenpiteitä on

K

i ’

, dissosiaatiovakio EIS monimutkainen. Siksi käytimme S /V versus [I] tontteja määrittää

K

i ’

arvot eston CYP2C9 ja CYP3A4. Kun

K

i

K

i

”, risteys oli yli [I] akselia juoni S /V vastaan ​​[I] ja sen alla on Dixon kuvaaja; Asia oli päinvastoin jos

K

i

K

i

’

. Siinä erityistapauksessa, jossa

K

i

=

Ki ”

(yksinkertainen ei-kilpaileva esto), risteyskohdat tapahtunut [I] akselin molemmissa tontteja. Asymptoottinen tapaukset kilpailukykyinen ja kilpailukyvyttömän esto voidaan tuottaa työntämällä olosuhteet

K

i ’

on ∞ kilpailevaa inhibointia, tai

K

i

on ∞ kilpailukyvyttömien esto [19].

laskeminen entsyymikinetiikka ja tilastollinen menetelmä

Kuten on kuvattu yksityiskohtaisesti aiemmin [14], määrittää tärkeimmät entsyymit vastuussa CK aineenvaihduntaa osakeyhtiöt, puhdistuma on inkubointiliuoksessa ilman erityisiä inhibiittoria CK pidettiin 100%. Vaikutukset erityisen estäjien metaboliseen puhdistumaan nopeudella CK arvioitiin SPSS yksisuuntainen varianssianalyysi (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P 0,05 katsottiin merkitseväksi kaikissa tapauksissa. Näennäinen kineettinen parametrit CK (

K

m

ja

V

max

) määritettiin sovittamalla Michaelis- Menten yhtälö käyttäen GraphPad Prism Entsyymi Kinetic 5 Demo ohjelmisto (GraphPad Co Ltd, San Diego, CA, USA). Yhtälö ilmaistaan ​​

V = V

max

[S] /(K

m

+ [S]) B, jossa

K

m

on substraatin konsentraatio, jossa reaktionopeus on 50%

V

max

. Määrittää estyminen CYP-isoformien aktiivisuus kunkin CYP isoformin laskettiin käyttäen Puhdistuma sen vastaavan koettimen alustaan. Puhdistuma anturin alustan pidettiin 100%, kun mitään erityistä estäjän ja CK lisättiin inkubaatiokokeessa.

IC

50

s

määritettiin analysoimalla juoni logaritmin estäjän konsentraatio vastaan ​​aktiivisuuden prosentuaalinen osuus jälkeen jäljellä esto SPSS ohjelmistoa for Windows (versio 11.5, SPSS, Chicago, IL). Laskea

K

i

arvot, esto tiedot sovitettiin eri malleja entsyymin esto (kilpailukykyinen, ei-kilpailevia) epälineaarisella pienimmän neliösumman regressioanalyysillä käyttäen GraphPad Prism 5 ohjelmistot (GraphPad Co. Ltd),

K

i

arvot laskettiin käyttämällä epälineaarisen regression yhtälöstä

v

= (

V

max

S

)/(

K

m

(1+

I/K

i

)+

S

) kilpailevaa inhibitiota ja yhtälö

v

= (

V

max

S

)/(

K

m

+

S

)(1+

I/K

i

) for-kompetitiivinen esto, jossa

I

on yhdiste pitoisuus,

K

i

on inhibitiovakion,

S

on alustan konsentraatio, ja

K

m

on alustan konsentraatio puolet suurimmasta nopeudesta (

V

max) reaktion [20].

K

i

’arvot

laskettiin käyttäen toissijaisena juoni rinteitä S /V versus [I] [19].

tulokset

kineettinen analyysi CK

Kuva 2A, 2B ja 2C esittävät metaboliaan CK inkuboinnin jälkeen osakeyhtiöt, CYP2C9 ja CYP3A4. Kineettinen tontteja osoitti, että

K

m

ja

V

max

arvot olivat 84,20 ± 21,92 uM ja 0,28 ± 0,04 nmol /mg proteiinia /min osakeyhtiöt, 34,63 ± 10,48 uM ja 0,45 ± 0,05 nmol /nmol P450 /min CYP2C9, 27.03 ± 5,04 uM ja 0,68 ± 0,04 nmol /nmol P450 /min CYP3A4, vastaavasti.

vuonna vitroCL

int

arvot CK on vuokra-asunto, CYP2C9 ja CYP3A4 olivat 0,0033 ml /mg proteiinia

-1 · min

-1, 0,0130 ml /nmol P450

-1 · min

-1, ja 0,0252 ml /nmol P450

-1 · min

-1, vastaavasti.

Huomaa: inkubointi olosuhteet ovat on kuvattu materiaalit ja menetelmät osassa. Käyrä automaattisesti asentaa käyttämällä epälineaarista regressiota ja Michaelis-Menten yhtälö. Tiedot saatiin kolmena kappaleena.

Erityisiä CYP-isoformien aineenvaihduntaan CK

estävät vaikutukset CYP erityisiä estäjien aineenvaihdunnan mismäisillä CK on vuokra-asunto on esitetty Kuva 3. pitoisuudet furafylline, tranyylisypromiini, sulfafenatsoli, kinidiini, tiklopidiini, ja ketokonatsoli olivat 1 uM, paitsi kloorimetiatsoliedisylaatti 5 uM. Pitoisuudet valittiin sen perusteella, aiemmin raportoitu

IC

50

tai

K

i

arvot CYP-isoformien varmistaa riittävä estävä selektiivisyys ja maksimaalinen inhibitiotehoa. Läsnäollessa sulfafenatsoli ja ketokonatsoli, Puhdistuma (MCR) CK laski 73,5 ± 20,9% ja 74,6 ± 28,1% kontrolliryhmän, vastaavasti (kuvio 3). Kuitenkin muut inhibiittorit ei ollut selvää estävää vaikutusta aineenvaihduntaan CK. Seulotaan entsyymit varmistettiin vielä ihmisen yhdistelmä-CYP käyttämällä erityistä inhibiittorit. MCRs CK laski 22,0% siitä, että ohjaus CYP2C9 ja 13,2% kontrolliryhmän CYP3A4 (kuvio 4). Tulokset osoittivat, että CYP2C9 ja CYP3A4 olivat tärkeimmät entsyymit vastuussa aineenvaihduntaan CK

in vitro

.

Huomaa: Furafylline, tranyylisypromiini, sulfafenatsoli, kinidiini, kloorimetiatsoliedisylaatti, tiklopidiini, ja ketokonatsoli käytettiin koska erityinen estäjien CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19, vastaavasti. Inkubointiolosuhteissa on kuvattu materiaalit ja menetelmät osassa. Kukin datapiste edustaa keskiarvoa kolmen määrityksen ja virhepalkkeja. Läsnäollessa sulfafenatsoli (1 uM) ja ketokonatsoli (1 uM), metaboliseen puhdistumaan nopeudella CK laski 73,5% ja 74,6% siitä valvonnan, vastaavasti, kun taas muut inhibiittorit ei ollut merkittävää estävää vaikutusta aineenvaihduntaan CK.

Huomaa: Noin 50 uM CK inkuboitiin CYP rekombinanteilla ja kofaktoreita puuttuessa (kontrolli) tai läsnäolo inhibiittoreiden sulfafenatsoli (1 uM) ja ketokonatsoli (1 uM), vastaavasti. Jokainen piste edustaa keskiarvoa kolmena kappaleena inkuboinneissa. MCRs CK merkittävästi väheni verrattuna ohjaus- CYP3A4 ja CYP2C9.

Arvio

IC

50

s

estävät vaikutukset useiden pitoisuuksien CK (10-100 uM) aktiivisuuteen kunkin CYP-isoformin määrää aineenvaihdunnan yksittäistä konsentraatiota isoformi-spesifisellä koettimella testattiin vuokra-asunto (tai ilmaistaan ​​CYP tarvittaessa). CK osoitti voimakas esto CYP2C9 (tolbutamidi 4-hydroksylaation) ja CYP3A4 (midatsolaamin 1-hydroksylaation) (kuvio 5), jossa

IC

50s

of 16,00 uM ja 9,83 uM vastaavasti. Estovaikutus CK aktiivisuuteen CYP1A2, CYP2A6, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19 oli vähäinen.

Huomaa: Inkubointi olosuhteet on kuvattu materiaalit ja menetelmät osassa. Kukin datapiste edustaa keskiarvoa kolmen määrityksen ja virhepalkkeja.

Arvio

K

i

arvot

CYP2C9 ,

K

i

arvot määritettiin käyttäen tolbutamidin koettimena alustaan.

V

max

ja

K

m

arvot arvioitiin käyttäen epälineaarinen regressiomallin kilpailukykyinen entsyymin esto CYP2C9 -catalyzed tolbutamidin 4-hydroksylaation että vuokra-asunto-edustaja Lineweaver-Burk koealojen (kuvio 6) ja toisen tontin CYP2C9 aktiivisuus käyttämällä rinteillä ensisijaisen Lineweaver-Burk tonttien versus pitoisuudet CK osoittavat, että

K

i

CK oli 14,92 uM (kuvio 7) [20]. Edustaja Dixon tontit vaikutus CK on tolbutamidia 4-hydroksylaation muodostumista ja S /V versus [I] tonttien (kuvio 6) ehdotti, että esto tiedot sopivat hyvin sekoitettu tyyppi esto [19]. CYP3A4,

K

i

arvot määritettiin käyttäen midatsolaamia koettimena alustaan.

V

max

ja

K

m

arvot arvioitiin käyttäen epälineaarinen regressiomallin kilpailukykyinen entsyymin eston CYP3A4 -catalyzed midatsolaamin 1-hydroksylaation että osakeyhtiöt (Kuva 8). Edustaja Lineweaver-Burk koealojen (kuvio 8) ja toisen tontin CYP2C9 aktiivisuus käyttämällä rinteillä ensisijaisen Lineweaver-Burk tonttien versus pitoisuudet CK osoittavat, että

K

i

ja ckValues ​​olivat 11,42 uM (kuvio 9) [20]. Edustaja Dixon tontit vaikutus CK on midatsolaamin 1-hydroksylaation muodostumista ja S /V versus [I] tonttien (kuvio 8) osoitti, että esto tiedot sopivat hyvin on kompetitiivinen esto [19].

datapisteet ovat keskiarvoja kolmena kappaleena inkuboinneissa. TB, tolbutamidin.

Huomaa: Nonlinear regressio analyysi tolbutamidi 4-hydroksylaatio versus substraattikonsentraatio suoritettiin saamiseksi

K

i

arvot. Jokainen piste edustaa keskiarvoa kolmesta määrityksestä.

Huomaa: estyminen CYP3A4: n toimintaa on parhaiten kuvata kompetitiivinen esto eri pitoisuuksia CK (10-100 uM) in HLM inkubaatioissa (0,5 mg · ml

-1 proteiinia). Datapisteiden ovat keskiarvoja kolmena kappaleena inkuboinneissa. MDZ, midatsolaamin.

Huomaa: Nonlinear regressioanalyysi CK vastaan ​​substraattikonsentraatio suoritettiin saamiseksi

K

i

arvoja. Jokainen piste edustaa keskiarvoa kolmesta määrityksestä.

Keskustelu

Tällä hetkellä samanaikaista käyttöä CAM ja lääkeaineet ovat suosittuja. CAM on potentiaalia aiheuttaa farmakokineettisiä ja dynaamisia yhteisvaikutuksia lääkeaineet. Siksi vähentynyt tai lisääntynyt pitoisuuksia plasmassa näiden lääkkeiden voi johtaa alempaan terapeuttista tehoa tai riski on suurempi myrkyllisyys [9, 10]. Erityisesti syöpälääkkeet, joilla on kapea terapeuttinen ikkuna, farmakokineettisiä yhteisvaikutuksia voi helposti johtaa kliinisesti merkittäviä vaikutuksia [9]. CK on CAM joka on mahdollinen sovellus syövän hoitoon [5-7]. Siksi seulonta lääkettä metaboloivia entsyymejä CK voi antaa hyödyllistä tietoa välttää CK-lääkkeiden yhteisvaikutuksia.

CYP superperheen käsittää tärkeä vaihe Ι lääkeainetta metaboloivia entsyymejä, jotka hapettavat yli 90% nykyisestä terapeuttisten huumeita. Yli 90% ihmisen huumeiden hapettumista voi johtua CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9, CYP2C19, CYP2E1, CYP2D6 ja CYP3A4 [12]. Drugs kilpailee saman metaboloivien entsyymi voi johtaa lääkkeiden yhteisvaikutukset, johtaen muuttuneeseen tehoa tai toksisuutta yksilöissä [13].

Tässä tutkimuksessa, meidän tiedot osoittivat, että CYP2C9 ja CYP3A4 olivat tärkeimmät osallistuvien entsyymien aineenvaihdunnassa CK

in vitro

, ei substraattien CYP1A2, CYP2A6, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19. Lisäksi meidän tutkimus osoitti, että CYP2C9 ja CYP3A4 olivat herkkiä inhibitiolle CK, ja niiden

IC

50

valueswere 16,00 uM ja 9,83 uM. CYP1A2, CYP2A6, CYP2D6, CYP2E1 ja CYP2C19 olivat tuskin herkkiä eston CK (

IC

50s

olivat kaikki yli 100 uM). Nämä havainnot ovat osittain tukee tutkimus Hao et al. (2008), että ginsenosides, Rh2, CK, ja kaikki sapogeniinien kohtalainen CYP3A4-eston in baculosomes. Mukaan Kong

et al

[21], teho yhdisteen voidaan luokitella sen

IC

50

arvoja, kuten voimakas, jos

IC

50

≤ 20 mikrog /ml tai ≤10 uM; kohtalainen, jos

IC

50

20-100 ug /ml tai 10-50 uM; tai heikko, jos

IC

50

≥100 mikrog /ml tai ≥50 uM. CK on luokiteltu CYP3A4: n estäjä, kohtalainen estäjä CYP2C9, ja heikko estäjä viittä muuta CYP testattiin tässä tutkimuksessa.

CYP2C9 on yksi runsaimmin CYP-entsyymien (noin 20% maksan koko CYP pitoisuus) [22]. Se metabolizes useita tärkeitä kliinisten lääkeaineiden, kuten syöpälääkkeen, antibiootti, diabeteksen, epilepsialääkkeiden, verenpainelääkkeitä, antikoagulantin, ja anti-hyperlipideemisiin lääkkeet [23]. Erityisen kiinnostuksen kohteena on CYP2C9-välitteistä metaboliaa lääkkeitä, joilla on kapea terapeuttinen leveys, kuten varfariini ja fenytoiini [24]. Siksi kilpailevat CYP2C9 aineenvaihdunta voi aiheuttaa vakavaa myrkyllisyyttä. CYP3A4 on tärkein P450 Ihmisen maksan joka on laaja alustoille [25]. CYP3A4 metaboloi paitsi vierasaineiden, kuten suurin osa huumeiden ja syöpää mutta myös monet endogeeniset yhdisteet, kuten kolesteroli, sappi, rasvahapot, prostaglandiinit, leukotrieenit, retinoidit, ja biogeeniset amiinit, ja täten useimmat farmakokineettisiä CAM-lääke vuorovaikutuksiin liittyy CYP3A4 [26]. Tämä tutkimus osoittaa, että CK on estäjä sekä CYP2C9 ja CYP3A4. Siksi potilaiden käyttäen CK yhdistelmässä tavanomaisten terapeuttisten lääkkeitä, jotka ovat substraatteja CYP2C9 ja CYP3A4 eri syistä tulisi olla varovainen.

Kuitenkin, toisin kuin erityisiä inhibiittorit CYP2C9,

IC

50

ja K

i

arvot CK olivat 11-53-kertainen ja 49-kertainen ja sulfafenatsoli vuonna osakeyhtiöt, vastaavasti [15, 16]. CYP3A4,

IC

50

ja K

i

arvot CK oli 41-123-kertainen ja 761 kertaa suurempi kuin ketokonatsolin vuokra-asunto, vastaavasti [17]. Voimakas inhibitio CK oli huonompi kuin entsyymi-inhibiittoreiden. Oletettavasti estämällä teho CK on liian alhainen aiheuttaa merkittävää kliinistä CYP2C9 ja CYP3A4-eston. Huomaa, että meidän muiden tutkimuksen terveillä vapaaehtoisilla, 10 tervettä miespuolista vapaaehtoista sai hallintojen 800 mg puhdasta CK tabletti (100 mg /tabletti, tarjoama Zhejiang Hisun Pharmaceutical Company Limited, Kiina) niellä 150 ml vettä, sen jälkeen sarja laskimoiden verinäytteitä 5 ml: n kerättiin EDTA sisältävään putkiin 0, 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 5, 6, 8, 12, 24, 36, 48, 72 ja 96 tunnin. Plasman Näytteet analysoitiin HPLC-MS /MS, huippupitoisuus plasmassa (C

max) ja aika plasman huippupitoisuuden (T

max) on saatu suoraan havaittu pitoisuus-aika tiedot. Pinta-ala plasmapitoisuus-aikakäyrän (AUC) ajasta nolla viimeiseen mitattu pitoisuus (AUC

(0-t)) laskettiin lineaarisen puolisuunnikkaan sääntöä, arvio oraalinen puhdistuma (CL /F) oli laskettuna CL /F = Annos /AUC

(0-t) [27]. Tulokset osoittivat C

max CK oli 4,07 uM (95% CI: 2,89, 5,24). C

max CK joidenkin vapaaehtoisten todettiin olevan lähes 5 uM läpi yhden päivän täydentäminen 800 mg: n, joka on lähellä

IC

50

ja

Ki

arvot CK CYP2C9 ja CYP3A4 (kuvio 10). Niinpä vielä varoittaa CK-lääke vuorovaikutus huolimatta lempeys.

Inset esittää samat tiedot on puolilogaritmiselle mittakaavassa, jokainen arvo on keskiarvo ± SD.

Kiitokset

Kiitos Zhejiang Hisun Pharmaceutical Company Limited (Zhejiang, Kiina) tarjoamiseksi Ginsenoside yhdiste K. Tätä työtä tukivat National Tiedesäätiö of China (Grants 81302850, 81300204, 31400306); Kiinan Postdoctoral Science Foundation (Grants 2013M531817, 2014T70793); ja Science and Technology Plan projektit Hunan (Grant 2014RS4011). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.