PLoS ONE: CD271 Määrittää kantasolun väestö Hypopharyngeal Cancer
tiivistelmä
Cancer kantasoluja edistää pahanlaatuisten fenotyypit erilaisia syöpiä, mutta markkereiden tunnistamiseksi ihmisen hypopharyngeal syöpä (HPC) kantasoluja edelleen huonosti ymmärretty. Täällä raportoimme että CD271
+ väestöstä lajitellaan ksenotransplantaatio HPCs hallussaan parannetun kasvainta aloittamista valmiudet immuunipuutteisilla hiirillä. Kasvaimet syntyvät CD271
+ solujen sisälsi sekä CD271
+ ja CD271
– soluja, mikä osoittaa, että väestö voi painua erilaistumista. Immunohistologinen analyysit kasvaimia osoitti, että CD271
+ solujen paikallistettu verisuonia kapealla lähellä CD34
+ verisuoniston, invasiivisia rintamilla, ja basaalikerrokseen. Mukaisesti nämä ominaisuudet, joka on stemness merkki,
Nanog
, ja
metalloproteinaasien (MMP: t) B, jotka ovat sekaantuneet syövän invaasio, oli merkitsevästi ajan säännelty CD271
+ verrattuna CD271
– solupopulaation. Lisäksi käyttämällä ensisijaista HPC yksilöitä, osoitimme, että korkea CD271 ilmentyminen korreloi huonoon ennusteeseen potilaille. Yhdessä meidän havainnot osoittavat, että CD271 on uusi markkeri HPC kantasolujen kaltaisia soluja ja HPC ennustetta.
Citation: Imai T, Tamai K, Oizumi S, Oyama K, Yamaguchi K, Sato I, et al. (2013) CD271 Määrittää kantasolun väestö Hypopharyngeal Cancer. PLoS ONE 8 (4): e62002. doi: 10,1371 /journal.pone.0062002
Editor: Vladimir V. Kalinichenko, Cincinnati Lasten Hospital Medical Center, Yhdysvallat
vastaanotettu: 12 joulukuu 2012; Hyväksytty 17. maaliskuuta 2013 Julkaistu 23. huhtikuuta 2013
Copyright: © 2013 Imai et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.
Rahoitus: Tämä työ tukivat JSPS KAKENHI lupanumeroita 24300326, 21791589, 24592613, JST CREST, ja myöntää-in-tukea terveysministeriön, Labour and Welfare, ja Takeda Medical perusta, Ichiro Kanehara perusta. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.
Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.
Johdanto
Pään ja kaulan levyepiteelisyöpä (HNSCC) on kuudenneksi yleisin syöpä maailmassa, jossa lähes 500000 uutta tapausta ja noin 300000 kuolemantapausta raportoitu vuosittain. Tämä termi sisältää useiden riippumattomien syöpien, kuten suun, nenänielun, suun ja nielun, ja hypopharyngeal syövät [1]. Hypopharyngeal syöpä (HPC), pahanlaatuisuuden ja hypopharynx, osuus on noin 10% kaikista HNSCCs. Epidemiologiset tutkimukset osoittavat, että tupakan ja alkoholin kulutus vaikuttaa sen syövän synnyn [2]. Valitettavasti noin 80% HPC tapauksista eteni aikaan diagnoosi, eli potilaat ovat vaiheen III tai IV [3], joten hoito on vaikeaa. Radikaaleja kuten yhteensä laryngopharyngoesophagectomy johtaa menetykseen äänen, ja samanaikainen kemosädehoito aiheuttaa usein hengenvaarallisia sivuvaikutuksia. Viivästynyt alueellinen imusolmuke etäpesäke, etäinen etäpesäke, ja lisäksi primaarimaligniteetti usein aikana ilmaantuu taudin [3]. 5 vuoden eloonjäämisaste HPC potilaista on enintään 30% [4], mikä viittaa vahvasti tarvetta löytää uusia hoitostrategioita.
kertyvät todisteita viime vuosina tukee syövän kantasolujen (tai aloittamista solu) teoriassa [5], [6]. Tässä kiehtova skenaariossa syövät koostuvat hierarkian heterogeeninen solupopulaatioiden, ja aloitetaan rajoitetulta alaryhmästä solujen kantasolujen kaltaisia ominaisuuksia. Niiden itseuudistumiseen aktiivisuus ja kasvaimen aloittamista ominaisuus, syövän kantasolut (CSCS) tai syöpä aloittamisen soluja (CIC) tuottaa ei-syövän kantasoluja kuin ”jälkeläiset” väestöstä. Kestävyys kemoterapiaa ja sädehoitoa on toinen ominaisuus CSCS. Siten CSCS voi olla vastuussa hoitovirheitä kemoterapiaa ja sädehoitoa, ja huono kliinisiä tuloksia. Kohti tavoitetta kehittää uusia CSC kohdistamisen hoitoja, tutkijat ovat yrittäneet tunnistaa ja kuvata solupinnan merkkiaineita CSCS.
HNSCC, CD44
+ soluja on tunnistettu CSCS. Kun syövän kliininen näytteet ksenosiirrettyjä osaksi immuunivajausta hiiriin, CD44
+ solut, mutta ei CD44
– soluja aloittaa kasvaimia, ja tuloksena kasvaimet tuottavat hierarkian heterogeeninen solupopulaatioiden [7]. Kuitenkin tuore tutkimus osoitti, että CD44
– solut muodostavat palloja, hallussaan kasvaimeen aloittamista valmiudet, ja ovat solunsalpaajaresistentti, kuten CD44
+ solujen [8]. Siten CSCS voi olla dynaaminen ja heterogeeninen eri mikroympäristöihin [9], ja CD44
+ soluja ei voi edustaa puhdasta HNSCC CSCS. Lisäksi, HNSCC itsessään on heterogeeninen, edustavat eri syöpätyyppejä, kuten edellä on kuvattu. Näin ollen, kohdistaminen tutkimuksen kunkin syöpä voi johtaa siihen, löytää uusia CSC markkereita.
CD271 on transmembraaninen proteiini, joka kuuluu tuumorinekroositekijän reseptorin superperheen. Se on myös hermokasvutekijäreseptori (NGFR), ja on vuorovaikutuksessa neurotrofiineja, kuten NGF, aivoperäinen neurotrofinen tekijä (BDNF), neurotrofiini-3 (NT3), ja neurotrofiini-4 (NT4), joilla on alhainen affiniteetti [10 ]. Aiemmat tutkimukset viittaavat siihen, että kudosten kantasolujen suun [11], kurkunpään [12], ja ruokatorven [13] levyepiteeleissä ilmaista CD271. CD271 myös liittyy CSCS pahanlaatuisen melanooman [14], [15] ja ruokatorven okasolusyöpä [16].
Tässä tutkimuksessa osoitamme, että CD271
+ solupopulaation HPC hallussaan kasvainta aloittamista kyky
in vivo
, ja on useita CSC kaltaisia ominaisuuksia.
Materiaalit ja menetelmät
kasvaimen istutuksen
Saatuaan tietoon perustuvan suostumuksen, tuore kasvain näytteet saatiin klo Miyagin Cancer Center (MCC), kuljetetaan laboratorioon jäähtynyt PBS (-) ja alistettiin edelleen analyysejä. Kaikki kasvain näytteet anonymisoidaan mukaisesti MCC Institutional Review Board. NOD /SCID /IL-2RγC
null (NOG) hiiret hankittiin Central Institute for Experimental Animals Japani nukutettiin pentobarbitaalilla. Kun hiiret olivat unessa, ihon viiltoa tehtiin, ja pieniä kasvain näytteet noin 50 mm
3 istutettiin ihon alle kylkeen molemmin puolin. Kasvaimen muodostumista seurattiin viikoittain, ja kasvaimen tilavuus laskettiin kaavalla: 1/2 x vertikaalinen alue × vaaka alue × korkeus. Kun alkuperäinen kasvaimia ksenotransplantaatio NOG hiirillä oli yli 10 mm halkaisijaltaan, hiiret tapettiin, ja kasvaimet jaettiin näytteet yksisoluiset ruoansulatusta, pallo muodostumista, formaliinilla tallennuksen histologia tai serial passage hiirillä. Eläin hoito ja koemenettelyn tehtiin tiukka mukaisesti menettelyjen ja suuntaviivojen perusteella, jotka MCC hallinnollinen paneelit laboratorio- eläinten hoitoon. Kaikki leikkauksia tehtiin anestesiassa, ja yritettiin minimoida kärsimyksen.
valmistaminen yksisoluiset jäädyttämiseen Kasvaimen kudosnäytteiden
aseptisissa olosuhteissa, kasvaimia leikattiin pieniksi paloiksi, ja hienoksi jauhettu steriilillä leikkausveitsellä. Pesun jälkeen PBS: llä (-), kasvain kudos upotettiin liuokseen, joka sisälsi PBS: ää (-), 1 mg /ml DNase1 (Roche) ja 1 mg /ml kollagenaasi /dispaasi (Roche), ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 2 tai 3 tuntia, kunnes täydellinen digestio oli tapahtunut. Solut läpi 40 um: n nailonverkko, ja pestiin 3 kertaa PBS: llä (-). Sentrifugoinnin jälkeen allas yksittäisten solujen jaettiin, ja soluja käytettiin FACS-analyysejä tai alalla kulttuurin. Sillä alalla viljelyn jälkeen solut suspendoitiin seerumittomassa DMEM /F12, johon oli lisätty B27 (Invitrogen), ihmisen rekombinantti epidermaalista kasvutekijää (EGF: 20 ng /ul: Peprotech), ja ihmisen fibroblastien kasvutekijän (bFGF: 20 ng /ul: Peprotech) ultra-low kiinnitys kulttuuri astiat (Corning).
Virtaussytometrianalyysi ja Cell Sorting
Dissosioituneet yhden solut suspendoitiin PBS (-) 3% FBS. Solut värjättiin anti-ihmisen erityisiä EpCAM-vasta-aineita (01:10, FITC-konjugoitu, Miltenyi Biotec), anti-ihmis-CD271-vasta-aineita (01:10, APC-konjugoitu, Miltenyi Biotec), anti-ihmisen CD44-vasta-aineita (1: 10, APC-konjugoitu, Becton Dickinson), anti-ihmis-CD133-vasta-aineita (01:10, APC-konjugoitu, Miltenyi Biotec), ja anti-hiiri-lgG1, κ isotyypin kontrollivasta-aineita (01:20, APC: n ja FITC-konjugoitua, Biolegend ja Becton Dickinson, vastaavasti). 7-AAD käytettiin jättää kuolleita soluja (Sigma, 1 ug /ml). Värjätyt solut joko analysoitiin FACSCanto ™ II (Becton Dickinson) tai lajiteltu kanssa FACSAria ™ II (Becton Dickinson) mukaisesti valmistajan protokollan.
Reaaliaikainen Reverse Transcription (RT) -PCR
kokonais-RNA puhdistettiin järjestetty yksittäisistä soluista tai kudosnäytteitä käyttämällä Mirvana ™ miRNA Isolation Kit (Ambion), ja transkriptoidaan käyttämällä PrimScript II cDNA Synthesis Kit (Takara Bio). Reaaliaikainen RT-PCR suoritettiin käyttäen Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix (Agilent Technologies).
GAPDH
käytettiin endogeenista viitegeenin. Aluke sekvenssejä käytetään reaaliaikaisen RT-PCR on lueteltu taulukossa S1.
immunohistokemia (IHC) B
Parafiini-upotettu, formaliinilla kiinnitetyt, 3 um kudosleikkeet parafiini ksyleenillä ja nesteytyksestä kautta etanolia tislattua vettä. Lämpöä epitooppisup- haku suoritettiin mikrossa osiot pH 9,0 tavoite hakea ratkaisua (Dako). Endogeeninen peroksidaasi blokattiin 0,3% H
2O
2. Leikkeet inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla ihmisen CD271 (1:4000, BD Biosciences) 20 minuuttia, tai CD34 (Nichirei Biosciences) tai Ki-67 (01:10, Santa Cruz Biotechnology), 60 min, 37 ° C: ssa . Jaksot värjättiin CD271 inkuboitiin 15 minuutin ajan hiiren LINKER (Dako), sitten toissijainen vasta-aineita ja DAB Kromogeeni (Envision ™ FLEX Kit, Dako) sovellettiin kuvatulla valmistajan protokollaa. Jaksojen värjättiin CD34 tai Ki-67, Simple Stain AP (M) (Nichirei Biosciences) levitettiin toisen vasta-aineen, ja värjäys visualisoitiin New Fuchsin Substraatti (Nichirei Biosciences). Kaksinkertaisen värjäys CD34 tai Ki-67, jossa CD271, CD34 tai Ki-67 värjäys suoritettiin ensin, sen jälkeen, että CD271, kuten edellä on kuvattu.
In vivo
tuumorigeneesiä Pitoisuus
Dissosioituneet kasvaimia lajiteltiin perustuu ihmisen EpCAM ja CD271 ilmaisua, kuten EpCAM
+ CD271
+ soluja tai EpCAM
+ CD271
– soluja. Lajitellut solut suspendoitiin 200 ul: aan Matrigel matriisin (BD Biosciences) 4 ° C: ssa, sitten injektoidaan ihon alle kylkiin NOG hiiriä 1-ml ruiskusta. Jokainen hiiri sai CD271
+ solujen oikealla puolella, ja CD271
– soluja vasemmalle. Kasvaimen muodostuminen seurattiin viikoittain tarkastus ja tunnustelu.
In vivo
Kemoterapia Pitoisuus
Sisplatiini (CDDP), joka on syöpälääke luokiteltu platina reagenssia, annettiin suonensisäisesti tai intraperitoneaalisesti 5 tai 7,5 mg /kg. Yksi viikko myöhemmin hiiret lopetettiin, ja kasvaimet uutettiin. Kasvaimet jaettiin ja joko kiinnitettiin formaliinilla IHC tai erottaa yksittäisiksi soluiksi ja altistettiin FACS-analyysiä.
Tilastot
analyysejä tautikohtaisia selviytyminen ja uusiutumisen elinaika tehtiin jossa Kaplan-Meier menetelmiä, ja log rank testillä arvioida ero ryhmien välillä. Fisherin testiä käytettiin vertaamaan kahta ryhmää ( ”vahva” versus ”kohtalainen-heikko” CD271 ilmaus) sisään resektoidun kasvaimia 28 tapauksessa HPC, ja chi-neliö testiä käytettiin vertaamaan samat kaksi ryhmää IHC tutkimus 83 HPC tapauksista. Keskiarvot
Nanog
ilmaisu kahden ryhmän välillä analysoitiin Studentin t-testiä. Merkitsevyystasoksi asetettiin
p
0,05.
Ethics
Institutional Review Board MCC hyväksyi tutkimussuunnitelman, ja kirjallinen suostumus saatiin kunkin kohteen. Protokolla Eläinkokeiden hyväksyi MCC Animal Care ja Käytä komitea (Luvan numero: MCC-AE-2011-8).
Tulokset
HPC kasvaimia ovat alapopulaatio CD271
+ solut
tutkimiseksi kasvain aloittamista ja syövän kantasoluja, tuore primäärikasvain yksilöitä saatu HPC leikkauspotilaiden istutettiin ihon alle 8-10 viikon ikäisten NOG hiirillä. Kolme riippumatonta ihmisen HPC yksilöitä, joilla on samankaltaisia kliinisiä piirteitä käytettiin luomaan ensisijaisen ksenograftin riviä (HPCM1-3) (taulukko S2). Histologia Kunkin ksenografti oli yhdenmukainen sen Perusnäytteeseen (kuva S1).
Luonnehtia sarjatuotantona ksenotransplantaatio tuumorilinjoja, niiden solupinnan markkeri ilmentyminen analysoitiin. Jokainen kasvain uutettiin isännältä ja valmistettiin yksisoluisia jousitus. Koska EpCAM on raportoitu olevan diagnostinen kasvain-solujen markkeri HNSCC [17], ihmisen EpCAM-positiiviset solut tiukasti porteilla poistaa isännästä peräisin soluista ja analysoitiin virtaussytometrialla. Niistä CSC markkereita testattu, solut olivat negatiivisia CD133, ja 3,4% kasvainsoluista oli positiivisia CD44 (aineistoa ei esitetty). Yllättäen havaitsimme CD271
+ alaryhmän joukossa kolme HPC linjat testattiin (kuvio 1A). Toistetuissa kokeissa CD271
+ väestön edustaa 2,99-20,1% soluista HPCM1. Samanlaisia CD271
+ populaatiot olivat selvästi läsnä toisessa kaksi riviä: 2,90-9,54% ja HPCM2 ja 19,1% varten HPCM3. Seuraavaksi analysoimme parafinoidut osat kasvaimia peräisin ksenotransplantaatio HPC linjat CD271 IHC (kuvio 1 B). Tyypillisellä okasolusyöpää muodostuu kolme riviä, CD271
+ solut olivat pääasiassa läsnä tyvikerroksen kasvain, lähes rajoittuu reunavyöhykkeen kasvaimen pesä, ja niukasti keskiosassa (kuvio 1 B) . Suurella suurennuksella, CD271
+-solujen havaittiin vieressä strooman (kuvio 1 B-d). Nämä CD271
+ solut osoittivat morfologisesti kehittymätön fenotyyppejä, kun taas CD271
– solujen keskustan alue kasvaimen pesä oli kypsempi, litistetty, ja keratinized muodot (kuvio 1 B-e). Edelleen karakterisoimiseksi lokalisoinnin CD271
+ solujen sisällä HPC, me värjätään sytokeratiineja (CKS) sarjaan kohdissa (kuva S2). CK5 /6 taipumus paikallistaa perustasolle kerroksia ja lisääntyvissä tyvikalvon yläpuolella osastoja, ja CD271
+ solut sijaittava CK5 /6-positiivinen alue. CD271
+ solut olivat myös kohtalaisen positiivisia CK8, mikä merkitsee eriytymättömiä SCC soluja. Nämä tulokset viittaavat siihen, että CD271
+ väestöstä kuuluu pohjapinta-kerroksen osan CK5 /6-positiivinen alue ja osittain päällekkäinen CK8-positiivisia erilaistumaton soluja.
(A) Solut, jotka ovat peräisin kolme HPC ksenotransplantaatio riviä värjättiin CD271 ja analysoitiin FACS: llä. (B) Kasvaimen kudokset leikeltiin hiirissä, kolmen HPC riviä analysoitiin CD271 ilmentyminen IHC. Immunopositivity ruskeaksi (a, b, ja c). Suurentavan kuvat liittyvät niiden boxed alueilla nuolilla. Mitta-asteikko: 100 um. Punainen viiva osoittaa rajan kasvaimen ja strooman (d). Punainen viiva osoittaa rajaa CD271
+ soluklusterin ja CD271
– soluja, ja punainen ja sininen arrowheads osoittaa CD271
+ solujen ja CD271
– soluja, vastaavasti (e). (C) edustaja tulokset IHC varten CD271 kliinisistä näytteistä. Normaali limakalvon (a), karsinooma
in situ
. (B). Arrowheads osoittavat invasiivisen edessä, ja vahvasti positiivinen CD271 lauseke (c, d). (D) IHC CD34 New Fuchsin alustaan (a), ja kaksinkertainen värjäys CD34 (New Fuchsin) ja CD271 (DAB) (b-e). CD34 immunopositivity on punainen. Sisäkkeet näyttää suurentavan kuvia boxed alueilla. Red arrowheads osoittavat CD34-positiiviset mikro- suonten, ja ruskea nuolenpää osoittaa CD271
+ soluja. (E) Sphere-muodostavien solujen HPCM1, ja kohonnut CD271 ilmaisun FACS-analyysi. Mitta-asteikko: 25 um. (F) IHC kaksinkertaisen värjäyksen Ki-67 (New Fuchsin) ja CD271 (DAB). Ki-67 immunopositivity näkyy punaisena tumassa. Red arrowheads osoittavat Ki-67-positiivisia soluja. Mitta-asteikko: 100 um.
tutki myös CD271 ilmaus sisällä kliinisesti leikeltiin HPC yksilöitä. Ensinnäkin vahvisti, että CD271
+ -soluja oli läsnä kaikkein tyvikerroksessa normaalin hypopharyngeal limakalvon (kuvio 1C-a). Samoin karsinooma
in situ
(
CIS
) yksilö, CD271
+ solut rajoittuvat basaalikerrokseen, ja olivat poissa eriytetympää ylemmät kerrokset (Kuva 1C- b). Tyypillisesti suurin osa syöpäsolujen sijaitsee invasiivisia edessä olivat CD271
+ (kuvio 1 C-c, d). Myös tutki CD271
+ solut sijaitsevat lähellä verisuoniston sisällä kasvaimia. Huomasimme, että CD34
+ mikroverisuonten endoteelisoluja (punainen kuvassa 1D) sijaitsivat CD271
+ solun alueilla sekä suurennettu kuvia osoitti, että jotkut CD34
+ ja CD271
+ soluja lähekkäin muut, tai suorassa kosketuksessa (kuvio 1D-a, b). Huomattavaa on, että useimmissa yksilöitä, The CD271
+ solut muodostivat tiheä klustereita, jotka ympäröivät strooman, joka sisälsi CD34
+ mikrosuonten (Kuva 1D-c, d, e). Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että CD271
+ solut ovat läsnä invasiivisia edessä ja verisuonia alueella tumors.It on hyvin tiedossa, että solut erilaisten syöpien, mukaan lukien HNSCC, jotka muodostavat pallojen väliaikaisesti viljelyolosuhteissa ovat CSCS [18 ]. Siksi tutkimme onko pallo-muodostelman kulttuuri vaikuttaisi CD271 ilmaisua. Dissosioituneissa syöpäsoluja syntyy aloilla, jotka selvisivät 12 päivää, ja yhden solujen valmistettu näillä aloilla tehtiin CD271-analyysi (kuvio 1 E). CD271 ilmaistiin 46,5% näiden solujen, toisin kuin alkuperäinen HPCM1 kasvain, jossa 2,99-20,1% soluista oli CD271
+. Tämä tulos viittaa siihen, että
in vitro
alalla muodostuminen aiheutti rikastamista CD271
+ solut.
tutki myös CD271
+ solut ovat lisääntyvä populaatio. Double -staining kokeiluja Ki-67 ja CD271 osoitti, että CD271
+ solujen enimmäkseen asunut Tyvisolukerroksessa, kun taas K-67-positiivisten solujen lokalisoitu pääasiassa suhteellisen eriytetty suprabasaalisissa kerrokset (kuvio 1 F). Nämä tulokset viittaavat siihen, että CD271
+ solut eivät aktiivisesti lisääntyvissä
in vivo
.
CD271
+ Solut ovat Kasvaimia synnyttävä ja Eriyttää
in vivo
vieressä tutki
in vivo
kasvainten muodostumiseen ja CD271
+ solujen kolmesta HPC riviä. Kolmekymmentä 100000 CD271
+ tai CD271
– soluja ihon alle injektoitiin kuhunkin puolelle saman hiiren välttämiseksi isäntä /ympäristön eroja (kuvio 2A). Tarkkuus lajittelun vahvistettiin FACS-analyysillä (kuvio 2B). Ksenotransplantaatio Tulokset on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. HPCM1, CD271
+ soluja aloitettu kasvaimia erittäin korkea, jopa silloin, kun vähemmän kuin 300-soluja (mutta vähintään 30 solua) injektoitiin. Kolmekymmentä CD271
– solut tuottivat kasvain vain yksi kuudesta rokotukset, ja kasvain, joka on muodostettu oli paljon pienempi kuin aloitettiin CD271
+ soluissa (kuvio 2C). Vastaavasti HPCM2, kaikki kasvaimia, jotka on muodostettu, lukuun ottamatta yhtä, syntyi CD271
+ solut. Vaikka CD271
– solujen HPCM3 syntyy kasvaimia, he osoittivat pidemmän latenssi ja harvemmin kuin ne, jotka kehitetty CD271
+ soluja. Nämä tiedot osoittivat, että CD271
+ solut hallussaan suurempi kasvainten muodostumiseen kuin CD271
– soluja
in vivo
.
(A) edustaja hiirissä, joihin on esitetty lukumäärä solut istutetaan. Red arrowheads osoittaa CD271
+ solu- pistoskohtaan (oikealla puolella), ja sininen nuolenpää osoittaa CD271
– cell pistoskohtaan (vasen puoli). Piirit ja romutti ympyrät ilmaisevat elinsiirrot paikkoja johtaa onnistumisen ja epäonnistumisen kasvainten muodostumista, vastaavasti. (B) Virtaussytometrianalyysi että lajitellut solut (96.8~99.5% CD271
+ tai CD271
– soluja). (C) Kolmekymmentä CD271
+ soluja (oikealla puolella) ja CD271
– soluja (vasemmalla puolella) istutettiin hiiren, ja syntyy kasvaimia resekoitiin. Kasvaimen kasvu piirrettiin käyttämällä keskiarvon. (D) virtaussytometrinen analyysi CD271 ilmentyminen kasvainsoluissa, jotka johtuvat injektion CD271
+ solut. Kasvaimen leikkeet värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H
p
= 0.022). Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että CD271 ilmentyminen liittyy huono kliinisiä tuloksia kannalta ennustetta ja uusiutumisen.
(A) Kaplan-Meier analyysi uusiutumisen elinaika korko mukaan
CD271
mRNA-tasolla, kasvainkudoksissa peräisin 28 HPC potilaista leikkauksella. Reaaliaikainen RT-PCR-analyysit suoritettiin, normalisoitu ilmaus
GAPDH
, ja kansi-muutos
CD271
ekspressiotasot kasvain verrattuna normaalin limakalvon laskettiin. Cut-off-arvo
CD271
-ilmaisu indeksi oli 1,5. *Tilastollisesti merkittävä. (B)
Nanog
ilmentymistä tutkittiin reaaliaikaisen RT-PCR. Cut-off-arvo
Nanog
ilmaisu indeksi oli 1,5. *Tilastollisesti merkittävä. Suljetut ympyrät, CD271 korkea;