Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää metylaatiostatuksen promoottorialueen Spalt kaltaisia transkriptiotekijä 3 (

SALL3

) ja ilmentymistä

SALL3

kohdunkaulan syöpä tutkia tehtävä tämä geenin kohdunkaulan syövän karsinogeneesissä.

Methods

metylaatiostatuksen

SALL3

havaittiin metylaatiospesifinen PCR, ja

SALL3

geenin ilmentyminen määritettiin reaaliaikaisella kvantitatiivisella PCR: llä kohdunkaulan syövän solulinjat, SiHa-, HeLa- ja C33A sekä kohdunkaulan syövän kudosnäytteistä (n = 23), sovitettu pericarcinomatous kudosnäytteet (n = 23) ja normaalin kohdunkaulan kudosnäytteistä (n = 17). MTT käytettiin mittaamaan solujen elinkelpoisuutta ja lisääntymistä kapasiteetti SiHa ja HeLa-solut.

Tulokset

SALL3

promoottori oli täysin metyloitu SiHa- soluissa, metyloitumattomia vuonna C33A soluissa ja osittain metyloitu HeLa-soluissa. Hoidon jälkeen SiHa ja HeLa-solujen kanssa 5 uM ja 10 uM 5-atsasytidiini (5-atsa) vastaavasti metylointi taso

SALL3

promoottori vähentynyt ja Havaittu aste unmethylation annoksesta -riippuvaisella tavalla. Lisäksi suhteellinen ilmentyminen

SALL3

mRNA kasvaa, kun pitoisuus on 5-atsa kasvoi SiHa (

p

0,05) ja HeLa (

p

0,05 ) solut. Tämä edellä mainittu kasvu

SALL3

mRNA: SiHa-soluissa oli merkittävä kuin on havaittu HeLa-soluissa. Solujen lisääntyminen kapasiteetti myös vähentynyt antamisen jälkeen 5-atsa jotta SiHa ja HeLa-solut (

p

0,05). Metylointi

SALL3

promoottori havaittiin 15 23 (65,21%) kohdunkaulansyöpä kudosnäytteitä, 15 23 (65,21%) sovitetun pericarcinomatous kudosnäytteitä ja 5 17 (29.41%) normaali kohdunkaulan kudosnäytteitä (

p

0,05).

SALL3

mRNA ilmentyminen oli merkitsevästi alhaisempi kohdunkaulan syövän ja pericarcinomatous kudoksiin verrattuna normaaliin kohdunkaulan kudoksissa (

p

0,05). Kaikissa kohdunkaulan kudosnäytteitä, HPV-infektion positiivisesti liittyy hypermetylaatiota promoottorialueen

SALL3

(

p

0,05, r = 0,408), ja ekspressio

SALL3

mRNA HPV-positiivisten kudosten oli alhaisempi kuin HPV-negatiivisten kudoksissa (

p

0,05).

Johtopäätös

poikkeava hypermetylaatiota

SALL3

yhdessä HPV osallistuminen inaktivoitua tehtäväänsä tuumorisuppressorina ja vaikutti syövän syntymistä kohdunkaulan syövän.

Citation: Wei X, Zhang S, Cao D, Zhao M, Zhang Q, Zhao J, et ai. (2015) Poikkeava hypermetylaatiota SALL3 HPV osallistuminen Auttaa Karsinogeneesi kohdunkaulan syöpä. PLoS ONE 10 (12): e0145700. doi: 10,1371 /journal.pone.0145700

Editor: Xuefeng Liu, Georgetown University, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 9. kesäkuuta, 2015 Hyväksytty: 06 joulukuu 2015; Julkaistu: 23 joulukuu 2015

Copyright: © 2015 Wei et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: Kaikki tiedot taustalla havainnot tutkimuksessamme ovat vapaasti saatavilla paperi- ja sen tukeminen Tietopaketti.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 81472428).

Kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kohdunkaulan syöpä riveissä kuin toiseksi suurin syy sukuelinten syöpään liittyvää kuolleisuutta naisten kaikkialla maailmassa, ja tulokset noin 266000 kuolemantapausta vuosittain mukaan hiljattain National Kattava Cancer Network (NCCN) suuntaviivat (2015 versio) [1] .Over 99% tapauksista liittyy infektio sukupuolielimissä ihmisen papilloomavirusten (HPV), joka on tunnistettu etiologiassa kohdunkaulan syöpä ja ovat tartunnan noin 660 miljoonaa ihmistä [2]; kuitenkin, esiintyvyys HPV-infektio ei vieläkään riitä selittämään kaikissa tapauksissa kohdunkaulan syövän synnyn. Viimeisten vuosien aikana, epigeneettiset mekanismit, erityisesti DNA: n metylaatio, on syntynyt ja on sittemmin säädetty uusia oivalluksia kasvaimia esiintyi [3, 4]. Kuitenkin tutkijat edelleen tutkia mekanismeja syövän ja syövän kehittyminen genomiikka.

Spalt kaltainen transkriptiotekijä 3 (

SALL3

) on jäsenenä

SAL

perhe ja sijaitsee 18q23.

SALL3

koodaa sal kaltainen C

2 H

2-tyypin sinkki sormen proteiinia. Mutaatiot joissakin näistä geeneistä liittyy synnynnäisiä sairauksia ihmisillä, mikä osoittaa niiden merkitystä sikiön kehityksen [5-7]. Shikauchi

et al

[8] mukaan

SALL3

hiljennettiin DNA metylaatio ja että proteiini tuote tämän geenin (SALL3) suoraan vuorovaikutuksessa PWWP domeenin DNMT3A ihmisen maksasyövän ( HCC), joka ehdotti, että

SALL3

toimii tuumorisuppressori HCC. Rakkaus

et al

[9] sekvenoinut exomes 59 Burkittin lymfooma kasvaimia, ja tulokset osoittivat ensimmäistä kertaa, että

SALL3

oli toistuvasti mutatoitunut Burkittin lymfoomat. Lisäksi CD133 (+) peräsuolen syövän solut (CRC),

SALL3

oli merkitsevästi säädelty verrattuna CD133 (-) CRC soluihin [10]. Lisäksi tuoreessa tutkimuksessa käyttämällä korkean suoritustehon DNA: n metylaatio Analyysi osoitti myös, että

SALL3

oli mahdollinen biomarkkeri paksusuolensyöpä [11]. Edellä mainitut havainnot osoittavat, että epänormaali ilmentyminen

SALL3

liittyy todettiin useita syöpiä. Kuitenkin, onko

SALL3

on mukana karsinogeneesi kohdunkaulan syöpä on edelleen tuntematon.

nykyinen tutkimuksessa olemme osoittaneet, että promoottorialueen

SALL3

on hypermetyloitunut, ja yhdessä HPV-infektio, on mukana kohdunkaulan syövän; lisäksi ilmaisua taso SALL3 mRNA alas-säädellä. Ehdotamme, että DNA: n metylaatio on

SALL3

estää rooliaan tuumorisuppressorina ja edistää karsinogeneesi kohdunkaulasyövän.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus hyväksyi ”eettisen komitean ensimmäisen Affiliated sairaala Xi’an Jiaotong yliopiston” in Shannxi, Kiinassa. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta osallistumaan tähän tutkimukseen.

Solulinjat ja viljelyolosuhteet

Kolmen ihmisen kohdunkaulansyövän solulinjoissa SiHa-, HeLa ja C33A annettiin meille Dr. Jing Ji ensimmäiseltä Affiliated sairaala Medical School, Xi’an Jiaotong yliopisto [12, 13]. Kaikki nämä soluja viljeltiin korkean glukoosin Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM) (HyClone, USA), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia (FBS) (Si Ji Qing, Kiina) 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2.

5-atsasytidiini hoito

1,0 × 10

5 /hyvin SiHa ja HeLa soluja viljeltiin erikseen 6-kuoppalevyille DMEM 10% FBS, ja sen jälkeen 24 tunnin kuluttua väliaine korvattiin tuoreella alustalla, joka sisälsi 0, 5 tai 10 uM 5-atsasytidiini (5-atsa) (Sigma, USA). Keskipitkän sisälsi 5-atsa korvattiin 24 tunnin välein aikana 72 tunnin aikana.

MTT-määritys

3 x 10

3 /hyvin SiHa- tai HeLa-soluja ympättiin 96- kuoppalevyille ja viljeltiin 0, 5 tai 10 uM 5-atsa. Kautta 5 päivän ajan, väliaine korvattiin 24 tunnin välein, ja sama pitoisuus on 5-atsa lisättiin. 3- (4, 5-dimetyylitiatsol-3-yyli) -2, 5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) määritystä käytettiin arvioimaan proliferatiivista kapasiteettia SiHa- ja HeLa-solujen käsittelyn jälkeen 5-atsasytidiini mukaisesti protokollaa. Solujen elinkelpoisuus mitattiin absorbanssi 490 nm: ssä.

Potilaat ja näytteet

Kaksikymmentä kolme kohdunkaulan syöpä kudosnäytteet, 23 täsmäsi pericarcinomatous kudosnäytteet ja 17 normaalia kohdunkaulan kudosnäytteitä saatiin ensimmäisen Affiliated sairaala Xi’an Jiaotong yliopiston tammi 2014 ja joulukuun 2014 Kaikilla potilailla diagnosoitiin patologisen tutkimus ja kukaan ei ollut saanut kemoterapiaa tai sädehoitoa ennen leikkausta. Jokainen potilas oli vapaaehtoista tähän tutkimukseen ja edellyttäen kirjallinen lupa.

kohdunkaulansyöpä kerättiin keskustasta kasvainten, kun taas näytteet pericarcinomatous kudosten alkunsa 1,0 cm: n päässä syöpäkudoksen. Seitsemäntoista näytteitä normaalin kohdunkaulan saatiin kohdunkaulan potilaiden, joille tehtiin yhteensä kohdun johtuu kohdun hyvänlaatuisten sairauksien. Keskimääräinen koko kunkin näytteen oli 0,5 cm x 0,5 cm x 0,5 cm. Sen jälkeen kun kudokset leikeltiin, kukin näyte pestiin steriloitiin PBS: lla ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Kaikki toimenpiteet suoritettiin jäissä.

DNA: n eristämiseksi, bisulfiittimodifikaatio ja metylaatiospesifinen PCR (MSP) B

Genominen DNA eristettiin soluista ja kudoksista käyttämällä TaKaRa Mini PARHAAT Universal Genominen DNA Extraction Kit (TaKaRa, Kiina) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Yhteensä 500 ng uutettua DNA: ta oli bisulfiitti-modifioitu EZ DNA Metylointi-Gold ™ Kit (Zymo Research, USA). Alukeparit käytetty MSP olivat seuraavat:

SALL3

: 5′-ATTTTAGAATGGAAGGGAGTTCGTC-3 ’(eteenpäin), 5′-ATAACCTCCTAAAACTTCCCCGAA-3′ (taaksepäin) metylaation ja 5’-ATTTTAGAATGGAAGGGAGTTTGTTG-3 ’ (eteenpäin), 5’-AAATAACCTCCTAAAACTTCCCCAAA-3 ’(reverse) varten unmethylation. Molemmat PCR-tuotteet olivat 197 bp. Lämpösyklilaitteella ohjelmat olivat seuraavat: 95 ° C: ssa 10 minuuttia ja 40 sykliä 95 ° C 30 sekuntia, hehkutus lämpötila metyloitu alukeparia oli 51 ° C: ssa samalla, että metyloimattoman alukeparia oli 50 ° C 30 sekuntia ja 72 ° C 30 sekuntia, jota seuraa inkubointi 72 ° C: ssa 7 minutes.The PCR-tuotteet erotettiin 2% agaroosigeelissä, värjättiin Gelview ja visualisoitiin UV-valo. Jokainen reaktio suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

HPV-DNA-testauksen

HPV-DNA kaksikymmentäkolme kohdunkaulan syövän kudosnäytteistä ja seitsemäntoista normaali kohdunkaulan kudoksen testattiin polymeraasiketjureaktiolla (PCR) ja virtaus-hybridisaatiolla. 21 HPV genotyypit laadullisesti testattiin HPV genotyyppitestiä kit mukaan AFOS järjestelmään (HybriBio, Kiina), mukaan lukien korkean riskin tyyppejä HPV-16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58 , 59 ja 68, matalan riskin tyyppejä HPV-6,11,42,43,44 ja yleisimpiä Kiinassa HPV-53,66 ja CP8304.

RNA ja reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR (Q PCR) B

Kokonais-RNA uutettiin soluista ja kudoksista käyttäen TRIzol reagenssia (Life Technologies, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Käytetyt alukkeet reaaliaikaista kvantitatiivista PCR: ää ovat seuraavat:

SALL3

: 5′-CAAAGCGAGCTCAGAAACAG-3 ’(eteenpäin), 5′-CCTGATGCTCCAACTTCAAA-3’ (taaksepäin);

GAPDH

:

5 ’

-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′ (eteenpäin), 5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3 ’(reverse). Reaktio-olosuhteet olivat seuraavat: 95 ° C 30 sekuntia, 40 sykliä 95 ° C 5 sekuntia ja 60 ° C: ssa 30 sekunnin ajan. Käytimme syklin kynnys (CT) edustajana piste. Suhteellinen ilmentyminen

SALL3

mRNA kussakin ryhmässä (fold-muutos verrattuna kontrolli) laskettiin käyttämällä kaavaa: RQ = 2

– △△ Ct. Jokainen reaktio suoritettiin kolminkertaisena.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot analysoitiin SPSS version 18.0.Consecutive tiedot analysoitiin Wilcoxonin summa testi, Kruskal-Wallisin H testi tai yksi- tapa ANOVA. Kategorinen data vertailtiin Pearsonin Chi-Square test. Kaikki tilastolliset testit olivat 2-puolinen, ja erot jossa

p

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Detection of metylaatiostatuksen promoottorissa alueilla

SALL3

kohdunkaulan syövän solulinjoissa

DNA: n metylaation aina tapahtuu alueilla, jotka ovat runsaasti CpG-saarekkeiden kuten promoottorialueille. Yleinen syy monien maligniteettien on epänormaali hypermetylaation tai hypometylaatio promoottori CpG-saarekkeiden, joka johtaa transkription tukahduttaminen monien tuumorisuppressorigeeneille tai aktivoituminen onkogeenien. Käytimme online-ohjelmisto ”MethPrimer” profiloida yhden CpG saari alueella, joka sijaitsee -1859–54 bp ylävirtaan ATG, transkription aloituskohdasta (TSS)

SALL3

promoottori (kuvio 1A ). Yksi alukepari suunniteltiin monistamaan

SALL3

promoottorialueen. Tunnistaa metylaatiostatuksen tämän alueen kohdunkaulan syövän solulinjoissa, käytimme metylaatiospesifinen PCR (MSP) määrittää

SALL3

promoottorin metylaatiostatuksen SiHa-, C33A ja HeLa-solut. Tulokset osoittivat, että tällä alueella SiHa soluissa oli täysin metyloitu, kun taas tämä alue oli täysin metyloitumaton vuonna C33A ja osittain metyloitu HeLa-soluissa (kuvio 1 B).

(A) Ennustettu CpG saarilla promoottorialueen

SALL3

. Numerot osoittavat tehtävissä emäsparin suhteessa transkription aloituskohdasta. Sininen alue edustaa CpG-saarekkeiden ja punaiset pystypalkit ovat CpG loci näissä syötesekvenssin. (B) havaitseminen

SALL3

metylaatiostatuksen MSP SiHa-, C33A ja HeLa solulinjoissa. (M: metyloidut, U: metyloitumaton).

5-atsasytidiini hoito demetyloi

SALL3

promoottorialue ja kääntää ilmaus

SALL3

useimmissa tapauksissa DNA: n metylaatio on palautuva prosessi. Sen selvittämiseksi metylaatiostatuksen promoottorialueella säätelee ilmaus geeni on transkription tasolla, havaitsimme ilmaus

SALL3

solulinjoissa, jossa

SALL3

promoottori on voimakkaasti metyloitu (SiHa- ja HeLa) käsittelyn jälkeen 5-atsasytidiini (5-atsa), joka voi aiheuttaa DNA: n demetylaation. Mittasimme metylaatio MSP ja reaaliaikainen Q-PCR. Tulokset osoittivat, että voimakkuus metylaation

SALL3

promoottorin sekä SiHa- ja HeLa-solulinjojen väheni, kun taas unmethylation on

SALL3

vähitellen kasvaa, kun pitoisuus on 5-atsa kasvoi (kuvio 2). Lisäksi olemme havainneet, että ilmaus

SALL3

mRNA SiHa ja HeLa-solujen määrä nousi merkittävästi annoksesta riippuvalla tavalla annon jälkeen 5-atsa (

p

0,05); lisääntynyt ilmentyminen, joka havaittiin SiHa-soluissa oli merkittävä kuin on havaittu HeLa-soluissa (taulukko 1, kuvio 3). Nämä tulokset viittaavat siihen, että ilmaus

SALL3

purettiin 5-atsa, joka demetyloitunut

SALL3

promoottorin ja edistää ilmentymistä

SALL3

-geenin transkription tasolla .

(M: metyloidut, U: metyloitumaton).

(*

p

0,05).

demetylointi

SALL3

promoottori voi estää leviämisen kohdunkaulan syöpäsolujen

Käytimme MTT-määritys tutkia onko leviämisen kapasiteetti SiHa ja HeLa-soluista saatiin aikaan

SALL3

metylaatio. Käsittelyn jälkeen 5-atsa, solujen elävyys sekä SiHa- ja HeLa-soluja heikensi annoksesta riippuvalla tavalla (

p

0,05) (kuvio 4), joka osoitti, että demetylaation

SALL3

promoottorin alueella voisi parantaa ilmentymistä

SALL3

ja vähennä solun elinkelpoisuuden ja lisääntymistä kapasiteetti kohdunkaulan syövän solulinjat SiHa- ja HeLa.

SALL3

promoottorialue hypermetyloitunut kohdunkaulan syövän kudoksissa

edelleen varmistamiseksi metylaatiostatuksen promoottorialueen

SALL3

kohdunkaulan syövän kudoksissa, suoritimme MSP 23 kohdunkaulan syöpä kudoksiin, 23 Hyväksytty pericarcinomatous kudosten ja 17 normaali kohdunkaulan kudoksissa. Kuten on esitetty taulukossa 2, kohdunkaulan syövän kudoksissa, 15 metyloitiin (65,21%) ja 8 olivat metyloitumaton (34,78); in pericarcinomatous kudoksissa, 15 metyloitiin (65,21%) ja 8 olivat metyloitumattomia (34.78%); normaaleissa kohdunkaulan kudoksissa, 5 metyloitiin (29,41%) ja 12 olivat metyloitumattomia (70,59%). Ero ryhmien välillä oli merkitsevä (

p

0,05) (taulukko 2) paitsi, että mitään merkittävää eroa ei havaittu syövän ja pericarcinomatous kudoksissa (p 0,05). Kuitenkin keskimääräinen harmaa-asteikon taso oli korkeampi syöpäkudoksiin (tuloksia ei ole esitetty). Nämä tulokset osoittivat, että

SALL3

promoottori hypermetyloitunut syövän kudoksissa, mikä saattaa olla rooli syövän synnyn kohdunkaulan syövän (kuvio 5).

hypermetylaatiota

SALL3

promoottorin inhiboi geenin ilmentymisen transkriptionaalisella tasolla

Olemme havainneet ilmentymisen

SALL3

mRNA: 23 kohdunkaulan syövän kudoksissa, 23 sovitettu pericarcinomatous kudosten ja 17 normaalia kohdunkaulan kudosten reaaliaikaisella Q-PCR. Verrattuna normaaliin kohdunkaula, keskimääräinen suhteellinen ilmentyminen

SALL3

oli alhaisempi kohdunkaulan syövän kudoksissa (

p

0,05) ja pericarcinomatous kudoksiin (

p

0,01 ), mutta mitään merkittävää eroa ei havaittu kasvain kudosten ja pericarcinomatous kudoksissa (

p

0,05) (kuvio 6A).

Nämä tiedot kuvaavat mediaanin kanssa kvartiiliväli ( *

p

0,05).

lisäksi voimme erottaa nämä näytteet kahteen ryhmään. Yksi ryhmä koostui kudoksiin, joissa promoottorialueen

SALL3

metyloitiin, ja toinen koostui kudosten kun aluetta on metyloimaton. Keskimääräinen suhteellinen ilmentyminen

SALL3

mRNA metyloitu kudoksissa oli alhaisempi kuin metyloitumattomalla kudoksissa (

p

0,05) (kuvio 6B). Nämä tulokset osoittivat, että hypermetylaatiota

SALL3

estivät

SALL3

geeniekspression transkriptiotasolla.

Korkean riskin HPV-infektio oli positiivisessa yhteydessä hypermetylaatiota

SALL3

promoottorialue kohdunkaulan syövän

Koska korkean riskin HPV-infektio on mukana kohdunkaulansyövän etiologian, me tutkia tarkemmin suhdetta HPV-infektion ja hypermetylaatiota

SALL3

promoottori alueella kohdunkaulan syöpä. Kohdunkaulan syövän kudoksissa, 14 18 HPV-positiiviset näytteet metyloitiin (77,78%), ja 4 olivat metyloitumattomia (22,22%); 1 5 HPV-negatiiviset näytteet metyloitiin (20,00%), ja 4 olivat metyloitumattomia (80,00%). Normaaleissa kohdunkaulan kudoksissa, 2 6 HPV-positiiviset näytteet metyloitiin (33,33%), ja 4 olivat metyloitumattomia (66,67%); 3 11 HPV-negatiiviset näytteet metyloitiin (27,27%), ja 8 olivat metyloitumattomia (72,73%). Yhdistetyt tilastolliset tulokset on esitetty taulukossa 3. Ero näiden kahden ryhmän oli merkittävä (

p

0,05). Lisäksi löysimme positiivinen suhde HPV-infektio ja hypermetylaatiota

SALL3

promoottorialueen kohdunkaula kudoksissa (p = 0,010, r = 0,408) (taulukko 3), joka osoitti, että HR-HPV-infektio on koskettavat läheltä metylaatiospesifisiin

SALL3

promoottorialueille.

Lisäksi suhteellinen ilmentyminen

SALL3

mRNA HPV-positiivisten kudosten oli alhaisempi kuin vuonna HPV-negatiivinen kudoksissa (kuvio 7). Tulokset HPV-tyyppien 40 kohdunkaula kudosnäytteet esitetty S1 taulukossa.

Nämä tiedot kuvaavat mediaanin kanssa kvartiiliväli (*

p

0,05).

keskustelu

maailmanlaajuisesti, esiintyvyys kohdunkaulan syövän osuus on 13% kaikista pahanlaatuisia kasvaimia naisilla ja on toiseksi vain rintasyövän [14, 15]. Vaikka sukupuolielinten HPV on todettu olevan tiiviissä yhteistyössä kohdunkaulansyövän etiologian, ja huolimatta laaja käyttö seulontamenetelmien ja rokotteet [16], esiintyvyys ja kuolleisuus on edelleen korkea, etenkin vähemmän kehittyneissä maissa [17-19 ]. Siten selvittäminen patogeneesin kohdunkaulan syöpä on suuri merkitys.

DNA: n metylaatio on yleisin muoto epigeneettiset muutos ja on välttämätöntä eri kehitysprosesseja kautta geeniekspression säätelyä, leimautuminen, ja epigeneettiset perintö [20]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että poikkeava DNA-metylaation promoottorialueille (ja CG saaret erityisesti) liittyy läheisesti Genesis moniin syöpiin, koska alentamista metyloinnin koko genomin tai hypermetylaatiota promoottorialueet tuumorisuppressorigeeneille vaikuttaa geenien ilmentyminen [21, 22]. Tämän seurauksena, epänormaali metylointi kasvaimeen liittyvien geenien on merkittävä rooli syövän synnyssä [23]. Löytö erityinen metylaation markkereita eri syöpien voisi olla merkittävä vaikutus.

SALL3

on jäsen SAL perhe etsii klo 18q23 [24], on olennainen geeni kehittämisessä ihmiskehossa . Poistaminen 18q23 aiheuttanut menetyksen koe, sydänsairaus, kehitysvammaisuus, kasvun hidastuminen, raajojen epämuodostumia ja niin edelleen [7, 24] .For viime vuosina, tutkijat suunnattu merkityksellinen välillä

SALL3

ilmaisun ja syövän synnyn . Yu

et al

[25] oli löytänyt

SALL3

hypermetyloitunut promoottori alueilla runsaasti CG-dinukleotidi virtsarakon syövän solulinjoissa ja kudoksissa, mikä voi olla uusia DNA metylaatio markkeri havaitsemiseen virtsarakon syöpä. Mitä enemmän, promoottorit

SALL3

oli hypermetyloitunut H719 solulinjassa [26]. Lisäksi Yang

et ai

[27] havaitsivat, että hypermetylaatiota

SALL3

osaltaan lasku

SALL3

mRNA HCC.

tutkimuksessamme olemme tutkineet mahdollisuutta havaita hypermetyloitunut

SALL3

vuonna promoottori alueilla seulontamenetelmä kohdunkaulan syövän. Kohdunkaulan syövän solulinjoissa SiHa- ja HeLa, joista molemmat HPV positiivisia solulinjoja, oli metyloitavaa

SALL3

promoottorialueiden mutta C33A, HPV negatiivinen solulinja,

SALL3

oli metyloitumaton vuonna promoottorialuetta. Samaan aikaan kohdunkaulan syövän kudoksissa, Hyväksytty pericarcinomatous kudosten ja normaali kohdunkaulan kudoksissa, tulokset osoittivat hypermetylaatiota

SALL3

kohdunkaulan syövän ja pericarcinomatous kudoksiin verrattuna normaaleissa kohdunkaula kudoksissa (

p

0,05 ) Our tulos oli yhdenmukainen Shikauchi

et al

[8] ja Yang

et al

[27].

Taken nämä yhteen, tartunta HPV voisivat osallistua mekanismi

SALL3

metylaatio liittyviä syövän synnyn. Korkean riskin HPV (hrHPV) aiheuttaman kuolemattomaksi ja pahanlaatuisiksi mukana DNA: n metylaatio isäntägeenejä. Schütze

et al

[28] todettiin, että HPV-aiheuttama kuolemattomaksi liittyi peräkkäinen ja progressiivinen kasvu promoottori metylaation osajoukko geenien, kuten hTERT, mir124-2, PRDM14 ja niin edelleen, mikä oli pääosin riippumaton viruksen kuolemattomaksi kapasiteettia. Tutkimuksessamme yllättäen avulla analysoimalla suhde HPV-infektion ja

SALL3

metylaatiostatuksen in kohdunkaula kudoksissa, tulokset osoittivat, että genominen hypermetylaation ja alemmat mRNA: n ilmentymisen transkription tasolla

SALL3

HPV-positiivisten kohdunkaulan syöpä kudoksiin verrattuna HPV-negatiivisten kudoksissa (

p

0,05) ja hr-HPV-infektio positiivisessa yhteydessä hypermetylaatiota

SALL3

promoottorialue (

p

0,05, r = 0,408), mikä oli yhdenmukainen Schütze ja aikaisemmat tutkimuksen kohdunkaulan syövän solulinjoissa, tuo meille uusia todisteita siitä, että HPV-infektio ei ole osallistunut karsinogeneesi kohdunkaulan syövän. Kuitenkin meidän olevassa tutkimuksessa, järjestys kahden tapahtuman tunnin-HPV-infektion ja

SALL3

metylaatio esiintyi ja onko heillä suora vuorovaikutus (ja E6 /E7 tai muu geenilokukset) on edelleen tuntematon. Me pidämme etsimiseen mekanismi syövän aiheuttamien HPV-infektion ja DNA: n metylaation seuraavissa tutkijat.

Jotta edelleen todentamiseksi suhdetta metylaatio ja geenien ilmentyminen, käsittelimme SiHa- ja HeLa, jotka olivat voimakkaasti

SALL3

metyloitavaa promoottorialueen, jossa 5-atsasytidiini, aine voisi olla rooli DNA demetyloituminen on genomin laajuisesti. Tulokset viittasivat siihen, että kun pitoisuus on 5-atsa kohonnut yleisesti taso metylaation

SALL3

pudonnut pois sekä metyloimaton ilmaisua kasvoi merkittävästi SiHa- ja HeLa (

p

0,05 ). Samalla, mRNA suhteellinen ilmentyminen

SALL3

SiHa- ja HeLa lisäävät myös ja nousi määrin

SALL3

täysin metyloidut solulinjaa SiHa oli merkittävämpää kuin HeLa,

SALL3

osittaisen-metyloitu solulinjaa, joka ehdotti, että demetylaation

SALL3

voisi tehokkaasti kumota sen ilmentymistä transkription tasolla. Sitten MTT-analyysi osoitti, että sen jälkeen käsiteltiin 5-atsa, solujen elinkelpoisuutta ja leviämisen SiHa- ja HeLa merkittävästi heikentynyt, joka havainnollistaa syöpää estävä toiminto

SALL3

kohdunkaulan syöpäsoluja. Vuonna kudosnäytteitä, Q-PCR tulokset viittasivat siihen, että mRNA ilmaus

SALL3

oli korkeampi syövän ja pericarcinomatous kudosten kuin normaaleissa kohdunkaula kudoksissa (

p

0,05), joka jakoi vastaavia ajatus aiempien tutkimusten kanssa [27]. Lisäksi, tilastollinen analyysi mRNA: n ekspression välillä metyloituneiden ja metyloitumattomien kudoksissa paljasti, että

SALL3

metyloidut kudoksissa, mRNA: n

SALL3

oli suurempi kuin metyloitumattomia kudoksissa (

p

0,05) .Taken yhdessä, tulokset osoittivat

SALL3

hypermetylaation osaltaan alas-säätely geenin ilmentymisen transkription tasolla kohdunkaulan syövän.

Yhteenvetona tutkimuksemme osoitti ensimmäisenä, että promoottori

SALL3

oli hypermetylaation, ja koska tämän mekanismin alassäädetty mRNA ilmaisun ja kiihtyi solujen kasvua kohdunkaulan syövän kudoksissa ja solulinjoissa. Korkean riskin HPV-infektio kuin kohdunkaulansyövän etiologian osallistui

SALL3

metylaatio. Tämä poikkeava metylaatio tilan koko genomista asteikon inaktivoitu sen toiminta tuumorisuppressorina ja osaltaan karsinogeneesi kohdunkaulasyövän.

tukeminen Information

S1 Taulukko. HPV-tyypit 40 kohdunkaula kudosnäytteitä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0145700.s001

(DOCX) B

Kiitokset

Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (No.81472428).