Krooninen sairaus

tiivistelmä

Useat tutkimukset osoittivat, että tyypin 2 diabetes ja insuliiniresistenssi liittyy lisääntynyt paksusuolen syövän riskiä. Viime aikoina tutkimukset viittaavat siihen, että metformiini voi vähentää syöpäriskiä diabeetikko tai ei-diabeetikoilla epäselviä mekanismeja. Tämä työ, jonka tarkoituksena määrittää metformiinin vaikutusten kemikaalien aiheuttamien paksusuolensyöpä hiirillä. Paksusuolensyöpä indusoitiin käyttäen 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH, 20 mg /kg /viikko, s.c.) viisitoista viikon ajan. Kokeessa I: terveet hiiret ruokittiin perusruokavaliolla neljän viikon ajan ja sitten jaetaan seitsemään ryhmään, (i) suolaliuosta, (ii) DMH, (iii) oksaliplatiinia, (iv-v): metformiini (100 tai 200 mg /kg) ja (vi-vii): oksaliplatiinin + metformiini (100 tai 200 mg /kg), vastaavasti. Experiment II: tyypin 2 diabetes aiheutettiin ruiskuttamalla STZ (30 mg /kg) jälkeen neljän viikon rasvaisen ruokinta ja sitten hiiret jaettiin seitsemään ryhmään samanlaiset kuin kokeessa I. Tutkiminen paksusuolen kudoksen kokeen lopussa korostetaan kasvua angiogeenisten markkereita ja solujen lisääntymistä ja osoitti suurempaa immuunivärjäykseen insuliinin kasvutekijän I reseptorit ja CD

34 paksusuolessa diabeettisen hiirillä verrattuna ei-diabeetikoilla. Yleisesti, metformiinin vaimentua kasvaimen angiogeneesiä ja täydensi antituumorivaikutuksen oksaliplatiinin. Kaiken kaikkiaan nykyinen tulokset osoittivat, että metformiinin suojattu DMH aiheuttama paksusuolensyöpä ei-diabeetikoilla ja diabeettinen hiirillä. Tämä terapeuttinen vaikutus oli, ainakin osittain, johtuu sen anti-angiogeenisten ja anti-proliferatiivista mekanismeja.

Citation: Zaafar DK, Zaitone SA, Moustafa YM (2014) Rooli metformiinin tukahduttamaan 1,2- dimetyylihydratsiinin aiheuttama Colon Cancer in Diabeettinen ja ei-diabeetikoilla Hiiret: Vaikutus tuumoriangiogeneesissa ja Cell Proliferation. PLoS ONE 9 (6): e100562. doi: 10,1371 /journal.pone.0100562

Editor: Rafael Aldabe, Centro de Investigación en Medicina Aplicada (CIMA), Espanja

vastaanotettu: 24 tammikuu 2014; Hyväksytty: 29 toukokuu 2014; Julkaistu: 27 kesäkuu 2014

Copyright: © 2014 Zaafar et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole rahoitusta tai tukea raportti.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Syöpä on luokan sairauksia ominaista ulko- of-control solujen kasvua. Maailmanlaajuisesti peräsuolen syöpä on kolmanneksi yleisin diagnosoitu syöpä miehillä ja toiseksi naisilla. Peräsuolen syöpä on toiseksi suurin syy syövän kuolemaan kehittyneissä maissa [1]. Kolorektaalisyövissä alkaa limakalvon suoliston ja hoitamattomana se voi kasvaa lihakseen kerroksiin alla, ja sitten suolen seinämän läpi.

Tyypin 2 diabetes on liitetty lisääntynyt syöpäriski [ ,,,0],2]. Erityisesti korkeampia maksan [3], paksusuolen [4] ja endometriumin [5] syöpä. Meta-analyysi tehtiin Julkaistujen tietojen yhdistyksen välillä diabetes ja ilmaantuvuutta sekä kuolleisuus paksusuolen syövän [4]. Taustalla olevia tekijöitä lisääntynyt riski on oletettu, mutta ei koskaan täysin selvitetty lääketieteellisessä kirjallisuudessa.

Angiogeneesi on prosessi tuottaa uutta kapillaarisen verisuonia. Säätelemätön angiogeneesi voi aiheuttaa eri sairaudet [6], kuten kasvaimen kasvun ja etäpesäkkeiden [7]. Kasvava kasvain tarvitsee hiussuonia antaa ravinteita ja happea. Verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF), joka on merkittävä välittäjä verisuonten läpäisevyyttä ja angiogeneesiä, voimistaa mikrovaskulaarinen hyperläpäisevyys, joka voi edeltää ja mukana angiogeneesin [8]. VEGF todettiin olevan suurempi seerumeissa lasten ja aikuisten tyypin 1 diabetes [9] ja sillä on tärkeä rooli verisuonten sairaudet kuten kasvainten kasvua sokeritaudin [10]. Nopeutettu eteneminen syövän havaittiin alle diabeetikko ja /tai hyperglykeemisten olosuhteet hiirillä [11].

On yhdistyksen välillä insuliini ja syöpä insuliinipitoisuuden indusoi proliferatiivista kudosta poikkeavuuksia, koska insuliini on vahva anabolinen vaikutus, joka johtaa stimuloiduissa DNA-synteesiä ja solujen lisääntymistä [12]. Tämä vaikutus saattaa selittyä myös rajat aktivointi insuliinin kaltainen kasvutekijä-I (IGF-I) -reseptori perheen [13]. IGF merkinantojärjestelmä on tärkeä rooli ihmisen syövässä, ja IGF-reseptoriin (IGF-R) on houkutteleva lääkeaine kohde, jota vastaan ​​erilaisia ​​uusia syöpälääkkeitä kehitetään [14]. Epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet yhteyden välillä kohonnut IGF tasolla ja kehittää kiinteitä kasvaimia kuten paksusuolen, rinta- ja eturauhassyövän [15]. On epäselvää, IGF-I on kausaalinen tekijä peräsuolen syöpä [16].

metformiinin pidetään lisäksi elintapojen muuttaminen, kuten ensilinjan hoitomuotoa tyypin 2 diabetes [16]. Kiinnostaa, edellinen suuri tapaus-verrokki-tutkimukset osoittivat, että diabeetikoilla hoidettiin metformiinilla oli merkitsevästi vähemmän syöpiä kuin niillä, joita hoidettiin muilla diabeteslääkkeisiin [17] – [19]. Diabeetikoilla, joilla on rintasyöpä ja joita hoidettiin metformiinilla kokenut suurempi patologisen täydellinen hoitovaste yhdistelmällä neoadjuvanttikemoterapian kuin teki, joita hoidetaan muilla diabeteslääkkeiden [20]. Monipuolinen mekanismeja syövän riskin vähentämistä on hypoteesi, [21].

Nykyinen tutkimus suunniteltiin vertaamaan vakavuutta kokeellisesti aiheuttaman paksusuolen syövän diabeetikko ja ei-diabeetikoilla hiirillä. Lisäksi rooli metformiinin hoidossa DMH aiheuttama paksusuolensyöpä tutkittiin diabeetikko ja ei-diabeetikoilla hiirillä keskittyen sen vaikutukset kasvaimen angiogeneesiin ja solujen lisääntymistä. Siksi jotkut mekanismien oletetun antituumorivaikutuksen metformiinia voidaan korostaa.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Kaikki koeprotokollaa hyväksynyt Research Ethics komitean farmasian tiedekunnan, Suezin kanava yliopisto.

Koe-eläimet

Male Swiss albinohiirten painavat 28-35 g toimitti Modern Veterinary Office for Laboratory Animals (Kairo, Egypti). Hiiriä pidettiin kymmenen ryhmissä polyeteeni- häkeissä valvotuissa laboratorio-olosuhteissa ja normaali tumma /vaalea sykli. Hiirten annettiin mukautua viikon ajan ennen kokeen aloittamista. Veden ja rehun ainesosia annetaan ad libitum tutkimusjakson aikana.

Lääkkeet ja kemikaalit

Metformiinihydrokloridi oli ystävällisesti Sigma Pharmaceutical Co. (Quesna, Egypti) ja liuotetaan tislattuun veteen. Oksaliplatiini (Oksaliplatiini, Hospiralla IL, Australia) valmistettiin tuoreeltaan joka viikko. Streptotsotosiinia (STZ) ja 1,2-dimetyylihydratsiinia (DMH) ostettiin Sigma-Aldrich (MO, USA). STZ valmistettiin tuoreeltaan sitraattipuskurissa (0,1 M, pH = 4,5) kuitenkin; DMH laimennettiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella. Syöttö ainesosia kuten laardi ja sakkaroosi hankittiin kaupallisesta lähteestä. Sitruunahappo ja natriumsitraatti toimitti ADWIC Company kemikaaleja (Kairo, Egypti).

induktio diabeteksen ja arvio insuliiniresistenssiä käyttäen HOMA-IR index

Hiiret kokeessa II syötettiin joissa runsasrasvainen ruokavalio (HFD), joka valmistettiin sekoittamalla 20% sakkaroosi (w /w) ja 10% laardia (p /p) osaksi Perusruokavalioon (BD) neljän viikon ajan. Tämän jälkeen hiiret pidettiin paastolla yön yli, sitten saivat yhden injektion STZ (30 mg /kg, i.p.) [22], jonka tilavuus oli 5 ml /kg (kuvio 1). Seitsemän päivän kuluttua STZ annon, hiiret paastosivat yön yli ja verensokerin taso määritettiin käyttämällä One Touch Ultra Mini -glukometriä (USA). Lisäksi verta otettiin näyte kustakin hiirestä silmäkuopan sinus saada seeruminäytteet, jotka pidettiin -80 ° C: ssa ja käytettiin sitten seerumin insuliinin tasoa käyttäen entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) sarja insuliinia ( Biorbyt, UK) noudattaen valmistajan protokollia. Insuliiniresistenssi arvioitiin käyttäen homeostaasimallimääritystä insuliiniresistenssi (HOMA-IR) indeksin kaavalla kuvanneet aiemmin Mathew et al. [23], HOMA-IR-indeksi = [paasto glukoosi (mmol /L) x paastoinsuliini (uU /ml)] /22,5).

DMH annettiin (20 mg /kg /viikko, sc) . Metformiini (100 tai 200 mg /kg /vrk) annettiin suun kautta. Oksaliplatiini annettiin viikoittain annoksena yhtä kuin 4 mg /kg /viikko (i.p.). BD: Perusravintona, HFD: rasvainen ruokavalio, DMH: 1,2-dimethyhydrazine. Kaikki kokeelliset ryhmät saivat DMH ennen asianomaiset hoidot lukuun ottamatta suolaliuosta ryhmiä.

induktio paksusuolen syövän

indusoimiseksi paksusuolen syövän, hiiriin injektoitiin subkutaanisesti DMH (20 mg /kg /viikko, kehon paino) ja viisitoista viikko [24]. Hoito DMH alkoi viikon kuluttua STZ suihkutus () jälkeen arviointi verensokerin ja jatkoi viidentoista viikon ajan (Fig. 1).

Farmakologiset hoitoja

metformiinin käynnistettiin jälkeen viimeistely aikana DMH (eli alussa viikon 21). Metformiiniin (100 tai 200 mg /kg) [25] jatkettiin seuraavan neljän viikon ajan, kunnes hiiret tapettiin lopussa terapeuttisen aikana (lopussa 24 viikon) (Fig. 1). Hiiriä tarkkailtiin päivittäin vaiva ja punnitaan joka kolmas päivä tarkistaa kasvaimen kasvua. Sillä yhdistelmähoidot, oksaliplatiinihoito (4 mg /kg, ip) annettiin päivänä 7, 14, 21 ja 28 lisäksi päivittäin metformiinin hoitoon.

Koeryhmät

Nykyinen tutkimus suoritettiin kaksi erillistä hiirillä; seitsemään ryhmään kutakin. Jokainen ryhmä alkoi kymmenen hiirtä.

Experiment I.

Se tehtiin terveillä (

ei-diabeetikoilla

) hiirillä. Hiiriä ruokittiin perusruokavaliolla neljän viikon ajan ja sitten jaetaan seitsemään ryhmään, (i) Saline, (ii) DMH, (iii) DMH + oksaliplatiinia, (iv): DMH + metformiini (100 mg /kg), (v) : DMH + metformiini (200 mg /kg), (vi): DMH + oksaliplatiini + metformiinia (100 mg /kg) ja (vii): DMH + oksaliplatiini + metformiinia (200 mg /kg).

Experiment II.

Se tehtiin

diabeetikko

hiirillä. Tyypin 2 diabetes aiheutettiin injektoimalla pieni STZ (30 mg /kg) neljän viikon syöttämällä HFD kuten aiemmin mainittiin, ja sitten hiiret jaettiin seitsemään ryhmään samanlaisia ​​kuin on esitetty kokeessa I (Fig. 1).

Perustelu annoksesta ja aikataulu metformiiniin

tyypillinen ihmisen hoidossa annos metformiinia on 1000-2500 mg, annetaan tavallisesti kaksi kertaa päivässä. Esillä olevassa tutkimuksessa, metformiinin (100 ja 200 mg /kg) käytettiin, ja tämä voidaan kääntää ihmisen ekvivalenttiannos käyttämällä Reagan-Shaw menetelmä [26]. Kaavan mukaan ihmisen vastaava annos (mg /kg) = eläimen annos (mg /kg) x eläimen (km) /ihmisen (km). Km 60 kg aikuisille ihmisille on yhtä suuri kuin 37 ja 20 g: n hiirelle on yhtä suuri kuin 3. Näin ollen ihmisen vastaa hiiren annos 100 ja 200 mg /kg, 486 ja 973 mg: n keskimääräinen koko on 60 kg aikuisen ihmisen. Näin ollen, kaikki valitut annokset esillä olevassa tutkimuksessa ovat turvallinen terapeuttinen alue merkitään ihmisillä.

Lisäksi esillä oleva tutkimus määritti terapeuttinen aikana on 4 viikkoa testata antituumorivaikutuksen metformiinin. Tämä oli sopusoinnussa terapeuttinen kausien raportoitu aikaisemmissa tutkimuksissa. Esimerkiksi Ramandeep et ai. (2011) tutkimuksessa havaittiin, että kolmen viikon hoito-ohjelmaan Metformiinin (100 ja 200 mg /kg /vrk, p.o.) tukahduttamaan munasarjasyöpä [27]. Lyhyempi kesto on suunnitellut Liu et al. (2013); kirjoittajat määritti metformiinin (250 mg /kg, i.p.) ja viisitoista päivää vastaan ​​munuaissyövän in vivo ksenografteissa [28]. Toinen tutkimus vaikutus testattiin metformiinin (600 mg /kg /päivä) 21 päivää inokulaation jälkeen ja B16-soluihin [29].

Oksaliplatiini käytettiin olla adjuvanttihoitona 5-fluorourasiilin in kolorektaalikarsinoomasta hoidon , ja se on kohtalaisen tehokas lääke hoitoon yksin käytettynä, kuten oksaliplatiini on tuottanut hoitovasteen 12%: sta 24% potilailla, joilla oli aiemmin hoitamaton kehittynyt peräsuolen syövän, ja 10%: sta 11% potilailla, joilla oli uusiutunut tai vaikeahoitoinen kehittynyt peräsuolen syöpä . Toisen vaiheen tutkimuksissa, oksaliplatiini yhdistettynä 5-fluorourasiilin kanssa tai ilman leukovoriiniin, liittyi hoitovasteen 60%. Siksi oletettiin, että sen lievää tai kohtalaista tehoa hoidettaessa tämän syöpä mahdollistaa odotettu vaikutus metformiinin voidaan tunnistaa [30].

Veren keräys ja näytteenvalmistus

Tällä kokeen päättyessä, hiiret nukutettiin tiopentaali natriumia (50 mg /kg, ip) ja tapettiin katkaisemalla kaula. Verinäytteet kerättiin sydänpunktiolla ja sentrifugoitiin 2000 x

g

15 min – 30 min kuluttua verinäytteen ottoa. Sitten, seerumit erotettiin ja kerättiin kaksi puhdasta Eppendorf: n putkiin ja säilytettiin -20 ° C: ssa, kunnes käytettiin ELISA-määritykset. Lisäksi, kudosnäytteiden paksusuolen leikeltiin ja kiinnitettiin fosfaattipuskuroidussa formaliinilla (4% paraformaldehydi 0,1 M fosfaattipuskurissa, pH = 7,2), yön yli ja sitten upotettiin parafiiniin vaha. Kaikki parafinoidut leikattiin 4 um paksuisia ja kuivua yön yli. Sitten leikkeitä parafiini, vedettömät ja valmistellaan histopatologisia värjäämällä hematoksyliinillä ja eosiinilla (H molemmat olivat määräytyy valmistajan ohjeiden. Reaktiot määritettiin mittaamalla optinen tiheys käyttämällä automaattista ELISA-lukijalla 450 nm: ssä.

Histopatologinen tutkimus paksusuolen kudoksen

Kudokset osat värjättiin H 0,05 pidettiin merkittävänä.

Tulokset

tulokset nykyisen kokeen osoitti, että injektio DMH indusoi 30% kuolleisuus ei-diabeetikoilla hiirillä versus 40% kuolleisuuden diabeetikon hiirillä. Oksaliplatiinihoidon ja /tai metformiinia ei muuttaa eloon jäämisestä ei-diabeetikoilla hiirillä (Kuva. 2). Kuitenkin, diabeetikoilla hiirillä, monoterapian metformiinin (200 mg /kg) lisäsivät elossa hiirien verrattuna diabeetikon /DMH ryhmässä (90% vs. 60%,

P

0,05, Fig. 2) . Selviytymisen käyrä osoitti, että jotkut kuolleisuutta kirjattiin aikana DMH hoidon (viikko 6-20) kuitenkin; eniten kuolleisuutta nauhoitettiin terapeuttista aikana (viikko 21-24).

Eloonjääneiden hiirten ei-diabeetikoilla ryhmien (ylin vasen paneeli) ja diabeetikoilla ryhmissä (ylhäällä oikealla paneeli) eri ajankohtina yleistä kulkua kokeen. Alempi paneeli osoittaa lopullinen määrä elossa hiirissä kokeen lopussa (viikon lopussa 24). Hiiret [paitsi suolaliuosta ryhmä] ruiskutettiin 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH) viikoittain 15 viikon aiheuttaa paksusuolisyövän käsiteltiin sitten oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) 4 viikon ajan. Tiedot ilmaistaan ​​absoluuttisen määrän (kymmenestä) ja analysoitu Chi square testi

P

0,05. * Merkittävästi erilainen suolaliuosta ryhmästä.

#Significantly eroaa DMH ryhmästä.

$ Merkittävästi erilainen oksaliplatiini ryhmästä.

≠ Merkittävästi erilaiset metformiinin (100 mg /kg) ryhmä.

× Merkittävästi erilaiset metformiinin (200 mg /kg),

n = 10 alussa kokeen

.

Lopussa viikon 4, keskimääräinen lähtötason kehon paino kaikki hiiret kokeessa II oli merkittävästi suurempi kuin tallennettu kokeessa I (35,71 ± 2,9 vs. 30,16 ± 2,78,

P

0,05). Kuitenkin lopussa tutkimuksen (viikon lopussa 24), mittaus prosentin painon muutoksia korostettuna eroa keskuudessa hiiret sekä kokeessa I ja II (taulukko 1A B).

saadut tulokset kokeesta II osoitti, että nykyinen malli tyypin 2 diabetes oli mukana enemmän HOMA-IR-indeksi verrattuna hiiriin ruokittiin perusruokavaliolla kokeessa I (9,22 ± 0,76 vs. 2,68 ± 0,26,

P

0,05). Kokeessa I, monoterapian metformiinin (100 tai 200 mg /kg) sekä sen yhdistelmät oksaliplatiinin ei aiheuttanut muutosta laskettu HOMA-IR-indeksi verrattuna niiden keittosuolaliuokseen. Sen sijaan kokeessa II, nämä lääkehoitojen vähensi laskettu HOMA-IR-indeksi verrattuna diabeettisen /suolaliuos (taulukko 2A B).

Lisäksi, seerumin IGF-I-taso diabeettista /suolaliuoksessa ryhmä oli suurempi (noin yhdeksän-kertainen) kuin mitattu ei-diabeetikoilla /suolaliuosta ryhmä (4578 ± 454 vs. 536 ± 54,

P

0,05, taulukko 2). Nykyinen Tulokset osoittivat, että toistuvat DMH injektio vähensi seerumin IGF-I-taso verrattuna keittosuolaliuokseen kummassakin kokeessa I ja II. Ei-diabeetikoilla hiirillä, monoterapian oksaliplatiinin tai metformiinin (100 tai 200 mg /kg) tuotti edelleen vähentää seerumin IGF-I-taso verrattuna ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä kuitenkin yhdistelmä 1 ja 2 ei tuottanut vastaavaa laskua seerumin IGF-I-taso. Toisaalta, diabeettisen hiiriä hoidettiin metformiinilla (100 tai 200 mg /kg) sekä yhdistelmä 1 ryhmä osoitti merkittävää seerumin IGF-I-taso verrattuna diabeetikon /DMH ryhmä (taulukko 2).

Tämänhetkiset tulokset osoittivat, että seerumin VEGF taso ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä ei ollut merkitsevästi suurempi kuin ei-diabeetikoilla /suolaliuosta ryhmä (612 ± 54 vs. 516 ± 46, Fig. 3). Ei-diabeettinen hiirillä, kaikki toteutettu farmakologisten aineiden pystyivät vähentämään VEGF taso verrattuna ei-diabeetikoilla /DMH ohjaus (Fig. 3). Edelleen, monoterapian metformiinin (200 mg /kg) tai sen yhdessä oksaliplatiinin (yhdistelmä 2) osoitti pienempi seerumin VEGF tasolla verrattuna monoterapiaan oksaliplatiinin (

P

0,05, Fig. 3).

Effect oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) seerumin IGF-I (paneeli A) ja seerumin VEGF (paneeli B). Hiiret [paitsi suolaliuosta ryhmä] ruiskutettiin 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH) viikoittain 15 viikon aiheuttaa paksusuolisyövän käsiteltiin sitten oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) 4 viikon ajan. DMH: 1,2-dimetyylihydratsiinin, IGF-I: insuliini kasvutekijä-I, VEGF: endoteelikasvutekijä. Tulokset on esitetty keskiarvo ± S.E.M. ja analysoitiin kaksisuuntainen ANOVA seurasi Tukeyn

post-hoc

testi

P

0,05. * Merkittävästi erilainen kuin suolaliuoksella ryhmästä.

#Significantly eroaa DMH ryhmästä.

$ Merkittävästi erilainen oksaliplatiini ryhmästä.

≠ Merkittävästi erilaiset metformiinin (100 mg /kg) ryhmä.

× Merkittävästi erilaiset metformiinin (200 mg /kg),

n = 5-6

.

Mikä tärkeää, seerumin VEGF taso oli suurempi diabeettisessa /suolaliuosta ryhmässä verrattuna ei-diabeetikoilla /suolaliuosta ryhmä (680 ± 60 vs. 516 ± 46,

P

0,05, Fig. 3). Kokeessa II, diabeettisen /DMH ryhmä ei osoittanut merkittävää muutosta seerumin VEGF tasolla verrattuna diabeetikon /suolaliuos ryhmä. Edelleen, monoterapian metformiinin (100 tai 200 mg /kg) ja sen yhdessä oksaliplatiinin tuotettu seerumin VEGF tasolla verrattuna diabeetikon /DMH ryhmä kuitenkin monoterapian oksaliplatiinin ei saatu samanlainen vaikutus (Fig. 3B). Lisäksi VEGF taso oli alhaisempi hiirissä hoidettiin metformiinilla (100 mg /kg) ja yhdessä 2 ryhmässä verrattuna hiiriin hoidettiin oksaliplatiinin monoterapiana (Fig. 3-B).

Kun maanmuokkauskohteisiin hiirien, vauriot olivat yleensä ei visualisoitu brutto tutkimus. Kuitenkin histologinen tutkimus paljasti, että paksusuolen limakalvo näytti hyperplastic ja dysplastic epiteelin vaurioita ja poikkeava kryptassa pesäkkeitä. Distal paksusuolen limakalvon poikkeavaan crypt pesäkkeitä oli vaikea tunnistaa normaalista limakalvosta. Histopatologisia muutoksia havaittiin suurennos on suuri; oli diffuusi häiriö paksusuolen limakalvoa. Lisäksi intramucosal pesäkkeet soluja hypercellular, jossa suuri määrä sekavaa epiteelisolujen; ytimet olivat suuria ja hyperchromatic. Yksittäisiä saaret esineoplastiset soluja, jotka olivat peräisin epiteelin havaittiin ominaisella leukocytic tunkeutuminen. Kryptissa järjestettiin tiiviisti pakattu tavalla (kuvio 4A).

A) mikrovalokuvia päässä koeryhmään. Colon ei-diabeettisten /suolaliuos hiirillä näyttää normaalia histopatologinen rakenteen limakalvojen kerroksen rauhas rakenne (g) ja taustalla submukoosassa ja lihaksikas kerros × 40. Colon diabeettisen /suolaliuosta hiiret osoittavat polttoväli imukudoksen aggregaatiota limakalvo (nuoli) kanssa hilseily limakalvon epiteelin ja rauhasten rakenteesta × 40. Paksusuolen ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä osoittaa kystinen laajentuma glandular rakenteen lievää dysplastic vuori epiteelisolujen ja ruuhkia verisuonissa (nuoli) × 80. Colon diabeettisen /DMH hiiret osoittavat polttoväli lymfoidisolulinja lisääntymistä korvaamalla limakalvon × 40. Colon ei-diabeettisten /DMH hiiriä hoidettiin oksaliplatiinin osoittavat painopistealalla disfiguration kanssa tulehdussolujen tunkeutuminen limakalvo × 80. Colon diabeettisen /DMH hiiriä hoidettiin oksaliplatiinin osoittavat aktiivinen vuori epiteelin litistetty ytimien ja muutaman tulehdussolujen tunkeutuminen välillä × 80. Colon ei-diabeettisten /DMH hiiriä hoidettiin metformiinilla (100 mg /kg) osoittaa polttoväli lymfaattisen hypoplasia limakalvon kerros × 80. Colon diabeettisen /DMH hiirillä, joita hoidettiin metformiinia (100 mg /kg) osoittaa valtava määrä tulehdussolujen tunkeutuminen luumenissa propriaan limakalvon kerroksen liikakasvu ja dysplasia limakalvon epiteeliin rauhasjärjestelmää rakenteen x 40. Colon ei-diabeettisten /DMH hiiriä hoidettiin metformiinilla (200 mg /kg) osoittaa tulehdussolujen infiltraatiota ja fibroosia lamina propriasta välillä rauhaset × 80. Colon diabeettisen /DMH hiirillä, joita hoidettiin metformiinia (200 mg /kg), josta rappeutumista rauhasten limakalvon epiteelin menetys ydinten x 80. Colon ei-diabeettisten /DMH hiiriä hoidettiin yhdistelmällä oksaliplatiinin ja metformiinin (100 mg /kg) osoittaa lymfaattisen leviämisen limakalvo × 80. Colon diabeettisen /DMH hiiriä hoidettiin yhdistelmällä oksaliplatiinin ja metformiinin (100 mg /kg) osoittaa aktiivista rauhas rakenne limakalvon epiteelin kierroksen ytimien × 40. Colon ei-diabeettisten /DMH hiiriä käsiteltiin oksaliplatiinia ja metformiinin (200 mg /kg), joka esittää tulehduksellisten solujen infiltraation välillä rauhasten rakenteen x 80. Colon diabeettisen /DMH hiiriä käsiteltiin oksaliplatiinia ja metformiinin (200 mg /kg), mikä osoittaa valtava määrä lymfoidisolulinja korvaamalla lamina proprian limakalvokerrokseen x 40. (X 40 = 240,19 um ja x 80 = 238,2 um. B) pylväsdiagrammi, joka osoittaa histopatologinen pisteet paksusuolen kudoksessa ei ollut diabetesta ja diabeetikon hiirillä. Hiiret [paitsi suolaliuosta ryhmät] injektoitiin 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH, 20 mg /kg /viikko) viisitoista viikkoa aiheuttaa paksusuolisyövän sitten, käsiteltiin oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) ylimääräisiä neljä viikkoa. Tulokset ilmaistaan ​​mediaani ja analysoitiin käyttäen ei-parametriset Kruskal-Wallisin testi (ei-parametrinen ANOVA), jota seurasi Dunnettin testi useita vertailuja. * Merkittävästi erilainen suolaliuosta ryhmästä.

#Significantly eroaa DMH ryhmästä.

$ Merkittävästi erilainen oksaliplatiini ryhmästä.

≠ Merkittävästi erilaiset metformiinin (100 mg /kg) ryhmä.

× Merkittävästi erilaiset metformiinin (200 mg /kg) ryhmä,

n = 5-6

.

Tilastollinen analyysi osoitti merkittävää eroa histologista pisteet välillä diabeetikko /DMH ryhmä ja ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä (Fig. 4B). Ei-diabeetikoilla hiirillä, yksikään toteutetaan aineita vähensi histopatologisia pisteet verrattuna DMH ohjaus (Fig. 4B). Epätodennäköistä, diabeetikoilla hiirillä, kaikki toteutettu farmakologisten aineiden onnistuneesti lievittää histopatologisten pisteet verrattuna DMH kontrolli (Fig. 4B).

Kuvio 5A esittää valomikroskooppikuvat immunohistokemiallista värjäystä varten IGFR-I paksusuolen kudosnäytteet. Tietojen analysointi paljasti ero immuunivärjäykseen IGFR-I välillä diabeetikko /DMH ryhmä ja ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä (245 ± 15,6 vs. 210 ± 10,9, Fig. 5B). Kokeessa I, tilastollinen analyysi paljasti, että ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä osoitti suurempaa immunoreaktiivisuus IGFR-I verrattuna ei-diabeetikoilla /suolaliuosta ryhmä. Edelleen, yhdistelmähoidot tuotti merkittävää laskua ilmaus IGFR-I verrattuna DMH ohjaus (kuvio. 5B). Kokeessa II, diabeettisen /DMH ryhmä osoitti suurempaa immunoreaktiivisuus IGFR-I verrattuna diabeetikon /suolaliuos ryhmä. Monoterapia oksaliplatiinin tai metformiinin (200 mg /kg) sekä kaksi yhdistelmäterapioihin tuotti merkittävän laskun immunoreaktiivisuus IGFR-I paksusuolen kudoksiin verrattuna DMH valvontaa. Tärkeää on, yhdistelmä 1 ryhmä osoitti erolla monoterapiat (Fig. 5B).

A) mikrovalokuvia paksusuolen kudoksiin immunohistokemiallisesti värjätty IGF-R1 (asteikko bar = 238,2 nm). B) pylväsdiagrammi, joka osoittaa optinen tiheys IGF-R1 immunovärjääminen ei-diabeetikoilla ja diabeettinen hiirillä. Hiiret [paitsi suolaliuosta ryhmät] injektoitiin 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH) viikoittain 15 viikon aiheuttaa paksusuolisyövän käsiteltiin sitten oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) 4 viikon ajan. Tulokset on esitetty keskiarvo ± S.E.M. ja analysoitiin kaksisuuntainen ANOVA seurasi Tukeyn

post-hoc

testi

P

0,05. * Merkittävästi erilainen suolaliuosta ryhmästä.

#Significantly eroaa DMH ryhmästä.

$ Merkittävästi erilainen oksaliplatiini ryhmästä.

≠ Merkittävästi erilaiset metformiinin (100 mg /kg) ryhmä.

× Merkittävästi erilaiset metformiinin (200 mg /kg),

n = 5-6

.

Kuva 6-A esittää mikrovalokuvia immunohistokemiallista värjäystä varten CD

34 paksusuolen kudosnäytteet. Oli merkitsevä ero immunoreaktiivisuus CD

34 välillä diabeetikko /DMH ryhmä ja ei-diabeetikoilla /DMH ryhmä (260 ± 12,2 vs. 213 ± 6,71, Fig. 6B). Kokeessa I immunoreaktiivisuus CD

34 oksaliplatiinia, metformiinin (100 mg /kg) ryhmä ja yhdistelmä 1 2 ryhmät olivat alhaisemmat kuin ei-diabeetikoilla /DMH ohjaus (Fig. 6B). Tärkeää on, että yhdistelmä 1 ryhmä osoitti alempi CD

34 immuunivärjäystä verrattuna vastaaviin monoterapiat. Kokeessa II, kaikki toteutettu hoitojen alensi optisen tiheyden CD

34 verrattuna diabeetikon /DMH ohjaus. Lisäksi yhdistelmäterapioihin osoittivat merkittävää laskua immuunivärjäykseen CD

34 paksusuolen kudoksiin verrattuna niiden vastaavien monoterapiat (Fig. 6B).

A) mikrovalokuvia paksusuolen kudoksiin immunohistokemiallisesti värjättynä CD

34 (asteikko bar = 238,2 nm). B) pylväsdiagrammi, joka osoittaa optinen tiheys CD

34 immunovärjääminen ei-diabeetikoilla ja diabeettinen hiirillä. Hiiret [paitsi suolaliuosta ryhmät] injektoitiin 1,2-dimetyylihydratsiinin (DMH) viikoittain 15 viikon aiheuttaa paksusuolisyövän käsiteltiin sitten oksaliplatiinin ja /tai metformiinia (100 tai 200 mg /kg) 4 viikon ajan. Tulokset on esitetty keskiarvo ± S.E.M.