Krooninen sairaus

tiivistelmä

kastraatio vastustuskykyisten etenemistä eturauhassyövän jälkeen androgeenideprivaatio hoitojen edelleen kriittisin haaste kliinisessä eturauhassyövän hoito. Nousevalle androgeenireseptorin (AR) aktiivisuus on vakiintunut kuljettaja kastraation kestävä etenemistä, ja säätelyä täyspitkän AR (AR-FL) ja konstitutiivisesti aktiivisen AR silmukoitumisvariantit (AR-Vs) on liitetty edistää kasvaneesta AR toimintaa. Olemme aikaisemmin raportoitu, että ginsenoside 20 (S) -protopanaxadiol-aglykoni (PPD) voidaan vähentää runsaasti sekä AR-FL ja AR-Vs. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme osoitti lisäksi, että vaikutus PPD on AR ilmaisun ja kohdegeenien oli riippumaton androgen. PPD hoito johti tukahduttaminen ligandista riippumattoman AR transaktivaatiota. Lisäksi PPD viivästynyt kastraatio vastustuskykyisten regrowth LNCaP ksenograftikasvaimissa jälkeen androgeenideprivaatio ja esti kasvua kastraation vastustuskykyisten 22Rv1 ksenograftikasvaimissa endogeenisen ilmentymisen AR-FL ja AR-Vs. Tähän liittyi lasku seerumin eturauhasen antigeenin tasot sekä lasku AR tasoa ja mitoosien kasvaimissa. On huomattava, että 22Rv1 ksenograftikasvaimissa olivat resistenttejä kasvun inhibitio seuraavan sukupolven anti-androgeenin enzalutamide. Esillä oleva tutkimus on ensimmäinen näyttää prekliinistä tehoa PPD estämisessä kastraatio kestävä eteneminen ja kasvun eturauhassyöpää. Havainnot tarjoavat perusteet kehittää edelleen PPD tai sen kaltaisten eturauhassyöpähoidolle.

Citation: Cao B, Qi Y, Yang Y, Liu X, Xu D, Guo W, et al. (2014) 20 (S) -Protopanaxadiol etenemisen estämiseksi ja kasvu kastraatio hylkivät Eturauhassyöpä. PLoS ONE 9 (11): e111201. doi: 10,1371 /journal.pone.0111201

Editor: Jindan Yu, Northwestern University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 24 kesäkuu 2014; Hyväksytty 23. syyskuuta 2014; Julkaistu: 06 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Cao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tätä työtä tuki National Cancer Institute of National Institutes of Health myöntää R01CA188609, Department of Defense myöntää W81XWH-12-1-0112 ja W81XWH-12- 1-0275, National Natural Science Foundation of China Projects 81272851, 30973587, 81102383, 81302206 ja 81430087, Louisiana Board-of-Regents Grant LEQSF (2012-15) -RD-A-25, Louisiana Cancer Research Consortium Fund, Tulane Cancer Centerin Developmental Fund, ja Tulanen yliopiston School of Medicine Pilot Fund ja Bridge Fund. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

androgeenien vajaushoidon, joka häiritsee androgeenireseptorin (AR) signalointi kastraatio tai AR-antagonistien, on ensilinjan hoitoon levitetään eturauhassyöpää. Kuitenkin eteneminen nykyisin parantumaton vaihe, jota kutsutaan kastraatio kestävä eturauhassyöpä (CRPC), poikkeuksetta esiintyy [1]. Kiihtyvää AR toiminta on vakiintunut kuljettaja hoidon epäonnistumisen ja kastraatio kestävä eteneminen [2], [3]. Eturauhassyöpä voi sopeutua androgeenien puute hoidon muta- AR, voimistamalla /yli-ilmentävät AR, upregulating konstitutiivisesti aktiivinen AR silmukoitumisvarianttia (AR-Vs), joka puuttuu ligandisitoutumisdomeenista, aktivoimalla AR androgeenien-riippumattomien mekanismien ja /tai lisäämällä sisäistä -tumoral androgeenitason kautta

de novo

androgeenisynteesin [4] – [17]. Tämän seurauksena, AR on uudelleen in CRPC, vaikka kasvain ei enää reagoi androgeenien puute hoidon.

Useita uusia lääkkeitä kohdistaminen AR uudelleenaktivoitumiseen CRPC on kehitetty, ja kaksi näistä on hyväksynyt FDA etäpesäkkeisen CRPC,

eli

, androgeenin biosynteesin estäjän abirateronin ja voimakas AR antagonisti enzalutamide [18], [19]. Ne ennakoi uuden aikakauden eturauhassyövän hoidossa. Kuitenkin monet potilaat esittelyyn terapia-resistenttejä, ja eniten alustavat vasteen kehittäneet vastustuskyvyn kuluessa kuukauden hoitojakson aloittamisesta, jälleen mukana lisääntynyt eturauhasen antigeeni (PSA), joka osoittaa uudelleen AR signalointi [18], [19]. Yksi mahdollinen mekanismi resistenssin abirateronin ja enzalutamide on katsottu johtuvan lisääntyneen ekspression täyspitkän AR (AR-FL) ja AR-Vs [20] – [24]. Yli-ilmentymisen AR-FL osoitettiin herkistää reseptorin alhainen androgen [25] ja muuntaa eturauhassyövän kasvua kastraatiotasolle-herkkä kastraatiotasolle kestävä vaiheessa [10]. Lisääntynyt ilmentyminen AR-Vs osoitettiin antaa kastraatio kestävä kasvu eturauhasen kasvaimia [14], [15], [26] – [28], ja korreloivan huonon säilymisen CRPC potilaista [29]. Kaatamalla AR-FL tai AR-Vs by shRNA ksenograftimalleissa voi viivästyttää etenemistä eturauhassyövän ja kastraatio vastuksen ja /tai tukahduttaa kasvua eturauhasen kasvain, joka on jo edennyt kastraatio vastustuskykyisten tilassa [15], [30] , [31]. Siksi terapeuttisia lähestymistapoja, jotka voivat vähentää saatavuutta sekä AR-FL ja AR-Vs tulisi tarjota huomattavaa hyötyä ehkäisyssä ja estämällä eturauhassyövän uusiutumisen jälkeen androgeenien puute hoidon.

ginsengjuuresta on yksi commonly- käytetyt lääkekasvien länsimaissa, etenkin syövän intervention [32]. Ginsenosides pidetään suuria farmakologisesti aktiivinen ginseng aineosien [33]. Olemme aiemmin raportoitu, että tärkein suoliston metaboliitti ginsenosides, 20 (S) -protopanaxadiol-aglykoni (PPD), on tehokas vähen- tämisessä ja ilmentävät aktiivisuutta AR, mukaan lukien sekä AR-FL ja AR-Vs, ihmisen eturauhasen syöpäsolujen [ ,,,0],34]. Lasku AR ilmentyminen johtuu PPD-välitteisen vähentää transkription AR-geenin ja lisääntynyt proteasomin-välitteinen hajoaminen AR-FL ja AR-V-proteiinien [34]. Olemme lisäksi osoittaneet, että PPD esti myös AR eturauhasessa ksenograftikasvaimissa mutta ei isännän normaalin prostates [34]. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioimme esikliinisesti mahdollisuuden käyttää PPD parantaa terapeuttista tulosta androgeenien puutteen hoito.

Materiaalit ja menetelmät

Cell Lines ja reagenssit

LNCaP ja 22Rv1 solut saatiin American Type Culture Collection at Passage 4. CWR-R1 solut saatiin tohtori Elizabeth M. Wilson ja viljeltiin kuvatulla [35]. Solut käytetään tässä tutkimuksessa olivat 20 kohtia (~ 3 kuukauden ei-jatkuva viljely). PPD saatiin Organic Chemistry Laboratory Jilin University, Changchun, Kiina. Yhdisteet, puhtaus 98%, määritettynä korkean suorituskyvyn nestekromatografi, käytettiin soluviljelmätutkimukset, ja että 95% käytettiin eläinkokeissa. Enzalutamide hankittiin Selleck Chemicals (Houston, TX), ja puhtaus 99% varmistettiin Nuclear Magnetic Resonance.

Western-blottaus

Menetelmä on kuvattu aikaisemmin [36]. Immunoreaktiivisia vyöhykkeet kvantitoitiin densitometrisesti ja normalisoitiin glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH). Seuraavia vasta-aineita käytettiin: anti-GAPDH (Millipore), anti-AR (Millipore), ja anti-AR-V7 (Precision Vasta).

Quantitative käänteistranskriptio-PCR: llä (qRT-PCR)

qRT-PCR suoritettiin, kuten on kuvattu [37]. QPCR aluke-koetin sarjat PSA, transmembraaninen proteaasi, seriini 2 (TMPRSS2), ja sykliini A2 (CCNA2) olivat IDT. Alukesekvenssit AR-isoformit, kuten on kuvattu [15].

Reporter Gene Assay

androgen-reagoivan elementin (ARE) -luciferase reportteri plasmidi, joka sisältää kolme toistoa ARE alueen ligatoitiin tandem on tulikärpäsen lusiferaasi toimittaja [38], käytettiin mittaamaan AR

trans

-activating aktiivisuutta. Se oli ohimenevästi kotransfektoidaan solujen PRL-TK

Renilla

lusiferaasi-konstrukti (Promega) on 20:1 suhteessa, kuten on kuvattu [39]. Dual Lusiferaasimääritys suoritettiin per valmistajan ohjeen (Promega), ja aktiivisuus tulikärpäsen lusiferaasi normalisoitiin kuin

Renilla

lusiferaasi.

-tuumoriksenografti mallit

Male nude hiiret saatiin NCI Animal Production Centerin 5-6 viikon iässä. Sillä kastraatio vastustuskykyisten etenemisen malli LNCaP kasvaimia, hiiriin istutettiin ihonalaisesti 4 x 10

6 LNCaP suspendoitiin 50% Matrigel Oikeaan kylkeen tehdyn viikon kuluttua sopeutumista. Kun kasvaimen koko saavutti -100 mm

3, kastraatio suoritettiin

kautta

kivespussin lähestymistapaa. Seuraavana päivänä kastraatio, hiiret satunnaistettiin kahteen ryhmään ja saivat 40 mg /kg PPD oliiviöljyssä tai oliiviöljyä ohjaus letkulla suun kautta 6 päivää viikossa. Sillä kastraatio vastustuskykyisten 22Rv1 kasvain malli, hiiriä kirurgisesti kastroitu viikon kuluttua sopeutumista, ja annettiin toipua 3 päivää ennen niiden istutettiin ihonalaisesti 4 x 10

6 22Rv1 solujen oikeaan kylkeen. Seuraavana päivänä inokulaation jälkeen hiiret satunnaistettiin ja sijoitettu samalle hoito-, kuten on kuvattu LNCaP mallin. Kasvain mitat ja kehon painot mitattiin joka toinen viikko ja viikoittain, vastaavasti. Kasvaimen tilavuus laskettiin

0,524 x leveys

2 x pituus

[40]. Tällä kokeiden päättyessä, hiiret nukutettiin ketamiinia /ksylatsiinia, veri kerätään seerumin PSA määritys käyttäen kvantitatiivista ELISA (United Biotech), ja lopetettiin CO

2. Kasvaimet poistettiin, punnittiin ja kiinnitettiin 10% formaliinilla parafiiniupotusta ja histologiset analyysit. Kaikki eläin menettelyt hyväksynyt Tulanen yliopiston Institutional Animal Care ja käyttö komitea.

AR immunohistokemiallinen analyysit

immunohistokemia suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [34]. Negatiivinen kontrolli, ensisijainen vasta-aine korvattu ei-immuuni-IgG samana pitoisuutena, ja reaktiivisuutta ei havaittu. Värjätyt leikkeet skannataan Aperio ScanScope Scanner, ja digitalisoitu kuvia analysoitiin Aperio WebScope integroitu algoritmeja. AR värjäystä, kuvat otettiin näytteet peräkkäin koko kunkin osan kanssa alueilla kuolion, valmistelu esineitä, ja reunat välttää. Intensiteetti tumavärjäystä luokiteltiin vahva, heikko tai negatiivinen määritettynä Aperio Nuclear V9 algoritmia. Fosfo-histoni H3 värjäytyminen kvantitoitiin kuten on kuvattu [41]. Viisi sattumanvaraisesti mikroskooppikentäs- vangittiin kunkin kasvaimen osiossa 10-kertainen suurennus, ja määrä fosfo-histoni-H3-positiivisten solujen käsin laskettiin.

Tilastollinen analyysi

Opiskelijan kaksisuuntainen t testiä käytettiin määrittämään keskimääräinen erot hoitoa ja valvontaa. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM.

Tulokset

PPD alassäätely AR-FL ja AR-Vs androgeenin menettäneiden kunto

Ensin arvioitiin vaikutusta PPD on AR-FL ja AR-V-proteiinin tasot kastraatio kestävä 22Rv1 ja CWR-R1 soluja viljeltiin androgeenin riistää kunnossa. Nämä kaksi solumalleja ilmaista AR-FL yhdessä kolmen -80 kDa suuria AR-vs, nimittäin AR-V7, AR-V1 (alias AR4), ja AR-V4 (aka AR5) [15], [16]. Western blot analyysit tehtiin vasta-aineen kanssa tunnustetaan kaikki AR isoformeja tai spesifisiä AR-V7. Kuten runsain ja aktiivinen AR-V soluihin [15], AR-V7 on ainoa AR-V, johon spesifinen vasta-aine on kehitetty. Kuten kuvioissa 1A ja 1B, PPD vaimentua sekä AR-FL ja AR-Vs on ajasta riippuva tavalla, jossa muutos AR-Vs samanlainen kuin AR-FL 22Rv1 soluissa mutta hieman merkittävämpi kuin AR -FL in CWR-R1 soluissa. Sitten tutkittiin, mikä vaikutus PPD mRNA- tasoja eri AR isomuotojen näissä soluissa viljeltiin androgeeni-riistää kunnossa qRT-PCR. Kuten esitetään kuvioissa 1C ja 1D, PPD hoito vähensi myös AR-FL ja AR-V transkriptien molemmissa solumalleissa. Mielenkiintoista on, että vaatimaton mutta tilastollisesti merkitsevä lisäys AR-V1 ekspressiota havaittiin varhaisessa ajanhetkellä 22Rv1 soluissa. Kuitenkin kasvu ei jatkunut pidemmän hoidon. Nämä tulokset osoittavat, että PPD voi estää ilmentymisen AR-FL ja AR-Vs androgeeni-riistää kunnossa.

A B. Western blot-analyysi AR proteiinien tunnistavaa vasta-ainetta kaikki AR isoformeja tai spesifisiä AR-V7 in 22Rv1 (A) tai CWR-R1-soluja (B). Numerot taulukoissa tarkoittavat suhteellisia normalisoitu intensiteetit AR proteiinivyöhykkeet kontrolliin verrattuna 100. C. qRT-PCR-analyysi mRNA tasoja AR-FL ja AR-Vs 22Rv1 soluissa. *,

P

0,05 kontrollista. Soluja viljeltiin androgeenin riistää kunnossa. PPD, 20 ug /ml. Virhepalkkien, SEM.

PPD tukahduttaminen androgeenin Independent AR Activity

AR-Vs puuttuu ligandisitoutumisdomeenista ja niillä androgen riippumaton konstitutiivinen aktiivisuus [15], [16 ], [42]. PPD downregulation AR-Vs odotettaisiin johtavan tukahduttaminen androgeenista riippumattoman AR transaktivaatiota. Olemme siis arvioitiin vaikutusta PPD on AR aktiivisuutta 22Rv1 soluissa viljeltiin androgeeni-riistää ehto, jonka reportterigeenimäärityksessä. Kuten kuviossa 2A, androgeeni-riippumaton AR transaktivaatiota heikensivät PPD funktiona ajan. 6 ja 12 tunnin kuluttua PPD hoidon aktiivisuus inhiboitui 36% ja 66%, vastaavasti. Meidän on tutkinut tämän vaikutuksen PPD endogeenisiin AR-kohdegeenien, kanoninen tavoitteet PSA ja TMPRSS2 sekä AR-V-erityinen tavoite CCNA2 [20], [43], jonka qRT-PCR samoissa olosuhteissa. Mukaisesti reportterigeenin seurauksena kaikki tavoitteet (kuviot 2B 2C) osoitti ajasta riippuva vähennys ilmaisun. Yhdessä nämä tiedot osoittivat, että käytettäessä PPD estää androgeenin riippumattoman AR-FL ja AR-V toimintaa.

. Reportterigeenimäärityksessä esittää PPD esto androgeenista riippumattoman

trans

-activating aktiivisuutta AR. 22Rv1 solut ko-transfektoitiin ARE-lusiferaasi-konstrukti ja PRL-TK-konstrukti, ja aktiivisuus tulikärpäsen lusiferaasi normalisoitiin kuin

Renilla

lusiferaasi. B C. qRT-PCR-analyysit osoittavat PPD pienentää ilmentymisen kanonisen AR tavoitteet PSA: n ja TMPRSS2: n (B) ja AR-V-erityinen tavoite CCNA2 (C) 22Rv1 soluissa. *,

P

0,05 kontrollista. Soluja viljeltiin androgeenin riistää kunnossa. PPD, 20 ug /ml. Virhepalkkien, SEM.

PPD esto kastraatio hylkivät eteneminen LNCaP kasvaimia

sitten arvioitiin vaikutus PPD eturauhassyövän uusiutumisen jälkeen androgeenien puute hoidon LNCaP ksenograftimallissa . LNCaP on androgeenista riippuvainen ihmisen eturauhassyövän solulinja ja ilmaisee pääasiassa AR-FL [44]. Kehittäminen LNCaP ksenograftikasvaimissa vaatii androgeenien, ja kastraatio aiheuttaa ensin hidastui kasvua ksenografteista [45], [46]. Kuitenkin samankaltainen kuin ihmisen eturauhasen syöpien, The ksenografteista lopulta kastraatio kestävä ja jatkaa kasvua [45] – [49]. Mies nude-hiiriin istutettiin LNCaP oikealla selkä kylki. Kastrointi suoritettiin, kun tuumorit saavutti -100 mm

3. Kastroitu Sitten hiiret jaettiin kahteen ryhmään sai joko oliiviöljyn kontrollina tai 40 mg /kg PPD suun kautta letkulla 6 päivää viikossa. Hoito aloitettiin seuraavana päivänä kastraation.

Verrattuna LNCaP kasvaimia kasvatettiin gonad-ehjät hiirillä [45], [46], oli hidastumisen kasvaimen kasvua molemmissa ryhmissä kahden ensimmäisen hoitoviikon ajan, kun ensimmäinen vastaus kastraatio (kuvio 3A). Kasvaimet kontrolliryhmässä uudelleen kasvu päivästä alkaen 17 Hoidon seurauksena hankkia kastraation vastarintaa, kun taas kasvaimia PPD ryhmässä pysyi pienenä. Päivästä 25, ero kasvaimen keskimääräinen koko näiden kahden ryhmän välillä oli tilastollisesti merkitsevä. Tällä kokeiden päättyessä keskimääräinen kasvaimen koko oli 1000 mm

3 kontrolliryhmässä, mutta 330 mm

3 PPD ryhmässä, mikä osoittaa -67% tuumorin uusiutumista PPD. Tämän mukaisesti tulos, keskimääräinen kasvaimen painot olivat 0,76 g ja 0,32 g valvonta ja PPD-ryhmässä (kuvio 3B). Aikana 42 päivä hoitojakson, PPD ei näyttänyt aiheuttavan toksisuutta hiirissä, kuten on esitetty ei laske painon verrattuna kontrolliryhmään (kuvio 3C).

LNCaP-soluja inokuloitiin gonad-ennallaan nude-hiirissä, ja kirurgisen kastraation suoritettiin, kun tuumorit saavutti -100 mm

3. Hoito 40 mg /kg PPD kautta letkulla suun kautta 6 päivää viikossa aloitettiin seuraavana päivänä kastraation (n = 10). A. Mean kasvain määriä. B. Yksittäiset kasvain painot päätteeksi kokeen. C. Mean hiiren painon. D. Mean seerumin PSA-taso määritettiin ELISA, normalisoitu kasvaimen painot, päätteeksi tutkimuksen. *,

P

0,05 kontrolliryhmään. Virhepalkkien, SEM.

eturauhasen kasvain uusiutunut kastraation liittyy kohonnut seerumin PSA-arvot [50]. Mittasimme tasot PSA-hiiren seerumissa käyttämällä ELISA. Kuten kuviossa 3D, PPD lisäravinteen johti lähes 50% lasku keskimääräinen seerumin PSA, 173 ng /ml /g kontrolliryhmässä 97 ng /ml /g PPD ryhmässä. Tasot normalisoitiin kasvaimen painon. Täten lasku ei ollut seurausta kasvaimen kasvun inhibition, vaan osoitus PPD tukahduttaminen AR uudelleenaktivointi kasvaimissa. Sitten mitataan AR proteiinin ilmentymisen immunohistokemia formaliinikiinnitetyt kudoksiin. Kuten on esitetty kuviossa 4A, PPD hoito vähensi solujen prosenttiosuus, joilla on vahva AR värjäys ja samalla kasvattaa prosenttiosuus negatiivisesti värjäytyneet solut. Tiedot siis tukevat meidän

in vitro

tuloksia, jotka osoittavat tehokkuutta PPD vähen- tämisessä AR tasolla ja aktiivisuus CRPC soluissa

in vivo

.

Kasvaimet kerättiin talteen lopussa kokeen kuvion 3 A. AR immunohistokemiallisella värjäyksellä kasvain osissa. Vasen paneeli, kvantifioinnin tiedot. Oikea paneeli, edustaja kuvia. B. Phospho-histoni H3 immunohistokemiallisella värjäyksellä kasvaimen kohdat. Vasen paneeli, kvantifioinnin tiedot. Oikea paneeli, edustaja kuvia. C. H 0,05 kontrolliryhmään. Virhepalkkien, SEM.

arvioidaan edelleen vaikutusta PPD on mitoosia kasvaimissa kautta Immunohistokemian käyttämällä vasta-ainetta fosfo-histoni H3, merkkiaine mitoosia [41]. Kuten kuviossa 4B, PPD lisäravinteen aiheutti merkittävän laskun keskimääräinen lukumäärä mitoosien kohden kuvakentän. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 0,05 kontrolliryhmään. Virhepalkkien, SEM.

Kasvaimet kerättiin talteen lopussa kokeen kuvion 5 A. AR immunohistokemiallisella värjäyksellä kasvaimen kohdat. Vasen paneeli, kvantifioinnin tiedot. Oikea paneeli, edustaja kuvia. B. Phospho-histoni H3 immunohistokemiallisella värjäyksellä kasvaimen kohdat. Vasen paneeli, kvantifioinnin tiedot. Oikea paneeli, edustaja kuvia. C. Western blot -analyysi kasvainten käyttäen pan-AR-vasta-ainetta. Kvantitointi tiedot on esitetty alla blotit. D. H 0,05 kontrolliryhmään. Virhepalkkien, SEM.

Mielenkiintoista, enzalutamide, on ei-annos, kykeni inhiboimaan kasvua 22Rv1 kasvaimia (kuvio 7A), estää seerumin PSA-tasot hiirissä (kuvio 7D), inhiboivat mitoosia (kuvio 8A), tai aiheuttaa ilmeistä histopatologisen muutoksen 22Rv1 kasvaimia (kuvio 8B). Päätteeksi kokeen, oli suuntaus lasku kasvaimen painot kasvaa annoksen enzalutamide (kuvio 7B). Kuitenkin lasku ei ollut tilastollisesti merkitsevä, mahdollisesti johtuen pienestä näytteen koosta kokeen. Tästä huolimatta lasku havaittiin 10 mg /kg enzalutamide, yleisimmin käytetty annos enzalutamide joka tehoaa kastraation kestävä LNCaP ksenograftimalleja [27], [51], [52], oli melko marginaalinen. Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, mahdollisuuden käyttää PPD estää kasvua CRPC.

22Rv1 inokuloitiin kastroitu nude-hiiriin. Kun kasvaimet olivat saavuttaneet -100 mm

3, hiiret käsiteltiin 10 tai 30 mg /kg enzalutamide suun kautta letkulla 6 päivää viikossa (n = 4). A. Mean kasvain määriä. B. Yksittäiset kasvaimen paino päätteeksi kokeen. C. Mean hiiren painon. D. Mean seerumin PSA-taso määritettiin ELISA, normalisoitu kasvaimen painot, päätteeksi tutkimuksen. Enz, enzalutamide. Kumpikaan hoitoryhmässä tilastollista eroa kontrolliryhmään tahansa päätepisteitä. Virhepalkkien, SEM.

Kasvaimet kerättiin talteen lopussa kokeen kuvion 7 A. Phospho-histoni H3 immunohistokemiallisella värjäyksellä kasvaimen kohdat. Vasen paneeli, kvantifioinnin tiedot. Oikea paneeli, edustaja kuvia. B. H & E-värjäys kasvaimen kohdat. Enz, enzalutamide. Virhepalkkien, SEM.

Keskustelu

osoittaneet aikaisemmin, että PPD tukahduttaa androgeenin signalointi kautta ekspression vähentämiseen sekä AR-FL ja AR-vs [34]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme laajentaneet huomautuksia androgeenista riistää kunnossa, osoittaa androgeeni-riippumaton downregulation AR ilmaisun ja transaktivaatiota PPD. Vielä tärkeämpää on, esillä oleva tutkimus osoitti, että ensimmäistä kertaa mahdollisuuden käyttää PPD parantaa terapeuttista tulosta androgeenien puutteen hoito. Osoitimme, ksenograftimalleissa, että PPD estää tai hidastaa kehitystä CRPC jälkeen androgeenideprivaatio ja estää niiden kasvun, kastraation vastustuskykyisten eturauhasen kasvaimista endogeenisen ilmentymisen AR-FL ja AR-vs.

Rise seerumin PSA käytetään markkerina biokemiallisten uusiutuminen hoidon jälkeen. Osoitimme, että PPD lisäravinteen johtaa vähenemiseen seerumin PSA tasolla. Lisäksi vähennys ei ole pelkästään seurausta laskua kasvaimen kokoa PPD, koska vaikutus on edelleen merkittävä normalisoinnin jälkeen kasvain painosta. Tiedot, sen sijaan, osoittavat kykyä PPD tukahduttaa AR uudelleenaktivointia kasvaimissa uusiutunut jälkeen androgeenideprivaatio ja kasvaimia, jotka ovat kastraatio kestävät, siis tarjoaa mekanistinen perusta kyky PPD estää kastraation vastarintaa.

annos PPD, jota käytettiin meidän ksenografti-tutkimukset oli 40 mg per kg hiiren ruumiinpainoa. Perustuen kehon pinta-alan muuntaminen [53], ihmisen vastaa 40 mg /kg PPD on 3,24 mg /kg. Tämä vastaa vuorokausiannosta 194 mg 60 kg aikuinen. Päivittäinen lisäravinteena 2 g ginseng uute aikuisille, joiden keskimääräinen paino on 60 kg ei osoittanut mitään haitallisia vaikutuksia ihmisten kliinisissä tutkimuksissa [54], [55]. Koska ginsenosides sisältö uutteen oli 14,5% [54], vuorokausiannos ginsenosides näissä tutkimuksissa oli 290 mg. Siten annos, joka käytimme meidän Eläinkokeissa on saavutettavissa ihmisen.

Huolimatta pitkään arvostusta tärkeydestä kohdistaminen AR signalointi eturauhassyövän hoidossa, ei hoitoa on kehitetty tähän mennessä kohdistaa AR suoraan vähentää sen saatavuutta. Lisäksi PPD, useita muita yhdisteitä, joiden on osoitettu pre-kliinisesti vähentämään AR-FL ja AR-Vs ja kasvun estämiseksi CRPC soluihin [26], [56] – [61]. Nämä yhdisteet voivat olla tehokas vastalääke voittamiseen vastustuskykyä androgeenideprivaatio hoidossa, erityisesti vastustuskyvyn vuoksi ilmen- tymisen lisääntymisen ilmentymisen AR-Vs. Koska ei ole ligandia sitovan domeenin, AR-Vs ei voi kohdistaa nykyisen androgeenien hoidot, mukaan lukien uusien lääkkeiden abirateronin ja enzalutamide. Tämä näkyy meidän tiedot osoittavat tehottomuus enzalutamide kasvua vastaan ​​AR-V-ilmentäviä 22Rv1 ksenograftikasvaimina kastroitu isäntä. Toisaalta, kasvu näiden kasvainten voidaan estää PPD on farmakologisesti saavutettavissa annoksen. Nämä havainnot tukevat mahdollisuuden käyttää PPD yhdessä näiden uusien lääkkeiden eturauhasen syövän hoidossa. Määritetään kombinatoorista tehokkuudet ja parhaat sekvenssit hoitoja on alue jatkuvaa tutkimusta. Yhdessä nämä havainnot Nykyisessä tutkimuksessa ei ainoastaan ​​tarjota perusteet kehittää edelleen PPD tai sen analogi interventioon of CRPC, mutta myös todistettava vähentää AR-FL ja AR-V saatavuus elinkelpoinen lähestymistapa parantaa terapeuttista lopputulos androgeenien puute hoidon .

Kiitokset

Kiitämme tohtori Elizabeth M. Wilson yliopiston North Carolina tarjota CWR-R1 soluissa.