Krooninen sairaus

tiivistelmä

Spontaani syövät ovat yleisiä sairauksia koirilla. Näistä jotkut pahanlaatuiset syövät, kuten suun melanooman, osteosarkooma, hemangiosarkooma, ja syöttösolujen kasvain usein tunnustettu kliininen ongelmia, koska, huolimatta korkeat taajuudet, nykyiset hoidot näiden syöpien eivät ehkä aina saavuttaa tyydyttävä tuloksia. Puuttuminen tehokas systeemisiä hoitoja näitä syöpiä vastaan ​​johtaa tutkijat tutkimaan uusia hoitomuodot, kuten immunoterapian. Ohjelmoitu kuolema 1 (PD-1) on kostimulatorista reseptori immunosuppressiivisilla toiminto. Kun se sitoo ligandeja, PD-ligandi 1 (PD-L1) tai PD-L2, PD-1-T-soluilla säätelee negatiivisesti aktivoimaan signaaleja T-solureseptorin, jolloin eston efektoritoiminnan sytotoksisia T-lymfosyyttejä. Poikkeava PD-L1-proteiinin ekspression on raportoitu monissa ihmisen syövissä, ja sitä pidetään immuuni paeta mekanismi syöpiä. Kliinisissä tutkimuksissa, anti-PD-1 tai anti-PD-L1-vasta-aineiden indusoiman tuumorin regression useita maligniteetteja, mukaan lukien kehittyneet melanooma, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, ja munuaissolukarsinooma. Tässä tutkimuksessa, voidaan arvioida, että PD-1 /PD-L1-akselin uutena terapeuttisena kohteena canine syövän immunoterapiaa, immunohistokemiallinen analyysi PD-L1-proteiinin ekspression eri pahanlaatuisia syöpiä koiria suoritettiin. Tässä osoitamme, että koira suun melanooma, osteosarkooma, hemangiosarkooma, syöttösoluja kasvain, nisärauhassyöpä, ja eturauhasen adenokarsinooma ilmaisi PD-L1, kun taas jotkut muut syöpien ei. Lisäksi PD-1 ilmentyy voimakkaasti kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä saadaan suun kautta melanooma, joka osoittaa, että lymfosyytit tässä syöpätyypin olisi ollut toiminnallisesti loppuun. Nämä tulokset kannustaa voimakkaasti kliininen käyttö PD-1 /PD-L1 estäjien uusia terapeuttisia aineita näitä syöpiä vastaan ​​koirilla.

Citation: Maekawa N, Konnai S, Okagawa T, Nishimori A, Ikebuchi R, Izumi Y, et ai. (2016) immunohistokemiallinen analyysi PD-L1 Expression in Canine Pahanlaatuinen Syövät ja PD-1 Ilmaisu lymfosyyttien Canine Oral Melanooma. PLoS ONE 11 (6): e0157176. doi: 10,1371 /journal.pone.0157176

Editor: Hiroshi Shiku, Mie University Graduate School of Medicine, JAPAN

vastaanotettu: 24 joulukuu 2015; Hyväksytty: 25 toukokuu 2016; Julkaistu: 08 kesäkuu 2016

Copyright: © 2016 Maekawa et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen (Grant Number 16K15042) ja Grant-in-tuki JSPS Fellows (Grant Number 15J01989) Japanista Society for Promotion of Science (JSPS). Tämä tutkimus on (osittain) tukee foorumin Drug Discovery, Informatics, ja Rakenteelliset Life Science (ehdotus nro 2157) Japanista Agency for Medical tutkimus ja kehitys (AMED). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Koirat kehittyy usein spontaani syöpiä, jotka voivat aiheuttaa kuoleman [1] tai vähentää elämänlaatua potilaista. Joukossa pahanlaatuinen syövät, lymfooma, syöttösolukasvainten kasvain (MCT), osteosarkooma (OS), pehmytkudoksen sarkooma, ja rintasyöpä ovat suhteellisen yleisiä [2,3] ja usein tunnustettu hengenvaarallisia tauteja kliinisissä puitteissa. Suun melanoomaa ja hemangiosarkoooma (HSA) ovat myös yleisiä pahanlaatuisten kasvainten koirilla, ja potilaan koirat näihin syöpiin yleensä huonon ennusteen [4,5]. Standardit hoidon kullekin syöpätyypin on perustettu ja onnistuneesti paransi ennustetta; kuitenkin hoidon tulokset eivät aina täytä koska alhainen kohtalaiseen hoitovaste tai rajoitetun elinajan pitenemiseen kertaa.

immunoterapioiden ovat potentiaalisia uusina hoitovaihtoehtoja syöpään. Niistä, immuuni tarkastuspiste-estäjät, kuten anti-ohjelmoidun kuoleman 1 (PD-1) ja anti-PD-ligandi 1 (PD-L1) vasta-aineet osoittivat lupaavia vaikutuksia useisiin pahanlaatuisia kasvaimia ihmisissä [6,7]. Immuunijärjestelmän tarkastusasema molekyyli PD-1 on CD28-perheen reseptorin, joka estää immuunivastetta. PD-1-T-soluilla säätelee negatiivisesti T-solureseptorin signalointi- ja estää sytokiinien indusointi, kuten interferoni-gamma (IFN-γ), interleukiini 2, ja tuumorinekroositekijä-alfan sekä solujen lisääntymistä, jolloin huolto perifeerisen toleranssin tai pysyvyys tietyt taudinaiheuttajat vastaanottavassa [8]. Kaksi ligandeja PD-1 on raportoitu: PD-ligandi 1 (PD-L1) ja PD-L2. PD-L2-ekspressio rajoittuu tietyntyyppisiin soluihin tai kudoksiin, kuten makrofagit ja dendriittisolut, kun taas PD-L1-proteiinin ekspressio voidaan indusoida erilaisia ​​solutyyppejä, mukaan lukien ei-hematopoieettisten solujen. PD-L1-proteiinin ekspressio ei useimmissa normaaleissa kudoksissa; kuitenkin, sen ilmentymistä on raportoitu eri kasvainsoluissa [9,10], ja näin ollen pidetään yhtenä immuunijärjestelmän kiertämisen mekanismeja syövän. Munuaissolukarsinoomassa, mahalaukun syöpä, ja muut syöpäpotilaita, PD-L1-proteiinin ekspression tiedetään liittyvän huonoon ennusteeseen [10-12], mikä osoittaa, että PD-L1 voi olla tärkeä säätelijä immuunijärjestelmää, kun se taistelee syöpää . Vasta-aine, lääkkeet, jotka kohdistuvat tämän reitin häiritä sitoutumista PD-L1-PD-1 ja voi parantaa immuunivasteita kasvainsoluihin [13,14], sen jälkeen tuloksena regressio syövän [15]. Useat kliiniset kokeet ovat osoittaneet, että tavoite vasteet voidaan saada anti-PD-1 tai anti-PD-L1-vasta-aineita potilailla, joilla on pahanlaatuisia syöpiä, mukaan lukien kehittyneet melanooma, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, ja munuaissolukarsinooma [6, 7], ja saatu todisteita osoittaa potentiaalia immuuni tarkistuspiste estäjien syövän hoidossa.

kuitenkin olemassa vain muutamia raportteja PD-1 /PD-L1 akseli koirilla, ja sen yhteys sairauksien jää selvittämistä. Aiemmin olemme raportoineet, että PD-L1 on ilmaistu koira melanooma, MCT, ja munuaissolukarsinooma ja että PD-L1 salpauksesta anti-PD-L1-vasta-aineen tehostaa IFN-γ tuotantoa kasvain infiltroituneen soluihin [16]. Nämä tulokset viittaavat siihen, että anti-PD-L1-vasta-aineilla voi olla terapeuttista vaikutusta syöpien koirilla. Tässä tutkimuksessa arvioida, mitkä syöpätyyppejä voitaisiin kohdistaa, PD-L1-proteiinin ekspression koira pahanlaatuiset syövät tutkittiin tarkemmin. Tässä osoitamme, että koira suun melanooma, OS, HSA, MCT, rintarauhasen adenokarsinooma, ja eturauhasen adenokarsinooma ilmaista PD-L1, mikä viittaa siihen, että PD-1 /PD-L1-akselilla voidaan käyttää immuunijärjestelmän kiertämisen mekanismi näitä syöpiä. Tämän tueksi hypoteesia, PD-1 ilmentyminen säädeltiin kasvainten tunkeutuvia lymfosyyttejä saatu suullista melanooman ja maksan kasvaimet. Ainakin, terapeuttinen potentiaaleja PD-1 /PD-L1 salpaajat suun melanooman ja muiden PD-L1-positiivisia syöpiä ansaitsevat lisätutkimuksia.

Materiaalit ja menetelmät

Koirien näytteitä

eläinten käytössä koko tämän tutkimuksen hyväksyi Institutional Animal Care ja Käytä komitea (sarjanumero hyväksyntä oli # 15-0149), Hokkaido University. Ei eläin lopetettiin varten tässä tutkimuksessa. Kliiniset näytteet koiran tuumorikudoksista kirurgisesti leikattiin klo eläinsairaala, Graduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University ja Veterinary sairaalat Sapporo kaupungissa vuosina 2014-2015. Kun käytöstä tässä tutkimuksessa suostumus saatiin kaikilta omistajien koirista. Aäreisverinäytteiden kliinisesti terveiden koirien kerättiin beagle iässä 12-15 vuosi säilytetään Experimental Animal Facility, Graduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University.

Virtaussytometria

arvioida sitoutumisen spesifisyyden äskettäin perustetun anti-PD-L1-monoklonaalinen vasta-aine (mAb) [17], virtaussytometria-analyysit suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [16], ja joitakin muutoksia. Lyhyesti, koiran melanoomasolulinjoja, Cmec ja CMM-1, jotka ovat PD-L1-negatiivinen normaaliolosuhteissa [16], transfektoitiin pEGFP-N2 vektori tai pEGFP-N2-CPD-L1 vektori [16], käyttämällä Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Yksi päivä transfektion jälkeen solut kerättiin ja värjättiin anti-PD-L1-mAb 6G7-E1 tai isotyypin kontrollivasta-ainetta (rotan IgM) (BD Biosciences, San Jose, CA, USA), jonka lopullinen pitoisuus on 10 ug /ml. Pesun jälkeen soluja inkuboitiin allofykosyaniini-konjugoitu anti-rotta Ig-vasta-aine (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA). Fluoresenssi analysoitiin FACSVerse -virtaussytometrissä (BD Biosciences) ja FCS Express 4 ohjelmisto (De Novo Software, Glendale, CA, USA). Transfektoitujen solujen parannettu vihreän fluoresoivan proteiinin (EGFP) -positiiviset solut porteilla ja käytetään analysointiin.

Sen arvioimiseksi, onko PD-1 ekspressio ylössäädellään yhteydessä koiran syöpien, virtaussytometria-analyysi suoritettiin rajat -reactive anti-ihmis-PD-1-vasta-aine [18]. Perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC: t) ja TIL: issä vasta leikattiin koiran kasvaimen kudokset saatiin kuten aiemmin on kuvattu [16]. Kaikki yhden solun suspensiot valmistettiin mekaanisella menetelmällä. Solut värjättiin optimaalinen pitoisuus on FITC-konjugoitu anti-CD4 /PE-konjugoitu anti-CD8-vasta-cocktail (ABD Serotec, Oxford, UK), ja biotinyloitua anti-ihmis-PD-1-vasta-aine (R 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Anti-PD-L1-vasta-aine 6G7-E1 sitoutuu spesifisesti koiran PD-L1

anti-PD-L1-vasta-aineet joka voi sitoutua koira PD-L1 perustettiin aiemmin [16,17]. Niistä, 6G7-E1 osoitti riittävän sitovia määritettynä immunohistokemialla formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut koira tuumorisektioiden. Voit testata spesifisyyden 6G7-E1 havaitseminen koiran PD-L1, me yritti ensin Western blotting-analyysi canine PD-L1-kani IgG: n Fc-fuusioproteiini [16] positiivisena kontrollina. Mitään sitoutumista ei kuitenkaan havaittu, kun 6G7-E1 käytettiin primaarisena vasta-aineena, kun taas anti-kani-IgG-Fc-vasta-aineella havaittu tietyllä taajuusalueella, (tietoja ei ole esitetty). Koska tämä tulos viittaa siihen, että 6G7-E1 tunnistaa spesifisen konformaation koiran PD-L1, virtaussytometria analyysi koiran melanoomasolulinjojen Cmec ja CMM-1 suoritettiin. Sitovaa havaittiin ei-transfektoiduista tai mock (EGFP vain) -transfected koiran melanoomasoluja, kun taas 6G7-E1 on sitoutunut soluihin transfektoitu canine PD-L1-EGFP (kuvio 1), mikä osoittaa spesifinen sitoutuminen 6G7-E1 koira PD-L1.

Canine melanoomasolulinjoja, Cmec ja CMM-1, transfektoitiin pEGFP-N2 vektorin (vale) tai pEGFP-N2-CPD-L1, ja vasta-aineen sitoutuminen analysoitiin virtaussytometria. Varjostettu alue, musta viiva, ja punainen viiva edustavat tulokset solujen ilman hoitoa, mock-transfektoituja soluja, ja CPD-L1-EGFP-transfektoiduissa soluissa, vastaavasti. (A) sitoutuminen isotyyppikontrollia vasta Cmec; (B) sitoutumista 6G7-E1 Cmec; (C) sitoutumisen isotyypin kontrollivasta-aineen CMM-1; ja (D) sitoutuminen 6G7-E1 CMM-1 on esitetty histogrammeja. O sitoutuminen 6G7-E1 havaittiin mock-transfektoituja tai transfektoimattomia soluja, kun taas spesifinen sitoutuminen havaittiin CPD-L1-EGFP-transfektoiduissa soluissa.

Koirien pahanlaatuiset syövät ilmaista PD-L1

immunohistokemiallinen analyysi suoritettiin havaitsemiseksi PD-L1-proteiinin ekspression eri pahanlaatuisia syöpiä. Yhteensä 110 näytteet testattiin, joista 36 suun melanooma, 7 OS, 6 HSA, 3 luokka III MCT, 4 rintarauhasen adenokarsinooma, ja 3 eturauhasen adenokarsinooma näytteet olivat PD-L1-positiivisia (kuviot 2 ja 3, ja taulukko 1). Sekä sytoplasminen värjäys ja solun pinnan värjäytymistä havaittiin. Määrien PD-L1-ilmentyminen oli 90% (36/40) suun kautta melanooma, 70% (7/10) OS, 60% (6/10) ja HSA, 60% (3/5) ja luokan III MCT , 80% (4/5) ja rintarauhasen adenokarsinooma, ja 60% (3/5), eturauhasen adenokarsinooma (taulukko 1). Toinen 7 kasvaimia, nimittäin okasolusyöpä, hajanainen suuri B-solujen lymfooma, nenän adenokarsinooma, pehmytkudoksen sarkooma, histiosyyttistä sarkooma, siirtymäkauden solu syöpä, ja peräaukon SAC rauhanen syöpä ei ilmaissut PD-L1, vaikka testattu näyte koko oleellisesti rajoitettu (5 tapauksessa kunkin kasvaimen tyyppi).

Formaliinifiksoidusta ja parafinoidut kasvainten kudokset tutkittiin immunohistokemiallisesti. Leikkeet värjättiin anti-PD-L1-mAb 6G7-E1. Edustavia positiivinen värjäykset (A, B) suun melanooma, (C, D) osteosarkooma, ja (E, F) hemangiosarkooma näkyvät. Alkuperäinen suurennus: (A, C, E) 200 x; (B, D, F) 400 x.

Formaliinifiksoidusta ja parafiiniin upotettuja kasvaimen kudokset tutkittiin immunohistokemiallisesti. Leikkeet värjättiin anti-PD-L1-mAb 6G7-E1. Edustavia positiivinen värjäykset (A, B) syöttösoluja kasvain, (C, D) nisärauhassyöpä, ja (E, F) eturauhasen adenokarsinooman näkyvät. Alkuperäinen suurennus: (A, D, E) 200 x; (B) 400 x; (C) 100 x.

PD-1 ilmentyy voimakkaasti kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL) koiran suun melanooman

Jotta voidaan arvioida ilmentymistason PD-1 kasvaimeen liittyvät lymfosyyttien, TIL saatiin kirurgisesti poistettu syöpä kudoksiin, ja virtaussytometrianalyysin tehtiin. Verrattuna perifeerisen veren lymfosyyttejä terveistä koirista, PD-1 ilmentyy voimakkaasti sekä CD8

+ ja CD4

+ TIL suun melanoomaa (kuvio 4,

p

0,05). Positiivinen nopeus PD-1 ilme CD8

+ tai CD4

+ TIL oli 70,9-96,6% eli 80,2-96,8% (taulukko 2). Siinä tapauksessa, maksan kasvainten, optimaalisia ohjaus soluja saatavilla; normaali kudos-tunkeutuvia lymfosyyttejä (_Nils) samoilta henkilöiltä käytettiin. Sekä maksasoluadenooman ja hepatosellulaaristen adenokarsinooma, TIL oli korkeampi ilmentyminen PD-1 kuin Nils (S2 kuvassa), mikä osoittaa, että säätelyä PD-1 ilme saattaisi olla yhteinen fenotyyppi TIL.

TIL kerättiin kirurgisesti poistettu suun melanooma kudosten ja ilmentymisen taso PD-1 arvioitiin virtaussytometrialla. Vasen paneeli, PD-1 ilme CD8

+ lymfosyyttien. Oikea paneeli, PD-1 ilme CD4

+ lymfosyyttien. Perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) saatiin terveiltä koiria käytettiin kontrollina (terveillä verrokeilla, HC).

p

0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä (U-testi).

Keskustelu

Melanooma on suhteellisen yleinen kasvaimen tyyppi, jonka osuus 7% kaikista pahanlaatuisten syöpien ja on yleisin suun maligniteetti koirilla [20]. Koirien pahanlaatuinen melanooma voi esiintyä tukka ihon, suuontelon, kynsien bed, jalka pad, silmä, tai ihon ja limakalvojen risteyksessä [20]. Näistä muodoista, suullinen melanooman pidetään erittäin pahanlaatuisen syövän, koska se usein aiheuttaa vakavia paikallisia invaasiota ja etäpesäkkeitä. Valitettavasti suullinen melanooma on yleensä resistenttejä kemoterapialle, mikä vaikeuttaa hoitoon etäpesäkeleesioita, joka lopulta tappaa sairaita koiria [21]. Puuttuminen tehokkaan systeemisen hoidon kannustaa kehittämään uusia hoitomuodot, kuten immunoterapian. Ihmisillä immuuni tarkastuspiste-estäjät, kuten anti-PD-1 ja anti-PD-L1-vasta-aineita on käytetty hoidettaessa edennyttä melanoomaa, osoittaa lupaavia tehokkuudet, jonka tavoitteena hoitovasteen 28% ja 18%, vastaavasti [6, 7]. Tässä tutkimuksessa immunohistokemiallinen analyysi osoitti, että peräti 90% (36/40) koiran suun melanooman ilmaistu PD-L1, mikä viittaa siihen, että PD-1 /PD-L1 akseli on tärkeä mekanismi immuuni kiertämisen tässä muodossa syöpä . Tämä tulos on hyvin yhdenmukainen aiempien raportti, joka osoitti, että 100% (8/8) suun kautta melanooman ilmaistu PD-L1, kun taas suurin osa melanooma irrotettiin silmästä tai ihon ei ilmaissut PD-L1 [16]. Lisäksi kanssa nämä tulokset, PD-1 ilmentyy voimakkaasti sekä CD8

+ ja CD4

+ TIL saatu suullinen melanooma. Nämä TIL näyttivät käytännöllisesti loppuun, koska immunosuppressiivisia motiiveja, joka tukahduttaa effektorifunktioita T-solujen ihmisen ja hiirillä, on erittäin konservoitunut koiran PD-1 [16]. Ottaen huomioon, että koira pahanlaatuisen melanooman jakaa joitakin yhtäläisyyksiä ihmisen melanooma, estäjiä PD-1 /PD-L1 akseli voisi myös antaa terapeuttiset vaikutukset vastaan ​​koira suun melanoomaa, ja koirat voisi olla hyvä eläinmalli tutkimiseksi terapeuttinen osa PD-1 /PD-L1-inhibiittorit melanoomaa kliinisissä tutkimuksissa.

käyttöjärjestelmä on yleisin luusyöpä koirilla, tunnetaan erittäin metastaattinen ominaisuudet. Kanssa amputaatio yksin, MST koirille OS on vain 19 viikkoa, ja noin 90% koirista kehittää etäpesäkeleesioita [22,23]. Siksi aggressiivinen leikkaus yhdistettynä systeemistä kemoterapiaa on ollut tavanomaista hoitoa varten koirien OS, ja uusia systeemisiä hoitoja on tutkittava. Ihmisillä anti-PD-L1-vasta-aineiden odotetaan olevan terapeuttisia vaikutuksia OS, koska noin 75% (12/16) metastaattisen OS osoitti PD-L1-proteiinin ekspression. Hiirimallissa, anti-PD-L1-vasta-aineen parantunut toiminta sytotoksisia T-lymfosyyttejä ja lisäsi eloonjäämistä kasvainta kantavien hiirten [24]. Koska 70% (7/10) ensisijaisen OS koirilla havaittiin ilmentävän PD-L1, estävät vasta-aineet voivat myös olla terapeuttista tehoa vastaan ​​koiran OS. Voi kuitenkin olla tärkeää huomata, että toisin kuin sen etäpesäkeleesioita, ei ihmisen ensisijainen OS ilmaistu PD-L1 [24], kun taas koira ensisijainen OS ilmaistu PD-L1 suurella nopeudella. Ero PD-L1-ilmentymisen on otettava tarkkaan huomioon kaikessa ekstrapoloimalla havaintoja ihmisen OS tutkimuksia koiran OS tai päinvastoin.

Dogs on suhteellisen suuri riski kehittää HSA [25], joka on pahanlaatuinen syöpä peräisin verisuonten endoteelisoluissa. Ottaen huomioon, että koira HSA on erittäin metastaattinen, adjuvanttihoitoa edelleen tärkeä, vaikka se voi antaa vain vähän hyötyä eloonjäämisen aikoina [26]. Koska angiosarcoma on harvinainen sairaus ihmisissä, raportteja PD-L1-proteiinin ekspression angiosarcoma ovat rajoittuneet [27,28], ja sen terapeuttinen epäsuorasti ei ole hyvin tutkittu. Koska PD-L1-ekspressio havaittiin 60% (6/10) koiran HSA näytteitä, se kannattaa tutkia terapeuttista potentiaalia PD-1 /PD-L1-inhibiittorit uusina systeeminen immunoterapioiden koiran HSA. PD-L1-proteiinin ekspression HSA voi jakaa ominaisuuksia sen peräisin verisuonten endoteelisolujen, koska verisuonten endoteelisolut ilmentävät PD-L1 vastauksena useita sytokiineja kuten IFN [29,30]. Se voi olla kohtuullista olettaa, että HSA käyttää PD-1 /PD-L1-akselin immuunivasteen kiertämisen mekanismia, koska PD-L1 verisuonten endoteelisolujen on raportoitu säädellä negatiivisesti CD8

+ T-soluvasteiden, kuten IFN- γ tuotanto ja sytolyyttinen aktiivisuus [30].

MCT on yleisin ihon syöpä koirilla, ovat noin 21% kaikista koirien ihokasvainten [31]. Vaikka kliininen käyttäytyminen MCT voi vaihdella, histologista arviointia [19] on laajalti käytetty ja katsotaan olevan luotettava ennustetekijä MCT koirille. Mukaan Bostock

et al

., Korkealaatuista tai erilaistumaton MCT, MST on vain 13 viikkoa [32] ja metastaattisen osuus on niinkin korkea kuin 56-96%. Tässä tutkimuksessa korkea-asteen (Patnaik luokka III) MCT analysoitiin PD-L1-ilmaisun, ja 60% (3/5) näytteistä oli positiivinen värjätään. Tämä tulos on myös hyvin vastaa meidän edellisessä raportissa, jossa 66,7% (4/6) luokan III MCT osoitti PD-L1 ilmaisun [16]. Vaikka jotkut solunsalpaajahoito lääkkeet ja KIT tyrosiinikinaasin estäjät, kuten imatinibi ja toseranibi on käytetty hoitoon MCT systeemisesti, immuuni tarkastuspiste-estäjät kohdistettu PD-1 /PD-L1-akselilla on myös mahdollista sisällyttää hoidossa MCT koska syntyminen lääkeresistenssin havaitaan joskus kemoterapian aikana, mukaan lukien kanssa KIT estäjiä. Vaikka PD-L1-proteiinin ekspression luokan I tai II MCT vielä tutkittava, PD-L1-ilmentyminen voi johtua biologista käyttäytymistä MCT koska se ajaa CD8

+ T-solujen tukahduttaminen ja helpottaa etäpesäke hiiren syöpä malleissa [33 ]. Lisätutkimukset ovat tarpeen sen arvioimiseksi, PD-L1-ilmaisua voidaan käyttää ennustetyövälineenä markkerina tätä monimutkaista ja heterogeeninen syöpä.

rintarauhasen kasvaimet ovat yleisimpiä kasvaimet seksuaalisesti ehjä naisten koiria, osuus 70% kaikista syöpätapauksista tässä alaryhmässä [34]. Niistä pahanlaatuisia nisäkasvaimia, rintarauhasen adenokarsinooman edustaa yhteistä histopatologian, ja koiria, joilla nisärauhassyöpä käsitelty pelkkä leikkaus joskus kärsii uusiutumisen ja /tai etäpesäkkeitä. Kemoterapia on joitakin etuja maitorauhasen maligniteetit; Kuitenkin monissa tapauksissa se ei ole parantava, ja korvaavat tai täydentävät systeemisiä hoitoja on selvitettävä. Ihmisissä, PD-L1-proteiinin ekspression tuumorisoluissa havaittiin 34% (15/44) potilailla, joilla on rintasyöpä, ja sen ekspressio korreloi merkitsevästi joitakin tärkeitä ennustetekijöitä, kuten ilmentymistä hormonireseptorit [35]. Koirilla 80% (4/5) ja nisärauhassyöpä näytteet ilmaisivat PD-L1, vaikka sen yhteys ennusteeseen jää epäselväksi. Lisäksi tutkimus suhdetta ilmentymisen aseman PD-L1 ja ennusteen tapauksessa koiran nisäkasvaimia tulisi suorittaa, ja se kannattaa ainakin arvioida terapeuttista potentiaalia PD-1 /PD-L1-estäjät uutena systeemisiä hoitoja vastaan ​​syöpään.

Eturauhasen adenokarsinooma on suhteellisen harvinainen tauti uroskoirilla. Vaikka esiintyvyys on alhainen, eturauhasen adenokarsinooma usein syntyy, kun kliininen ongelma, koska paikallinen eteneminen ja metastaasit ovat yhteisiä jälkitauteja. Tuolloin diagnoosin, alueellisten ja etäinen etäpesäkkeitä löytyy useimmiten ja MSTs koirille ilman hoitoa pidetään alle kuukausi [36]. Tähän mennessä ei ole yksimielisyyttä varten tavanomaista hoitoa on saavutettu, ja tavanomaiset hoidot kuten leikkaus, sädehoito ja kemoterapia ovat lievittävä useimmissa koirilla. Ihmisillä, 50% (8/16) kastraation kestävä eturauhassyöpä (CRPC) tapauksia raportoitiin ilmaista PD-L1 [37]; kuitenkin, yksikään CRPC potilailla, jotka saivat anti-PD-1-vasta-aine oli objektiivinen vaste kliinisessä tutkimuksessa [6]. Ei vaste CRPC potilailla johtuu mahdollisesti puuttuessa PD-L1-ilmentyminen kasvainkudoksessa, vaikka vain muutaman näytteitä osallistuneista potilaista tutkittiin ja sen todettiin olevan PD-L1-negatiivinen [6,38]. Tässä tutkimuksessa, PD-L1 ilmentyi 60% (3/5) koiran eturauhasen adenokarsinooma näytteitä, mutta vaikuttivat hoitoon epäselvät. Lisätutkimukset yhdistyksen PD-L1-proteiinin ekspression kanssa hoitotulokseen tulisi tehdä, ja koirat voivat olla tehokas eläinmalli ihmisen eturauhassyövän koska koira eturauhasen adenokarsinooma osakkeita joitakin ominaisuuksia, ihmisen eturauhassyövän kannalta sen spontaani esiintyminen, metastaattisen taipumus ja PD-L1-proteiinin ekspression.

muiden syöpien testattiin tässä tutkimuksessa ei havaittu PD-L1-proteiinin ekspression. Koska PD-L1-proteiinin ekspression nämä kasvaimet voivat johtua eroista alkuperä kasvainsolujen, kasvaimen ja /tai immunologiset kunto kunkin syöpä. Koska otoskoko testataan tässä tutkimuksessa oli erittäin pieni, edelleen analysointi on tehtävä ennen päätöksen tekemistä ilmenemistä asemasta PD-L1 näissä syövissä. Äskettäin sääntelymekanismeja PD-L1-ilmentyminen ihmisillä on tutkittu laajasti. Yksi mekanismi, joka indusoi PD-L1-proteiinin ekspression tuumorisoluissa on vastaus IFN-γ [9], joka on todennäköisesti tuotettu immuunijärjestelmän soluja kasvaimen mikroympäristössä aikana antitumor immuunivasteita. Koska PD-L1-proteiinin ekspression koiran syövän solulinjoissa indusoitiin tai parantaa koiran IFN-γ hoito [16], tämä mekanismi on todennäköisesti myös osallisena säätelyssä PD-L1 koirilla. Toinen mekanismi liittyy onkogeenisella signalointia; menetys fosfataasin ja tensin homologi (PTEN) toimintaa on ilmoitettu upregulate PD-L1-proteiinin ekspression gliooma ja triple-rintasyöpäsolujen [39,40]. Koirilla, mutaatio ja /tai menetystä PTEN raportoitiin myös melanooman, OS, HSA ja pahanlaatuiset maitorauhasen kasvaimia [41-44]. Tämä saattaa osaltaan ainakin osittain poikkeava PD-L1-proteiinin ekspression näiden syöpien koirilla.

Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen raportti PD-L1-proteiinin ekspression eri koiran pahanlaatuiset syövät . Expression analyysin PD-L1 on merkittäviä vaikutuksia kliinisessä soveltamisessa PD-1 /PD-L1-estäjien koirilla, koska ihmisen kliinisissä kokeissa anti-PD-1-vasta-aine, PD-L1-ekspressiota raportoitu liittyvän hoitotulokseen. Potilaat, joilla PD-L1-positiivisia kasvaimia oli objektiivinen hoitovaste 36%, kun taas yksikään potilaista PD-L1-syöpäkasvain oli objektiivinen vaste [6]. Tuloksemme antaa perustiedot osallistumista PD-1 /PD-L1-akselilla koiran syöpäimmunologian ja voimakkaasti kannustaa kehittämään uusia immunoterapioiden kohdistaa PD-1 /PD-L1-reitin koirilla. Koska anti-PD-L1-vasta-aineiden osoitettiin olevan terapeuttinen potentiaali koirien syöpiin [16], kliinisiä sovelluksia anti-PD-L1-vasta-aineet ansaitsevat lisätutkimuksia.

tukeminen Information

S1 Kuva. Edustavia immunohistokemia kanssa isotyyppiyhteensovitettu kontrolli vasta-aineella.

Oral melanooma näyte värjättiin rotan lgM isotyypin kontrollivasta-ainetta. Mitään värjäytymistä ei havaittu. Alkuperäinen suurennus, 200 ×.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0157176.s001

(TIF)

S2 Kuva. PD-1 ilme TIL saatujen maksan kasvaimista.

TIL saatu (A) hepatosellulaarinen adenooma ja (B) hepatosellulaarista adenokarsinooman analysoitiin PD-1 ilmentymisen virtaussytometrialla (punainen viiva). Normaali kudos-tunkeutuvia lymfosyyttejä (_Nils) saatu viereisen terve maksa kudoksen samat henkilöt (sininen viiva) käytettiin kontrollina. Musta viiva, isotyyppikontrollia TIL. Varjostettu alue, isotyyppikontrollia Nils.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0157176.s002

(TIF) B