Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tunnistaa sopivia ehdokkaita aggressiivinen hoito tällaisten kuten eturauhasen tai sädehoidon paikallinen eturauhassyöpä (PCA), uusi ennustava biomarkkerit eturauhassyövän aggressiivisuus ovat välttämättömiä. Core 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) on keskeinen entsyymi, joka muodostaa ytimen 2-haarautunut

O

glykaanien. Sen ilmentyminen liittyy etenemiseen useita syöpiä. Olemme perustaneet hiiren IgG monoklonaalinen vasta-aine (mAb) vastaan ​​GCNT1 ja tutkittiin suhdetta GCNT1 ilmentää kliinis tilan PCa. Parafinoidut PCa näytteet analysoitiin immunohistokemiallisesti varten GCNT1 ilmaisun käyttämällä äskettäin perustetun hiiren anti-GCNT1 mAb itse. GCNT1-positiivinen kasvain osoitti merkittävästi korkeammat Gleason pisteet ja suurempi kasvaimen tilavuus. Lukumäärä GCNT1-positiivisia tapauksia oli merkitsevästi pienempi tapauksissa elimeen rajoittunut tauti kuin tapauksissa ekstrakapsulaari- laajennus. GCNT1-syöpäkasvain liittyi huomattavasti parempi prostataspesifinen antigeeni (PSA) vapaa eloonjääminen verrattuna GCNT1-positiivisia kasvaimia. Monimuuttuja-analyysi paljasti, että havaitseminen GCNT1 ilmentyminen oli itsenäinen riskitekijä PSA toistumisen. Perustimme uusia menetelmiä GCNT1 havaitsemiseksi PCA yksilöitä. Immunoblottaus käytettiin tutkimaan jälkeisen eturauhasen (DRE) virtsa PCA potilaista. Yli 90% GCNT1-positiivisten PCa potilailla, joilla on suuria pitoisuuksia PSA osoitti ekstrakapsulaarinen laajennus. Lopuksi GCNT1 ilmaisu tiiviisti yhdistää kanssa aggressiivinen potentiaalia Eturauhassyövän. Lisätutkimuksia pyritään kehittämään GCNT1 havaitsemisen jälkeiseen DRE virtsa markkerina PCA aggressiivisuus.

Citation: Kojima Y, Yoneyama T, Hatakeyama S, Mikami J, Sato T, Mori K, et al. (2015) havaitseminen Core 2 β-1,6-

N

-Acetylglucosaminyltransferase in Post-eturauhasen virtsa on luotettava indikaattori ekstrakapsulaarinen laajentaminen Eturauhassyöpä. PLoS ONE 10 (9): e0138520. doi: 10,1371 /journal.pone.0138520

Editor: Ming Tat Ling, Queensland University of Technology, AUSTRALIA

vastaanotettu: 27 huhtikuu 2015; Hyväksytty: 1. syyskuuta 2015 mennessä; Julkaistu: 21 syyskuu 2015

Tämä on avoin pääsy artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 julkisuuteen omistautumista

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoittajat: Japani Society for Promotion of Science (https://www.jsps.go.jp/), Grant-in-Aid nuorten tutkijoiden (B) 24791631 ja Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen (C) 15K10569 (YT); Japan Society for Promotion of Science (https://www.jsps.go.jp/), Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen (B) 22390301, Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen (A) 15H02563 ja apuraha in-tuki Haastava kartoittava tutkimus 24659708 (CO); National Institutes Health Avustukset UO1 CA168924 (MF); Suzuki Urologisessa Research Foundation, tutkimus avustus 2014 (YT). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Lyhenteet : DRE, eturauhasen; GCNT1, core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1; HRP, piparjuuriperoksidaasi; mAb, monoklonaalinen vasta-aine; PCA eturauhassyöpä; PSA, eturauhasen-antigeeni; RLU, suhteelliset valoyksiköt

Johdanto

Yhdysvalloissa ja Euroopassa, eturauhasen syöpä (PCA) on yleisin maligniteetti miehillä ja toiseksi suurin syy syöpään liittyvä kuolema [1 , 2]. Ilmaantuvuus PCa on tiettävästi alhainen Aasian maissa [3]. Kuitenkin sen esiintyvyys kasvaa nopeasti Aasian-Tyynenmeren alueella [4]. Jotkut kaikkein kriittisiä kysymyksiä, jotka liittyvät PCa kliinisessä käytännössä ovat ylidiagnostiikka ja ylihoito [5]. Puute spesifisyyden eturauhasen antigeenin (PSA) testaus on johtanut keskustelun hyödyllisyydestä PSA-pohjainen PCa seulonta [6, 7]. Lisäksi tarpeeton hoito indolent PCa alhaisella pahanlaatuinen potentiaali on tärkeä asia, koska aggressiivinen PCa hoito on joskus liittynyt haittavaikutuksia. Lupaava vaihtoehtoinen modality estää ylihoito on aktiivinen valvonta [8]. Kuitenkin voidaan määrittää soveltuvat potilaat, jotka ovat hyviä ehdokkaita aggressiivinen hoito liittyy vaikeuksia. Tähän mennessä ei ole olemassa täydellisiä työkaluja määritystä hyvä ehdokas aktiivinen valvonta [9]. Siksi tunnistaminen ja validointi biomarkkerit Eturauhassyövän aggressiivisuus ovat tärkeitä estämään PCa ylihoito.

Preoperatiivisen seerumin PSA tasot ja koepalan Gleason tulokset ovat tavanomaisia ​​ja tehokkaita ennustavia biologiset vaikutukset jälkeen eturauhasen PCA [10, 11] . Parantaa riski kerrostuminen PCA uusiutumisen jälkeen ensisijainen potilailla, joilla oli paikallinen PCA monet tutkijat ovat pyrkineet biomarkkereita, jotka kuvastavat aggressiivinen potentiaali Eturauhassyövän [12]. Kuitenkin suurin osa raportoitu biomarkkereiden ei ole validoitu toimittamaan tiedot, jotka on enemmän hyötyä kuin mitä tavanomaisilla kliinis parametreja. Romaani biomarkkereiden edustaa pahanlaatuistumisriskin PCA tarkempi ennustaminen PSA uusiutumisen ja asianmukaisen hoidon valinta voi olla mahdollista.

Solun pinnan hiilihydraatti- rakenteita muuteta syövän synnyn ja tärkeitä rooleja syövän etäpesäkkeiden [13, 14 ]. Läsnäolo sialyyli Lewis X, joka on yksi toiminnallinen päätelaitteen rakennetta, solun pinnalla paksusuolen syövän korreloi positiivisesti huonon ennusteen [15]. Samalla tavalla, korkean Gleason viereen eturauhassyövän näytteet ilmaisivat sialyyli Lewis X [16]. Haaroitus glykaanin on lisääntynyt toiminnallinen päätelaitteen rakennetta, ja sitoutumisaffiniteetti lektiinejä [17]. Aikaisemmissa tutkimuksessa mannosyyl (alfa-1,6 -) – glykoproteiinin β -1,6-

N

asetyyli-glukosaminyylitransferaasia (MGAT5) ja Core 2 β -1, 6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) muodostettu GlcNAc β1,6 haarautuva glykaanitähteen lisääntynyt PCa aggressiivisuus [18, 19].

GCNT1 [20, 21] on keskeinen entsyymi, joka syntetisoi core 2-haarautunut

O

glykaanien kataly- siirto

N

-acetylglucosamine alkaen uridiini diphosphate-

N

-acetylglucosamine kanssa β1, 6-sidoksessa a-

N

– asetyyligalaktosamiini ytimestä 1

O

glykaani (kuvio 1A). Aiemmassa tutkimuksessa on analysoitu

GCNT1

mRNA ilmaisu makeassa peräsuolen kasvain näytteet ja osoittivat, että ilmentyminen core 2-haarautunut

O

glykaanien läheisesti korreloi pahanlaatuinen potentiaalia kolorektaalisyövän [22]. Tämä pätee myös keuhkojen adenokarsinooma [23]. Immuunihistokemiallisessa käyttäen polyklonaalista vasta-ainetta [21], olemme osoittaneet, että GCNT1 ilmentyminen liittyy läheisesti aggressiivinen potentiaalia PCa [18], kivessyöpä [24], ja virtsarakon syöpä [25]. Viime tutkimuksessa, geenin ilmentyminen array osoitti GCNT1 yliekspressoitiin eturauhassyöpäkudoksen [26]. Kuitenkin perustaminen monoklonaalinen anti-GCNT1 vasta-aine on olennaista lisätutkimuksia, mukaan lukien validointitutkimuksia valaista kliininen hyöty GCNT1 biomarkkerina.

(A) biosynteesireiteissä varten

O

glykaanien. (B) PCa näytteitä inkuboitiin anti-core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) monoklonaalinen vasta-aine (mAb), jota seurasi piparjuuriperoksidaasiin (HRP) konjugoitua sekundääristä vasta-ainetta . Counterstaining suoritettiin käyttäen hematoksyliinillä. GCNT1-positiiviset syöpäsolut ovat ruskeita. (C) Prostate antigeenin elinaika jaksoja verrattiin toisiinsa GCNT1-positiivisten ja GCNT1-negatiivisia yksilöitä. Survival analysoitiin Kaplan-Meier -käyrät.

Täällä esiin monoklonaalinen vasta-aine (mAb) vastaan ​​GCNT1 immunisoimalla hiiri GCNT1 spesifistä peptidiä (S1 File) on arvioitava mahdollisuudet jälkimmäisen indikaattorina PCa aggressiivisuus. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että anti-GCNT1 mAb osoittivat korkea spesifisyys ihmisen GCNT1 ja että GCNT1 ilmaisun PCA yksilöitä eturauhasen korreloi PCa aggressiivisuus. Lisäksi havaitseminen GCNT1 jälkeisessä eturauhasen (DRE) virtsa anti-GCNT1 mAb ennustettu ekstrakapsulaarinen laajentaminen PCa. Siksi havaitseminen GCNT1 jälkeisessä DRE virtsa voi olla vähän invasiivisia menetelmä ennustaa PCa aggressiivisuutta.

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

ISOGEN II Reagent hankittiin Nippon Gene (Japani). Puhdistettu kaniinin anti-hiiri-IgG-vasta-ainetta (γ-ketjuspesifinen) hankittiin Zymedin. Piparjuuriperoksidaasi (HRP) konjugoitua vuohen anti-kani-IgG (H + L) -vasta-aineella ja HRP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG-vasta-aine hankittiin Cell Signaling Technology. HRP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG-vasta-aine hankittiin Millipore. Puhdistettua hiiren myelooma-proteiini MOPC 21 (IgG, κ), 2-merkaptoetanolia, ja naudan seerumin albumiinia (BSA) hankittiin Sigma-Aldrich. Tween-20 hankittiin Wako Pure Chemicals (Japani), kuten oli DMEM ja Hamin F12 -alustassa. Penisilliini G /streptomysiiniliuoksella oli Hyclone. Precision Plus Protein standardien Dual Color olivat Bio-Rad, ja rasvaton maito oli peräisin Yukijirushi (Japani).

Solut

kiinanhamsterin munasarja (CHO) soluja pidettiin alfa muuttaminen Eaglen vähintään essential medium (α-MEM), jota oli täydennetty 100 U /ml penisilliiniä, 100 ug /ml streptomysiiniä ja 10% naudan sikiön seerumia (FBS).

immunohistokemiallinen analyysi PCa näytteet

Vuosien 2005 ja 2011, 250 PCa potilasta sai eturauhasen laitoksella urologian, Hirosaki University Graduate School of Medicine, Hirosaki, Japani. Kasvain Näytteet Formaliinifiksoidusta ja upotettiin parafiiniin. Parafiini näytteet inkuboitiin 5 ug /ml hiiren anti-humaani GCNT1 mAb (klooni HU127), jonka jälkeen inkuboitiin HRP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG-vasta-ainetta (H + L, Millipore).

immunoblottaus-analyysi post-DRE virtsanäytteet

Post-DRE virtsan täytettiin 50 ml: n kartioputkiin, jäädytettiin välittömästi ja säilytettiin -80 ° C: ssa analyysiin asti. Post-DRE virtsanäytteistä kerättiin 35 potilasta, joille tehtiin eturauhasen 2010-2013 laitoksella urologian, Hirosaki University Graduate School of Medicine, Hirosaki, Japani. Jäädytetyt näytteet sulatettiin yön yli 4 ° C: ssa ja sentrifugoitiin lyhyesti (5000 x

g

, 5 min) erottamaan supernatantti ja kiinteät aineet. Viisikymmentä mikrolitraa supernatanttia täpliksi nitroselluloosakalvolle. Membraani kiinnitettiin post-DRE virtsan proteiinia inkuboitiin anti-GCNT1 mAb (HU127), mitä seurasi HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen. Signaaleja, jotka edustavat GCNT1 olivat entsymaattisesti havaittiin käyttäen Novex® ECL kemiluminesenssisubstraatilla Reagent Kit (Life Technologies), ja visualisoida ChemiDocXRS + System (Bio-Rad). Signaalin keskiarvot mitattiin Image Lab ohjelmisto (Bio-Rad). Määrä GCNT1 ilmentymisen laskettiin perustuen signaalin keskiarvoa ihmisen rekombinantti GCNT1 (R Hyväksyntänumero: 2014-195). Tutkimus suoritettiin mukaisesti eettisiä Helsingin julistuksen.

Staging ja luokittelu kasvaimia

Kaikki potilaat ennen leikkausta arvioitiin käyttämällä DRE, seerumin PSA testaus, luu skannaus, lantion laskennallinen tomografia, ja transrectal ultraääni. Käyttämällä 18-G neulaa, 6-12 eturauhasen neulabiopsiaan näytteet saatiin ultraääniohjauksessa. Staging suoritettiin käyttäen 2002 American sekakomitean Cancer Staging Manual [27], kun taas Gleason pisteytysjärjestelmä käytettiin kasvaimeen luokittelua [28].

PSA mittaus ja potilaiden seurantaan

seerumin PSA-pitoisuudet määritettiin käyttäen IMx (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Leikkauksen jälkeinen PSA-pitoisuudet katsottiin korotetaan (PSA uusiutumisen), jos ne ≥ 0,2 ng /ml kahden peräkkäisen käyntien 1 kuukauden välein. Nolla-aika määriteltiin päivä leikkauksen. Potilaat, joilla on jatkuvasti havaittavia PSA-arvot ( 0,001 ng /ml) leikkauksen jälkeen kirjattiin toistuminen hetkellä nolla. Seuranta välein laskettiin alkaen leikkaus aikana viimeisestä seuranta (mediaani 48,4 kuukautta alue, 13,2-+82,9kuukausi).

Tilastollinen

khiin neliö testillä analysoimiseksi yhdistys GCNT1 aseman kliinisten ja histopatologisten parametrit. PSA-elinaika arvioitiin käyttäen Kaplan-Meier käyrät ja ryhmien välisiä eroja arvioitiin käyttäen log-rank-testi. Käytimme SPSS 21.0 ohjelmistopaketti (SPSS, Chicago, IL) kaikille tilastollisia analyysejä. Optimaalinen PSA ja GCNT1 ilmaisun cut-off-arvot lasketaan seuraavan kaavan avulla: cut-off = (1 – herkkyys)

2 + (1 – spesifisyys)

2 [29, 30].

tulokset

GCNT1 ilmaisun PCA positiivisesti korreloi syövän etenemiseen ja PSA uusiutumisen

vahvista vasta-spesifinen GCNT1, hiiren anti-ihmisen GCNT1 vasta-aine puhdistettiin hybridoomasupernatantista. Annoksesta riippuvainen sitoutuminen hiiren anti-humaani-GCNT1 mAb (klooni HU127) immobilisoituun rekombinantti ihmisen GCNT1 (rhGCNT1) detektoitiin käyttämällä HRP-konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) (S1A kuvio). Koska immobilisoitu rhGCNT1, ei vasta-aineen sitoutuminen havaittiin (S1B kuvio). Immunoblottauksella analyysi, HU127 anti-humaani-GCNT1 mAb sitoutui spesifisesti rhGCNT1, mutta ei rhGCNT3 (S1C kuvio). HU127 anti-humaani-GCNT1 mAb myös havainnut ohimenevän ilmentymisen GCNT1 CHO-soluissa (S1D ja S1E kuviossa). Kun kyseessä on HU127 anti-humaani-GCNT1 mAb esisekoittaa GCNT1 peptidiantigeenillä ennen inkuboinnin immunohistokemia ja immunoblottaus, The GCNT1 signaalit vähentynyt (S1F ja S1G kuviossa). Tulokset ehdotti myös, että HU127 anti-ihmisen GCNT1 mAb pystyssä spesifisyys vastaan ​​GCNT1.

arvioimiseksi roolin GCNT1 PCA etenemisen PCA näytteet analysoitiin immunohistokemiallisesti käyttämällä HU127 anti-ihmisen GCNT1 mAb. Tulokset osoittivat, että GCNT1 oli heikosti ilmaistu terveillä eturauhaset. Sen sijaan osalle Eturauhassyövän soluja ilmaisivat merkittävästi parannetaan GCNT1 (kuvio 1 B). Kun lajiteltuina näillä kriteereillä PCA yksilöt 250 potilasta näytteillä eri kliinisten parametrien (S1 taulukko). GCNT1 ilmentyminen prostatektomia näytteet korreloi positiivisesti leikkauksen Gleason pisteet. Yli 80% tuumorin näytteiden kanssa ekstrakapsulaarinen laajentamisen PCa (pT3 ja pT4) ilmaistuna GCNT1, ja GCNT1-positiivisia kasvaimia olivat merkittävästi suurempia kuin GCNT1-syöpäkasvain (S2 taulukko).

Kuten kuviossa 1C, GCNT1 positiivisia potilaita olivat huomattavasti suurempi riski PSA uusiutumisen jälkeen eturauhasen. Mukaan Monimuuttuja-analyysissä, PSA-arvot, marginaali tila, ja GCNT1 ilmentyminen kasvaimen olivat riippumattomia riskitekijöitä PSA toistumisen (taulukko 1).

Detection of GCNT1 jälkeiseen DRE virtsan Eturauhassyövän potilaiden avulla ennustaminen ekstrakapsulaarinen laajentaminen Eturauhassyövän

Muodosta semikvantitatiivinen suurikapasiteettisten näyttö GCNT1 ilmaisun jälkeinen DRE virtsanäytteet, jotka sisältävät suuria pitoisuuksia PCa proteiinien analysoitiin dot-taudille menetelmällä käyttäen anti-ihmisen GCNT1-vasta-ainetta (kuvio 2). Ennustaminen ekstrakapsulaarinen laajentaminen Eturauhassyövän on hyvä ennustaja PSA toistumisen (S2 Kuva). Alkuperäinen PSA taso ja GCNT1 ilmaisun korreloivat voimakkaasti ekstrakapsulaarinen laajentamista PCA logistisen regressioanalyysin (taulukko 2). Optimaalinen raja-arvot PSA ja GCNT1 ekspressiotasoja määritettiin olevan 7,52 ng /ml ja 79,36 pg /mg vastaanotin-operaattori ominaiskäyrä ennustamiseksi ekstrakapsulaarinen laajentaminen PCa käyttäen seuraavaa kaavaa: cut-off = (1 – herkkyys)

2 + (1 – spesifisyys)

2 [29, 30] (Kuva 3A-3C). Näiden pohjalta kliinis parametrien loimme seuraavaa toistumisen riskiä stratifications: kaksinkertainen negatiivinen riski (PSA 7,52 ng /ml, GCNT1 79,36 pg /mg), yksi positiivinen riskin (PSA 7,52 ng /ml tai GCNT1 79,36 pg /mg) ja kaksinkertainen positiivinen riskin (PSA 7,52 ng /ml ja GCNT1 79,36 pg /mg). Yli 90% kaksinkertainen positiivisia riskin potilailla oli ekstrakapsulaarinen laajentamista PCA tämä riski kerrostuminen (kuvio 3D). Nämä tulokset osoittavat, että korkea PSA-pitoisuus ja GCNT1 ilmaisun jälkeisen DRE virtsa ovat hyviä ennustajia ekstrakapsulaarinen laajentamisen PCa.

(A) Post-eturauhasen virtsanäytteitä kerättiin ja (B) sentrifugoitiin. (C) Supernatantit kerättiin ja huomasi nitroselluloosakalvolle. (D) Core 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) havaittiin anti-GCNT1 monoklonaalinen vasta-aine, jota seurasi piparjuuriperoksidaasiin (HRP) konjugoidun vasta-aineen. (E) jälkeen käsittelemällä kemiluminesenssin reagenssia, GCNT1 signaali on tallennettu, jonka ChemiDoc + järjestelmä.

(A) Prostate-antigeenin (PSA) pitoisuus ja (B) Core 2 β-1,6 –

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) ekspressiotasot olivat merkittävästi korkeampia eturauhassyövässä (PCA) potilailla, joilla on ekstrakapsulaarinen laajennus kuin potilailla, joilla elimeen rajoittunut tauti. (C) Vastaanotin-operaattori ominaiskäyrä analyysi PSA: n ja GCNT1 osoitti, että pinta-ala käyrän PSA oli 0,7455 ja GCNT1 oli 0,7614. (D) Risk kerrostuneisuus määritettiin käyttämällä PSA ja GCNT1 ennustaa paikallisten PCa. Double negatiivinen (DN) -risk (PSA 7,52 ng /ml, GCNT1 79,36 pg /mg), yksi positiivinen (SP) -risk (PSA 7,52 ng /ml tai GCNT1 79,36 pg /mg) ja kaksinkertainen positiivinen (DP) -risk (PSA 7,52 ng /ml ja GCNT1 79,36 pg /mg) potilasta verrataan.

keskustelu

Aberrant glykosylaatiota solun pintaglykoproteiinien on tärkeä rooli syövän aloittamista, leviämisen, invaasio, ja etäpesäkkeiden [31-33]. Biosynteesi oligosakkarideja glykoproteiinien suoritetaan konsertti useita glykosyylitransferaaseihin. Toiminnallinen päätelaite rakenteen, kuten sialy Lewis X (sLex) ja sialyyli Lewis A (Slea) on myös muodostettu glykosyylitransferaasien [16, 34]. SLex ja Slea, jotka olivat laajalti tunnettu ligandi hiilihydraattia sitovien proteiinien, jotka liittyvät läheisesti etäpesäkkeiden [35]. Ei vain SLE antigeenejä, mutta myös sisäisiä rakenteita, erityisesti GlcNAc beta1,6 haarautuvia rakenteita ja polylactosamines, liittyvät läheisesti syövän maligniteetin [22, 31]. GCNT1 on yksi glykosyylitransferaasien, joka muodostaa ytimen 2

O

glykaanien pinnalla lymfosyyttien ja erilaisten syöpäsolujen [18, 24, 36, 37]. Aiemmin on raportoitu, että GCNT1 ilmentyminen liittyy metastaattista potentiaalia kolorektaalisyövän [22], keuhkosyöpä [23], kivessyöpä [24] ja PCa [18]. On myös raportoitu, että GCNT1 ilmentäviä syöpiä voi paeta isännän immuunivastetta [25, 38], etenkin isäntä luonnollisten tappajasolujen, jotka sitoutuvat galektiini-3 core 2-haarautuva

O

glykaanien [25 , 38].

tutkimus perustanut mAb vastaan ​​GCNT1 ja arvioitiin sen mahdollisuuksia indikaattorina PCa aggressiivisuus. Immunohistokemiallinen analyysi eturauhasen yksilöitä osoitti GCNT1 ilme PCa soluissa liittyy läheisesti ekstrakapsulaarinen laajentamiseen PCa (kuvio 1). Lisäksi potilailla, joilla on GCNT1-positiivisten PCa näytteillä huonompi PSA elinaika verrattuna potilaisiin, joilla GCNT1-syöpäkasvain (kuvio 1). Nämä tulokset osoittavat, että GCNT1 ilmaisua voimakkaasti korreloi pahanlaatuinen potentiaalia Eturauhassyövän.

Vaikka immunohistokemia tarjotaan paljon tietoa proteiinin ilmentymistä PCA analyysissä ei ollut kvantitatiivinen. Käyttämällä jälkeinen DRE virtsa, perustimme semikvantitatiivinen ja korkea-seulonnan pahanlaatuinen potentiaalia Eturauhassyövän (kuviot 2 ja 3). Viimeaikaiset tutkimukset raportoitu, että eturauhassyövän antigeeni 3 ja TMPRSS2: ERG fuusio oli kaksi eniten hyödyllisiä indikaattoreita Eturauhassyövän. Näitä markkereita keskittyivät mahdollisille PCa seulontaa ja varhaista havaitsemista PCa [39]. Eturauhassyöpä antigeeni 3 ja TMPRSS2: ERG fuusio lähes raportoitu PCR-based study ja eivät esittäneet riittäviä biologisia todisteita Eturauhassyövän aggressiivisuus. Meillä on myös raportoitu, että havaitseminen poikkeavan glykosylaation PSA parantunut PCa seulonta, mutta ei ennustanut PCa aggressiivisuus [40]. Tässä tutkimuksessa GCNT1 ilmaisu jälkeisissä DRE virtsaa korreloi ekstrakapsulaarinen laajentamisen PCa. Lisäksi yhdistelmä alkuperäisen PSA-pitoisuus ja GCNT1 ilmaisun voisi ennustaa ekstrakapsulaarinen laajennus yli 90%: Eturauhassyövän. Siksi GCNT1 havaitseminen jälkeisissä DRE virtsan parantunut ennustaminen Eturauhassyövän invasiivisuus.

Koska GCNT1 ei ole syöpä-spesifistä proteiinia, sen ilme oli sopimaton PCA seulontaan. Näin ollen, yhdistelmä raportoitiin PCa seulontamarkkereiden ja GCNT1 voi parantaa terapeuttisten strategioiden kehittämisen Eturauhassyövän. Vaikka mekanismi GCNT1 perustuvan sääntelyn syövän etenemisen tunnetaan huonosti, meidän tutkimus osoittaa, että GCNT1 voi olla ennustaja pahanlaatuinen potentiaalia Eturauhassyövän. Edelleen kliininen tutkimus on tarpeen määrittää hyödyllisyys GCNT1 biomarkkerina Eturauhassyövän.

tukeminen Information

S1 Kuva. Valmistaminen anti-ihmis-core 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 monoklonaalinen vasta-aine.

(A) Sidonta on core2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 (GCNT1) spesifisen vasta-aineita. Viljelysupernatantit valmistettiin HU127 hybridoomasoluja. Sitovat anti-ihmisen GCNT1 monoklonaalinen vasta-aine (mAb, sininen viiva) tai IgG myelooma MOPC 21 (kontrolli, oranssi linja) immobilisoituun ihmisen rekombinantti GCNT1 pitoisuudesta riippuvaisella tavalla (x-akseli) havaittiin käyttäen piparjuuriperoksidaasilla (HRP) – konjugoitu anti-hiiri-IgG-vasta-ainetta. Virhe palkit osoittavat keskihajonnan kolmena kappaleena mittauksia. Pitoisuuksia vasta-aineen supernatantit määritettiin käyttämällä sandwich-ELISA. Tulokset edustavat kahden kokeen. (B) anti-humaani-GCNT1 mAb tunnustettu immobilisoitua rekombinantti ihmisen GCNT1, mutta ei BSA: lla. (C) Vahvista anti-humaani-GCNT1 mAb spesifisyys, rekombinantti ihmisen GCNT1 ja GCNT3 analysoitiin käyttämällä elektroforeesia (SDS-PAGE) ja siirrettiin PVDF-kalvolle. Anti-ihmisen GCNT1 mAb tunnistaa spesifisesti GCNT1, mutta ei GCNT3. (D) Immunoblottaus ja (E) immunosytokemia paljasti anti-humaani-GCNT1 mAb myös tunnistaa spesifisesti GCNT1 in GCNT1-yli-ilmennetään CHO-soluissa. Peptidi inhibition määritys (F) IHC ja (G) dot-blottauksella menetelmiä paljasti GCNT1 signaalit inhiboi GCNT1 antigeenipeptidin esikäsitellä anti-ihmis-GCNT1 mAb.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s001

(TIF)

S2 Kuva. Ekstrakapsulaarinen laajentaminen eturauhassyövän oli yksi vahva ennustaja eturauhasen antigeenin toistuminen.

Eturauhasen antigeenin elinaika jaksoja verrattiin toisiinsa elimeen rajoittunut tauti (pT2) ja ekstrakapsulaarinen laajennus (pT3 ja pT4). Survival analysoitiin Kaplan-Meier -käyrät.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s002

(EPS) B S1 tiedosto. Täydentävät materiaalit ja menetelmät.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s003

(DOCX) B S1 Taulukko. Core 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 asema ja potilastiedot.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s004

(DOCX)

S2 Taulukko. Core 2 β-1,6-

N

-acetylglucosaminyltransferase-1 asema ja patologinen parametrit.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s005

(DOCX)

S3 Taulukko. Potilastiedot jälkeisen eturauhasen virtsanäytteitä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0138520.s006

(DOCX) B

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää tohtori Shigeru Tsuboin varten hyödyllisiä keskusteluja.