Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

seriini /treoniini proteiinikinaasi, p70S6K on tärkeä rooli kasvainsoluissa. Tulokset ovat osoittaneet yli-ilmentyminen p70S6K ja fosforyloidun p70S6K (p-p70S6K) erilaisissa tuumorikudoksissa, näiden proteiinien tunnistettu itsenäisiksi ennustetekijöitä markkereita ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC). Tässä tutkimuksessa selvitimme roolia p70S6K erityinen estäjä PF-4708671 NSCLC.

Methods

kolme NSCLC solulinjoissa (A549, SK-MES-1 ja NCI-H460) käsiteltiin PF-4708671 viidellä eri pitoisuuksina, mukaan lukien 0,1 uM, 0,3 gm, 1 uM, 3 uM ja 10 uM, ja proteiinia tasot määritettiin Western-blot. Sitten, PF-4708671: n vaikutuksia arvioitiin sekä

in vitro

(solujen lisääntymistä, apoptoosin, solusyklin jakelun ja invaasio) ja

in vivo

.

Tulokset

ekspressiotasot p-p70S6K ja alavirtavaikuttajainhibiittorit S6 merkittävästi vähentää PF-4708671. Täysin vastakkaisia, loppupään proteiinin tasot BAD, Caspase3 ja ERK oli kasvanut hoidon jälkeen PF-4708671. Lisäksi PF-4708671 rajusti esti solujen lisääntymistä ja invaasiota kyky A549, SK-MES-1 ja NCI-H460-solujen

in vitro

aiheuttaen solusyklin pysähtymisen G0-G1 vaiheeseen. Limited vaikutuksia PF-4708671 havaittiin apoptoosin kolmella NSCLC solulinjat arvioitu. Tärkeää on, PF-4708671 voi estää kasvainten synnyssä nude-hiirissä

in vivo

.

Johtopäätös

Nämä havainnot osoittivat, että p70S6K erityinen estäjä PF-4708671 on estäviä vaikutuksia NSCLC tuumorigeneesiä

in vitro

ja

in vivo

. Siksi p70S6K olisi pidettävä uusia mahdollisuuksia terapeuttinen kohde, ja PF-470867 voidaan käyttää kohdistuva lääkkeiden syövän hoitoon.

Citation: Qiu ZX, Sun RF, Mo XM, Li WM (2016) p70S6K erityisiä Inhibitor PF-4708671 vaikeuttaa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä Growth. PLoS ONE 11 (1): e0147185. doi: 10,1371 /journal.pone.0147185

Toimittaja: Javier S. Castresana, Navarran yliopisto, Espanja

vastaanotettu: 17 marraskuu 2015; Hyväksytty: 30 joulukuu 2015; Julkaistu: 15 tammikuu 2016

Copyright: © 2016 Qiu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tuki National Natural Science Foundation of China (nro 81372504), tieteen ja teknologian tuki ohjelma Science and Technology Department of Sichuan Province (2014SZ-0148), ja kansainvälinen yhteistyö Program of Science and Technology Agency of Sichuanin maakunnassa (2014AA022202-2).

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Taustaa

Keuhkosyöpä, yksi yleisimmistä pahanlaatuisia on suurin syy syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti, jolla on korkein sairastuvuus ja kuolleisuus Kiinassa. Yli 80% potilaista, joilla on keuhkosyöpä on diagnosoitu ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [1]. Huolimatta yhdistelmähoito kirurginen resektio, kemoterapia, sädehoito, ja biologiseen kohteeseen hoito, yleinen 5 vuoden pysyvyys keuhkosyöpään on vain 16%, vaihdellen 52,2%: sta 4% paikallisessa ja etäinen vaiheessa potilaista [2]. Näin ollen, tunnistaminen uusien tavoitteiden ja selvittäminen muutoksia molekyylitasolla saattaa olla hyötyä keuhkosyövän hoitoon.

seriini /treoniini proteiinikinaasi AGC kinaasiperheen, p70S6K fosforyloituu eri kasvutekijöiden ja insuliinin -kuten tekijät kautta PI3K /mTOR-reitin, ja vuorovaikutuksessa S6, eIF4B, eEF2K, PDCD4 ja monet muut alustoista; tämä on tärkeää mitogeeni aiheuttama solujen lisääntymistä, eloonjääntiä, liikkuvuuteen ja kemoterapia lääkeresistenssin syöpäsoluissa [3]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että yli-ilmentyminen p70S6K ja p-p70S6K eri tuumorikudoksissa on tärkeää ennustaa huono ennuste, ja myötävaikuttaa kemoterapian resistenssin [4-14].

In vitro

yliekspressio p70S6K edistää solujen lisääntymistä, angiogeneesin, ja apoptoosin tukahduttaminen [15, 16]. Samaan aikaan S6K1 knockdown estää p70S6K ilmaisua ja vähentää merkittävästi solujen lisääntymistä, vähentää kasvainten muodostumista nude-hiirissä [17]. Lisäksi p70S6K ja p-p70S6K tasot ovat huomattavasti korkeammat kasvaimissa kuin normaaleissa kudoksissa peräisin NSCLC potilaiden [18, 19]. Aikaisemmat tutkimus osoitti, että p-p70S6K liittyy läheisesti säilyminen pitkällä aikavälillä NSCLC [20]. Siksi p70S6K tärkeä rooli NSCLC, ja arviointi korkea spesifisyys p70S6K estäjät voivat auttaa määritellä tarkemmin tämän uuden terapeuttinen kohde kliinisissä sovelluksissa.

Nykyinen tutkimusten kohteena hoitomuotoja syöpään keskittyvät pääosin mTOR-estäjät [20] , kun taas teokset erityisesti arvioitaessa p70S6K estäjien keuhkosyövän hoidossa rajoittuvat [21-25]. Tässä tutkimuksessa keskityttiin erityisten p70S6K -estäjä PF-4708671 vaikutusten arvioimiseksi p70s6K eston NSCLC [22].

Methods

1. PF-4708671 (C

19H

21F

3 N

6) B

PF-4708671 (# 559273 Calbiochem, Merck, USA) on inhibiittori S6K1 (Ki = 20 nM ; IC 50 = 160 nM). 10 mg PF-4708671 oli täysin liuennut 1 ml DMSO ja säilytettiin -80 ° C: ssa

in vitro

kokeita. Sillä

in vivo

määrityksissä, PF-4798671 liuotettiin 10% DMSO: ensimmäisen ja laimennettiin edelleen 30% PEG400, 0,5% Tween 80 ja 5% propyleeniglykolia, saavuttaa lopullinen DMSO-pitoisuus on 1%.

2. Soluviljely

Kolme ei-pienisoluinen keuhkosyöpä solulinjat saatiin Type Culture Collection of Kiinan Academy of Sciences, ja viljeltiin mukaan toimittajan suositusten. Ne sisältyvät A549 (adenokarsinooma), NCI-H460 (suuri karsinooma), ja SK-MES-1 (levyepiteelikarsinooma) soluja. Kaikki soluja pidettiin kosteutetussa ympäristössä, joka sisältää 5% CO 2 37 ° C: ssa.

3. Western blot

Proteiinit uutettiin soluista käyttäen fosforyloidun proteiinin Extraction Kit (KEYGEN, Nanjing, Kiina), ja pitoisuudet mitattiin käyttäen BCA Protein Assay Reagent (Thermo tieteellinen, Rockford, USA). Yhtä suuret määrät proteiinia, eri näytteistä erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja elektro-siirrettiin polyvinylideenifluoridi (PVDF) (Millipore, Billeraica, USA). Sitten membraaneja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa anti-p70S6K R365, anti-p-p70S6K T389, anti-ribosomi-proteiinin S6 A229 (# BS1568, # BS4440, # BS3610, 1, 1000, Bioworld Technology, Nanjing, Kiina ), anti-BAD, anti-Caspase3, anti-ERK (# 9239P, # 96625, # 3552S, 1: 1000, Cell Signaling Technology), ja anti-β-aktiini (# 4970, 1: 5000, Cell Signaling Technology) vasta-aineita, vastaavasti. Kohdeproteiineja havaittiin käyttäen ChemiDoc XRS järjestelmän (Bio-Rad, Philadelphia, USA) altistumisen jälkeen kemiluminesoiva HRP-substraattia (Millipore, Billerica, USA). Tiedot analysoitiin Määrä One 1-D analyysi ohjelmisto (Bio-Rad).

4. Soluproleferaatiomäärityksessä

soluproliferaatiota NSCLC solulinjojen mitattiin käyttäen Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Dojindo, Kumamoto, Japani) mukaan valmistajan protokollaa. Kasvaimen solut ympättiin 96-kuoppaisille levyille tiheydellä 5 x 10

3 per kuoppa. Inkuboinnin jälkeen läsnä ollessa PF-4708671 (0,1 uM, 0,3 gm, 1 uM, 3 uM ja 10 uM) 24, 48 ja 72 tuntia, vastaavasti, proliferaatiota arvioitiin. DMSO käsiteltyä tai käsittelemätöntä soluja käytettiin negatiivisina kontrolleina. Lisäksi solujen lisääntymistä markkeri Ki-67 tutkittiin immunohistokemiallisesti nude tuumorikudoksissa.

5. Solusyklianalyysiä

Kunkin solulinjan, noin 1 x 10

6 solut kerättiin käsittelyn jälkeen 10 uM PF-4708671 24 tunnin ajan; solusyklin jakelu arvioitiin käyttäen Cell Cycle Detection Kit (Keygen, Nanjing, Kiina); DNA sisältö määritettiin FACSCalibur -virtaussytometrillä (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, USA). Tiedot analysoitiin käyttämällä CellQuest- ja Modfit ohjelmistoja.

6. Soluinvaasion

soluinvaasion arvioitiin käyttämällä Millipore soluinvaasion iinianalyysikitissä (# ECM550, Millipore, USA) valmistajan ohjeiden käsittelyn jälkeen PF-4708671 10 uM 24 tuntia. Cell suspensiot, jotka sisältävät 1 x 10

6 solua /ml ympättiin ylempään kammioon, jota oli täydennetty 1% seerumia. Media, joka sisälsi 20% FBS lisättiin alakammioissa.

7. Apoptoosin

Noin 5 x 10

5 solut kerättiin käsittelyn jälkeen PF-4708671 10 uM 24 h, ja värjättiin anneksiini V-APC /7-AAD Apoptosis Detection Kit (KeyGen, Nanjing, Kiina ) mukaan valmistajan protokollaa. Fluoresenssi mitattiin FACSCalibur -virtaussytometrillä. Anneksiini-V-positiivisten ja 7AAD-negatiivisia soluja pidetään apoptoottisia. Lisäksi, TUNEL-menetelmää käytettiin määrittämään apoptoosin ksenograftin kasvaimen kudoksissa.

8.

In vivo

vaikutuksia PF-4708671 nude hiiren ksenograftimallia perustettu H460-solujen

H460 soluja, jotka osoittivat suurin kasvu, valittiin

in vivo

kokeissa. Nainen karvattomia hiiriä (4 viikkoa, 18 20 g) ostettiin Beijing WeiTongLiHua koe-eläimen teknistä yhteistyötä. LTD. (Kiina), ja sijoitettu Animal Center West China Sichuanin yliopiston, jossa on 12 h valo /12 h pimeä jakso. Kaikki kokeet suoritettiin SPF (Special taudinaiheuttajista vapaat) olosuhteissa. Hiiret jaettiin kolmeen ryhmään satunnaisesti, ja kukin ryhmä sisälsi kolme hiiriä (n = 3 /kussakin ryhmässä). Päätepisteiden havainto olivat seuraavat: 1) halkaisija kasvainten 3cm; 2) siirrettyjen kasvainten oli kuolion ja /tai hajoaminen; 3) luonnollisen kuoleman. Menetelmä lopetukseen lopussa vivo Tutkimus decapitated anestesian jälkeen alle lähtökohta ilman muiden hiirten voisi nähdä. Ryhmässä 1 (H460 ryhmä), 1 x 10

7 H460 solua ihon alle injektoidaan hiiriin. Ryhmä 2 (negatiivinen kontrolli, NC ryhmä) eläimiin injektoitiin soluja kuin ryhmän 1; kolme päivää myöhemmin, niiden annettiin intraperitoneaalisesti 200 ui liuotinta seoksen (1% DMSO, 30% PEG400, 0,5% Tween80 ja 5% propyleeniglykolia) päivittäin 1 viikko. Ryhmän 3 (H460 + PF4708671 ryhmä), hiiriä käsiteltiin, kuten on kuvattu ryhmän 2, 200 ul PF4708671 (50 mg /kg), sen sijaan, että liuotinta sekoitetaan. Kasvaimet koot mitattiin päivittäin yli viikon (pitkä läpimitta = a; lyhyt läpimitta = b), ja määrät saatiin seuraavasti: V = ab2 /2. Kasvaimen esto = [(kontrolli kasvaimen paino-kokeellisen kasvaimen paino) /ohjaus kasvaimen paino] x 100%. Tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea West China Hospital.

9. Tilastollinen analyysi

Tiedot käsiteltiin Microsoft Excel 2010 SPSS 19.0 ohjelmisto, t-testi ja yksisuuntainen-ANOVA sovellettiin tietojen analysointia. Tiedot ovat keskiarvo ± SD, ja kaksipuolinen

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

1. PF-4708671 estää p70S6K ja S6 fosforylaatio

tulokset paljastivat, että erityinen p70S6K -estäjä PF-4708671 vähensi fosforylaatiota p70S6K ja sen loppupään S6 0,1 uM (

P

0,05) ; p-S6 ekspressiotasot, laskivat lääkeainepitoisuudet (

P

0,05). Päinvastoin, proteiini tasoilla loppupään BAD, Caspase3 ja ERK lisättiin käsittelyn jälkeen PF-4708671 pitoisuuden kanssa 1 uM. Kuitenkin koko p70S6K ja S6-proteiini tasoilla ei ollut merkittäviä eroja negatiivista kontrolli- ja testiryhmään (kuvio 1, S1 File).

1. Proteiinin ekspressiotasot p70S6K, p-p70S6K, S6, ja p-S6 käsittelyn jälkeen eri lääkeainepitoisuudet. β-aktiini käytettiin latauskontrollina. 2. Proteiini ilmaisuja tasot p-p70S6K ja p-S6 eri lääkeainepitoisuudet.

P

0,05: lääkehoidon ryhmässä vs. negatiivinen kontrolliryhmä. N, negatiivinen kontrolli; A, H460; B, A549; C, SK-MES-1.

2. PF-4708671 estää NSCLC-solujen lisääntymisen

CCK-8 koetulokset osoittivat, että proliferaation kyvyt kolmen NSCLC solulinjat inhiboi merkittävästi PF-4708671. 24 tunnin kuluttua hoidon, PF-4708671 esti H460 soluproliferaatiota 10 uM, ja A549 ja SK-MES-1 solujen määrät olivat vähentyneet huomattavasti klo 3 uM ja 0,1 uM, tässä järjestyksessä (

P

0,05). Lisäksi H460, A549, ja SK-MES-1 solujen kasvu oli merkittävästi inhiboi PF-4708671 on 0,3 gm, 0,1 uM, ja 0,1 uM, tässä järjestyksessä, 48 tunnin kuluttua hoidon (

P

0,05). Kaikki solulinjat osoittivat vähensi merkitsevästi lisääntymistä 72 tunnin käsittelyn jälkeen 0,1 uM PF-4708671 (

P

0,05). Merkittävät ajasta ja pitoisuudesta riippuva inhibitio soluproliferaatiota havaittiin kaikissa solulinjoissa (

P

0,05) (kuvio 2).

leviämisen esto = [1 – (kokeellinen ryhmä arvot – tyhjä arvo) /(negatiivinen kontrolliryhmä arvo – tyhjä arvo)] x 100%.

3. PF-4708671 koskee NSCLC solusyklin

Kun DNA värjäys PI, virtaussytometria analyysi osoitti solusyklin pysähtymisen G0 /G1 vaiheessa kaikkien kolmen NSCLC solulinjoissa (

P

0,05). Samaan aikaan osuudet solujen S ja G2 /M faasit merkittävästi vähentynyt A549-soluja (

P

0,05). Lisäksi alemmat määrät S-vaiheessa (H460) ja G2 /M vaiheessa (SK-MES) soluja havaittiin myös (

P

0,05) (kuvio 3).

(* p 0,05, lääkehoitoa vs negatiivinen kontrolliryhmä).

4. PF-4708671 merkittävästi estyy soluinvaasiota

PF-4708671 esti hyökkäyksen kyky kolmessa NSCLC solulinjat arvioitu. Todellakin, keskimääräinen määrä soluja kulkee soluväliaineen geeli oli merkitsevästi pienempi hoitoryhmissä kuin negatiiviset kontrollit (

P

0,05), jossa invaasio esto hinnat 75.90%, 46.23% ja 82.73%, ja H460, A549 ja SK-MES-1-soluissa, vastaavasti (kuvio 4).

5. PF-4708671 kasvattaa NSCLC-solujen apoptoosin

PF-4708671 osoitti vähäinen vaikutus apoptoosin kolmella NSCLC solulinjat, joskin tilastollisesti merkitseviä eroja saatiin (

P

0,05). Verrattuna negatiivinen kontrolliryhmiin, apoptoosin hinnat H460, A549 ja SK-MES-1 solulinjat kasvoivat 1,537%, 2,483% ja 3,475%, vastaavasti (

P

0,05) (kuvio 5).

6. PF-4708671 estää kasvaimen kehittymisen

in vivo

Kaikki siirrettyjen kasvainten kasvatettiin onnistuneesti kuhunkin hiiri, ja kaikki hiiret ei ole merkkejä miscomfort ja /tai kärsimystä, kunnes laitamme heidät kuolemaan. Suuntauksista kasvainten nude-hiirissä, kunkin ryhmän on koottu taulukkoon A S1-tiedoston ja S2 kuvassa. Eläimet käsiteltiin p70S6K erityinen estäjä PF470867 osoitti avoimesti esti kasvaimen kasvua verrattuna ryhmään 1 (H460) ja ryhmä 2 (NC) (kaikki

P

0,05). Kuten taulukosta B S1 File ja S3 kuvassa, painot ja tilavuudet irrotettiin kasvaimista olivat alhaisemmat käsittelyn jälkeen PF470867 verrataan kontrolliarvoihin (

P

0,05). Lisäksi solujen lisääntymisen, kuten ilmaistaan ​​Ki-67, oli pienentynyt huomattavasti H460 + PF4708671 ryhmässä verrattuna arvoihin, jotka saatiin sekä kontrolliryhmiin. Lopuksi TUNEL värjäys osoitti merkittävästi korkeammat apoptoottisten korko kasvainsolujen ryhmässä 3 verrattuna ohjaus (ryhmät 1 ja 2) arvot (kuvio 6).

Nuolet osoittavat positiivisesti värjäytyneiden solujen. Alkuperäinen suurennos, × 400.

Keskustelu

p70S6K osallistuu aiheuttavan kasvaimia ja syövän etenemistä, mutta mekanismia taustalla sen vaikutus ei ole täysin ymmärretty. Tutkimukset arvioidaan p70S6K suhteessa NSCLC ovat niukat; Olemme aikaisemmin havainneet, että p70S6K yliekspressio edistää NSCLC soluproliferaatiota, inhiboi apoptoosia ja parantaa hyökkäys kyky. Edelleen ymmärtää rooli p70S6K estäjiä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, tässä tutkimuksessa arvioitiin kolmen NSCLC solulinjoissa (A549, SK-MES-1 ja NCI-H460) käsiteltiin PF-4708671, ja arvioi muutokset pahanlaatuisten fenotyypit kuten leviämisen, invaasio ja apoptoosin kiertämisen.

kuten edellä on esitetty, p70S6K estäjä PF-4708671 estivät merkittävästi aktivointi p70S6K ja sen keskeiset alavirtavaikuttajainhibiittorit S6, kun pitoisuus on riippuvainen tavalla. Lisäksi proteiini tasoilla loppupään BAD; Caspase3 ja ERK, jotka vaikuttavat apoptoosin solujen kykyä, lisättiin käsittelyn jälkeen PF-4708671. Tämä osoitti, että PF-4708671 voisi vaikuttaa NSCLC solulinjat selviytymistarpeen säätelemällä merkityksellisiä tekijöitä apoptoosin. Lisäksi NSCLC soluproliferaatioon oli aikaa ja keskittymistä riippuvalla estävät PF-4708671, joka vahvistaa aikaisempien raporttien [15-17]. Niinpä ehdotetaan, että p70S6K asetus liittyy solujen apoptoosin. Erot pienin tehokas lääkepitoisuudet NSCLC solulinjat arvioitiin voi johtua niiden erilliset p70S6K suuruuteen ja kasvuun: löysimme kasvun estäminen on 30 40%.

Oletimme, että säätelemällä solukierron PF-4708671 saattaa estää solujen lisääntymisen. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että S6K1 ja p70S6K ovat kriittisiä G1 pidätys [26-28]. Johdonmukaisesti, huomasimme, että PF-4708671 vaikuttaa solusyklin jakelun kolmessa NSCLC solulinjat arvioitu, merkittävästi viivästyttää solusyklin etenemisen G0 /G1 vaiheeseen. Toinen tärkeä tekijä, joka vaikuttaa solujen lisääntymisen on apoptoosia; vaiheen I tutkimuksessa LY2584702 arvioidaan kehittyneen kiinteä kasvain potilailla ei osoittanut ilmeistä antituumorivaikutuksen tämän lääkkeen [25]. Kuten edellä on esitetty, PF-4708671 ollut vähäinen vaikutus solujen apoptoosin NSCLC soluissa, ja apoptoosin nopeudella lähes 3% in vitro. Siksi oletimme, että p70S6K reittejä ei saa olla mukana solujen apoptoosin. Tämä tutkimus kuitenkin osoitti myös, että PF-4708671 estää NSCLC tumorigeneesin

in vivo

.

p70S6K yliekspression osoitettiin liittyvän aggressiiviseen tauti ja huonon ennusteen rintasyövän [29]. Aikaisemmat tutkimus osoitti p70S6K yliekspressio edistää solujen invaasiota

in vitro

. Mielenkiintoista, PF-4708671 voi estää hyökkäyksen kyky kaikkien NSCLC solulinjojen arvioitu tässä tutkimuksessa. Sen sijaan tutkimuksissa pienisoluista keuhkosyöpää osoitti, että p-p70S6K ilmaisua ei liittynyt imusolmuke etäpesäke ja syövän vaihe [18-29]. Lisätutkimuksia tarvitaan vahvistaa roolia p70S6K NSCLC invaasiota ja etäpesäkkeiden

in vivo

.

Kuitenkin oli vielä rajoituksia tutkimuksemme. Ensinnäkin, vaikka kaikki solut olivat NSCLC solulinjat, lähteet olivat erilaiset. Joten meidän tuloksia ei olla täysin johdonmukainen, koska saattaa olla erilaisia ​​mekanismeja eri geneettiset taustat. Lisäksi määrä ei ollut tarpeeksi iso kokeita nude-hiirten in vivo. Tämän vuoksi tulokset on vielä perusteellista tutkimusta vahvista.

Yhteenvetona Tutkimuksemme osoitti, että p70S6K estäjä PF-4708671 voi vaikuttaa solusyklin jakelu, estämällä solujen lisääntymistä, apoptoosin ja hyökkäyksen NSCLC soluissa. Estämällä p70S6K-S6 akseli johti voimakas antituumorivaikutus. Siksi yhdistelmähoito p70S6K estäjän ja kemoterapia edustaa lupaavaa uutta strategiaa NSCLC hoitoon.

tukeminen Information

S1 Kuva. Proteiinin ekspressiotasoja BAD, Caspase3 ja ERK käsittelyn jälkeen PF-4708671.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0147185.s001

(TIF)

S2 Kuva. Kasvaimen tilavuus kasvutrendi kussakin ryhmässä nude-hiirten (mm

3).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0147185.s002

(TIF)

S3 Fig. Vertailu kasvainten koot ryhmien kesken.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0147185.s003

(TIF) B S1 tiedosto. Taulukko A. Kasvaimen tilavuus kasvu kunkin ryhmän nude-hiirissä (n = 3 /mm

3). Taulukko B. tuumoriksenografteja paino kussakin ryhmässä ().

Doi: 10,1371 /journal.pone.0147185.s004

(DOCX) B

Kiitokset

Kiitos professori Mo XM antoi meille hyvän laboratorioympäristössä ja laitteet.