Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Tämä tutkimus suoritettiin lauseketta aktivoitujen leukosyyttien adheesiomolekyyli (ALCAM) haimasyövän (PAC) ja määrittää onko ektodomeenia irtoaminen of ALCAM (t-ALCAM) voitaisiin käyttää biomarkkerina perifeerisessä veressä PAC potilaista.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue näytteet ja verta potilaiden seerumeista PAC (n = 264 ja n = 116, tässä järjestyksessä) ja seerumit 115 potilailla, joilla on krooninen haimatulehdus (CP) analysoitiin kautta ALCAM immunohistokemia ja s-ALCAM ELISA-testit. Tulokset korreloivat kliinisten, histopatologisten, ja potilaiden eloonjäämisen data (Chi-square test, Kaplan-Meier analyysi, log-rank testi, vastaavasti).

Tulokset

ALCAM ilmaistiin enemmistön PAC vaurioita. Immunohistokemia ja seerumin ELISA paljastaneet mitään yhdistyksen välillä ALCAM ilmentyminen ensisijainen kasvaimia tai s-ALCAM ja kliinisiä tai histopatologiset tulokset. Kumpikaan ALCAM tai s-ALCAM osoitti merkittävää vaikutusta koskevat eloonjäämiseen (p = 0,261 ja p = 0,660, vastaavasti). S-ALCAM seerumissa olivat merkittävästi koholla verrattuna seerumeista CP potilailla (p 0,001). Herkkyys s-ALCAM havaitsemisessa PAC oli 58,6%, kun spesifisyys 73,9% (AUC = 0,69).

Johtopäätökset

ALCAM ilmaistaan ​​useimmissa PAC vaurioita, mutta tilastollinen analyysi paljastaneet mitään yhteyksiä kliinisiin tai patologisia tietoja. Vaikka merkitsevästi koholla potilailla, joilla PAC, herkkyys ja spesifisyys s-ALCAM seerumin kvantifiointiin testi oli alhainen. Siksi sen mahdollisuuksia uusien diagnostisten markkeri PAC edelleen heikko ja tarvitaan enemmän tutkimuksia.

Citation: Tachezy M, Zander H, Marx AH, Stahl PR, Gebauer F, Izbicki JR, et al. (2012) ALCAM (CD166) Expression ja seerumitasot Haimasyöpä. PLoS ONE 7 (6): e39018. doi: 10,1371 /journal.pone.0039018

Editor: Frank T. Kolligs, University of Munich, Saksa

vastaanotettu: 27 helmikuu 2012; Hyväksytty: 15 toukokuu 2012; Julkaistu: 20 kesäkuu 2012

Copyright: © 2012 Tachezy et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Taloudellinen tuki tämän tutkimuksen antamien tutkimus avustusta Hampurin yliopiston (Forschungsförderung Medizin – FFM). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Koska suurin potilailla, joilla haiman adenokarsinooma (PAC) läsnä myöhemmissä vaiheissa taudin esiintyvyys PAC on lähes sama kuin sen kuolleisuutta. Jopa parantava asetus, joka koskee vain potilasalaryhmässä, syöpäsairauksien pysyvyyttä ei ole parantunut merkittävästi viime vuosina (raportoitu mediaanielossaolosta välillä 14 ja 22 kuukautta); useimmat kasvaimet toistuvat paikallisesti tai kaukaisiin kohtiin [1], [2]. Valitettavasti parannukset (neo-) adjuvantti ja jopa lievittävää hoitoa koskevat uusiutumisen ja eloonjäämisen yhä pettymys; yksikään testasi äskettäin kohdennettujen hoitomuotojen olivat erittäin lupaavia kliinisissä tutkimuksissa [3], [4], [5], [6].

Tämän seurauksena kaksi päämäärää on saavutettava: ensinnäkin uutta biokemiallisia testit varhaista havaitsemista, seurantaa ja ennusteen PAC tulisi kehittää. Lisäksi nämä voisivat auttaa erottamaan pahanlaatuisia ja hyvänlaatuisia haiman kasvainten, kuten krooninen haimatulehdus (CP). Itse asiassa, ei ole vieläkään vahvistettu tai suositeltu seerumimarkkereiden diagnosoimiseksi tai ennustetta PAC rutiinikäyttöön [7], [8]. Toiseksi, mahdolliset innovatiiviset tavoitteet biologisten hoitojen on tunnistettava parantaa potilaiden selviytymiseen PAC.

Viime aikoina teoria hierarkkisen organisaation kasvainsolujen oli laajasti tutkittu, tukemalla syövän kantasolujen hypoteesi [ ,,,0],9], [10], [11], [12], [13]. Nämä solut voivat olla mahdollisia terapeuttisia biologinen tavoitteet ja ennustetekijöitä markkereita. Useat kirjoittajat ovat tunnistaneet otaksuttu kantasolujen merkkiaineita suoliston sekä PAC eli CD133, CD44, ja CD166, aktivoitua leukosyyttisolun adheesiomolekyyli (ALCAM) [10], [14], [15], [16], [17 ]. Viimeksi mainittu on erittäin konservoitunut 110 kDa multidomain transmembraani- tyypin 1 glykoproteiini immunoglobuliinien superperheen. Tämä molekyyli välittää homotyyppisessä ja heterotypic solujen välisiä vuorovaikutuksia [18], [19]. Se on rooli kehittämisessä eri kudoksissa, esimerkiksi neurogenesis ja haemotopoiesis, ja se osallistuu mekanismeja immuunivasteen [20], [21], [22]. Kuten muidenkin membraaniproteiineja, ALCAM on potentiaalinen kohde terapiassa ja hyödylliseksi lääke kohteena rakenne voidaan edelleen tehostaa ligandin indusoiman endosytoosin [23]. Lisäksi äskettäin kuvattu sisäistäminen yksiketjuista anti-ALCAM vasta-aineella on mahdollista tuottaa terapeuttisesti vaikuttavien aineiden syöpäsoluja [23], [24].

Useat tutkimukset ilmoitetaan sen mahdollisuuksia biomarkkerina eri kasvaimen yhteisöjä, kuten melanooman, haiman ja ampullary adenokarsinooma, paksusuolen ja peräsuolen, naistentautien ja neuroendokrii- karsinoomat. Sen ilmentyminen liittyy erilaisia ​​tuloksia eri kasvaimissa [17], [18], [19], [20], [25], [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Lisäksi solunulkoiseen domeeniin ALCAM (t-ALCAM) vuodatetaan mukaan metalloproteaasit (esimerkiksi ADAM 17), toimii aktiivisena messenger ja vuorovaikutuksessa ympäröivien kudosten [33]. Pilkottiin tuumorisolun pinnalla, s-ALCAM voidaan havaita veren seerumista. Lisääntynyt tasot s-ALCAM ilmentymistä havaittiin munasarja-, rinta- ja ruokatorven syöpä potilailla verrattuna terveisiin kontrolleihin [30], [33], [34], [35], [36]. Lisäksi tutkimukset pienten potilaiden näytteet osoittivat korkeudessa s-ALCAM ilmentymisen potilaiden seerumeista PAC [37], [38].

on suoritettu tässä tutkimuksessa tutkia yhdistyksen välillä ALCAM ilmaisun suuri määrä ensisijainen PAC vaurioista ja kliiniset ja histopatologiset tulokset ja sen mahdollisen ennusteen arvioinnissa. Lisäksi määritimme ennen leikkausta s-ALCAM seerumin potilaalla on PAC ja CP ja arvioidaan merkityksensä ja ennustavia merkki.

Tulokset

Ominaisuudet Potilaat

Haimasyöpä kudosnäytteiden 264 potilasta iältään 33-87 vuotta (mediaani 63 vuotta) ja veri seerumit 116 PAC potilasta iältään välillä 33 ja 92 vuotta (mediaani 64 vuotta) ja 115 CP potilasta iältään välillä 31 und 79 (mediaani 51 vuotta) olivat mukana tässä tutkimuksessa. Kaikki potilaat olivat hoidetuista vuosien 1993 ja 2006 Department of General, sisäelinten ja Torakaaliikirurgia yliopiston Medical Center Hamburg-Eppendorf, Saksa.

Operaatio käytetyt menetelmät olivat klassinen Whipple menettely, pylorus säilyttävää pankreatikoduodenektomia , välisumma tai kokonaan pancreatectomy tapauksissa PAC ja elimen säilyttävää resektio menetelmiä tapauksissa CP.

mediaani seuranta-ajan potilaista sisältyvät eloonjääminen analyysi oli 14 kuukautta (vaihteluväli 0-193 kuukautta) ja mediaani kokonaiselinaika (OS) oli 15 kuukautta (95% CI +13,2-+16,7kuukausi). Kaksikymmentäyhdeksän (10,5%) potilaista kuoli ensimmäisten 30 päivän ajan leikkauksen jälkeen.

ALCAM ilmentäminen PAC ja sen Korrelaatio Clinical and Histopatologisten Ominaisuudet

yhteensä 192 (78,6%) ensisijaisen PAC kasvain näytteet olivat tulkittavissa meidän kudoksessa microarryay (TMA) analyysi. Luopumissyitä informatiivinen tapauksissa (52; 21,3%) kuului täydellinen puuttuminen kudosnäytteiden tai puuttuminen yksiselitteistä syövän kudoksen TMA osissa. Analyysi terveen haiman kudosta paljasti heikko tai väli- ALCAM lauseke (+ /++) normaalissa acinar tai ductal haiman soluja (n = 10, kuvio 1 F). Värjäytymisen kuvio ALCAM immunohistokemian esittää hallitseva kalvo ilmentymisen ALCAM molekyylin. Vaikka jotkut sytoplasmaattinen värjäytymistä oli ajoittain nähty, tämä oli aina liittynyt paljon suurempi taso värjäytymistä kalvoja. Kolmekymmentäkahdeksan prosenttia kasvaimia osoitti alhainen ALCAM ilmaisun, 44% keskipitkän ja 18% korkeatasoista ALCAM ilmentymisen (kuvio 1A-1E, katso Materiaalit ja menetelmät kriteerit). Kasvaimet osoittavat heterogeeninen värjäyskuvion sisällä pahanlaatuisten vaurioiden (kuvio 1A-1E).

(A) ja (B) vahva ALCAM lauseke, (C) ja (D) keski- ja (E) ei ilmaisua. (F) Healthy haimakudoksesta. (G) skannauksen PAC kudoksen mikrosirulla.

histopatologiset havainnoista tulkittavia kasvaimia on koottu taulukkoon 1. ilmaus ALCAM osoittanut mitään yhteyksiä kliinisiin tai histopatologisia parametreja kuten ikä, sukupuoli , kasvain vaiheessa (UICC 6

th luokitus) tai kasvaimen (G).

eloonjäämiseen käyrät piirrettiin Kaplan-Meier-analyysi ei havaittu merkitsevää eroa pieni, keskisuuri tai korkean ALCAM-ilmentymisen potilailla (p = 0,261, kuvio 2A). Tästä johtuen ei monimuuttujamenetelmin suoritettiin.

(A) immunohistokemiallinen ALCAM värjäys ensisijainen haimasyövän yksilöitä ja (B) matala ja korkea s-ALCAM seerumissa (potilaat, jotka kuolivat ensimmäisten 30 päivää leikkauksen jälkeen suljettiin pois).

S-ALCAM veren seerumin

s-ALCAM arvot merkittävästi kohonnut veren seerumista PAC potilailla (n = 116, keskimääräinen 29,4 ng /ml , keskihajonta (SD) 1,1 ng /ml, p 0,001) verrattuna CP potilailla (n = 115, keskimääräinen 18,2 ng /ml, SD 1,0 ng /ml) ja terveet verenluovuttajien (n = 128, keskimääräinen 21,1 ng /ml , SD 0,7 ng /ml, kuvio 3A).

(a) s-ALCAM seerumin potilaiden haimasyöpä (PAC) ja krooninen haimatulehdus (CP) ja terveisiin verenluovuttajien (p 0,001) . (B) Vastaanotin toimii (ROC) käyriä s-ALCAM diagnosoimiseksi PAC versus CP potilailla.

Receiver operating ominaiskäyrät käytettiin luomaan herkkyyttä-spesifisyys suhde s-ALCAM ( kuvio 3B). Cut-off taso määräytyy Youdenin indeksi oli 22 ng /ml. AUC oli 0,690. Herkkyys s-ALCAM havaitsemisessa PAC oli 58,6%, kun spesifisyys 73,9% verrattuna potilaisiin, joilla CP.

Jotta vaikutusten arvioimiseksi kohonnut s-ALCAM tasolle potilailla, joilla PAC, jatkuva ja kategorinen analyysit perfomed.

merkittäviä eroja ei havaittu koskien sukupuoli (nainen 33,6 ng /ml, uros 31,3 ng /ml, p = 0,649), ikä ( 64 vuotta 33,0 ng /ml, 64 vuotta 33,0 ng /ml; p = 0,775), UICC vaiheessa (Ia 24,1 ng /ml, Ib 36,0 ng /ml, IIa 26,8 ng /ml, IIb 36,4 ng /ml, III 19,0 ng /ml; IV 28,1 ng /ml; p = 0,277) ja kasvaimen solujen luokittelu (G1 ja G2 31,1 ng /ml, G3 35,0 ng /ml; p = 0,479).

määritellään eri raja-arvot kategorinen analyysi s-ALCAM data . Jossa mikään niistä, (25

persentiili, mediaani ja 75

persentiili, The ’optimaalinen raja-arvo ”, määritetty Youdenin-indeksi syrjinnän UICC luokittelun ja kasvainsolun luokittelu) merkittävän yhteyksiä kliinisiin tai histopatologisia parametrit laskettiin.

tämän kuvaamiseksi taulukossa 1 esitetään analyysin kanssa cut-off-arvo 75

persentiili ( 42,3 ng /ml s-ALCAM, 75

persentiili, taulukko 1). Yleinen eloonjäämiskäyristä piirretty Kaplan-Meier-analyysi osoitti merkittäviä eroja matalan ja korkean s-ALCAM ryhmissä (p = 0,660, kuva 2B). Tämän vuoksi ei ole monimuuttuja-analyysi. Lisäksi ei havaittu yhteyttä koskien ikää tai sukupuolta sekä PAC ja CP. Lisäksi, ei ollut merkittävää korrelaatiota s-ALCAM ryhmät ja ALCAM immunohistokemiallisella värjäyksellä tulokset (n = 39; p = 0,699).

Keskustelu

tavoitteena olevassa tutkimuksessa oli lauseketta ja kliinistä merkitystä ALCAM PAC kudoksiin ja onko vai ei s-ALCAM voisi toimia ja ennustavia markkeri perifeerisessä veressä PAC potilaista. Tulokset osoittivat, että ALCAM on ilmaistu suurin osa PAC vaurioita, ja että s-ALCAM seerumissa olivat merkittävästi koholla verrattuna seerumeista CP potilaiden ja terveiden kontrollien (p 0,001).

korrelaatio ALCAM ilmaisu ensisijaisen PAC vaurioita kliinisen ja patologisen parametrit eivät paljastaneet merkittäviä havaintoja, mikä vahvistaa tulokset äskettäin julkaistujen tutkimusten pienempiin potilaiden näytteistä [29], [37]. Siitä huolimatta, samojen tekijöiden kuvattu mahdollisen roolin ALCAM solun tarttumiseen vähentäminen ja induktio chemoresistance in vitro [37], ja ALCAM kuvattiin myös itsenäisenä prognostinen markkeri PAC potilailla (n = 97) [29]. Toisin kuin havainnot Kahlert ja kollegat, yleinen eloonjääminen analyysi tuloksemme (n = 138) ei osoittanut mitään merkittävää yhdistyksen välillä aika selviytymisen ja intensiteetti ja määrä ALCAM ilmaisun (pieni, keskisuuri tai suuri) (p = 0,261, Kuvio 2A).

lokalisointi ALCAM ilmentymisen haimasyöpäsoluissa aiemmin kuvattu olevan lähinnä sytoplasmaattinen PAC yksilöt [29]. Toisin kuin nämä tulokset, immunohistokemiallinen värjäys protokollan esillä olevassa tutkimuksessa kävi ilmi, pääasiassa kalvo ilmaus adheesiomolekyyli ALCAM (kuvio 1) [27], [30], [31], [32]. Sytoplasmaattinen värjäytymisen intensiteetti liittyi intensiteetti kalvomainen värjäystä ja ei tapahtunut ilman kalvomainen värjäystä. Samanlaisia ​​havaintoja tehtiin Kristiansen ja työtovereiden, joka myös löytyy pääasiassa kalvo värjäämällä eriasteisia sytoplasmista värjäytymistä [39]. Lisäksi emme tarkkailla kalvo-sytoplasmaattinen shift normaalin ductal solujen tai huono laatu ja korkean asteen kasvaimet kuten Kahlert ja työtovereiden tekivät [29].

Miksi on olemassa ristiriitaisuuksia morfologisia ja tilastollisten tutkimusten tulokset tutkivat ALCAM PAC? Tietenkin, useita tekijät vaikuttavat värjäytymisen intensiteettiä ja spesifisyys immunohistokemia, ja vasta-aineen pitoisuus on vain yksi niistä. Käytetyt laimennokset vaihtelevat 1:100 ja 1:450 ja eri ennalta hoitoja kuvataan tutkimuksissa, mikä heijastaa yleistä ongelmaa vertailukelpoisuuden immunohistokemiallisessa tutkimuksissa. Valitettavasti yleisesti hyväksyttyjen ohjeiden optimaalinen immunohistokemiaa protokollan kehityksestä puuttuvat [40], [41]. Äskettäin tutkimuksessa tutkitaan kliinistä merkitystä p53 muutoksia eturauhassyövän, immunohistokemiallista protokolla, joka on tarkoituksella suunniteltu ”oversensitive” johti paljon korkeampi positiivinen immunohistokemiallinen havainnoista (2,5% positiivisuuden kanssa vakioprotokolla verrattuna yli 90% positiivisuuden kanssa ”yliherkkä” protokolla) [42]. Kohtaavat tämän ongelman, ryhmämme on perustettu kattava ja erittäin standardoitu protokolla objektiivinen optimointia Immunohistokemiallisen värjäykset [40]. Lopuksi eri protokollia tuottavat eri laatuja herkkyys ja spesifisyys, mikä johtaa huomattavia poikkeamia värjäyskuviot ja sen seurauksena, että tilastotiedot. Toinen lähde tilastollisia eroja on eroja otoskokoja ja toisistaan ​​poikkeavia pisteytysjärjestelmät. Vaikka meidän protokolla on optimoitu mittaamaan sekä määrä ja tha intensiteetti värjäyksen, Kahlert ja kollegat ovat keskittyneet voimakkuus ainoastaan ​​[29], [40]. Estämään tämän syynä poikkeava tuloksia, olemme suorittaneet analyysi käyttäen värjäystä intensiteetti vain, mikä myös löytänyt mitään tilastollisesti merkitseviä tuloksia (tuloksia ei ole esitetty).

Kuitenkin, ei ainoastaan ​​suurin osa ensisijainen PAC vaurioita ilmaista ALCAM, mutta metastaattinen ja toistuvia vaurioita osoitti myös väliaineen vahva ilmentyminen (imusolmukemetastaaseja 46%, n = 50; etäispesäkkeitä 85%, n = 7; toistuvia tuumorileesioissa 67%, n = 15, tuloksia ei ole esitetty) . Samoin Piscuoglio ja kollegat ovat kuvanneet merkittävästi kohonnut ilmentyminen syövän ampulla ja Vater verrattuna terveisiin haiman näytteitä ja adenooma [17]. Nämä havainnot Ehdottaisin mahdollinen osallistuminen tämän tekijän kasvainprogression PAC [17].

Tämä hypoteesi on vastoin viime huomautuksia Zhang ja työtovereiden, joka tunnistaa ei pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) varsi solujen tai kasvaimen aloitetaan-solujen ALCAM erityisiä FACS lajittelu [13]. ALCAM positiiviset NSCLC-solut osoittivat korkean proliferaatiopotentiaali in-vitro ja in-vivo toisin ALCAM negatiivisia soluja. Mielenkiintoista, tyrmäävä alas ALCAM eivät johtaneet laskua kasvainten, mikä on sopusoinnussa tutkimuksen mukaan Hong ja kollegat, jotka havaittiin samankaltaisia ​​tuloksia käytettäessä ALCAM hiljentäminen kokeilu PAC solulinjan kautta ALCAM RNAi [37]. Ei vaikutusta proliferaatioon tai muuttoliikettä nähtiin. Lisäksi Zhang ja työtovereiden esitetään immunohistokemiallinen tuloksia vaikutuksista ALCAM kudosekspressiotutkimuksen eloonjäämiseen on TMA-muodossa 143 pienisoluista keuhkosyöpää, löytää tilastollisesti merkitsevää vaikutusta. He päättelivät, että ALCAM olisi erittäin vankka, mutta inertti solun pinnan merkkiaine NSCLC kasvaimen aloittamista-soluissa. Koska emme ole löytäneet merkittävää kliinistä yhdistys ALCAM ilmaisun, ALCAM saattaa hyvin olla samanlainen rooli PAC kantasoluja. Jos tämä hypoteesi voidaan vahvistaa edelleen in vitro ja in vivo kokeissa ALCAM voisi tulla potentiaalinen kohteena uusille vasta-aineisiin perustuvia hoitostrategioita. Käyttökelpoisuus ALCAM kuin huume tavoite rakenne voidaan edelleen parantaa ligandin indusoiman endosytoosin ALCAM [23]. Lisäksi, äskettäin kuvattu sisäistää yksiketjuinen vasta-aine [23], [24], kohdistaminen ALCAM on ehdotettu mahdollisia solunsisäisen toimituksen eri terapeuttisten aineiden eturauhasen syöpäsoluja. Kuitenkin yksi tärkeä On kuitenkin huomattava: ALCAM on läsnä kaikissa molekyylin kanssa fysiologisia rooleja suolen limakalvolla [43]. Vakavia vaikutuksia normaaleihin kudoksiin saattaa siten johtaa ja on otettava huomioon, kun sovellus systeemisen tietyn syövän hoitomuotoja pidetään [43].

Koska korkea ilmentymisen ALCAM useimmissa syöpä vaurioita olemme myös arvioineet tasoja s-ALCAM (alkaen ektodomeeni vuodattamalla ALCAM) veressä sera. S-ALCAM arvot olivat merkittävästi koholla PAC potilailla verrattuna potilaisiin, joilla CP ja terveen veren luovuttajien (p 0,001 ja p 0,001, vastaavasti, kuvio 3A). AUC osoittivat tyydyttävää erottelukykyä s-ALCAM (AUC = 0,690; Kuva 3B). Herkkyys (58,6%) ja spesifisyys (73,9%) ja s-ALCAM oli selvästi huonompi tuumorimarkkeri yleisimmin käytetty PAC, CA19-9, (herkkyys 58%: sta 87%, spesifisyys 93%) [44] . Kuitenkin potentiaali suunnitelmallista heikkoudet Tutkimus on tarkasteltava arvioinnin tulokset: Vaikka käsittely seeruminäytteistä on standardoitu toimielimellemme, pienetkin erot jalostukseen tai käsittely voi olla valtavia vaikutuksia [45]. Lisäksi tutkimuksessa oli retrospektiivinen ja järjestettiin suhteellisen pitkän ajan. Siten tuloksemme eivät sulje pois mahdollisen käyttökelpoisuuden s-ALCAM seerumin kvantifiointiin testi, uskomme testi olisi edelleen arvioitava mahdollinen tutkimuksissa suurempia potilasryhmissä.

Sen määrittämiseksi yhdistyksen kohonneen s -ALCAM tasoilla elossaololuku ja kasvaimen vaiheessa eri tilastollisia menetelmiä. Kumpikaan analyysi käyttämällä s-ALCAM tasot jatkuvana muuttujana eikä luokka-analyysi eri raja-arvot osoittivat merkitseviä kliinisiä tai histopatologisia parametrit (taulukko 1 esittää esimerkinomaisesti tulokset 75

persentiilin cut-off-tason ). Kuten jo mainittiin, ALCAM saattaa olla inertti tekijä, joka voisi selittää puute yhdistyksen [13].

Äskettäin mahdollista roolia ALCAM in gemsitabiinin aiheuttaman chemoresistance in PAC kuvattiin, koska ALCAM-vaiennettu PAC solut osoittivat indusoidun chemoresistance [37]. Tutkiminen kliinistä vaikutusta in vitro data, suoritimme sub-analyysi potilaille, jotka saavat adjuvanttihoitoa koskien eloonjäämisen (log-rank-testi). Potilaat, joilla on korkea tai keskitason ALCAM ilmaus ei osoittanut vähentää tai pidensi elinaikaa verrattuna ALCAM negatiivisilla potilailla (n = 60, p = 0,176). Lisäksi ei eloonjäämishyötyä todettiin potilailla, joilla on alentunut s-ALCAM seerumissa (75

persentiili, n = 28, p = 0,672). Koska takautuva luonne Tutkimuksen Muutamilla potilailla adjuvanttihoitoa tunnistettiin, joka merkittävästi rajoittaa teho analyysin. Lisäksi erilaisia ​​järjestelmiä annettiin (gemsitabiini, fluoriurasiili ja muut). Tarkempi analyysi tulisi suorittaa suurempia ja vähemmän heterogeeninen potilasaineistoihin, mikä saattaa auttaa tunnistamaan potilaat, jotka hyötyisivät eniten adjuvanttia hoito ja myös auttaa räätälöidä parhaan yksilöllisen kohtelun kullekin potilaalle.

seerumin s -ALCAM on tutkittu haimasyövän aikaisemmin, mutta tämä tutkimus oli ensimmäinen analysoida sekä ALCAM ilmaisua ja s-ALCAM tasolle samalla potilaille [36], [37], [38]. Yllättäen mitään merkittävää korrelaatiota tai assosioitunut koholla kudoksen ilmaisun ja seerumin taso potilailla (n = 48, p = 0,699). Äskettäin s-ALCAM tasot tutkittiin rintasyövän ja ruokatorven syöpä potilaat mutta ei korreloi kudoksen ilmentymistä havaittiin [30], [35]. Tämä voi olla useita syitä: Esimerkiksi pelkästään ilmaus ALCAM proteiinin ei tarvitse johtaa suurentuneeseen vuodattamalla s-ALCAM proteaasien kuten ADAM17, joka äskettäin osoitettu [29], [30]. Lisäksi punoitusta valetusta molekyylin verenkiertoon saattaa olla seurausta häiriöiden anatomiset esteet ympäröivän isäntä kudosten ja endoteelisolujen. Yhdessä sääntelymekanismeissa vuodattamalla ALCAM ja niiden välittämisen ympäröivään kudokseen ja sen tuloa verenkiertoon ovat tuskin ymmärretään ja lisätutkimusten tarvitaan.

ALCAM ilmenee vahvasti PAC yksilöitä. Kohonnut ALCAM ilmentymistä perus- ja metastaasien PAC kenties tehdä ALCAM mahdollisena kohteena uusille vasta-aineisiin perustuvia hoitostrategioita. Immuunihistokemialliset Tutkimuksemme tuloksia ei paljastanut mitään merkittävää yhdistyksen välillä ALCAM ilmaisun ja kliinisiä tai patologisia tietoja PAC potilailla. Tämä tulos poikkeaa selvästi edelleen -tutkimusten ilmentymistä ALCAM haimasyövän ja useita muita kiinteitä kasvaimia ruoansulatuskanavassa. Lisätoimia on sitoutunut tutkia fysiologisia ja onkologian rooli ALCAM ja vahvistamaan kliinistä käyttöä s-ALCAM mahdollisena kliininen markkeri PAC.

Methods

Potilaat ja kliiniset tiedot

tätä tutkimusta varten kudosnäytteitä (n = 264) ja veren seerumista (n = 116) potilailla, joilla on PAC ja seerumit 115 potilasta, joilla CP käsitellään laitoksella General, sisäelinten ja Torakaaliikirurgia, University Medical center Hamburg-Eppendorf vuosien 1993 ja 2006 analysoitiin. Verinäytteet otettiin juuri ennen leikkausta. Kukaan potilaista ei saanut neoadjuvant hoitoa. Kaikki tiedot mukaan lukien sukupuoli, histologia, kasvaimen koon, imusolmuke etäpesäke, taudin vaiheessa (UICC 6

painos). Follow-up tiedot saatiin yhdistelmästä kliiniset ja patologiset kirjaa arvioita, mistä poliklinikka potilastiedot ja yhteydenpitoa potilaiden ja heidän lääkäreiltä, ​​ja syöpä rekisteristä. Kokonaiselossaoloaika laskettiin alkaen toiminnan kuolinpäivästä tai Viimeisimmässä seurannassa. Potilaat, jotka eivät selvinneet 30 ensimmäisen päivän kuluttua leikkauksesta jätettiin selviytymisen analyysin.

Tutkimus hyväksynyt eettinen komitea Chamber of Physicians Hampuri, Saksa. Kirjallinen lupa käyttää näytteiden tutkimustarkoituksiin saatiin kaikille potilaille ennen leikkausta tai veren piirustuksen.

Tissue Microarray (TMA) B

ennestään haimasyöpä kudos microarray koostuu yhteensä 600 kudosnäytteiden [31], [46]. Näitä ovat 244 näytettä ensisijainen haiman adenokarsinooma, 116 imusolmukemetastaaseja, 12 kaukaisia ​​etäpesäkkeitä ja 23 paikallista uusiutumista 264 potilaalla on PAC. Lisäksi haimatuumorien muu kuin adenokarsinooma (hormonaaliset, intraduktaalisissa papillaarinen mucinous kasvaimet, hyvänlaatuiset ja pahanlaatuiset kystinen kasvaimia, ja asinoosisolukasvainten), vakio valvonta-alueen, joka sisältää 40 kasvaimia muista elimistä, terve haiman kudoksista, ja 18 terveiden kudosten muilta sivustoilta ovat mukana. Rakentaminen TMA kuvattiin aiemmin [47]. Lyhyesti, hematoksyliiniä-eosiini värjätyt leikkeet valmistettu valikoiduista primaarikasvaimen lohkot (luovuttaja lohkot) määritellä edustavan kasvaimen alueilla. Tissue sylinterit (0,6 mm halkaisijaltaan) sitten meistetään että alueelta luovutuslohkon käyttäen kotitekoisia puoliautomaattista kudosta ryhmittäjällä. Jaksot 3 um leikattiin käyttämällä parafiinia leikkausnopeudesta Aid System (Instrumentics, Hackensack, NJ, USA).

Immunohistokemiallinen värjäys ALCAM ja arviointi ALCAM Expression

ALCAM värjäytyminen protokolla optimoitu laaja ja standardoitu monivaiheinen menettely eri hyvän- ja pahanlaatuisten kudosten protokolla muokattiin kunnes selektiivinen värjäys alin taustalla signaaleja perustettiin [40]. Juuri leikattu TMA osiot analysoitiin yhden päivän yhdessä kokeessa. Ilmentyminen ALCAM havaittiin käyttäen hiiren monoklonaalista vasta-ainetta (klooni MOG /07, 1:450; Novocastra, Newcastle upon Tyne, UK), sen jälkeen kun osat oli peitetty sitraattipuskurilla, pH 7,8, ja keitetään autoklaavissa. EnVision järjestelmä (Dako, Glostrup, Tanska) käytettiin havainnollistamaan Immunovärjäyksen.

Only membranous värjäytyminen arvioitiin koska sytoplasmaattinen värjäystä – jos läsnä – oli aina sidoksissa vahvempi membranous värjäystä. Värjäytymisintensiteettiä (0, 1+, 2+, 3+) ja osa positiivisia kasvainsoluja pisteytettiin kunkin kudoksen spot äskettäin julkaistu [40]. Täplät ilman värjäystä ja joiden värjäytymisen intensiteetti 1+ in 70% ja 2+ 30% kasvainsoluista pisteytettiin ALCAM alhainen, keskitason pisteitä annettiin varten värjäytymisen intensiteetti 1+ vuonna ≥70%, 2+ ≥30% tai 3+ 30% kasvainsoluista ja huippupisteet annettiin varten värjäytymisen intensiteetti 2+ ≥70% tai 3+ ≥30% tuumorisolujen. Immunohistokemiallinen analyysi kohdat tehtiin ilman tietoa potilaiden henkilöllisyyden tai kliininen tila.

Sandwich-ELISA s-ALCAM

s-ALCAM kvantifiointiin ääreisverenkierrossa, seeruminäytteet 116 valkoihoisiin PAC ja 115 valkoihoisiin (37 naarasta ja 78 miehiä, mediaani-ikä 50,1 vuotta (+31,4-+79,2vuosi)) CP, joka oli tarkoitettu leikkaushoitoa, analysoitiin s-ALCAM sandwich entsyymi immunomääritys ( ELISA). Kaikki verinäytteet saatiin suoraan ennen leikkausta. Kuten terveillä verrokeilla, 128 valkoihoinen veri-pankki luovuttajien (62 naarasta ja 66 miehiä, mediaani-ikä 48,7 vuotta +19,2-+65,3vuotta) sisällytettiin tutkimukseen. Kaikki seerumit käsiteltiin viimeistään 4 tunnin jälkeen [45].

havaitsemiseen s-ALCAM, joustava 96-kuoppaisille mikrotiitterilevyille (Costar, Corning, NY, USA) päällystettiin 50 pl kuoppaa kohti 2 ug /ml hiiren monoklonaalinen pyydystää vasta-ainetta (MAB6561; R Fraktion V, puhtaus 98%, Sigma Aldrich, Taufkirchen, Saksa) PBS: ssä /T (PBS, pH 7,3, joka sisälsi 0,05% v /v Tween) 45 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, ja sitten inkuboitiin 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ihmisen seerumin kanssa, jotka oli laimennettu 1:50 PBS: ään. Viiden pesun PBS /T, sitoutuneen proteiinin havaittiin biotiini-konjugoitu polyklonaalinen vasta-aine (BAF656 R 10% variaatiokerroin (CV) varten intra- ja määritysten välinen vaihtelu tutkimuksia.

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS Statistics for Windows (versio 17, SPSS Inc., Chicago Ill, USA). Keskinäinen riippuvuus immunovärjäystä ja ELISA-tulokset sekä kliiniset tiedot laskettiin käyttäen Chi-square ja Fisherin testejä ja näytetään cross taulukoissa. Cut-off tasolla s-ALCAM kvantifiointiin määritettiin Youdenin-indeksin. Ryhmä erot laskettiin t-testin, ANOVA; Mann-Whitney tai Kruskal-Wallisin testiä. Vastaanotin toimii ominaiskäyrät käytettiin kuvaamaan suorituskykyä s-ALCAM. Survival käyrät piirrettiin käyttäen Kaplan-Meier menetelmällä ja analysoitiin käyttäen log-rank-testi. Kaikki testit olivat kaksipuolisia ja p-arvot alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Kiitokset

Kiitämme potilaista vapaaehtoisesti ja avokätisesti tiedot ja näytteet tutkimustarkoituksiin sekä Petra Schröder ja Christina Koop erinomaisesta teknistä tukea.