Krooninen sairaus

tiivistelmä

stressin aiheuttama fosfoproteiini 1 (STIP1) on hiljattain tunnistettu julkaistiin biomarkkereiden ihmisen munasarjasyöpä. Lisäksi, STIP1 erittävät ihmisen munasarjasyövän solujen on osoitettu edistävän kasvainsolujen proliferaatiota sitoutumalla Alk2 (aktiiviinimolekyylien reseptorin tyyppi II-like kinaasi 2), ja aktivoimalla Smad-ID3 signalointireitteihin. Tässä tutkimuksessa, yhteensä 330 munasarjasyöpä kasvainnäytteet arvioitiin STIP1 ekspressiota immunohistokemiallisesti ja analysoitiin mahdollisen korrelaation potilaan ominaisuudet ja selviytymistä. Kvantifiointi immunoreaktiivisuus suorittaa lisäämällä immunohistokemiallinen pisteytysjärjestelmä (histoscore). Potilaat, joilla on korkean tason STIP1 ilmentymisen (histoscore ≥169) oli merkitsevästi elinajan (korkea STIP1, keskimääräinen elinaika = 76 kuukautta, alhainen STIP1, keskimääräinen elinaika = 112 kuukautta;

P

0,0001). Lisäksi STIP1 histoscores olivat merkittävästi korkeammat korkealaatuisesta kasvaimet (arvosana 3) kuin huonolaatuisen (grade 1-2) syöpäsairauksia (

P

0,0001), mikä viittaa siihen, että STIP1 voi olla välityspalvelinta kasvain aggressiivisuus. Tulokset monimuuttujaisen analyysi paljasti, että korkeat STIP1 histoscores, vaiheissa, histologisen tyypit, ja läsnäolo jäljellä tauti (≥2 cm) olivat riippumattomia ennustajia huonoon ennusteeseen. Lisääminen STIP1 histoscores paransi ennustaminen yleistä ja etenemisestä vapaan eloonjäämisluvut että monimuuttuja Coxin suhteellista riskin malliin. Hoito munasarjasyövän solut yhdistelmä STIP1 stimuloi soluproliferaatiota ja muuttoliike, mutta co-hoito anti-STIP1 vasta kumotaan tätä vaikutusta. Tuloksemme viittaavat siihen, että STIP1 ilmentyminen voi liittyä ennustetta ja että STIP1 reitti voi edustaa uutta terapeuttinen kohde ihmisen munasarjasyöpä.

Citation: Chao A, Lai CH, Tsai CL, Hsueh S, Hsueh C, Lin CY, et al. (2013) Tumor stressin aiheuttama Phosphoprotein1 (STIP1) kuin Prognostiset biomarkkereiden munasarjasyövässä. PLoS ONE 8 (2): e57084. doi: 10,1371 /journal.pone.0057084

Editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 lokakuu 2012; Hyväksytty: 16 tammikuu 2013; Julkaistu: 27 helmikuu 2013

Copyright: © 2013 Chao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustusta National Science neuvosto (NSC100-2314-B-182-016MY3 ja THW), Chang Gung Medical Research Foundation (CMRPG391451 /2 AC, CMRPG 391461/2 ja THW), ja Department of Health ( DOH101-TD-I-111-TM013 ja THW, DOH101-TD-C-111-006 ja AC ja THW). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Epiteelin munasarjasyöpä on yksi kaikkein vaarallisin syöpäsairauksia naisia ​​[1]. Lähes 225500 munasarjasyövän uutta tapausta esiintyy maailmanlaajuisesti vuosittain vastuussa 140200 kuolemista [2]. Munasarjakarsinoomat käsittävät heterogeeninen kasvainten neljästä yleisimmästä histologinen alatyyppi on vakavasta, endomet-, kirkas solu, ja mucinous [3]. Mittaus seerumin syöpäantigeenipep- 125 (CA125) tasot on tullut tavanomainen käytäntö ennen leikkausta arvioinnin munasarjojen massojen [4]. Lisäksi, CA125 on osoitettu olevan käyttökelpoisia seurantaan terapeuttisen vasteen ja valvonnan potilaita, joilla on munasarjojen epiteelin syövän [5]. Kuitenkin, CA125 ei kohonnut kaikissa munasarjojen kasvaimia ja ei ole riittävästi positiivinen ennustearvo väestöpohjaisia ​​arviointiin, tai varhainen havaitseminen [6]. Rajoituksista johtuen CA125 kuin sairauden merkkiaine, on kiireellinen tarve uusille biomarkkereita, joita voidaan käyttää ennustetekijöiden indikaattoreita munasarjasyöpää tehokkaasti erottaa aggressiivinen ja vähemmän aggressiivinen tauti.

Viimeaikaiset teknologiset edistysaskeleet, erityisesti aloilla genomiikan ja proteomiikan, ovat nopeuttaa löytämään uusia syövän biomarkkereita [7], [8]. Vertaamalla proteomeja kasvaimen soluvälinesteessä (TIF) ja normaalin soluvälinesteessä (NIF), olemme hiljattain tunnistettu stressin aiheuttama fosfoproteiini 1 (STIP1) ehdokkaaksi biomarkkeri ihmisen munasarjasyöpä [9]. Seerumin STIP1 tasot ovat merkittävästi korkeammat munasarjasyöpäpotilaalle kuin ikä-haun terveillä verrokeilla [9] ja vähentää merkittävästi kirurgisen poiston jälkeen kasvain [10]. Lisäksi, yhdistetty mittaus CA125 ja STIP1 on osoitettu parantavan varhaisen havaitsemisen munasarjasyöpä [9], joka tukee kliininen hyödyllisyys STIP1 biomarkkerina tässä maligniteetti [11].

STIP1, myös tunnetaan Hsp70 /Hsp90-järjestäminen proteiini (HOP), transformaatio-herkkä proteiinin IEF SSP 3521 (IEF-SSP-3521), P60, STI1, STI1L, (GeneID 10963; HPRD 05454), joka on 62,6 kDa proteiini, sisältää kolme tetratricopeptide toista (TPR) verkkotunnuksia [12], jotka voivat olla vuorovaikutuksessa lämpöshokkiproteiineihin muodostamaan komplekseja, jotka osallistuvat erilaisiin biologisiin prosesseihin vaihtelevat silmukointi, transkriptio, proteiinin laskostumista, signaalitransduktion, ja solusyklin säätelyssä [13], [14]. Hermokudoksissa, solunulkoisen STIP1 sitoutuu prioniproteiineja ja laukaisee eri signalointireittejä – mukaan lukien endogeeninen mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasin 1/2 (ERK1 /ERK2), proteiinikinaasi A: n ja fosfatidyyli-3-kinaasi signa- – lopulta johtaa kasvuun soluproliferaatioon [15], [16], [17]. Munasarjasyövän, olemme osoittaneet, että STIP1 sitoutuu luun morfogeneettinen proteiini (BMP) reseptori – nimeltään aktiiviinimolekyylien reseptorin, tyypin II kaltainen kinaasi 2 (Alk2) – aktivoida Smad signalointireitin ja transkription aktivoituminen ID3 (estäjä DNA: ta sitovan 3) [10]. Yhdessä nämä havainnot viittaavat siihen, että STIP1 erittävät ihmisen munasarjasyöpäsoluja edistää syöpäsolujen lisääntymistä toimimalla autokriinisellä ja /tai parakriinisellä tavalla.

Vaikka vapautuminen STIP1 ihmisen munasarjasyöpä on vahvistanut riippumaton tutkimusryhmä [18], harvat tiedot ovat saatavilla hyödyllisyydestä STIP1 immunohistokemiallista analyysiä arvioimiseksi ennusteen munasarjasyöpä [19]. Tässä tutkimuksessa yhteensä 330 munasarjasyövän kasvainnäytteestä arvioitiin STIP1 ilmaisun immunohistokemiallisesti ja analysoitiin mahdollisen korrelaatio potilasryhmät ja selviytymistä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics Statement

Tämä tutkimus suoritettiin noudattaen Helsingin julistuksen ja hyväksyi Institutional Review Board of Chang Gung Memorial Hospital (CGMH-IRB # 99-0112B ja # 97-1444C).

Potilaille

Vuosien 2000 ja 2005 yhteensä 403 peräkkäisen potilaiden diagnosoitu munasarjasyöpä on Linkou Medical Centre of Chang Gung Memorial Hospital olivat mukana tutkimuksessa. Histologinen tyypit olivat seuraavat: vakavien (n = 160), mucinous (n = 68), endomet- (n = 73), kirkas cell carcinoma (n = 64), ja sekoitettiin solutyypin (n = 38). Poissulkukriteerit olivat seuraavat: (i) potilailla, joille tehtiin neoadjuvant hoito ennen lopullista leikkausta tai jotka saatettiin ulkopuolelta sairaaloissa alkuvaiheen jälkeen leikkauksen; (Ii) potilailla, joille tehtiin laparoskopinen ensisijaisena hoitoon; (Iii) joiden ei seurattu kolmen ensimmäisen kuukauden jälkeen mekaanisesti; (Iv) potilaille, joilla on erilaistumaton karsinoomia syntyviä teratomas; ja (v) potilailla, joilla on käytettävissä patologinen parafiinilohkoihin. Etenemisestä vapaa elinaika (PFS) laskettiin aikavälin (kk) alkaen leikkaus päivämäärä dokumentoitu taudin etenemiseen (takautuvasti määritelty perustuu seerumin CA125 ja /tai röntgenkuvissa nähtävien etenemisen). Kokonaiselinaika (OS) määriteltiin välinen aika, jona kirurgian ja kuolinpäivä.

immunohistokemia

arkistoista formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut munasarjasyöpään kudosleikkeet haettuja kuten aiemmin on kuvattu [9], [20], [21]. Leikkeet värjättiin primaarisella hiiren anti-humaani STIP1 monoklonaalinen vasta-aine (Abnova Corp., Taipei, Taiwan, 1:1,800 laimennus) käyttäen automatisoitua immunohistokemia värjäyslaitteesta kanssa Ventana Basic DAB (3,3-diaminobentsidiini) Detection Kit (Tucson, AZ, USA). Levyjä arvioitava riippumattomasti kahdella patologit (S. H. ja C. H.), jotka olivat sokaissut kliinis datan ja patients’identities. Yleinen immunohistokemiallista pisteet (histoscore) ilmaistiin prosentteina positiivisia kasvainsoluja (0-100%), kerrottuna niiden värjäytymisen intensiteetti (0 = negatiivinen, 1 = heikko, 2 = kohtalainen, 3 = voimakas). Näin ollen, koko histoscore vaihteli 0-300 [22]. Validointi anti-STIP1 Vasta-aineen spesifisyyden suoritettiin estämällä vasta 400 nM rekombinanttia ihmisen STIP1 proteiini (rhSTIP1) aikana inkubaatiovaiheen anti-STIP1.

Cell Culture

Munasarjojen syöpäsolulinjoissa (BG1, MDAH2774) saatiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Soluja viljeltiin 10% FBS: ää, penisilliiniä (100 yksikköä /ml), streptomysiiniä (100 yksikköä /ml), ja DMEM /F12-väliainetta 37 ° C: ssa, 5% CO

2-ilmakehässä.

Cell Migration määritys

BG1 ja MDAH2774 soluja (10

6 /kuoppa) – käsiteltiin joko rhSTIP1 (400 nM) tai pelkkää vehikkeliä – viljeltiin seerumittomassa väliaineessa 24 tunnin ajan. Solut asetettiin saliin of Transwell (24-kuoppainen, 8-um huokoskoko Corning Inc., Corning, NY, USA). Alempi kammio täytettiin 800 ui DMEM /F12 ja 0,5 ug /ml fibronektiiniä (Sigma, St. Louis, MO, USA). Sen jälkeen, kun 26 tunnin inkubaation jälkeen solut, jotka olivat vaeltaneet huokosten läpi ja kiinnitetty alempi kalvo värjättiin fluoreseiini ja kalseiini-AM: n (4 ug /ml; BD Biosciences, San Diego, CA, USA). Määrä elinkelpoisia soluja, jotka oli kulkenut suodattimen määritettiin fluoresenssin mittausta kutakin näytettä käyttäen Tecan Infinite M200 Multiwell (TECAN, Männedorf, Sveitsi). Neutralointi STIP1 suoritettiin käyttäen anti-STIP1-vasta-ainetta (800 nM). Kaikki määritykset toistettiin ainakin kolme kertaa.

haavansulkemiseen Pitoisuus

vaikutuksen tutkimiseksi STIP1 solun maahanmuuttoa, MDAH2774 solut (10

6 /kuoppa), jotka joko käsitellään 400 nM rhSTIP1 tai ajoneuvon ympättiin 3,5 cm: n annoksia 24 tunnin viljelyn seerumivapaassa väliaineessa. Sitten väliaine korvattiin yksi, joka sisälsi 0,4% FBS: ää. Solumigraation havaittiin aukon läpi. Vaihekontrasti kuvia aukot kiinni alussa ja 24 tunnin kuluttua hoidon käännettyä mikroskooppia (suurennus 10 x). WimScratch ohjelmisto (Wimasis, Munich, Saksa) käytettiin analysointiin haavan [23].

solunelinkykyisyysmääritys käyttäen 3- (4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5 difenyylitetra (MTT) B

konversio keltainen tetratsoliumsuolojen violettiin formazon kiteitä mitokondrioiden käytettiin mittarina solujen elinkykyä. 48-kuoppaisille levyille, 5 x 10

4-soluja viljeltiin 200 ul: ssa väliainetta per kuoppa yön yli. Kaksikymmentä ui MTT-reagenssia lisättiin kuhunkin kuoppaan, ja sen jälkeen 4 h, 200 ui liukenemisen liuosta (10% SDS: ää 0,01 M HCI) kuoppaa kohti lisättiin yli yön. Absorbanssi määritettiin 570 nm: ssä mikrolevyspektrofotometrillä (PerkinElmer Life Science). Testaamiseksi vaikutuksen knockdovvn STIP1 solujen elinkelpoisuuteen, munasarjasyöpä solut transfektoitiin 50 nM kaksijuosteisen siRNA kohdistaminen STIP1 tai ohjata siRNA Lipofectamine RNAimas (Invitrogen, Calsbad, CA), kuten aiemmin on raportoitu [10]. 48 tunnin kuluttua transfektion jälkeen solut jatkoviljeltiin levyn MTT määrityksissä.

bromideoksiuridiinia (BrdU) sisällyttäminen Pitoisuus

vaikutuksen tutkimiseksi STIP1 soluproliferaatioon, BG1 ja MDAH2774 soluja (10

4 solua /kuoppa) viljeltiin täydellisessä väliaineessa 24 h, jonka jälkeen 72 h seerumin nälkään. Solut käsiteltiin sitten joko 400 nM rhSTIP1 tai ajoneuvon 24 tuntia. DNA-synteesi määritettiin kanssa Cell Proliferation ELISA, BrdU Kit (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA) käyttäen kolorimetrisesti mukaan valmistajan protokollan [21], [23]. Neutralointi eksogeenisen STIP1 suoritettiin käyttäen anti-STIP1-vasta-ainetta (800 nM).

Ki67 immunosytokemiallinen Pitoisuus

BG1 ja MDAH2774 soluja seerumia 72 tuntia ja käsiteltiin sitten joko 400 nM of rhSTIP1 tai ajoneuvon 24 tuntia. Proliferatiivinen aktiivisuus testattiin immunosytokemiallisessa värjäyksessä Ki67 käyttäen monoklonaalinen vasta-aine Ki67 (NeoMarker, Fremont, CA, USA).

Tilastollinen analyysi

erot histoscore kahden ryhmän välillä verrattiin Mann-Whitney

U

testi. Kruskal-Wallisin testiä käytettiin verrattaessa enemmän kuin kaksi ryhmää. Kyky STIP1 histoscores erottamaan selvisivät ja kuolleen potilaat arvioitiin piirtämällä vastaanottimen toiminta-ominaisuudet (ROC) käyrä, joka liittää todellinen positiivisten määrä (herkkyys) ja väärien positiivisten määrä (1-spesifisyys) ja laskemalla pinta-ala käyrän alla (AUC). Aikariippuvainen ROC käyrät arviointiin käytettiin AUC eri ajankohtina [24]. Coxin suhteellisten riskien regressioanalyysiä käytettiin tunnistamaan riippumattomia ennustajia käyttöjärjestelmän ja PFS. Kaikki muuttujat kanssa yhden muuttujan yhdistysten osoitteessa

P

0,05 vietiin monimuuttuja malliin. Tutkimaan vaikutusta lisäämällä STIP1 jotta ennustetekijöiden Coxin mallin potilaalla on invasiivisia munasarjasyöpä, me vähennetty poikkeavuuden mallin lisäämällä STIP1 alkaen poikkeavuuden mallin ilman STIP1. Tämän jälkeen erotus testattiin Khin neliö jakauman vapausasteita yhtä suuri kuin erotus vapausasteita kaksi mallia (tai ilman STIP1) [25]. Tulokset esitetään tarkistetaan hazard ratio (HR) ja 95% luottamusvälit (CI). Kaikki analyysit tehtiin SPSS 17.0 tilastopaketilla (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Käytimme R paketti

survivalROC

(R versio 2.15.1; R perusta Tilastollinen tietojenkäsittely, Wien, Itävalta) laskettaessa ajasta riippuvaa ROC käyrät. Kaksisuuntainen

P

arvojen 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

High STIP1 immunohistokemiallinen ilmentyminen liittyy korkea-vaiheessa korkea-asteen, ja Invasive munasarjasyöpä

tulokset immunohistokemiallinen (IHC) osoitti, että käsittely ylimäärällä rekombinanttisen STIP1 kumosi kokonaan immuuni tunnustamatta kudoksen STIP1 anti-STIP1 vahvistaen spesifisyys anti-STIP1 käytetty vasta-aine tässä tutkimuksessa (kuviot 1A-D). Jotta identtinen anti-STIP1 käytetty vasta-aine IHC koko tämän tutkimuksen Western blot-analyysi useiden munasarjasyövän solulinjoissa vahvistettiin myös sen spesifisyys tunnistamaan STIP1 (kuvio S1). Erot STIP1 immunohistokemiallisella värjäyksellä on esitetty kuvioissa 1E-G.

STIP1 ilmaistuna sytoplasmassa munasarjasyöpäsoluja värjätään ruskea. Immunoreaktiivisuus STIP1 anti-STIP1-vasta-aineen syövän kudoksissa (A, C) kumottiin lisäämällä 15 ug rekombinanttia ihmisen STIP1 inkuboinnin aikana (B, D); nämä tulokset tukevat spesifisyys anti-STIP1 vasta-aine. Intensiteetti STIP1 värjäys luokiteltiin 1 (E), 2 (F), ja 3 (G). Kaikki diat Tässä esitetyt olivat munasarjojen vakavasta karsinoomat. Asteikko pylväät edustavat 100 um (A, B) tai 20 um (C-G).

Yhteensä 330 munasarjasyöpäpotilaalle (mediaani-ikä 50,7 vuotta valikoima, 17-90 vuotta ) olivat mukana tutkimuksessa. Yleiset ominaisuudet Tutkimuksen potilaista on esitetty taulukossa 1. Niistä 50 potilaalla on rajatapaus munasarjojen kasvaimia (BOT), 49 (98%) oli vaiheen I tai II. Sitä vastoin 146 (52,1%) ja 280 potilaalla on kohdunkaulan syöpä oli vaiheen III tai IV. Serous kohdunkaulan oli yleisin histologinen alatyyppi. Korkeampi STIP1 histoscores liittyivät merkittävästi iällä (≥50 vuotta), pitkälle, läsnäolo ei-mucinous syöpiä (vakavien, kirkas solu, tai endomet- karsinoomat), asteen 3, kohdunkaulan syöpä, korkea CA125 tasoilla (≥35 U /ml), ja optimaalinen ensisijainen kirurgiset cytoreduction (jäljellä tauti ≥2 cm) (taulukko 1).

High STIP1 immunohistokemiallinen ilmentyminen liittyy Alennettu Kokonaiselossaoloaika (OS) B

mediaani kesto seuranta-aika oli 69,3 kuukautta (vaihteluväli 4-130 kuukautta). Tutkia mahdollisuuksia hyödyllisyyttä STIP1 immunohistokemiallinen ilmaisun biomarkkerina munasarjasyövän, käytimme ROC käyrä määrittää miten hyvin eri histoscores voitaisiin käyttää ennustamisessa selviytymisen. Koska vähintään seurannan 3 vuoden vaadittiin selviytymisen analyysin määräytyy ROC käyrä, yhteensä 245 potilasta otettiin mukaan tähän analyysiin. Optimaalinen sulku varten STIP1 histoscore erotella potilaat, jotka selvisivät (n = 191) ja ne, jotka kuolivat (n = 54) oli 169 (herkkyys = 0,889, spesifisyys = 0,492). Analyysissä kaikkien tutkittujen potilaiden mukaan lukien invasiivisia (n = 280) ja rajatapauksia (n = 50), kumulatiivinen OS, että potilailla, joilla on STIP1≤169 (n = 119), oli merkittävästi suurempi (

P

0,0001) kuin pistemäärällä 169 (n = 211) on Kaplan-Meier-analyysi. Keskimääräinen selviytyminen kaudet olivat 112 ja 76 kuukautta, vastaavasti (kuvio 2A).

Kaplan-Meierin käyrä analyysit eloonjäämiseen osoitti, että naisilla, joilla on STIP1 histoscore 169 (punainen viiva) oli huomattavasti alhaisempi kokonaiselinaikaa kuin ne, joilla on STIP1 histoscore ≤169 (sininen viiva). Tilastollinen merkitykset (

P

0,0001) havaittiin analyyseissä (A) kaikissa tapauksissa (n = 330), mukaan lukien kohdunkaulan syöpä ja rajatapaus kasvain (BOT), (B) invasiivisia munasarjasyöpiä kaikkien solutyyppien (n = 280), ja (C) ainoastaan ​​invasiivisia vakavasta tyyppi munasarjojen syöpien (n = 107).

Koska raja munasarjojen kasvaimia on yleensä ominaista hyvä ennuste, ja joita ei yleisesti sisälly munasarjojen syöpä kliiniset kokeet, riippumaton ennustetekijöiden merkityksen STIP1 tasojen analysoitiin ainoastaan ​​potilaiden alaryhmässä invasiivisen munasarjasyövän (n = 280). Tulokset monimuuttuja-analyysi osoitti, että STIP1 histoscores 169 olivat riippumattomia, merkittävästi ennustetekijä OS (

P

0,005) ja PFS (

P

0,05) (taulukko 2 ). Kaplan-Meier analyysit paljasti myös, että STIP1 histoscores 169 olivat merkitsevästi yhteydessä huonoon OS sekä kaikissa invasiivisia tapauksissa tämän tutkimuksen (n = 280) (kuvio 2B) ja invasiivisia vakavien munasarjasyöpiä (n = 170) (kuvio 2C) .

High STIP1 immunohistokemiallinen ilmentyminen liittyy Korkeatasoinen kasvaimet

Histologinen luokittelu on tärkeä parametri riskinarviointiin munasarjasyöpäpotilaalle. Kuten taulukosta 1 STIP1 histoscores olivat merkittävästi korkeammat korkealaatuisesta (aste 3) kasvaimia kuin huonolaatuisen (grade 1-2) syöpäsairauksia (

P

0,0001). Tutkimme lisäksi kliinistä merkitystä STIP1 immunoexpression munasarjojen syöpien niiden histologinen tyyppi ja laatu. Suurin osa 3. asteen kasvaimet osoittivat STIP1 histoscore 169; erityisesti, 92,8% (77/83) ja vakavien tyyppi, 92,3% (12/13) ja endomet-, ja 76,5% (13/17) ja sekamuotoinen karsinoomien osoitti korkeaa STIP1 ilme. Niistä 57 kirkas solu munasarjojen syöpiä, jotka eivät yleensä ole luokiteltu [3], 40 (70,2%) osoitti STIP1 histoscore 169. Kumulatiivinen OS hinnat potilaalla on huonolaatuisen (grade 1-2) maligniteetit olivat merkittävästi korkeammat kuin potilailla, joilla oli asteen 3 syöpäsairauksia (

P

0,0001). Keskimääräinen eloonjääminen jakson aikana olivat 102 ja 66 kuukautta, vastaavasti (kuva S2). Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että korkeat STIP1 histoscores liittyy erityisen aggressiivinen munasarjasyöpä.

lisäämällä STIP1 Histoscores Parantaa Prognostic ositus Potilaat, joilla Invasiivinen munasarjasyöpiä

Voit testata onko STIP1 histoscores toimitti tietoja lisäksi nykyisin käytössä kasvain luokittelua ja lavastus, me analysoi vaikutusta STIP1 tasot kliinisin eloonjäämiseen vain potilailla, joilla on sama laadut tai sama kliininen vaiheissa. Potilailla, joilla on asteen 3 munasarjasyöpä, potilailla, joilla on STIP1 169 (n = 102) oli merkitsevästi (P ​​= 0,022) huonompi 5 vuoden pysyvyys 44,5% kuin 63,6% niillä, joilla STIP1≤169 (n = 11). Potilailla, joilla on luokan 1-2 munasarjasyöpä, tapaukset, joissa STIP1 169 (n = 62) oli huonompi 5 vuoden pysyvyys 73,8% kuin 85,3% niillä, joilla STIP1≤169 (n = 48), vaikka ero ei saavuttanut tilastollista merkittävyyttä vielä (P = 0,197). Lisäksi potilailla, joilla on edennyt vaiheiden (III ja IV) vakavien syöpä ja määrittelemätön arvosana 2-3 (n = 8), ne kaikki oli STIP1 169 ja 7 heistä (87,5%) sortunut taudin seurannan aikana up tämän tutkimuksen.

myös suoritettu analyysi poikkeavuuden ja rakennettu ajasta riippuvia ROC käyrät (tai ilman STIP1) tutkia lisäämällä STIP1 histoscores voisi parantaa ennustetekijöiden kerrostuneisuus potilaalla on invasiivisia munasarjojen syöpien. Näissä analyyseissä, muut mahdolliset ennustajia sisältyivät malliin olivat vaiheessa tyyppi, seerumin CA125, ja läsnäolo jäljellä taudin. Malli lisäämisen STIP1 histoscore muihin ennustetekijöitä merkittävästi päihitti malli ilman STIP1, osoittaen sekä suurempi AUC ja alempi deviances molemmissa OS (kuvio 3A,

P

= 0,0008) ja PFS (kuvio 3B,

P

= 0,014). Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että kasvain STIP1 histoscoring oli ennusteen arvioinnissa lisäksi luokittelu ja lavastus.

aikariippuvainen AUC (area under the ROC käyrä) mallin mukaan lukien STIP1 raportoidaan punaisena kiinteänä aineena linja, kun taas AUC mallin ilman STIP1 näkyy sinisenä pisteviivalla. Muita parametrejä olivat vaiheessa tyyppi, seerumin CA125, ja jäljellä tauti. (A) Kokonaiselossaoloaika, (B) etenemisestä vapaa elinaika.

STIP1 Kannustanut leviämisen ja muutto munasarjasyöpäsoluja

tutkimiseksi biologisten toimintojen STIP1, käsittelimme BG1 ja MDAH2774 munasarjasyöpä soluja rhSTIP1 (400 nM). Hoidon rhSTIP1 indusoi 1,9-kertaisen stimulaation BrdU sekä munasarjasyöpäsoluja (kuvio 4A). Lisäksi hoito rhSTIP1 johti lisääntyneeseen Ki-67 immunovärjäystä, viittaa siihen, että STIP1 indusoi ihmisen munasarjasyövän solujen lisääntymistä (kuvio 4B).

kaksi munasarjasyövän solulinjoissa (BG1 ja MDAH2774) käsiteltiin 400 nM ja rhSTIP1 ja analysoitiin BrdU (A) ja Ki67 immunovärjäyksellä (B). Ki67-positiivisten solujen näkyvät ruskea väri; asteikko palkit edustavat 20 μ.

Käsittely rhSTIP1 merkittävästi stimuloi munasarjasyövän solujen vaeltamiseen (2,4-kertainen BG1 soluissa ja 1,6-kertainen nousu MDAH2774 soluissa, vastaavasti) (kuvio 5A). Kanssa saadut tiedot Transvvell- migraatiokokeessa, tulokset haavansulkemiseen määrityksessä (kuvio 5B) analysoitiin käyttäen WimScratch ohjelmiston osoitti 1,8-kertaisen lisäyksen maahanmuuttoluku MDAH2774 käsiteltyjen solujen rhSTIP1 (tuloksia ei ole esitetty).

käsittely rhSTIP1 edistetään solumigraation tulosten mukaan kummankin Transwell muuttoliikkeen (A) ja haavan sulkeminen (B) määritykset. Kvantitatiivinen analyysi prosenttiosuus vaeltavien MDAH2774 soluihin käyttäen WimScratch ohjelmistoa osoittivat, että altistuminen rhSTIP1 indusoi 1,8-kertainen muuttoliike (B). Tulokset edustavat kolmen erillisen kokeen.

On tärkeää, että havaitut lisäykset solujen lisääntymisen ja muuttoliikkeen aiheuttama rhSTIP1 kumottiin Yhteistyössä hoito anti-STIP1 vasta-aineita (kuviot 6A ja 6B). Nämä tulokset eivät vain vahvistaa, että havaitut vaikutukset indusoitiin STIP1, mutta myös alustavia todisteita terapeuttista potentiaalia anti-STIP1 vasta-aineiden munasarjasyöpä.

Kun anti-STIP1 vasta-aineita (800 nM) lisättiin syöpäsoluja aikaisemmin altistuneet 400 nM rhSTIP1, solujen lisääntymistä (A) ja kulkeutuminen (B) on estetty. Data esitetään keskiarvoina ± keskivirhe keino kolmen itsenäisen kokeen.

munasarjasyöpäsoluja käsiteltiin rhSTIP1, siRNA knockdovvn STIP1, tai anti-STIP1 vasta-aineita, käytettiin myös MTT määrityksissä arvioida solujen elinkelpoisuuden mittarina solujen määrä, sillä edellytyksellä, että solujen määrä on muovautunut voimat sekä solujen lisääntymisen ja apoptoosin. Yhteisymmärryksessä tuloksiin kuviossa 4 ja kuviossa 6A, hoito rhSTIP1 merkitsevästi (P ​​ 0,01) lisääntynyt munasarjasyövän solujen määrä perustuu MTT-määritystä (kuvio S3A), kun taas pudotus on STIP1 merkitsevästi (P ​​ 0,005) tukahdutetaan munasarjasyöpäsoluja (Kuva S3B). Toisin kuin neutraloiva vaikutus anti-STIP1 on rhSTIP1-stimuloitujen solujen proliferaatiota (kuvio 6A), suora munasarjasyövän solujen eri klooneja anti-STIP1 ei muuttanut MTT lukemat (kuvio S3C).

keskustelu

Tämä tutkimus osoittaa ensimmäistä kertaa, että STIP1 on ennustetyövälineenä biomarkkereiden ihmisen munasarjasyöpä. Mukaan niiden yksittäisten molekyylien ominaisuuksia, biomarkkerit on hiljattain ryhmitelty seuraaviin ryhmiin: syövän synnyn biomarkkereiden vapautuu biomarkkerit, vastaus biomarkkereita, ja riski biomarkkerit [11]. Perustuen niiden soveltamista sairauden kuvaamista, biomarkkerit voidaan luokitella prognoosi-, ennakoivaa, ja riski markkereita [19]. Aiemmissa tutkimuksissa [9], [10], olemme osoittaneet, että STIP1 erittyy munasarjojen syöpien verenkiertoon, mikä viittaa siihen, että tämä molekyyli voi toimia vapautuu biomarkkeri munasarjasyöpä. Erityisesti, meidän Esillä olevat havainnot viittaavat siihen, että suuri STIP1 ilmentyminen liittyy huono OS (kuvio 2, taulukko 2) ja huono PFS hinnat (taulukko 2), ja se voi näin ollen edustaa uutta prognostinen markkeri.

Tärkeä ennustetekijä munasarjasyövän on histologinen luokka (kuvio 2B); Valitettavasti luokittelu voi olla subjektiivinen jopa kesken kokenut patologien ja jotkut kasvaimet eivät sovi siististi tietyssä luokassa [26]. Esimerkiksi merkittävää keskinäistä tarkkailija vaihtelua joukossa patologeja arvosteluun rintasyövän on raportoitu [27]. Ongelman varoitus, luokittelu rintasyöpä osaksi molekyylitason alatyyppeihin erottuva geenin ilmentymisen allekirjoituksista on ehdotettu keinona ymmärtäminen molekyyli- perusteella histologinen luokka [28]. Tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet, että STIP1 histoscores voi olla hyödyllinen täydentämisestä patologi n histopatologinen arvosteluun munasarjojen syöpien tarjoamalla objektiivisia, kvantitatiivinen arviointeja. Erityisesti STIP1 histoscores voi osoittautua hyödylliseksi ennustamiseen ennusteen potilailla, joilla on selkeät cell syöpä (joka ei yleensä ole porrastettu) [3]. Analyysimme kertoo vielä, että vaikka potilaalla saman kasvaimen, korkeamman STIP1 taso oli yhteydessä heikompaan kliiniseen tulokseen.

Seerumin STIP1 tasot eivät näkyneet poikkeavan merkittävästi potilailla, joilla on 4 kliininen vaiheissa munasarjojen syöpä [9], mutta tässä tutkimuksessa kasvaimen STIP1 histoscores olivat merkittävästi korkeammat vaiheiden III-IV (n = 147) kuin vaiheissa I-II (n = 183) (taulukko 1). Tämä ristiriita voidaan pelkästään aiheuttama pieni asian numero (n = 43) edellisessä tutkimuksessa [9]. Havainnot, että korkea STIP1 histoscores liittyi merkittävästi korkea kliinisen vaiheen (III-IV) ja korkea laatu (3) (taulukko 1) myös esiin mahdollisuuden, että korkea histoscores voi olla funktio korkea kasvain arvosanoja ja /tai korkea kliininen vaiheissa, joka jää todistaa tulevissa tutkimuksissa suurempien asianumero. Silti kasvain STIP1 histoscoring selvästi kykenee ennusteen arvioinnissa lisäksi yleisesti käytettyjä, kliinisten parametrien (kuva 3). Nämä tulokset yhdessä kannatettava käyttökelpoisuutta STIP1 histoscore ennustetyövälineenä biomarkkereiden.

Koska fosfoproteiini, STIP1 läpikäy cdc2 kinaasin fosforylaatio, johon liittyy sytoplasmisen translokaatio STIP1 [14]. Ilmentymistä STIP1 eri syöpätyyppien [15], [29], [30], [31] viittaavat siihen, että tämä molekyyli on anti-apoptoottisen roolin ja /tai edistää syövän solujen eloonjäämistä. Knockdovvn STIP1 on osoitettu tukahduttaa invasiivisuus haimasyövän soluja [31]. Olemme aiemmin raportoitu, että STIP1 erittyy munasarjasyövän solujen kasvaimen mikroympäristössä ja systeemiseen verenkiertoon [9]. Olemme myös kuvattu molekyylitason mekanismeja, joilla erittää STIP1 stimuloi munasarjasyöpäsoluja [10]. Tulokset Tämän tutkimuksen (kuviot 4 ja 5) ei ainoastaan ​​vahvista roolia STIP1 edistämisessä kasvainten synnyssä, vaan myös siihen, että tämä molekyyli voi toimia ennustetyövälineenä biomarkkereiden (kuviot 2 ja 3, taulukko 2).

tehokas salpaaminen rhSTIP1-stimuloitujen solujen proliferaatio ja migraatio munasarjojen solujen esiin anti-STIP1 vasta-aineita (kuvio 6) osoittaa, että eritetyn STIP1 syöpään kudoksista voi olla kohde kehittämiseen terapeuttisten vasta-aineiden munasarjasyöpä. STIP1 on houkutteleva ehdokas syöpähoitoa. Esimerkiksi, yhdiste, joka estää hsp90 vuorovaikutuksessa STIP1 on äskettäin suunniteltu ja osoitettu heikentää Hsp90-riippuvaisen taitto-reitin, lopulta kohdistaa sytotoksisia vaikutuksia rintasyövän soluissa [32]. Lisäksi novobiosiini johdettu Hsp90 C-terminaalista estäjä, KU135, on osoitettu estävän proliferaatiota ja indusoivat apoptoosin melanoomasoluissa [33]. Lopuksi, joka on

in vitro

tutkimuksessa Horibe et al. [34] on raportoitu, että anti-TPR peptidi, joka estää vuorovaikutuksen Hsp90 kanssa TPR2A domeenin STIP1 kykenee indusoimaan solukuoleman haiman, munuaisten, keuhkojen, eturauhasen, ja mahasyövän solulinjoissa.

huolimatta vähittäisiä parannuksia kirurgian ja kemoterapia, suurin osa munasarjasyöpäpotilaalle kuolla taudin viiden vuoden kuluessa diagnoosista [3]. Sopivat potilaat, lisäämällä täsmähoitoihin kemoterapiaa saattaa lisätä sekä mahdollisuus, että kasvain olisi hyvin hoidossa sekä lisätä kesto että kasvain voidaan vaimentaa; yhdessä, tämä saattaa johtaa joidenkin pitkittyminen elämää. Jos tukevat muut tutkimukset, meidän tiedot viittaavat siihen, että STIP1 voi toimia lupaava kohde vasta-aineisiin perustuva munasarjasyöpään terapia.

tukeminen Information

Kuva S1.