Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

myosiiniin 9 (MYH9) kuuluu myosiinin suurperheen aktiini-sitovan moottori proteiinia. Äskettäin MYH9 on ajateltu liittyvän syöpäsolujen muuttoliike, invaasio, ja etäpesäkkeitä. Tavoitteet Tämän tutkimuksen oli immunohistokemiallisesti tutkia MYH9 ilmaisun kirurgisesti resektoitiin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), ja arvioida sen korrelaatiota kliinis parametrien ja ennusteen potilaiden.

Methods

MYH9 ilmentyminen immunohistokemiallisesti tutkittiin 266 peräkkäisen resektoidun NSCLCs, ja sen yhdistysten kanssa kliinis parametreja arvioitiin. Kaplan-Meier selviytymisen analyysin ja Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin arvioimaan vaikutuksen MYH9 ilmaisun eloonjäämiseen.

Tulokset

MYH9 ekspressiota havaittiin 102 266 (38,3%) NSCLCs. MYH9 ilmentyminen korreloi merkitsevästi adenokarsinooma histologia (

P

= 0,014), köyhempi eriyttäminen ((

P

= 0,033), kasvaimeen verisuonten invaasio ja imusuonten invaasio ((

P

= 0,013 ja P = 0,045 vastaavasti), ja huonompi ennuste ((

P

= 0,032). lisäksi monimuuttuja-analyysi paljasti, että MYH9 ilmaisu itsenäisesti ennusti huonompi selviytyminen (HR, 2,15; 95% CI, 1,17-3,92, (

P

= 0,01).

Johtopäätös

Tämä tutkimus paljasti, että MYH9 ilmaistaan ​​osajoukko NSCLC entistä pahanlaatuinen luonne ja ilmaisu on osoitus heikompi selviytymisen todennäköisyys.

Citation: Katono K, Sato Y, Jiang SX, Kobayashi M, Nagashio R, Ryuge S, et al. (2015) Prognostic merkitys MYH9 Expression in resektoitiin Non -Pieni keuhkosyöpä. PLoS ONE 10 (3): e0121460. doi: 10,1371 /journal.pone.0121460

Academic Editor: John Souglakos, University General Hospital Heraklionin ja laboratorio kasvain solubiologian, School of Medicine, University of Kreeta, Kreikka

vastaanotettu: 29., 2014; Hyväksytty: 01 helmikuu 2015; Julkaistu: 31 maaliskuu 2015

Copyright: © 2015 Katono et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

rahoitus: kirjoittajat saanut mitään erityistä rahoitusta tähän työhön.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Ensisijainen keuhkosyöpää on johtava syy syöpään liittyvien kuolleisuus kaikkialla maailmassa, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) osuus on lähes 80% kuolemista [1]. Ennuste potilaiden NSCLC pääasiallisesti korreloivat kasvaimen etäpesäkkeitä. Prosessi tuumorimetastaasin koostuu monimutkaisia ​​vaiheita: joka liittyy tuumorisolujen muuttoliikettä seuraa irrottautuminen primaarikasvaimen, invaasio ympäröiviin kudoksiin, intravasation verelle tai imusuonten leviämisestä hemolymphatic järjestelmään, ja ekstravasaatio toissijainen sivustoja [2]. Ymmärtäminen proteiineja liittyvät kasvaimen muuttoliikettä, invaasio ja metastaasi voivat olla käyttökelpoisia uusia ennustetekijöitä merkkiaineita tai terapeuttisia kohteita NSCLC. Läheinen korrelaatio etäpesäke ja chemoresistance oli usein havaittu ihmisen syöpäpotilailla, jotkut molekyylit, jotka liittyvät etäpesäkkeiden ja chemoresistance raportoitu [3,4,5]. Siksi olemme keskittyneet proteiinien sisplatiini kestävästä sub-linjat havaita uusi merkki, joka osoittaa aggressiivista kliinistä käyttäytymistä NSCLC.

Tässä tutkimuksessa olemme keskittyneet myosiiniin 9 (MYH9), joka on lisääntynyt sisplatiini kestävät sub-linjat. Myosiinin superperhe edustaa viisitoista luokkiin. Myosiiniin II, tavanomainen kaksipäinen myosiinin joka muodostaa kaksisuuntainen säikeitä, on suoraan mukana säätelyssä sytokineesi, solun liikkuvuus, ja solujen morfologian nonmuscle soluissa. Selkärankaiset ilmaista vähintään kahden ei-lihaksen myosiinin II raskasketjun isoformit, kutsutaan myosiiniin IIA ja myosiiniin IIB. Entinen koostuu kahdesta ei-lihaksen myosiinin IIA raskaiden ketjujen (NMMHC-IIA), kutsutaan myosiiniin 9 (MYH9), kaksi sääntelyn kevytketjua (RLC), ja kaksi olennaista kevytketjua. Aktiivisuus myosiinin-IIA on pääasiassa säätelee fosforylaatio RLC ja MYH9 [6]. Koska MYH9 edistää solun polariteetti, tarttuvuus, jako, ja muuttoliike [7,8], useat tutkimukset ovat osoittaneet, että MYH9 avainasemassa syövän solujen vaeltamiseen, invaasiota ja etäpesäkkeiden [9,10]. Ihmisen MCF-7-rintasyöpäsolut, MCF-7/6-soluja, joilla on invasiivinen kyky on korkeampi ekspressio MYH9 kuin MCF-A /Z-soluja, jotka ovat ei-invasiivinen. Invasiivisuus MCF-7/6 on vähentynyt joko knockdovvn MYH9 tai hoidon blebbistatin, joka estää funktio MYH9, osoittaa osallistumista MYH9 siirtymien ja invaasion syöpäsoluja. Yli-ilmentyminen MYH9 liittyy huono ennuste ruokatorven [11], virtsarakon [12], ja mahasyövän [13]. Maeda et ai. raportoitu, että vaihe I potilaille, joilla on keuhkojen adenokarsinooma puuttuu ilmentymistä joko MYH9 tai vimentiinista suotuisaan lopputulokseen ilman leikkauksen jälkeisiä adjuvanttihoitoa [14]. Kuitenkin väliset suhteet MYH9 ilmaisun ja kliinis-, ja potilaiden ennusteita olisi edelleen tutkittu useita NSCLC tapauksissa eri tauti vaiheissa sekä keuhkojen okasolusyöpä. Tässä tutkimuksessa tarkasteltiin MYH9 ilmaisun resektoidun NSCLCs lukien okasolusyöpää patologisten vaiheen I-III, ja analysoi korrelaatio kliinis parametreja potilaista ja sen ennustetekijöiden merkitys.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunnot

tutkimus hyväksynyt eettinen komitea Kitasato yliopiston School of Medicine (B13-53) ja seurasi Helsingin julistuksen protokollaa. Kaikki potilaat otettiin yhteyttä perustuvat hyväksyttyjen eettisten ohjeiden, suostui osallistumaan tähän tutkimukseen, ja voivat evätä pääsyn ja keskeyttää milloin hyvänsä. Kaikki osallistujat osoittautui kirjallista suostumusta. Eläimet Tässä tutkimuksessa käsiteltiin suuntaviivojen mukaan eläinkokeita on Kitasato University School of Allied Health Sciences, ja kaikki eläinten tutkimussuunnitelma hyväksyttiin valiokunnassa etiikasta eläinkokeille on Kitasato yliopiston Allied Health Sciences (14- 16).

Solulinjat

LCN1 johdettu suuri solu neuroendokriini karsinooma, perustettiin vuonna laboratoriossamme [15]. LC-2 /mainos ja A549, molemmat peräisin keuhkojen adenokarsinooma, ostettiin RIKEN Bioresource Center (Ibaraki, Japani) ja Japani Cancer Research Resources Bank (Tokio, Japani), tässä järjestyksessä. Nämä solut kasvatettiin RPMI-1640-väliaineessa (Sigma, Steinheim, Saksa), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia (FBS; Biowest, Miami, FL, USA), 100 yksikköä /ml penisilliiniä, ja 100 ug /ml streptomysiiniä ( GIBCO, Auckland, Uusi-Seelanti). Sadonkorjuun jälkeen ja pesun kahdesti fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella ilman kaksiarvoiset ionit (PBS: llä), subkonfluenteista soluja säilytettiin -80 ° C: ssa proteomiikka analyysiä ja kiinnitettiin 10% formaliinilla ja upotettiin parafiiniin immunohistokemiaa. LCN1 solut myös Amex-kiinteä [16] immunohistokemiallista seulontaan. SP2 /O-Ag14-soluja, jotka ovat peräisin hiiren myelooma ostettiin RIKEN Bioresource Center ja kasvatettiin RPMI-1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 1 x 8-atsaguaniinille (50 x Hybri-Max, SIGMA), 10% FBS, 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 100 mg /ml streptomysiiniä (GIBCO).

Cisplatin vastustuskykyisten sub-linjat

Cisplatin vastustuskykyisten sub-linjat (LCN1-cis, LC-2 /ad-cis, ja A549-cis) vahvistettiin viljelemällä soluja 6 kuukautta Sisplatiini (Randa inj., Nippon Kayaku Co., Ltd., Tokio, Japani), alkaen pitoisuuteen 25 ja nousee vähitellen 3200 ng /ml. Sisplatiini-resistenttejä sub-linjat stabiilisti kasvatettiin pitoisuudessa 3200 ng /ml sisplatiinia yli 12 kuukautta laboratoriossamme [17].

Generation monoklonaalisia vasta-aineita

LCN1-cis solulysaatin valmistettiin PBS (-) käyttäen ultra-sonic homogenisaattorilla (UH-50; SMT Company, Tokio, Japani). Viisi viikkoa vanhoja BALB /c-hiiret immunisoitiin intraperitoneaalisesti 50 mg märkää-paino LCN1-cis solulysaattia 500 ml: aan PBS (-) 3 kertaa kahden viikon välein. Vasta-ainetiitteri testattiin IHC käyttämällä 100-kertaa laimennettu seerumit immunisoiduista hiiristä ensimmäisenä vasta-aineena Amex-kiinteä LCN1-cis-soluja. Kolme päivää ennen solufuusio, eläin, jolla on korkein tiitteri oli intraperitoneaalisesti kasvatti sama määrä LCN1-cis-lysaattia. Hybridooman valmistelu ja IHC seulonta kanssa Amex-kiinteä LCN1-cis-solut aiemmin kuvattu [18,19].

määritys vasta-isotyypin

Vasta-aine, joka on nimetty KU-Lu-6, joka osoittivat kalvomainen värjäytyminen LCN1-cis-soluissa, mutta ei sen emo- LCN1 soluja, poimittiin ylös ja edelleen tutkittu. Voit selvittää isotyypin vakiintuneiden KU-Lu-6-vasta-ainetta, käytimme IsoStrip

TM Hiiren monoklonaalinen vasta-aine isotyypityskittiä (Roche Diagnostics, Mannheim, Saksa) mukaan valmistajan ohjeiden.

Immunopresipitointi

immuunisakkautuksen käytetty menetelmä Pierce Protein L agaroosi (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) tässä tutkimuksessa mukaan valmistajan ohjeiden. Lyhyesti, LC-2 /ad-cis-solut pestiin PBS: llä (-) ja käsiteltiin radioimmunologisissa määritys (RIPA), joka sisälsi Complete-Mini EDTA-vapaan (Roche Diagnostics), jäillä 30 minuutin ajan. Kun oli sentrifugoitu 15000 rpm: ssä 30 min ajan 4 ° C: ssa, supernatantti otettiin talteen. Konjugoida ensisijainen vasta-aine, 200 ui primaarista vasta-ainetta (KU-Lu-6 hybridoomasupernatantista) ja 50 ui proteiini L agaroosihelmiä suspendoitiin RIPA-puskurissa inkuboitiin rotaatiossa huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan. Sentrifugoinnin jälkeen vasta-agaroosi-konjugaatilla ja 500 ug solun kokonais-proteiinin LC-2 /ad-cis-supernatanttia inkuboitiin rotaatiossa huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan. Immunopresipitaatit kerättiin sentrifugoimalla 15000 rpm: ssä 5 minuutin ajan 4 ° C: ssa. Kun oli pesty kolme kertaa RIPA-puskurilla, supernatantti poistettiin huolellisesti, ja pelletit resuspendoitiin 20 ul: aan 1 x Laemmili puskurissa. Sitten kaikki näytteet keitettiin ja erotettiin SDS-PAGE: lla 10% polyakryyliamidigeelillä. SDS-PAGE, geelit olivat Zn-värjättiin Negative Gel Stain MS Kit (Wako Pure Chemical, Tokio, Japani), mukaan valmistajan ohjeiden.

tunnistaminen antigeeniproteiinin

proteiini paikalla leikattiin irti SDS-PAGE-geelillä ja jauhettiin 1 mm

3, väri poistettiin värinpoistoliuos (Wako Pure Chemical), kuivattu 100% (v /v) ACN ja kuivattiin tyhjiössä. Tryptinen digestio suoritettiin pieneen tilavuuteen ruoansulatusta, joka sisälsi 10 ng /ul trypsiiniä (Trypsin Gold, massaspektrometria Grade, Promega Madison, WI, USA) ja 25 mM NH4HCO3 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Inkubaation jälkeen, sulaneen proteiinin fragmentit eluoitiin liuoksesta kerättiin, ja geelit pestiin kerran 5% (v /v) trifluorietikkahappo /50% (v /v) ACN ja kerättiin samaan putkeen.

kerätyt peptidin fragmentit analysoitiin käyttämällä AUTOFLEX III matrix-liittyvä laserdesorptio /ionisaatio-lentoaika /lentoaika (MALDI-TOF /TOF-MS; Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Saksa). Kertakäyttöinen levy, täplikäs α-syaani-4-hydroksikanelihappomatriisi näytteitä, ja PAC peptidi Calibstandard kalibrointia (Prespotted AnchorChip 96 asetettu Proteomiikka, Bruker Daltonik GmbH) käytettiin. Peptidi massa sormenjälkien (PMF) mitattiin, ja sitten muutama huiput saatu PMF oli edelleen mitattiin niiden tandem massaspektrit kuin vanhemman massoja. MASCOT (https://www.matrixscience.com) käyttäen IPI Human 3,85 tietokanta (89952 sekvenssit; 36291020 jäämät), käytettiin määrittämään proteiinien PMF ja tandem massa tiedot.

Koska KU-Lu- 6-vasta-aine ei toimi immunoblottauksella, vasta-aineen imeytymistä testi vahvistaa antigeenin käyttäen puhdistettua synteettistä antigeenia proteiinia käytettiin.

MYH9 ilmentyminen klooni konstruoitiin CU013414 kloonin ja pINSOL20 kohde vektori Gateway-järjestelmän ( Life Technologies, USA). Proteiini synteesi suoritettiin käyttäen menetelmää edellisessä raportissa [20]. Määrällinen proteiinin laskettiin tiheys kaistan CBB-värjäys SDS-PAGE, kuten BSA vakiona proteiinia.

Sata ui kutakin ei-laimennetun hybridoomasupernatantteja on esiabsorboitiin 0,12, 0,24, ja 0,48 ug synteettistä MYH9 proteiineja, vastaavasti. Sitten niitä inkuboitiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja 4 ° C: ssa yön yli. Sen jälkeen, kun sentrifugoitiin 20000 g: ssä 10 minuutin ajan, kukin supernatantti kerättiin ja sitä käytettiin ensimmäisenä vasta-aineita.

IHC absorboitunut vasta kuvattiin 2,8.

Potilaat ja kudosnäytteet

yhteensä 266 peräkkäisen NSCLC potilaat, joille tehtiin täydellinen resektio tammikuusta 2002 ja joulukuun 2005 Kitasato yliopistollisessa sairaalassa kuuluivat tähän retrospektiivinen kohorttitutkimus. Ne, jotka saivat ennen leikkausta kemoterapiaa ja /tai sädehoitoa suljettiin pois. Kymmenen prosenttia formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kudokset jalostetaan 3 um paksuisia leikkeitä ja värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla. Histologinen diagnoosi perustui kriteereihin Maailman terveysjärjestön /International Association for Study of Lung Cancer luokittelu keuhko- ja keuhkopussin kasvaimet [21]. Jokainen potilas arvioitiin uudelleen mukaan seitsemäs painos TNM luokituksen [22]. Kliiniset ja patologisen parametrit jälkikäteen tarkistetaan sisältyi ikä kirurginen resektio, sukupuoli, tupakointi, histologinen tyyppi, kasvain eriyttäminen, patologinen TNM (p-TNM) ja vaihe, imusolmukestatuksesta, kasvaimeen verisuonten invaasio, kasvaimeen imusuonten invaasio, keuhkopussin invaasio, vastaanottava adjuvanttihoitoa, elinkelpoisuutta tila, ja elinaika leikkauksen jälkeen. Elinkelpoisuus tila määritettiin perustuen vai ei NSCLC liittyvää kuolemaa, ja elinaika määriteltiin ajaksi alkaen leikkaus kuolinpäivä tai seurannan loppuun asti. Tapauksia muista syistä johtuvat kuolemat tai kadonnut seuranta käsiteltiin sensuroitiin tapauksissa.

immunohistokemiallinen värjäys KU-Lu-6-vasta-aineen

Kun deparaffinizing ksyleenissä, 3 um paksuja osia tai soluvalmisteita rehydratoitiin laskevassa etanolissa, ja sitten käsiteltiin 3% vetyperoksidilla 10 min. He olivat antigeeni-noutaa autoklavoimalla 10 min 0,01 M sitraattipuskurissa (pH 6,0), jossa oli 0,1% Tween 20: tä. Kun oli salvattu 2% normaalin sian seerumissa /Tris-puskuroitua suolaliuosta (0,01 M Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl) 10 min, ne saatettiin reagoimaan non-laimennettiin supernatantti KU-Lu-6-vasta-ainetta yli yön huoneen lämpötilassa . Huuhtelemisen jälkeen Tris-puskuroidulla suolaliuoksella kolme kertaa 5 minuutin ajan kutakin, ne reagoimaan ChemMate ENVISION reagenssilla (DAKO, Glostrup, Tanska) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Tämän jälkeen heidät näkyviksi Stable DAB-liuoksella (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja vasta- värjättiin Mayerin hematoksyliinillä. Negatiiviset kontrollit valmistettiin korvaamalla fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, että KU-Lu-6-vasta-ainetta.

arviointi immunohistokemiallisella värjäyksellä

kalvo immunovärjäystä kasvainsolujen katsottiin olevan positiivinen KU-Lu -6-vasta-ainetta. Värjäytymisintensiteettiä luokiteltiin kolmeen ryhmään: 0 = negatiivinen; 1 = heikosti positiivinen; 2 = voimakkaasti positiivinen. Kasvain solut värjäys pisteet 2 arvioitiin positiivisiksi. Havaitsimme kaikissa tuumorisoluissa näytteen, kasvaimen positiivista värjäytymistä yli 25%: sen kasvainsolujen pidettiin positiivisena. Kaikki immuno- osat tarkistettiin kaksi tutkijaa (K.K. ja S. Y.) ilman tietoa kliinisten tietojen. Ristiriitainen tapausta tarkistettiin ja keskusteltiin, kunnes päästiin.

Tilastollinen

Jatkuva muuttujat esitetään mediaani (alue), kun taas numeeriset muuttujat on annettu N (%). Väliset suhteet NMIIA ilmaisun ja kliinis parametreja arvioitiin kanssa Pearsonin χ

2 testiä tai Fisherin testiä tarvittaessa. Kumulatiivinen potilaiden selviytymiseen arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier menetelmällä, ja merkitys selviytymisen eroja MYH9-positiivisten ja -negatiivisilla ryhmät testattiin käyttäen log-rank-testi. 5 vuoden kumulatiivinen eloonjäämistä arvioitiin käyttäen elämän taulukon menetelmää väli pituus vahvistetaan 1 kuukausi. Monimuuttujalähettimet analyysi tehtiin käyttämällä Coxin suhteellisten riskien regressiomallia tutkia vuorovaikutusta MYH9 ilmaisun ja muiden kliinispatologiset muuttujia, ja arvioida riippumattoman ennustetekijöiden vaikutus MYH9 eloonjäämiseen säätämällä varten sekoittavat tekijät. Tavanomainen

P

-arvo 0,05 tai vähemmän käytettiin määrittämään tason merkitystä. Kaikki raportoidut

P

-arvot ovat kaksipuolisia. Analyysit tehtiin itsenäisesti meidän kliinisessä tutkimuskeskuksessa SPSS versio 17.0 ohjelmistot (SPSS, Chicago, IL, USA).

Tulokset

karakterisointi KU-Lu-6-vasta-aineen

käyttäminen Amex-kiinteä LCN1-cis-solujen immunohistokemiallinen seulontaa, lopulta valitaan nimetty klooni KU-Lu-6, joka osoitti kalvo värjäytymisen LCN1-cis-soluissa, mutta ei LCN1 solut (Fig. 1).

membranous värjäytyminen havaittiin LCN1-cis-soluissa, mutta ei LCN1 soluissa. (Alkuperäinen suurennus: A, B x 400).

immunohistokemiallisella värjäyksellä KU-Lu-6-vasta-aineen kanssa, formaliinilla kiinnitetyt solulinjat, intensiivinen värjäytyminen havaittiin sisplatiini-resistenttejä solulinjoja, erityisesti LC2 /ad-cis-solut (Fig. 2A).

KU-LU-6-vasta-supernatantti Esiabsorboidut mikään (A), 0,12 ug (B), 0,24 ug (C), ja 0,48 ug (D) synteettistä MYH9 proteiineja. Kukin imeytyy vasta-aine immunovärjättiin formaliinikiinnitetyt LC2 /ad-cis-soluissa. Värjäytyvyys KU-Lu-6-vasta-ainetta vähentää asteittain riippuen pitoisuudesta MYH9 proteiinia.

Jotta voitaisiin tunnistaa antigeeni proteiini tunnustettu KU-Lu-6-vasta-ainetta, suoritimme IP lysaatti LC-2 /ad-cis-soluissa. Tulokset IP on esitetty kuviossa. 2. antigeeniproteiini havaittiin suunnilleen 250 kDa kaista 2 (Fig. 3). Mitään signaalia ei havaittu kaista 3 ja 4 negatiivinen kontrolli (Fig. 3). Määrittämään antigeeniproteiini tunnustettu KU-Lu-6-vasta-ainetta, me leikattiin ja keräsi paikalla Zn-värjättyä geeliä, ja eteni geelissä ruoansulatusta. Kun analyysi käyttämällä MALDI-TOF /TOF MS ja MASCOT haku, proteiini määritettiin isoformin 1 myosiinin-9 (MYH9, liittymistä: IPI00019502), joka koostuu 1960 aminohaposta, jonka ennustettu molekyylipaino on 226532 Da. Immunoglobuliini isotyyppi KU-Lu-6-vasta-aine määritettiin IgM, k. Vasta-aineen imeytymistä testin värjäytyvyys KU-Lu-6-vasta-ainetta vähentää asteittain riippuen pitoisuus MYH9 proteiinia. Värjäytyvyys KU-Lu-6-vasta-ainetta täysin menetetty 0,48 ug MYH9 proteiinin (Fig. 2).

Kaista 1: molekyylipainomarkkeri, kaista 2: LC-2 /ad-cis lysaattia yhdistettynä KU-Lu-6-vasta-ainetta, kaista 3: LC-2 /ad-cis lysaatin yhdistettynä proteiini L, kaista 4: KU-Lu-6-vasta-ainetta yhdistettynä proteiini L, kaista 5: LC-2 /ad-cis lysaattia. Kaistat 3 ja 4 ovat negatiiviset kontrollit, ja erityisiä immunosaostettiin tuote KU-Lu-6-vasta-aineen havaittiin kaista 2 (nuoli).

MYH9 ilmaisun NSCLC

MYH9 ilmaistiin kalvon ja sytoplasmassa joidenkin kasvainsolujen. Erityisesti, värjäytyminen intensiteetti merkitty solukalvon. 266 kirurgisesti resektoitiin NSCLCs, mukaan lukien 203 adenokarsinoomat, 51 okasolukarsinoomia, 10 suuri solu karsinoomat, ja 2 adenosquamous solukarsinoomat, positiivinen MYH9 ilmentyminen kasvainsoluissa havaittiin 102 tapauksessa (38,3%) (Fig. 4). MYH9 ilmentyminen havaittiin myös fibroblastien kasvain strooman ja normaaleissa keuhkoputken epiteelisoluissa. MYH9 ilmentymistä ei havaittu normaalissa keuhkorakkuloiden epiteelisolujen. Ei ilmentymistä havaittiin negatiivisista kontrolleista.

: MYH9 voimakkaasti ilmaistu kalvon kasvainsolujen adenokarsinooma. B: MYH9 voimakkaasti ilmaistu kalvon ja sytoplasmassa kasvainsolujen okasolusyöpä. (Alkuperäinen suurennus: A, B × 400).

kliinis ominaisuudet potilaiden

kliinis potilaiden ominaisuuksiin on esitetty taulukossa 1. Kaikkiaan 168 miestä ja 98 naista oli mukana, iät vaihtelevat 34-85 vuotta (mediaani, 64 vuotta), joista 166 (62,4%) oli tupakoitsijoita. Yleinen seurannan kesto vaihteli 3-129 kuukautta (mediaani, 84 kuukautta). Kaikkiaan 142 potilasta oli elossa lopussa seurannan, 88 potilasta oli kuollut keuhkosyöpään, 19 potilasta oli kuollut muista syistä, ja 17 potilasta menetettiin seurata. Syyt 19 ei-keuhkosyöpäkuolemista oli keuhkokuume (n = 11), cholangiocellular karsinooma (n = 2), krooninen ahtauttava keuhkosairaus (n = 1), sepsis (n = 1), aivoinfarktin (n = 1) , akuutti sydäninfarkti (n = 1), mahasyöpä (n = 1), ja leukemia (n = 1). Mikään näistä 19 potilasta oli leikkaus liittyvää kuolemantapausta. Vuonna 17 menetetty-to-seuranta potilasta, kaikki menetettiin seurata johtuen lopettamisen sairaalaan läsnäolo ja eivät voineet ottaa yhteyttä. Seurannan kestot 17 potilasta hävisi seuranta vaihteli 15-92 kuukautta (mediaani, 61 kuukautta).

suhde MYH9 ilmaisun ja kliinis ominaisuudet

suhteita MYH9 ilmaisun ja kliinis ominaisuudet on koottu taulukkoon 2. MYH9 ilmentyminen useammin havaittu adenokarsinooma kuin okasolusyöpä ja muita histologisia alatyyppejä (

P

= 0,014). MYH9 ilmentyminen liittyi myös köyhemmille erilaistumiseen (

P

= 0,033), kasvaimeen verisuonten invaasio (

P

= 0,013), ja kasvaimeen imusuonten invaasio (

P

= 0,045) . Ei ollut merkittävää yhdistyksen välillä MYH9 ilmaisun ja ikä, sukupuoli, tupakointi, p-TNM vaiheessa imusolmukestatuksesta tai keuhkopussin invaasio.

Kaplan-Meier arvio selviytymisen MYH9-positiivisten ja – negatiivisilla potilailla

Kaikki potilaat olivat mukana selviytymistä analyysiin. Yleinen seurantatutkimuksissa vaihteli 3-129 kuukautta (mediaani, 84 kuukautta), ja 5-vuoden kumulatiivinen eloonjäämistä oli 70% kaikille potilaille. Koska kumulatiivinen selviytymisen todennäköisyys 50% ei ollut vielä saavutettu, yleinen keskimääräinen eloonjäämisaika ei määritetty. 5 vuoden kumulatiivinen eloonjäämistä oli 66% varten MYH9-positiivisten ryhmässä ja 78% varten MYH9-negatiivinen ryhmä. Vaikka mediaani elinaika ei ollut saatavilla, eloonjäämisaste MYH9-positiivisten ryhmässä oli merkitsevästi huonompi ryhmä (

P

= 0,029) (Kuva. 5A). Jatkotutkimuksissa MYH9 ilmentyminen korreloi merkitsevästi huonompi selviytymisen potilailla, joilla on joko adenokarsinooma (

P

= 0,007) (kuvio. 5B) tai okasolusyöpä (

P

= 0,032) (kuvio . 5C). 5 vuoden eloonjäämistä oli 69 ja 85% varten MYH9-positiivisten ja -negatiivisilla adenokarsinooma potilaista, ja 43 ja 74% MYH9-positiivisten ja -negatiivisilla okasolusyöpä potilaista.

(A ) kaikilla potilailla; (B) potilailla, joilla adenokarsinooma; (C) potilailla, joilla okasolusyöpä, hoidettaessa kaikkia muita kuolinsyitä ja menetti seuranta niin sensuroitu tapauksissa. MYH9 ilmentyminen korreloi merkitsevästi huonompi selviytymistä resekoituun NSCLCs.

vaikutus MYH9 ilmaisun selviytymisen yksi- ja monimuuttuja analyysit

Univariable analyysi suoritettiin Coxin suhteellista riskin malliin arvioida vaikutusta MYH9 ilmaisun ja muut kliinispatologiset tekijöiden eloonjäämiseen. Tulokset osoittivat, että histologinen tyyppi (HR, 1,94; 95% CI, 1,23-3,06;

P

= 0,004), p-TNM (HR 4,58; 95% CI, 2,89-7,26;

P

0,001), adjuvanttihoitoa (HR, 2,81; 95% CI, 1,73-4,57;

P

0,001), kasvain eriyttäminen (HR, 2,45; 95% CI, 1.53- 3,92;

P

0,001), verisuonten invaasio (HR 5,67; 95% CI, 3,25-9,90;

P

0,001), lymfaattinen invaasio (HR, 4,43; 95% CI, 2,65-7,40;

P

0,001), keuhkopussin invaasio (HR, 2,64; 95% CI, 1,73-4,03;

P

0,001), ja MYH9 lauseke (HR , 1,57; 95% CI, 1,03-2,39;

P

= 0,03) olivat merkittäviä ennustajia syöpää erityisiä selviytymisen. Lisäksi MYH9 ilmaisun ja muut clinicopathlogical muuttujista kuten histologinen tyyppi, p-TNM vaiheessa adjuvanttihoitoa, kasvaimen erilaistumiseen, verisuonten invaasio, imusuonten invaasio, ja keuhkopussin invaasio merkittiin monimuuttuja-analyysi käyttäen Coxin suhteellisten riskien regressiomallia. Tulokset osoittivat, että MYH9 ilmentyminen oli merkitsevästi itsenäinen ennustaja heikompi selviytymisen (HR, 2,15; 95% CI, 1,17-3,92;

P

= 0,01) (taulukko 3).

keskustelu

Tässä tutkimuksessa, MYH9 ilmaistiin 102 266 (38,3%) NSCLCs, ja sen ilmentyminen korreloi merkitsevästi adenokarsinooma histologia, köyhempi erilaistumista ja kasvaimeen verisuonten ja imusuonten hyökkäystä. Suostumuksella aikaisempien raporttien ruokatorven [11], virtsarakon [12] ja mahasyövän [13] esillä Tutkimus osoitti, että MYH9 ilme on itsenäinen ennustetekijä ja liittyy huonompi ennuste potilaita, joilla resektoidun NSCLCs. Vaikka Maeda et al. raportoitu, että potilailla, joilla on vaiheen I keuhkoadenokarsinooma puuttuu ilmentymistä joko MYH9 tai vimentiinista osoittavat myönteisen tuloksen ilman leikkauksen jälkeisiä adjuvanttihoitoa [14] esillä Tutkimus osoitti, että MYH9 ilmaisu on itsenäinen ennustetekijä selviytymisen potilailla, joilla resektoidun NSCLCs luettuna patologinen vaiheessa I-III, ja keuhkojen levyepiteelikarsinooma.

esillä olevassa tutkimuksessa, MYH9 värjäytymistä havaittiin sekä kalvon ja sytoplasmassa joidenkin kasvainsolujen, mutta värjäytymisen intensiteetti oli huomattavasti vahvempi solukalvon. MDA-MB-231-rintasyöpäsolujen levittää fibronektiinin, MYH9 on havaittu marginaalinen leviämisen lamellivalurauta alueen solujen [9]. Koska MYH9 raportoidaan edistää solun polariteetin ja lamellipodioihin solun reuna ja etureuna, voimakas värjäytyminen intensiteetti solukalvon voi heijastaa MYH9 aktiivisuutta syöpäsolujen muuttoliikettä ja invaasiota.

Paikallinen microenvironment invaasio, kuten kasvaimensisäistä lymphovascular läpäisyä, on tärkeä askel alkuvaiheessa tuumorimetastaasin. MYH9 edistää solujen vaeltamiseen, joka vaaditaan hyökkäystä paikallisen mikroympäristön.

In vitro

useat tutkimukset raportoitu että MYH9 vaje solut osoittivat viallinen muuttoliike [10,11]. Lisäksi lamellipodioihin muodostus kärjessä solun tarvitaan maahanmuuttoa [23], ja tällainen muodostuminen ohjataan Rac, WAVE monimutkainen, ja Arp2 /3complex [24]. Äskettäin Morimura et ai. raportoitu, että MYH9 on tarpeen myös lamellipodioihin muodostumista sitoutumalla WAVE2 [25]. Siten MYH9 ilmaisu voi liittyä hankintaan muuttoliikkeen ja invaasion valmiuksia kasvainsolujen, mikä johtaa myöhemmin erittäin kasvaimensisäisiä lymphovascular hyökkäyksen, ja huonompi ennusteita tässä tutkimuksessa.

Tässä tutkimuksessa, MYH9 ilme oli korreloi merkitsevästi huonompi kasvaimen erilaistumista. Huonosti eriytetty karsinooma on ominaista helpottaminen sytokineesiin. Vuonna sytokineesi soluissa rakentaa supistuvien rengas, joka constricts solukalvon lähettämään kahta tytärsoluksi yhdistetty sytoplasmisen silta. MYH9 myötävaikuttaa supistuminen supistuvien rengas ja sillä on keskeinen rooli sytokineesiin [26,27]. Lisäksi aikaisemmassa tutkimuksessa raportoitiin, että hoito blebbistatin, estäjä MYH9, johtaa epäonnistumiseen sytokineesin [28]. Näin ollen ei ole yllättävää, että MYH9 ilmentyminen liittyy huonompi kasvaimen erilaistumiseen tässä tutkimuksessa.

Johtopäätös

Olemme raportoineet, että MYH9 ilmaistaan ​​osajoukko NSCLC, ja sen ilmentymistä on liittyvät adenokarsinooma histologia, köyhempi erilaistuminen, kasvaimeen verisuonten invaasio, kasvaimeen imusuonten invaasio, ja huonompi ennuste. MYH9 ilme on itsenäinen ennustetekijä selviytymisen potilailla, joilla resektoidun NSCLCs, vaikka sen ennustetekijöitä merkitys vaatii vielä vahvistusta suurempia potilasryhmissä.