Krooninen sairaus

tiivistelmä

Yhä enemmän on näyttöä siitä, että häiriöstä joidenkin MikroRNA (miRNA) voi myötävaikuttaa taudin etenemiseen ja etäpesäkkeiden ja ovat olleet ehdotetaan olevan keskeinen sääntelyviranomaisten erilaisten biologisten prosessien kuten transkription säätelyyn, solujen kasvua ja kasvaimen kehittymisen. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että miR-137 on väärin säädellystä joissakin maligniteettien, mutta sen roolia virtsarakon syöpä on vielä tuntematon. Tutkimuksessamme havaitsimme, että miR-137 on säädelty ihmisen virtsarakon syövän kudoksissa ja solulinjoissa. Lisäksi korkeampi miR-137 liittyi pM tai pTNM vaiheen kliinisissä virtsarakon syöpäpotilailla. Pakotettu ilmentymä miR-137 virtsarakon syövän soluissa merkittävästi parantaneet lisääntymisen, migraation ja invaasion. Bioinformatiikan analyysi tunnisti tuumorisuppressorigeenin PAQR3 mahdollisena miR-137 kohdegeenin. Lisäksi tutkimukset osoittivat, että miR-137 tukahdutti ilmentymistä PAQR3 sitoutumalla sen 3′-alueella. Hiljentäminen PAQR3 pienet häiritsevät RNA: t phenocopied vaikutuksia miR-137 yliekspressio, kun taas palauttaminen PAQR3 virtsarakon syöpäsoluja virtsarakon syövän solut yli-ilmentävät miR-137, osittain päinvastaiseksi tukahduttava vaikutus miR-137. Nämä havainnot osoittavat, että miR-137 voi olla potentiaalia onkogeenin virtsarakon syöpä.

Citation: Xiu Y, Liu Z, Xia S, Jin C, Yin H, Zhao L, et ai. (2014) MicroRNA-137 lisääntymisen merkkejä Lisäykset virtsarakon syövän Cell Proliferation ja Invasion kohdistaminen PAQR3. PLoS ONE 9 (10): e109734. doi: 10,1371 /journal.pone.0109734

Editor: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Espanja

vastaanotettu: 15 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 08 syyskuu 2014; Julkaistu 16. lokakuuta 2014

Copyright: © 2014 Xiu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Rahoitus National Natural Science Foundation of China (81170534) (https://www.nsfc.gov.cn/). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä on viides yleisin syöpä väestössä ja toiseksi yleisin kuolinsyy potilailla, joilla urogenitaaliseen pahanlaatuinen kasvain [1], [2]. Yli 90% virtsarakon kasvaimet muodostuvat siirtymäkauden cell carcinoma (TCC), joka syntyy siirtymäkauden epiteeli [3]. Rakkokasvaimista voidaan luokitella kahteen luokkaan: ei-lihas- ja lihasten invasiivisia virtsarakon syövän [4], [5]. Useimmat virtsarakon kasvaimia (75-80%) on diagnosoitu ei-lihas-invasiivisia kasvainten joista toistumisen hinnat ovat korkeat (50-70%) [6]. Loput ovat korkealaatuisia lihaksen invasiivisia kasvain (15%), joka voi nopeasti edetä etäpesäkkeitä ja johtaa kuolemaan [7]. Vaikka huomattavaa edistystä hoidossa on tehty, mukaan lukien parantunut leikkaus, sädehoito ja kemoterapia, virtsarakon syöpä on edelleen yleinen sairaus on korkea kuolleisuus [8], [9].

Äskettäin kasvava todisteet viittaavat siihen, että uuden luokan RNA: t, jotka tunnetaan MikroRNA (miRNA), voitaisiin säädellä eri kohdegeenien, kuten onkogeenit ja tuumorisuppressorigeenit [10]. miRNA ovat endogeenisiä 19~22 nukleotidin (nt) ei-koodaavat RNA: t, jotka voivat säädellä negatiivisesti proteiinin ilmentyminen indusoimalla hajoamisen kohde-mRNA: iden, heikentäen niiden kääntämistä tai sekä sitoutuvat spesifisesti 3’untranslated alueet (3′-UTR) ja kohde-mRNA: iden [ ,,,0],11], [12]. Yhä useammat tutkimukset ovat osoittaneet, että miRNA edistävät useimmat, elleivät kaikki, perus biologiset prosessit, kuten kehitys, erilaistuminen, apoptoosi ja solujen lisääntymistä [13] – [16]. Mutaatioita miRNA geenien tai säätelyhäiriö ilmentymisen miRNA on kuvattu hyvin monissa eri kasvainten, mukaan lukien mahasyöpä, lymfooma, rintasyöpä, keuhkosyöpä, paksusuolen ja maksan syöpien [17] – [22]. Kuitenkin rooli miRNA virtsarakon syöpä on edelleen suurelta osin tuntematon.

MiR-137 on saanut paljon huomiota, koska se on usein alassäädetty ja toimii tuumorisuppressori moniin syöpiin, kuten munasarjasyöpä, mahasyöpä, glioblastooma, keuhkosyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä ja neuroblastooma [23] – [28]. Aikaisempi tutkimus Shimuzu et al. osoittivat myös, että miR-137 oli usein metyloitu ensisijainen rakkokasvaimista ja ektooppinen ilmentyminen miR-137 tukahdutetaan virtsarakon syöpä solujen lisääntymistä [29]. Emme kuitenkaan tässä raportoivat ristiriitaisia ​​ilmentymistä ja toimintaa miR-137 virtsarakon syöpä, jotka vastustavat, että raportoitu kirjallisuudessa. Tässä tutkimuksessa havaitsimme usein ylössäätely miR-137 ihmisen virtsarakon syövän kudoksissa ja solulinjoissa. Yli-ilmentymisen miR-137 edistänyt solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion virtsarakon syöpäsoluja. Lisäksi olemme havainneet, että PAQR3, uusi tuumorisuppressorigeeniä, oli välittömänä kohteena miR-137 virtsarakon syöpä. Siten tulokset viittaavat siihen tärkeitä rooleja miR-137 virtsarakon syövän synnyssä ja ilmoittaa sen mahdollisen soveltamisen syövän hoidossa.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Kaikki nämä potilaat suostuneet osallistumaan tutkimukseen ja antoi kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen. Sekä tämän tutkimuksen ja suostumus oli hyväksynyt eettinen hallituksen instituutin ensimmäisen Affiliated sairaala Harbin Medical University ja noudatetaan Helsingin julistuksen.

Ihmiskudokset

Biopsiat virtsarakon syöpään ja viereinen normaali uroteelin saatiin potilailta, joille suoritetaan radikaali cystectomy virtsarakon syövän The First Affiliated sairaala Harbin Medical University, Kiina. Leikkaukset tapahtui huhtikuun 2010 huhtikuulle 2013 ja kaikki potilaat edellyttäen allekirjoittaneet tietoisen suostumuksen. Koepaloja säilytettiin nestemäisessä typessä heti resektion kunnes RNA. Väestörakenteen ja kliiniset patologinen tiedot on lueteltu taulukossa S1.

Solulinjat, soluviljelmissä ja miRNA transfektio

neljä ihmisen virtsarakon syövän solulinjoissa T24, J82, 5637 ja UMUC3 ja yksi normaali virtsarakon solun linja, SV-HUC-1, ostettiin Shanghai Institute Biokemian ja solubiologian at Kiinan Academy of Sciences [30]. Solulinjoja viljeltiin RPMI 1640 -alustassa, jota oli täydennetty 10% lämmöllä inaktivoitua naudan sikiön seerumia, kostutetussa ilmakehässä 5% CO2, 37 ° C: ssa. Päivää ennen transfektiota solut maljattiin kasvualustaan ​​ilman antibiootteja tiheydellä 30-40%. Transfektion HSA-miR-137 matkivat, inhibiittori, ja sekoituskoodin, syntetisoidaan kemiallisesti GenePharma (Shanghai, Kiina) suoritettiin käyttäen Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) valmistajan protokollan ja transfektoitiin soluihin lopullisen oligonukleotidi pitoisuus 20 nmol /l.

RNA: n eristys ja qRT-PCR

Yhteensä RNA kudosnäytteistä ja viljeltyjä soluja eristettiin käyttäen TRIzol reagenssia (Takara, Dalian, Kiina). Ennen kuin Kvantitatiivinen RT-PCR-määrityksissä (qPCR), RNA käänteistranskriptoituneet miRNA cDNA ja koko cDNA käyttämällä One Step PrimeScript miRNA cDNA Synthesis Kit (Takara, Dalian, Kiina) ja PrimeScript RT reagenssia Kit (Takara, Dalian, Kiina), vastaavasti. Reaaliaikainen PCR-sekvenssit ja olosuhteita taulukossa S2 ja taulukko S3, vastaavasti, mukaan MIQE ohjenuorana. MRNA ja miRNA ekspressiotasoja havaittiin qPCR kanssa Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System reaaliaikainen PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, USA) SYBR Esiseos Ex Taq (Takara, Dalian, Kiina) mukaan valmistajan ohjeiden ja normalisoitiin vs. GAPDH mRNA ja pieni ydin- RNA vastaavasti U6. Ct-arvo miR-137 ja PAQR3 kvantifioitiin kanssa 2

-ΔΔCt menetelmällä.

Muuttoliike ja invaasio määritykset

Solun invaasio ja muuttoliike analysoitiin käyttämällä transwell kammio (Millipore, USA) kanssa ja ilman matrigeelin (BD, Franklin Lakes, USA). Hyökkäykselle määritystä varten transwell kammio laitettiin 24-kuoppalevylle, ja päällystettiin 30 ul: n kanssa Matrigeliä ja inkuboitiin neljäkymmentä minuuttia 37 ° C: ssa. Molemmissa transwell määrityksessä soluja, 48 tunnin kuluttua transfektoidut, käsiteltiin trypsiinillä ja ympättiin kammioissa tiheydellä 8 x 10

4 solua kuoppaa kohti ja niitä viljeltiin väliaineessa RPMI 1640-väliaineessa, jossa on 2% seerumia, kun taas 600 ui 10 % FBS-1640 lisättiin alempaan kammioon. Kaksikymmentäneljä tunnin kuluttua siirtyneet solut kiinnitettiin 100% metanolissa 30 minuutin ajan. Non-Siirretyt solut poistettiin vanupuikkoja. Sitten solut alapinnalle kalvon värjättiin 0,1% kristallivioletilla (Sigma) 20 minuutin ajan. Cell kuvat saatiin alla faasikontrastimikroskoopissa (Olympus, Tokio, Japani).

Solulisääntyminen

soluproliferaatiomäärityksissä tehtiin käyttämällä Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japani ). Virtsarakon syövän solut maljattiin 24-kuoppalevyille 2 x 10

5 solua kuoppaa kohti. Soluja inkuboitiin 10% CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japani), joka oli laimennettu normaaliin elatusaineeseen 37 ° C: ssa, kunnes visuaalisen värin muuntaminen tapahtunut. Proliferaationopeudet määritettiin 0, 24, 48 ja 72 tuntia transfektion jälkeen.

Western blotit

Vastaavat määrät (30-50 ug) proteiinia erotettiin 10% SDS-polyakryyliamidigeeleillä ja siirrettiin ja polyvinylideenifluoridi (PVDF). Membraanit blokattiin 5% rasvatonta kuivamaitoa, ja niitä inkuboitiin yön yli sopivan primaarisen vasta-aineen kanssa laimennoksilla valmistajan ohjeiden mukaisesti. Seuraavaksi kalvot pestiin kolme kertaa TBST: ssä ja inkuboitiin vastaavan piparjuuriperoksidaasi (HRP) konjugoitua sekundääristä vasta-ainetta on 1:5,0000 laimennus 1 tunnin ajan. Sitoutunut sekundääristä vasta-ainetta havaittiin käyttäen Enhanced Chemiluminescence (ECL) järjestelmä (Pierce Biotechnology Inc, USA). Ensisijainen immunoblottaus vasta-aineet olivat: anti-GAPDH, anti-PAQR3 (Santa Cruz Biotechnology, USA).

lusiferaasianalyysissä

T24-soluja ympättiin 24-kuoppalevyille (1 x 10

5 solua /kuoppa) ja inkuboitiin 24 tuntia ennen transfektiota. Sillä reportterigeenimäärityksessä, solut kotransfektoitiin 0,5 ug pGL3-PAQR3-3’UTR tai pGL3- PAQR3-3’UTR Mut plasmidi, 0,05 ng phRL-SV40 kontrollivektori (Promega, USA) ja 100 nM miR-137 tai kontrolli-RNA käyttämällä Lipofectamine 2000 (Invitrogen, USA). Tulikärpäsen ja renilla lusiferaasi aktiivisuudet mitattiin peräkkäin läpi kaksi lusiferaasin määritystä (Promega, USA) 24 h transfektion jälkeen.

Tilastollinen analyysi

Jokainen koe toistettiin vähintään kolme kertaa. Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS 15.0. Tiedot esitetään keskiarvona ± keskihajonta. Tilastolliset analyysit tehtiin joko varianssin analyysiä (ANOVA) tai Studentin t-testiä, ja tilastollinen merkitsevyys asetettiin arvoon α = 0.05 (kaksi-puoli).

Tulokset

Expression Mir-137 on säädellään ylöspäin virtsarakon syövän solulinjoissa

ilmentyminen miR-137 oli ensimmäinen arvioitiin kvantitatiivinen käänteistranskriptio-PCR (qRT-PCR) virtsarakon syöpä solulinjoissa ja yksi normaali virtsarakon solulinja SV-HUC-1. Kuten on esitetty kuviossa. 1, miR-137 oli merkittävästi säädelty kaikissa virtsarakon syövän solulinjat verrattuna SV-HUC-1. Olemme edelleen määrällisesti ilmentymistason miR-137 6 paria ihmisen virtsarakon syöpä kudoksiin ja viereisten normaalin limakalvon kudosten qRT-PCR (Kuva. 1). Tulokset osoittivat, että ilmentymistaso miR-137 oli yleensä korkeampi kasvaimen kudoksissa verrattuna täsmäsi ei-kasvainkudoksia. Niinpä spekuloivat, että miR-137 voi olla oletetun onkogeenin virtsarakon syöpä.

(A). Ylössäätely miR-137 ilmentymistä virtsarakon syövän solulinjoissa ja kudoksissa verrattuna vastaavaan valvontaa. Suhteellinen ilmentyminen miR-137 neljässä virtsarakon syövän solulinjoissa ja yksi normaali virtsarakon solulinjan SV-HUC-1 määritettiin qRT-PCR. U6 snRNA käytettiin sisäisenä kontrollina. (B) Suhteellinen ilmentyminen miR-137 6 kirurgisista näytteistä virtsarakon syöpään kudosten ja sovitettu ei-tuumorikudoksista määritettiin qRTPCR. U6 snRNA käytettiin sisäisenä kontrollina.

Expression of miR-137 kliinisissä virtsarakon syöpäpotilailla ja niiden korrelaatio analyysi kliinis ominaisuudet

Tutkia suhdetta miR-137 virtsarakon syöpä esiintyminen, ilmaus miR-137 havaittiin 50 kliinisessä potilailla käyttäen reaaliaikaista PCR. Out of 50 virtsarakon syöpä näytettä, miR-137 oli säädelty 45 tapauksessa (45/50, 90%) verrattuna viereisten kudosten (Fig. 2B). Samaan aikaan miR-137 oli alassäädetty 5 tapauksessa (5/50, 10%). Yleensä ilmaus miR-137 virtsarakon syöpä kudoksissa oli merkitsevästi parempi kuin viereisiin kudoksiin (kuvio. 2A, p 0,001). Mitä korkeampi taso ilmentymistä miR-137 liittyi pTNM vaiheeseen (Fig. 2C), ja korkeamman tason miR-137 liittyi pM vaiheeseen (p = 0,05, etäpesäke vs. ei metastssis) virtsarakon syöpäpotilailla (kuvio . 2D). Nämä tiedot osoittivat, että muutokset ja miR-137 voi olla mukana virtsarakon syövän etenemisessä.

(A) Suhteellinen miR-137 ekspressiotasot virtsarakon syövän kudoksissa ja viereisten normaaleissa kudoksissa määritettiin qRT-PCR: llä. U6 snRNA käytettiin sisäisenä kontrollina. (B) miR-137 havaittiin 50 paria virtsarakon syöpä kudoksiin ja sen vieressä normaalit kontrollit kvantitatiivisen RT-PCR. Tulokset esitetään log2 kertamuutos virtsarakon syövän kudosten suhteessa viereisiin normaaliin alueille; (C) ja (D) tilastollinen analyysi yhdistyksen välillä miRNA tasolla ja pTNM vaiheessa (I, II, III ja IV) ja pM vaihe (o etäpesäke ja Metastasis); * P 0,05, ja ** p 0,01, *** p 0,001.

yli-ilmentyminen miR-137 edistänyt virtsarakon syövän solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion

tutkitaan mahdollisia vaikutuksia miR-137 virtsarakon syövän solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion. Solut transfektoitiin sekoitetun ohjaus oligo tai miR-137 jäljittelee ja estäjä, joka osoitti korkean transfektiotehokkuuden (Fig. 3A). CCK-8 lisääntymisen määrityksessä osoitti, että solujen lisääntymistä edistettiin miR-137 jäljittelee transfektoiduissa virtsarakon syöpäsolujen verrattuna salatun oligo-transfektoidut solut tai käsittelemättömiä soluja (Fig. 3B). Toisaalta, miR-137-estäjän merkittävästi inhiboivat T24-soluissa (kuvio. 3C). Kiehtovan, muuttoliike ja invaasiomääritys osoittivat, että yli-ilmentyminen miR-137 merkittävästi edistänyt muuttoliike ja invaasion T24 soluja verrattuna kontrolli taas miR-137 estäjä esti sekä solumigraatioon ja invaasiota (Fig. 3d ja E).

(A) Expression tasot miR-137 tutkittiin reaaliaikaisella PCR transfektion jälkeen miR-137 jäljittelee tai sramble tai ei transfektiota. (B) kasvua T24-solujen osoitettiin transfektion jälkeen miR-137 jäljittelee tai sramble tai ei transfektiota. Kasvu indeksin arvioitiin 0, 24, 48 ja 72 tuntia. (C) Expression tasot miR-137 tutkittiin reaaliaikaisella PCR: llä transfektion jälkeen miR-137-estäjän tai valvontaa tai ei transfektiota. (D) Growth of T24-solujen osoitettiin transfektion jälkeen miR-137 estäjän tai valvontaa tai ei transfektiota. Kasvu indeksin arvioitiin 0, 24, 48 ja 72 tuntia. (E) TranswellTM analyysi T24-solujen käsittelyn jälkeen miR-137 jäljittelee, estäjien tai scramble tai valvontaa; suhteellinen suhde siirtynyt solua per kenttä on esitetty alla. (D) TranswellTM analyysi T24-solujen käsittelyn jälkeen miR-137 jäljittelee, estäjien tai scramble tai valvontaa; suhteellinen suhde invasiivisen solua per kenttä näkyy alla, * p 0,05, ** p 0,01 ja *** p 0,001.

MiR-137 tavoitteita PAQR3 virtsarakon syövän soluissa

Kuten ennusti PicTar oli täydentävät toisiaan on-miR-137 ja PAQR3 3’UTR (Fig. 4A). Yliekspressio miR-137 vähensi proteiinin ja mRNA-tasoja on PAQR3 virtsarakon syövän soluissa (Fig. 4C ja D). Vaikutus miR-137 muuntamisesta PAQR3 mRNA-proteiini arvioitiin sitten käyttäen lusiferaasireportteri- määritys (Fig. 4B). Pakotettu ilmentymä miR-137 vähensi huomattavasti lusiferaasiaktiivisuus reportterigeenin kanssa villityypin konstrukti, mutta ei mutantti-PAQR3 3′-UTR rakentaa, mikä osoittaa, että miR-137 suoraan suunnattu PAQR3 3’UTR.

(A) Kaavamainen esitys PAQR3 3 ’UTR osoittaa otaksuttu miRNA kohdesivustoa. (B) analyysi suhteellisen lusiferaasiaktiivisuudet PAQR3-WT, PAQR3-MUT in T24-soluissa. Virhepalkit ovat peräisin kolmena kappaleena expriments. (C) qRT-PCR-analyysi PAQR3 mRNA ilmaisun T24-soluissa hoidon jälkeen miR-137 jäljittelee tai scramble tai ei transfektiota. Ilmentyminen PAQR3 normalisoitiin GAPDH. (D) Western blot analyysi PAQR3 ilmentymisen T24 transfektoiduissa soluissa miR-137 jäljittelee tai scramble tai ei transfektiota. GAPDH havaittiin myös latauskontrollina.

Palautettu ilmaus PAQR3 osittain pelastettiin miR-137-solujen lisääntymisen tehostuneen ja invaasiota

Ensin analysoidaan toimintaa PAQR3 virtsarakon syöpäsoluissa . Kuten on esitetty kuviossa. 5A, transfektoimalla Sirna vastaan ​​PAQR3 osaksi T24 soluihin johti dramaattisesti vähentynyt PAQR3 proteiinin ilmentymisen. Hiljentäminen PAQR3 merkittävästi parannettu leviämisen virtsarakon syövän solujen (kuviot. 5B), joka phenocopied vaikutukset miR-137 leviämisen virtsarakon syöpäsoluja. Kotransfektoimalla konstruktilla ilmentävien PAQR3 ja miR-137 T24-soluissa johti palauttamista PAQR3 ilmaisun, kuten vahvistettiin Western blot (kuvio. 5C). Tämä palauttaminen PAQR3 merkittävästi inhiboivat ja invasiivisia ominaisuuksia virtsarakon syöpäsoluja. Vielä tärkeämpää on, huomasimme, että palauttaminen PAQR3 voisi merkittävästi kääntää leviämisen ja invaasion edistetään miR-137 (kuviot. 5D ja 5E). Yhteenvetona nämä tulokset osoittavat, että esto PAQR3 ilmentymisen miR-137 on vastuussa, ainakin osittain, että edistävät vaikutukset miR-137 soluproliferaatioon ja invaasiota ihmisen virtsarakon syöpään.

(A) Western blot-analyysi osoitti, että transfektointi Sirna vastaan ​​PAQR3 osaksi T24 soluihin johti dramaattisesti vähentynyt PAQR3 proteiinin ilmentymisen. GAPDH havaittiin myös latauskontrollina. (B) vaiennettu PAQR3 merkittävästi parannettu leviämisen virtsarakon syöpäsoluja. Kasvu indeksin arvioitiin 0, 24, 48 ja 72 tuntia. (C) Western blot-analyysi PAQR3 in T24-soluissa ko-transfektoitiin joko miR-137 matkivat tai sekoituskoodin ja 2,0 ug pCDNA- PAQR3 tai pCDNA tyhjän vektorin. GAPDH havaittiin myös latauskontrollina. (D) Cell kasvukäyrät in T24-soluissa, jotka on transfektoitu erilaisilla yhdistelmillä on 0, 24, 48 ja 72 tuntia. (E) TranswellTM analyysi T24 soluja käsiteltiin erilaisilla yhdistelmillä. Suhteellinen suhde invasiivisen solua per kenttä näkyy oikealla. * P 0,05, ** p 0,01, *** p 0,001.

Keskustelu

Viimeisten vuosikymmenten aikana, miRNA ovat nousseet suuret sääntelyviranomaisten mukana erilaisten biologisten prosessien kuten transkription säätelyyn, solujen erilaistumista ja kasvaimen kehittymisen [31]. Maailmanlaajuisesti poikkeava miRNA ilmentymisen profiilit kasvaimia on arvokasta oivalluksia molekyyli polkuja syövän synnyn [32]. Yhtenä merkittävimmistä miRNA osallinen kasvainten synnyssä, miR-137 on esittänyt kanssa ristiriitainen asema aikana syövän etenemistä [33]. MiR-137 havaittiin alennetaan useissa ihmisen syövissä, mukaan lukien mahasyöpä, glioblastooma ja rintasyövän [24], [25], [34]. Tarkka rooli miR-137 virtsarakon syöpä oli edelleen epäselvä, vaikka sen kasvaimeen estävä toiminto on liitetty [29]. Siten nykyinen tutkimus tarkoituksena on selkeyttää ilmaisua ja biologisen toiminnan miR-137 virtsarakon syöpä. Toisin kuin havainnot Shimuzu et al. [29], meidän tutkimus osoitti, että miR-137 oli usein säädellään ylöspäin virtsarakon syövän solulinjoissa ja kudoksissa verrattuna normaaliin virtsarakon solulinjaan ja kudoksissa. Näiden tulosten perusteella, me arveltu, että miR-137 voisi olla potentiaalinen onkogeenin virtsarakon syöpään. Kuten odotettua, täytäntöön ilmentyminen miR-137 tehostetun jakaantumiseen, kulkeutumiseen ja invaasion T24 soluja. Syyt poikkeavat toisistaan ​​havaintojen tämän tutkimuksen ja että Shimuzu et al. jää epäselväksi, mutta etnistä taustaa kliinisten näytteiden voi olla merkitystä. Lisäksi kasvaimia synnyttävän toiminnon miR-137 voi olla ominaisia ​​virtsarakkokudos koska sen kasvain tukahduttava toiminto on laajalti raportoitu muissa kudostyypeissä. Nykyinen havainnot viittaavat siihen, että miR-137 on keskeisessä asemassa invasiivisia ja metastaattisen potentiaalin virtsarakon syöpä ja se voi olla mahdollisia diagnostisia ja ennakoivan biomarkkereiden.

Seuraavaksi käsitelty molekyylimekanismi miR-137 edistämisessä leviämisen , muuttoliike ja hyökkäyksen virtsarakon syövän soluissa. Tässä tutkimuksessa reaaliaikaisen PCR, Western-blotit ja Lusiferaasimäärityksiä osoittivat, että PAQR3 on tavoite miR-137. Tärkeää on, erityisiä PAQR3 pudotus siRNA phenocopied maahanmuutto- ja invaasio edistävät vaikutukset miR-137 yli-ilmentyminen. Osoitimme myös, että kun miR-137 ilmentävien solujen uudelleen PAQR3 ilme, niiden invaasio puutteita osittain päinvastainen. Siksi uskomme, että miR-137 on rooli edistämisessä etäpesäkkeiden virtsarakon syövät, ainakin osittain vähen- tämisessä proteiini ilmentymä PAQR3. PAQR3 kuuluu progesteronin ja AdipoQ-reseptori (PAQR) perheeseen ja on seitsemän transmembraanisen proteiinin spesifisesti sijaitsevat Golgin laitteeseen nisäkässoluissa [35]. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että PAQR3, joka tunnetaan myös nimellä RKTG (Raf-kinaasin ansastusta ja Golgin), voisi toimia spatiaalinen säätelijänä Raf-kinaasin sitomalla Raf Golgin laitteeseen [36]. PAQR3 toimii tuumorisuppressori, koska sen inhibitorinen vaikutus raf /MEK /ERK signaloinnin [37]. Kun yli-ilmentyy ihmisen A375-melanoomasoluja, ihmisen pahanlaatuisen melanooman solulinja B-Raf mutaatio, PAQR3 /RKTG estää ERK aktivointia, solujen lisääntymisen ja transformaatio solujen [37]. Lisäksi poistetaan PAQR3 hiirillä johti lisääntyneestä ihon kasvaimien syntyyn. PAQR3 /RKTG myös voi estää solujen lisääntymisen, migraation itävät ja endoteelisolujen angiogeneesin, ja ilmentymistason PAQR3 merkittävästi vaimentua kliinisessä kirkas-cell munuaissyövän näytteitä, joiden käänteinen korrelaatio VEGF-ilmentymisen määrä [38]. Lisäksi aiemmat tutkimukset ovat myös osoittaneet, että PAQR3 on toimiva vuorovaikutus p53 syövän muodostumisen ja epiteelin-to-mesenkymaalitransitioon [39]. Ilmaisu taso PAQR3 pieneni merkitsevästi kolorektaalisyövässä näytteissä verrattuna viereisten normaaleista kudoksista ja ekspressiotason PAQR3 oli käänteisesti yhteydessä kasvaimen vuonna peräsuolen syöpä näytteitä [40]. Meidän tutkimukset ovat osoittaneet, että yli-ilmentyminen PAQR3 voi estää solujen lisääntymisen ja invaasiota. Ylössäätely näistä miRNA syövän voi helpottaa ilmentymisen PAQR3, joka parantaa etäpesäkkeiden syöpä.

Yhteenvetona tuloksemme ovat osoittaneet, että miR-137 oli merkittävästi voimistunut virtsarakon syövän soluissa ja kudoksissa. Pakotettu ilmentymä miR-137 edistänyt virtsarakon syövän solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion kautta suoraan kohdistaminen PAQR3. Tämä uusi miR-137 /PAQR3 akseli voi tarjota uusia oivalluksia mekanismeista tuumorimetastaasin, ja tukahduttaminen miR-137 ilmentyminen voi olla potentiaalinen terapeuttinen strategia hoitoon virtsarakon syöpään tulevaisuudessa.

tukeminen Information

Taulukko S1.

ennusteeseen viittaavia charateristics potilaita, joilla on virtsarakon syöpä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0109734.s001

(DOCX) B Taulukko S2.

Alukesekvensseillä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0109734.s002

(DOC) B Taulukko S3.

Tarkistuslista MIQE ohjeena.

doi: 10,1371 /journal.pone.0109734.s003

(DOC) B