Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

tunnistaakseen uusia ennustetekijöitä merkkiaineita eturauhassyöpä on erittäin perusteltua, koska on vaikea tunnistaa potilaat vaativat parantavaa hoitoa. Tiedot sekä kokeellisissa malleissa ja kliiniset näytteet ovat tunnistaneet tärkeitä toimintoja PDGFRβ on perisyyteissä ja fibroblastien kasvaimen strooman.

Menetelmät /Principal Havainnot

Tässä tutkimuksessa ennustetekijöiden merkityksen PDGFRβ eturauhassyövässä strooman ja Hyväksytty ei-pahanlaatuista kudosta, arvioitiin immunohistokemiallisesti. PDGFRβ ilmentyminen analysoitiin normaaleissa ja kasvaimen strooman yli 300 eturauhassyöpäpotilaalla. Korkea PDGFRβ ilmentyminen kasvaimen strooman liittyi suuri kasvaimen kokoa, pitkälle, korkean Gleason ja korkea suonitiheys. Perivaskulaarinen PDGFRβ värjäys kasvaimissa oli myös korreloi korkean Gleason. Korrelaatiot havaittiin myös välillä PDGFRβ tilaansa kasvain strooman ja ei-pahanlaatuiset strooman. Vastaavasti korkea PDGFRβ ilmentyminen vierekkäisiin hyvänlaatuisen kudoksen strooman korreloivat suuri kasvaimen kokoa, pitkälle, korkean Gleason ja lisääntymistä ei-pahanlaatuinen epiteelin. Mielenkiintoista, korkea PDGFRβ stroomaan kasvain ja ei-pahanlaatuinen kudos liittyi lyhyempi syöpään erityisiä selviytymisen eturauhassyöpäpotilailla.

Johtopäätökset /merkitys

Tutkimus osoitti useita uusia assosiaatioiden strooman PDGFRβ ilmentymistä eturauhastuumoreissa ja useita tärkeitä kliinisiä tekijöitä, mukaan lukien selviytyminen.

Citation: Hägglöf C, Hammarsten P, Josefsson A, Stattin P, Paulsson J, Bergh A, et al. (2010) stroomakasvaimet PDGFRβ Expression eturauhastuumoreissa ja ei-pahanlaatuiset eturauhasessa ennustaa Eturauhassyöpä Survival. PLoS ONE 5 (5): e10747. doi: 10,1371 /journal.pone.0010747

Editor: Per Westermark, Uppsalan yliopisto, Ruotsi

vastaanotettu: 03 maaliskuu 2010; Hyväksytty: 30 huhtikuu 2010; Julkaistu: toukokuu 20, 2010

Copyright: © 2010 Hägglöf et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoittivat rajoittamattoman avustusten osalta Linna avustuksesta STARGET verkkoon Ruotsin tutkimusneuvoston ja avustukset Ruotsin Cancer Society ja Konung Gustaf Vs Jubileumsfond. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kasvaimen käyttäytyminen on yleensä suurelta osin säätelevät ominaisuudet kasvaimen strooman. Kun kyseessä on eturauhasen syöpä tämä kuvaa hyvin äskeittäin tutkimuksissa on tunnistettu strooman ominaisuudet ja merkkiaineiden kanssa ennustetekijöiden ja vaste-predicative merkitys.

Kasvaimet kanssa selvin muutos strooman morfologia, tunnettu Suurvahinko sileiden lihassolujen ja kasvaa fibroblasteissa, myofibroblasteja, ja kollageeni kuidut (reaktiiviset strooman luokka 3), on huono tulos verrattuna kanssa strooman morfologisesti enemmän samanlainen kuin normaalissa eturauhasessa kudoksessa, eli reagoiva strooman laadut 1 ja 2 [1]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat myös osoittaneet, että eturauhasen syöpä on tunnusomaista menetys androgeenireseptoreita (AR) stroomassa [2]. Matala taajuus strooman AR kytkettiin lisääntynyt Gleason pisteet, etäpesäke, huono vaste kastraatio terapian ja epäsuotuisa lopputulos. Lisäksi strooman ominaisuudet, kuten angiogeneesin, kertyminen makrofagit, lymfosyytit ja syöttösolut sekä muutokset solunulkoisessa matriisissa on yhdistetty vaihtelut eturauhassyövän käyttäytymiseen [3], [4], [5], [6], [7]. Erityisesti se on myös havaittu, että syöpää kentän vaikutuksia ja /tai mukautuva muutokset voivat muuttaa strooman ja rauhasepiteeliin ympäröivillä ei-pahanlaatuinen kudos on ennusteen mukaan merkittäviä tavalla [2], [8], [9], [10] .

PDGF α- ja β-tyrosiinikinaasireseptorit käyttää tärkeitä ohjaustoimintoja mesenkyymisolujen, kuten perisyyteissä, fibroblastien ja verisuonten sileän lihaksen soluissa kehityksen aikana [11], [12]. Kokeelliset tutkimukset ovat tunnistaneet erilaisia ​​toiminnallisia vaikutuksia strooman PDGF-reseptorin signalointia eri kasvainmuodoista. On osoitettu, että parakriinisen aktivoituminen PDGF-reseptoreiden fibroblastien toimii voimakas signaali kasvaimen strooman rekrytointi [13], [14], [15]. Muut tutkimukset ovat osoittaneet terapeuttisia hyötyjä kohdistaminen strooman PDGF-reseptoreita, joihin liittyy joko suoraan kasvaimia torjuvaa vaikutuksia sekä myönteisiä vaikutuksia kasvaimeen huumeiden ottoa [16], [17], [18], [19], [20]. Kliininen merkitys havaintojen kokeellisissa malleissa on osoitettu lukuisissa tutkimuksissa osoittavat strooman PDGF-reseptorin ilmentymistä ihmisen erilaisten kiinteiden kasvainten [13]. Viimeksi nämä tutkimukset on täydennetty analyysit paljastavat, että korkea strooman PDGF-reseptorin ilmentymisen on merkkiaine epäsuotuisasta tulos syöpäpotilaista [21].

biologiset vaikutukset PDGF-reseptorien kasvaimen fibroblastien ja perisyyteissä yhdessä kynnyksellä lääkeaineiden PDGF-reseptori-estävä aktiivisuus, kuten imatinibi sorafenibia ja sunitinibi, mikä motivoi systeeminen luonnehdinta ekspressiokuviota PDGF-reseptorien ihmisen kiinteiden kasvainten. Tätä varten tässä tutkimuksessa kuvataan ilmentymistä PDGFRβ noin 300 tapausta eturauhassyövän ja Hyväksytty ympäröivä ole pahanlaatuisia eturauhasessa, ja kertoo myös assosiaatiot PDGFRβ ilmaisun ja molekyylitason, histopatologiset ja kliinisiä tekijöitä.

tulokset

Muuttuva PDGFRβ ilmentymistä normaalissa ja kasvaimen eturauhaskudoksessa

jotta voidaan arvioida merkityksen PDGFRβ eturauhassyövässä, TMA sisältävät sovitetun hyvänlaatuisen ja kasvainkudoksen välillä 377 eturauhassyöpää sairastavilla potilailla jopa 25 vuoden seurannan analysoitiin PDGFRβ immunohistokemiallisesti.

suostumuksella aiemmissa tutkimuksissa, PDGFRβ ilmentymistä pääasiassa löydetty fibromuskulaarinen strooman ja verisuonia soluissa (kuvio 1 ja taulukko 1). Ei-malignien eturauhasen 27% ja 18% pisteytettiin positiivisia PDGFRβ ilmaisun fibromuskulaarinen strooman ja verisuonia soluja, vastaavasti. Verisuonia ja strooman värjäystä ei korreloi. Kasvaimen alueilla 34% oli positiivisia fibroblastin kaltaisen strooman ja 17% perivaskulaarinen soluissa. Värjäys kasvaimen strooman ja ympärillä kasvaimen verisuonten korreloivat (R = 0,59). Merkittäviä liittymiä havaittiin myös välillä PDGFRβ asema pahanlaatuinen ja ei-pahanlaatuiset stroman (taulukko 1).

Osiot värjättiin PDGFRβ ei-pahanlaatuinen (A, B ja C) ja kasvaimen (D, E ja F) kudosta eturauhassyöpäpotilaalla. Kotelot ja D esittävät negatiivista värjäystä, B ja E maltillista strooman värjäytymistä taas C ja F edustavat voimakasta strooman värjäytymistä. Asteikko bar = 200 uM.

Joissakin tapauksissa PDGFRβ ilmentyminen vaihteli alueella eturauhasessa saman potilaan (kuvio S1).

stroomakasvaimet PDGFRβ ilmaisu tapahtuu pääasiassa αSMA-positiivisten solujen

edelleen karakterisoimiseksi strooman PDGFRβ ilmaisu, kaksinkertainen värjäys suoritettiin vasta-aineilla αSMA ja PDGFRβ.

Nämä analyysit vahvistivat, että suurin osa PDGFRβ ilmentymistä ei-malignien fibromusclar ja fibroblastin kaltaisen kasvaimen strooman tapahtui αSMA-positiivisten solujen (kuvio 2). Lisäksi analyysit osoittivat myös, kun läsnä on αSMA-positiivisten solujen stroomaan kasvaimen ja ei-pahanlaatuisia kudoksia, joita ei ole ilmennyt strooman PDGFRβ ilmaisua.

Double värjäykset eturauhas- kudoksen PDGFRβ (vihreä) ja αSMA (punainen) ei-pahanlaatuinen kudos (A ja B) ja kasvainkudoksen (C ja D). Asteikko bar = 100 uM.

Nämä havainnot vahvistavat näin ollen olemassaolon osajoukkojen strooman αSMA-positiivisten solujen, jotka eroavat osalta PDGFRβ ilmaisua.

stroomakasvaimet ja verisuonia PDGFRβ värjäytymistä eturauhasen kasvaimia korreloi ennustetekijöitä markkereita

Analyysit suoritettiin selvittämään mahdollisia assosiaatioita PDGFRβ ilmentyminen kasvaimissa ja kliiniset oireet tai histologisia ominaisuuksia kasvaimia.

läsnäolo PDGFRβ värjäytymistä fibroblast- kuten kasvain strooma merkittävästi korreloi positiivisesti suuri kasvaimen kokoa, pitkälle, korkean Gleason ja korkea suonitiheys (taulukko 1). Potilailla, joilla on Gleason pisteet 4-6 tai Gleason pisteet 7 kasvain, vain noin 20% kasvaimista osoitti strooman PDGFRβ värjäystä, mutta se oli huomattavasti yleisempää tapauksissa Gleason pisteet 8-10 kasvaimet (Kuva 3).

PDGFRβ värjäytymistä kasvain strooman oli yleisempää tapauksissa Gleason pisteet 8-10 kasvaimissa verrattuna potilailla, joilla on Gleason pisteet 4-6 tai Gleason pisteet 7 (A). Läsnäolo PDGFRβ Immunovärjäyksen oli yleisempää normaalissa eturauhasessa kudos strooman kun Gleason pisteet 8-10 kasvain oli läsnä eturauhasen verrattuna, jos kasvain oli Gleason pisteet 4-6 (B).

perivaskulaarinen PDGFRβ ilmentyminen kasvaimen alueella myös korreloi positiivisesti pitkälle, kasvain suonitiheys ja korkean Gleason (tuloksia ei ole esitetty).

Yhdessä nämä havainnot osoittavat aikaisemmin un-tunnustettujen järjestöjen välillä strooman ja verisuonia PDGFRβ ilmaisun eturauhasen kasvaimet ja ominaisuudet, jotka liittyvät enemmän aggressiivinen syöpä fenotyypin.

stroomakasvaimet PDGFRβ värjäytymistä viereisessä ei-pahanlaatuista kudosta korreloivat prognostisia markkereita

PDGFRβ ilmentymisen viereisen ei-pahanlaatuista kudosta analysoitiin myös osalta assosiaatioita kasvainten ominaisuuksiin (taulukko 1).

korkea PDGFRβ ei-pahanlaatuinen, fibromuskulaarinen strooman korreloi suuri kasvaimen kokoa, pitkälle, epiteelisolujen lisääntymistä ja korkean Gleason (taulukko 1). Se oli huomattavasti yleisempää löytää PDGFRβ ilmentymisen normaalissa eturauhasessa kudos strooman kun Gleason pisteet 8-10 kasvain oli läsnä muualla elimessä verrattuna jos kasvain oli Gleason pisteet 4-6 (kuva 3 B).

Perivaskulaarinen PDGFRβ ilmentymisen ympäröivän ei-pahanlaatuista kudosta myös korreloi positiivisesti epiteelisolujen proliferaatiota (tuloksia ei ole esitetty).

Nämä analyysit viittaavat siis uusia suhteita eturauhassyöpä ominaisuuksia ja fenotyypin stroomaan ei-malignien eturauhasen kudoksen vieressä eturauhasen kasvaimia.

stroomakasvaimet PDGFRβ ekspression kasvaimissa ja ei-pahanlaatuinen eturauhas- ympäröivän kudoksen kasvaimia ennustaa syöpää erityisiä selviytymisen

tulokset analyyseistä PDGFRβ ilmentymisen oli lopuksi yhdistetään Eloonjääntitulokset selvittämään mahdollisia ennustetekijöitä merkitys.

cut-off kasvaimen strooman PDGFRβ ja ei-pahanlaatuisten strooman PDGFRβ analyyseissä asetettiin kolmanteen neljännekseen, mikä vastaa 1,0 ja 0,5 kasvaimen ja muiden -malignant strooman PDGFRβ värjäystä, eli korkea PDGFRβ immunoreaktiivisuus oli ≥1.0 kasvaimen ja ≥0.5 ei-pahanlaatuisten strooman.

Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että valvovan odottaa potilailla, joilla on korkein neljännekseen PDGFRβ ilmentymisen kasvaimen strooman oli huomattavasti lyhyempi syöpä erityisiä selviytymisen verrattuna muuhun (15 vuoden todennäköisyys tapahtuman vapaa elinaika (P-EFS) oli 67 ± 5% ja 34 ± 9% molemmissa ryhmissä) (kuvio 4).

Potilaat jaettiin kahteen ryhmään riippuen siitä, strooman ilmentyminen PDGFRβ kasvaimen (A) ja ei-malignien eturauhasen ympäröivän kudoksen kasvaimet (B). Kiinteä linja, korkea PDGFRβ kasvaimen strooman (≥1.0); katkoviiva, alhainen PDGFRβ kasvaimen strooman ( 1,0; A). Kiinteä linja, korkea PDGFRβ ei-pahanlaatuinen stroman (≥0.5); katkoviiva, alhainen PDGFRβ ei-pahanlaatuinen stroman ( 0,5; B).

Mielenkiintoista, korkea ilmentyminen PDGFRβ stroomaan viereisen normaalin eturauhasen kudosta liittyi myös merkittävästi vähentynyt selviytymisen potilaat hallinnoi valpas odottaa (15-vuoden P-EFS oli 68 ± 5% ja 41 ± 9% molemmissa ryhmissä) (kuvio 4 B).

korkea tuumorin ja ei-pahanlaatuiset strooman PDGFRβ immunovärjäyksellä liittyi suurentunut suhteellinen riski eturauhassyövän erityinen kuoliaaksi univariate Coxin regressioanalyysiä (taulukko 2). Monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä lukien tunnetut ennustetekijöiden merkki GS ja paikallinen kasvain vaiheessa korkea tukikudosten PDGFRβ kasvainten ja ei-pahanlaatuinen kudos ei ollut itsenäinen prognostinen markkeri (tuloksia ei ole esitetty).

Keskustelu

Tämä analyysit paljastui joukko uusia assosiaatioita kasvaimen strooman PDGFRβ tila ja histopatologiset ominaisuudet, mukaan lukien positiivisia korrelaatioita Gleason pisteet, kasvaimen vaiheesta ja kasvaimen kokoa (taulukko 1). Nämä havainnot muistuttavat äskettäin kuvattua tilannetta rintasyövän jossa strooman PDGFRβ ilmentyminen korreloi positiivisesti korkean asteen [21]. Nämä havainnot herättävät kysymyksen taustalla olevaa mekanismia (s). Kuten nyt ei ole mahdollista päätellä, onko yhdistysten aiheuttanut epiteelin aiheuttama strooman fenotyypin tai jonka strooman aiheuttama epiteelin fenotyypin.

analyysit Tämän tutkimuksen paljasti myös merkittäviä assosiaatioita kliinisiä piirteitä, lukien selviytyminen, ja strooman PDGFRβ ilmaisua ei-pahanlaatuinen läsnä kudosta (taulukko 1). Tämä havainto ennusteen mukaan merkittäviä ominaisuuksia kuin pahanlaatuinen kudos lisää että joukko samankaltaisia ​​havaintoja, jotka yhdessä ovat johtaneet ehdottaa termin ”kasvain ilmaisee ei-pahanlaatuinen kudos” (TINT), mikä merkitsee sitä, että analysoidaan ei-pahanlaatuisen eturauhasen kudosta voidaan saadaan varoituksia syntymässä olevista [2], [10]. Muut viimeaikaiset tutkimukset ovat esittäneet samankaltaisia ​​havaintoja seuraavat analyysit esimerkiksi Pakt, pEGFR ja AR [2], [10], [22]. Käytännön näkökulmasta tämä on tärkeää, koska monet diagnostisia koepaloja vain näyte ei-pahanlaatuinen kudos.

taustalla biologia vaihtelut strooman PDGFRβ ilmaisua olisi selkiytetäänkin. Nykyisestä analyysejä varten on epäselvää muutoksia ei-pahanlaatuinen kudos ovat toissijaisia ​​läsnäolo läheisiin pahanlaatuinen kudos ehdotetulla eläinmalleissa [8], tai jos se pikemminkin heijastaa kasvaimen salliva ympäristö, joka kausaalisesti myötävaikuttaa muodostuminen lisää pahanlaatuisia kasvaimia.

analyysien mukaan lukien kaksinkertainen värjäys αSMA ja PDGFRβ vasta-aineita, osoitti, että PDGFRβ ilmaisu tapahtui αSMA positiivisten solujen (kuvio 2). Se oli kuitenkin myös, että nämä solut, kasvaimissa sijoitettiin kuin ottaa PDGFRβ-positiivinen strooman, esiintyi yhdessä αSMA positiivisten /PDGFRβ-negatiivisia soluja. Nämä havainnot siten selvästi esimerkkinä molekyyli heterogeenisuus solujen ei-pahanlaatuisten fibromusclar strooman ja fibroblastin kaltaisen kasvain strooman. Samanlaisia ​​havaintoja on tehty kokeellisissa kasvaimissa [23]. Kuten ehdotettiin myös muut [24], havainnot tulisi kannustaa parannettua ryhmään nämä subsets ja jatkoivat analyysejä toiminnallista merkitystä.

assosiaatioita korkea strooman PDGFRβ ilmaisun ja lyhyempi selviytymisen osoittavat, että tämä reseptori on syy liittyy kliinisiä taudin kulkua ja siten myös ehdottaa kohdistaminen PDGF-reseptorien terapeuttisia tarkoituksia varten. Jotkut pienemmät ole raportoitu jossa imatinibi on käytetty eturauhassyövän ilman ilmeisiä vaikutuksia [25], [26]. Havainnot Tässä tutkimuksessa osoitetaan suuret vaihtelut strooman PDGFRβ ilmaisun, viittaavat siihen, että tulevissa tutkimuksissa arvioidaan tämä lähestymistapa vaatii tiukempia menettelyjä potilaan valintaan. Tässä yhteydessä voidaan myös todeta, että epiteelin PDGFRβ ilmentyminen oli vain harvoin havaittu tässä tutkimuksessa (tietoja ei esitetty). Lisäksi ei yhdistysten välillä tätä ilmaisua ja kliinisiä tai histopatologisia ominaisuuksia havaittu.

Sarjan aiheita tulevissa tutkimuksissa ehdotetaan esillä havainnot. Kokeelliset tutkimukset, joissa co-viljelmistä epiteelin ja strooman solujen pitäisi auttaa selventämään jos peruskudoksettoman epiteelin yhdistykset ovat niiden hallitseva mekanistinen perusta strooman tai epiteelin osastoon. Toinen mielenkiintoinen aihe tulevissa tutkimuksissa olisi tutkia, missä määrin strooman ja epiteelin fenotyypit liittyvät yksilöllisiin eturauhassyövän riskiä geenejä. Lopuksi, edelleen analyysejä tarvitaan ymmärtää, jos kasvaimeen liittyvää vaihtelut ei-pahanlaatuista kudosta ovat syynä tai seurauksena kasvaimen muodostumisen. Huolellinen kudos analyysit tulevaisuudentutkimusta voidaan tarvita selventämään tätä asiaa.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja kudosten mikrosirujen

Tissue näytteet kerättiin potilailta, joille tehtiin höyläysleikkaus eturauhasen (TURP) sairaalassa Västeråsissa, Ruotsissa, vuosina 1975 ja 1991. histologinen analyysi osoitti on eturauhassyöpä. Mediaani ikä TURP oli 74 vuotta (vaihteluväli 51-95 vuotta). Tiedot puuttuessa tai läsnä eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun ei ollut saatavilla. Dosnäytteistä Formaliinifiksoidusta ja parafinoidut seurasi uudelleenluokittelua mukaan Gleason järjestelmää. Näytteet käytettiin rakentaa kudoksen micro array (TMA) käyttäen Beecher Instrument (Sun Prairie, WI, USA). TMA: s sisälsi 5-8 näytteitä kasvainkudoksen edustavat sekä ensisijainen ja toissijainen Gleason luokka ja 4 näytettä ei-pahanlaatuisen kudoksen kunkin potilaan. Potilaat eivät olleet saaneet mitään syövän hoitoon ennen TURP. Radio nuklidin luukuvaus suoritettiin pian diagnoosin jälkeen havaitsemiseen etäpesäkkeitä. Oli 377 potilasta mukana tutkimuksessa, joista 293 potilasta seurattiin valpas odottaa jälkeen TURP. Klo oireita etäpesäkkeitä potilasta sai lievittävää hoitoa Androgeeniablaatio- ja muutamissa tapauksissa sädehoidon tai estrogeenihoito mukaan hoito perinteiden Ruotsissa tuona aikana. Lisäksi, 84 potilasta hoidettiin lievittävää hoitoa välittömästi diagnoosin jälkeen analysoitiin. Keskimääräinen eloonjäämisaika varten potilasryhmässä seurannut valpas odottamassa oli 5,6 vuotta. Yhdeksänkymmentä kaksi TURP yksilöt luokiteltiin Gleason (GS) 4-5, 107 potilasta kuin GS 6, 63 potilaalla oli GS 7, ja 115 potilasta GS 8-10. 3 potilaalla (4,1%) ja GS 6, 4 potilasta (8,2%) ja GS 7, ja 33 potilasta (33,7%) kanssa GS 8-10 ollut etäpesäkkeitä luustossa diagnoosi. Elokuussa 2003, 36 potilasta (9,5%) oli vielä elossa, 131 potilasta (34,7%) oli kuollut eturauhassyövän ja 210 potilasta (55,7%) oli kuollut muista syistä. Aineisto kerättiin Ruotsin määräysten mukaisesti samaan aikaan, kun tietoon perustuvan suostumuksen ei tarvittu. Tutkimuksen eettinen komitea Uumajan yliopistollisessa sairaalassa (Regional Ethical Review Board Uumajassa) hyväksyi tutkimuksen ja luopua tarvetta suostumusta.

Tässä materiaali olemme jo analysoitu tekijöitä mahdollisten prognoosi- merkitys kuten Gleason pisteet, kasvaimen tilavuus, kasvaimen vaiheessa kasvainsoluproliferaation ja verisuonten tiheyden ja saadut tiedot on nyt liittyvät nykyiseen PDGFRβ havaintojen [2], [27].

PDGFRβ immunohistokemia

PDGFRβ immunohistokemia suoritettiin kuvatulla Nupponen

et al

2008 [28]. Anti PDGFRβ (kani monoklonaalinen, # 3169, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) käytettiin konsentraatiossa 2 ug /ml. Värjäytymisintensiteettiä pisteytettiin erikseen strooman ja ympärillä aluksiin negatiivisina (0), heikko (1), kohtalainen (2) tai vahva (3). PDGFRβ värjäys pisteet ovat mediaaniarvot viidestä kahdeksaan sai näytteitä kasvainkudoksen tai neljä sai näytettä pahanlaatuisten kudosta. Korrelaation analyysi näytteet pisteytettiin positiivisiksi PDGFRβ jos värjäytyminen havaittiin ainakin yksi TMA sydämiä.

Immunofluoresenssi

immunofluoresenssivärjäyksiä että TMA suoritettiin kuten edellä (in immunohistokemia jakso), kunnes inkubointi anti- PDGFRβ vasta-aine. Sitten leikkeet pestiin PBS: ssä, jossa oli 0,1% Tween-20 (PBT) 3 x 5 min. Tätä seurasi 1 tunnin inkubaatio toisen primaarisen vasta-aineen, hiiren monoklonaalinen αSMA (M0851, klooni 1A4, Dako Cytomation, Glostrup, Tanska) laimennettuna 1:100 20% vuohen seerumia PBT. Pesun jälkeen PBT 3 x 5 min, kalvot inkuboitiin biotinyloidulla vuohen anti-hiiri-vasta-ainetta (E0432, Dako Cytomations 1:500) 45 minuutin ajan RT: ssä. Tätä seurasi toinen 3 x 5 min pesu PBT. Levyjä inkuboitiin sitten Alexa-Flour 488 vuohen anti-kaniini-vasta-ainetta (A11008, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) laimennettiin 1:100 in PBT 45 minuutin ajan RT: ssä. Sen jälkeen pesu; kalvot inkuboitiin 45 min Cy3-streptavidiini-konjugaatti (Sigma-Aldrich) laimennettuna 1:500 in PBT 45 minuutin ajan RT: ssä. Pesun jälkeen objektilasit kuivattiin ja asentaa Vectashield kiinnitysväliaine DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA).

Tilastot

bivariate korrelaatiot laskettiin Pearsonin korrelaatio testi. Korrelaatiot kategorinen muuttujien ja jatkuvia muuttujia analysoitiin käyttäen Spearmanin rank korrelaatio testi. Tietoja kerättiin aikaan eturauhassyövän diagnoosia.

Potilaat sisältyvät selviytymisen analyyseja Kaplan-Meier ja Coxin regressio seurattiin valpas odottaa. Kesto tapahtuma-elinaika (EFS) määritellään aika TURP asti eturauhassyövän kuolema, kuolema muun syyn, tai siihen saakka, kunnes viimeinen seurannan. Tapahtuma selviytymisen analyysin määriteltiin eturauhassyövän kuolema, mikä osoittaa syöpäspesifisessä selviytymisen. Erot tulos testattiin log-rank-testi. Prognostisia merkitys PDGFRβ immunoreaktiivisuus arvioitiin Coxin regressioanalyysiä yksin ja yhdessä GS ja paikallisten kasvainten vaiheessa. Todennäköisyys tapahtuma vapaa elinaika (P-EFS) esitetään ± keskivirhe (SE). Taso tilastollinen merkittävyys määritettiin

P

0,05 (kaksipuolinen). Tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS 17.0.0 ohjelmisto OS X (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

tukeminen Information

Kuva S1.

PDGFRβ ilmaisu satunnaisesti vaihtelee alueella eturauhasessa saman potilaan. Heterogeeninen PDGFRβ värjäyskuviot havaittiin monissa kasvaimissa. A ja B esittävät eri osia saman eturauhasen syöpä. Asteikko bar = 200 uM.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0010747.s001

(7,24 MB EPS) B

Kiitokset

jäsenet laboratorion a.o. tunnustetaan tuottavaan ja tukevia huomautuksia koko projektin ajan.