Krooninen sairaus

tiivistelmä

aktiivinen metaboliitti vitamiini D

3, 1,25 -dihydroxyvitamin D

3 (kalsitriolin) on antiproliferatiivisia vaikutuksia ei-aggressiivinen eturauhassyöpä, mutta sen vaikutukset aggressiivisempia mallissa järjestelmät ovat vielä epäselviä. Näissä tutkimuksissa vaikutukset kalsitriolin ja vähemmän kalseemista D-vitamiinin analogi, QW-1624F

2-2 (QW), testattiin

in vivo

käyttäen aggressiivinen kotoperäisten siirtogeeninen adenokarsinooma hiiren eturauhasen ( TRAMP) malli. Tutkia ehkäisy androgeenin stimuloiman eturauhassyöpä, ajoneuvo, kalsitriolin (20 ug /kg), tai QW (50 ug /kg) annettiin 4 viikkoa vanha TRAMP-hiirissä vatsaonteloon (ip) 3 x /viikko on MWF aikataulun 14 viikkoa. Kalsitriolin ja QW hidasti etenemistä eturauhassyövän kuten vähentämällä virtsa (p = 0,0022, kalsitriolin; p = 0,0009, QW) ja eturauhasen painot (p = 0,0178, kalsitriolin; p = 0,0086, QW). Kuitenkin vain kalsitriolin lisääntyneen ekspression pro-differentiaatiomarkkeri, kadheriinin 1 (p = 0,0086), ja vähentää kasvaimen leviämisen (p = 0,0467). Sitä vastoin ole D-vitamiinin analogi ollut vaikutusta kastraatio kestävä eturauhassyövän hiirillä käsitelty ennen tai jälkeen kastraation. Mielenkiintoista, vaikka D-vitamiinin osoitti estävä vaikutus ensisijainen kasvaimia hormonien ehjä hiiret, kaukainen elin etäpesäkkeitä näytti tehostetun hoidon (p = 0,0823). Siksi TRAMP hiiriä käsiteltiin pitkäaikaisia ​​kanssa kalsitriolin tutkia tarkemmin vaikutukset etäpesäkkeitä. Kalsitrioli lisännyt huomattavasti kaukaisten elimen etäpesäkkeitä, kun hiiriä hoidettiin 4 viikkoa-of-ikä saakka kehitystä ilmeni selvänä kasvaimia (20-25 viikkoa-of-ikä) (p = 0,0003). Kaiken kaikkiaan tulokset viittaavat siihen, että varhainen puuttuminen kanssa D-vitamiinin TRAMP hidastui androgen stimuloimaa syövän etenemiseen, mutta pitkäaikainen hoito johti kehittää kestäviä ja aggressiivisempi sairaus liittyy lisääntynyt kaukainen urut etäpesäke.

Citation: Ajibade AA, Kirk JS, Karasik E, Gillard B, Moser MT, Johnson CS, et al. (2014) Early Growth Inhibition seuraa Lisääntynyt etäpesäkkeitä D-vitamiinia (kalsitriolin) Käsittely TRAMP malli Eturauhassyöpä. PLoS ONE 9 (2): e89555. doi: 10,1371 /journal.pone.0089555

Editor: Karl X. Chai, University of Central Florida, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 syyskuu 2013; Hyväksytty: 21. 2014; Julkaistu: 26 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Ajibade et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Roswell Park Cancer Institute ja National Cancer Institute (NCI) avustus # P30 CA016056, NIH /NCI avustus # 5R01 CA95367 (ja BAF), sekä puolustusministeriön (DOD) Pre-jatko Fellowship avustuksen # W81XWH-05 -1-0571 (AAA). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yksi johtavista syistä syövän ja syöpään liittyvien kuolleisuus American men [1]. Alkuvaiheen, elimeen rajoittunut PCA voidaan hoitaa leikkauksella, sädehoitoa tai valpas odottaa, kun taas miehet, joilla on paikallisesti levinnyt tai metastaattinen PCa hoidetaan ensisijaisesti androgeenien puute hoidon [2]. Kuitenkin monet potilaat lopulta kehittää kastraation kestävä PCa, joille nykyiset hoitovaihtoehdot ovat vain lievittävä. Esiintyvyys, pitkä latenssi, sairastuvuus ja kuolleisuus liittyy PCa ovat tuottaneet merkittävää kiinnostusta kehittää aineita kemopreventioon taudin [3].

Epidemiologiset yhdistysten D-vitamiinin ja PCa viittaavat siihen, että D-vitamiini voi olla tärkeä säädin Eturauhassyövän kasvun ja erilaistumisen [4]. Kuitenkin tutkimukset yhdistää seerumin D-vitamiinin ja PCa ilmaantuvuutta ja kuolleisuutta ei korreloivat voimakkaasti (tarkistetaan [5]). Sen sijaan, prekliinisissä tutkimuksissa osoittavat, että D-vitamiinilla on voimakas syöpää ehkäisevistä vaikutuksista in PCa soluissa

in vitro

, mukaan lukien soluproliferaation inhibointi [6] ja invasiivisuus [7], solusyklin pidätys [8], stimulaatio apoptoosin [9], ja erilaistumisen edistäminen [10]. Lisäksi lukuisat

in vivo

tehtyjen tutkimusten hiiren ksenografti järjestelmät osoittavat, että D-vitamiinin yhdisteet tukahduttaa kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden [6], [11], [12]. Lisäksi käyttö geneettisesti hiiri malleja, jotka spontaanisti kehittävät syöpää, osoittavat, että D-vitamiini voi estää etenemistä syöpää edeltävän PCa vaurioiden [13] ja tukahduttaa kasvaimen kasvua kastraatio kestävä PCa [14].

Kliiniset kokeet suoritetaan PCA potilaat ovat olleet enimmäkseen pettymys [15], [16], [17], [18], vaikka on ollut joitakin myönteisiä tuloksia [19], [20], ja voitot on tehty ymmärrystä D-vitamiinin farmakokinetiikkaan ja farmakodynamiikka. Yksi syy huono kliininen suorituskyky D-vitamiini on sen tärkein annosta rajoittava haittavaikutus, hyperkalsemia. Vaikka hyperkalsemiaa on helposti hallittavissa, se voi olla estää optimaalisen käytön kalsitriolin. Siksi vähemmän kalseemista D-vitamiinin analogeja on kehitetty tarkoituksenaan säilyttää voimakas syöpää ehkäisevistä vaikutuksista kalsitriolin. QW-1624F

2-2 (QW) on fluorattu analogista kalsitriolin joka on 100 kertaa vähemmän kalseemista, erittäin antiproliferatiivisia, ja saa aikaan samanlaisia ​​loppupään vaikutuksia kalsitriolialtistus [21], [22]. Lisäksi anto suurina annoksina QW (3 ug) estävät 7,12-dimetyylibents [a] antraseeni-aloitettu ja TPA-edistänyt ihon syövän syntymistä hiirillä ilman hyperkalseemisia sivuvaikutuksia [23].

siirtogeenisiä adenokarsinooma hiiren eturauhasen (TRAMP) malli on aggressiivinen, alkuperäiskieltä malli eturauhassyövän [24]. 10 viikkoa-of-ikä, TRAMP hiiret kehittävät huono laatu, ei-invasiivisia eturauhassyövän [25]. Koska hiiret edelleen iän, kasvaimen edetessä ei-invasiivisia ja korkea laatu, invasiivisia adenokarsinooma, ja myöhemmin huonosti eriytetty neuroendokriinisiä kasvaimia 20-25 viikkoa-of-ikä. Progression mallin tarjoaa mahdollisuuden tutkia vaikutuksia kemopreventiivisten aineiden molemmin aikaisin ja loppuvaiheissa Eturauhassyövän kehitystä, toisin kuin vain yksi tai toinen. Toistaiseksi päineen vertailuja chemopreventive vaikutuksista eri D-vitamiinin yhdisteillä androgen stimuloimaa ja kastraatio kestävä PCa etenemistä on vielä tehdä. Koska eturauhassyöpä kuolleisuutta esiintyy miehillä kehittyneitä, myöhäisvaiheen syöpä, pyrimme tutkimaan syöpälääkkeen tehoa D-vitamiinin yhdisteiden avulla aggressiivisempi TRAMP malli. Näissä tutkimuksissa TRAMP mallia käytettiin tutkimaan, onko kalsitriolia tai QW voivat estää tai hidastaa androgen stimuloimaa ja kastraatio kestävä PCa aloittamista, etenemistä ja etäpesäkkeitä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics Statement

Kokeellinen käyttötarkoitukset laboratorioeläinten tehtiin tiukka mukaisesti National Institutes of Health Guide for Care ja koe-eläinten käyttöä ja protokolla hyväksyi Roswell Park Cancer Institute (RPCI) Animal Care ja käytön komitea (Assurance # A3143-01). RPCI on AALAC International akkreditoitu eläimen tutkimuslaitoksessa. Kaikki Leikkaus suoritettiin isofluraanilla varten inhalaatioanestesiaa ja yritettiin minimoida eläinten kärsimyksiä.

Eläimet

Kasvatuslaitoksessa säilyivät laitoksella laboratorion ja eläinten Resource (DLAR) ydin laitokseen Roswell Park Cancer Institute (Buffalo, NY). Homotsygoottinen mies TRAMP hiiriä kasvatettiin villityypin FVB naaras hiiret (Taconic, Germantown, NY) saamiseksi C57BL /6 x FVB 50:50 miespuolinen TRAMP hiirillä. Hiiret genotyypattiin Vahvista alkio linjasiirrossa siirtogeenin [24]. Kaikki koe-eläimet olivat heterotsygoottinen siirtogeenin, ja ylläpidetään Harlan Teklan Diet S2335, joka sisältää 2980 IU /kg D3-vitamiinia.

D-vitamiini kemopreventiossa tutkimukset

1α-hydroksimetyyli-16-eeni -24,24-difluori-25-hydroksi-26,27-bis-homovitamin D

3 (QW-1624F

2-2, QW) saatiin tri Gary Posner (Johns Hopkins University, Baltimore, MD). Kalsitriolin ja QW varastot liuotettiin 100% etanolia, ja oli juuri resuspendoitiin suolaliuokseen ennen pistämistä. Eläimet punnittiin, seurattiin myrkyllisyyttä, ja palpoidaan arvioimaan kasvaintaakka viikoittain. Tutkimukset olivat yleensä lopetettiin 72 tunnin kuluttua viimeisestä lääkehoitoa annettiin. Tuolloin eutanasia, lopullisen painon mitattiin ja virtsa- (UG) suolikanavan (virtsarakon, rakkularauhanen ja eturauhanen) leikattiin ja punnittiin. Selkäpuoli, sivusuunnassa ja vatsanpuoleinen eturauhanen lohkoa olivat microdissected päässä UG sairauksien ja Punnittavien eturauhasen painoja. Metastaattinen ilmaantuvuus määritettiin perustuen brutto tutkiminen lantion imusolmukkeiden, maksa, munuaiset ja keuhkot, ja immunohistokemiallisella värjäyksellä kudoksen kanssa SV40 T-antigeenin spesifinen vasta-aine. Seuraavat kudokset kerättiin 9-kammiossa kasetteja histologia: selkä-, sivusuunnassa, vatsa- ja aikaisemmat prostates, rakkularauhanen, peri-aortan imusolmukkeet, munuaisten, suolistossa ja maksassa. Kokoelma kudosten histologia priorisoitu siten vain jäänne kudoksia suurista eturauhasen kasvaimia snap-jäädytetty nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa Western blot analyysiä.

vaikutuksen tutkimiseksi kalsitriolin tai QW etenemiseen androgen-stimuloidun PCa, kolme kohortteja 4 viikkoa vanha TRAMP-hiiret käsiteltiin vehikkelillä (n = 40), kalsitriolin (n = 41) tai QW (n = 42) ip 3 x /viikko maanantai, keskiviikko ja perjantai (MWF) 14 viikon (kuvio 1A). Tutkimus lopetettiin, kun hiiret olivat 18 viikkoa vanhoja ja kudokset kerättiin, kuten edellä on kuvattu. Jotkut näytteet eivät voineet analysoida tai ei arvioitu perustuen totesi poissulkukriteereitä. Toinen tutkimus suoritettiin vaikutuksen tutkimiseksi

pitkäaikainen

kalsitriolin antamiseen on androgen stimuloimaa PCa etenemistä. Kaksi ikäluokat 4 viikon ikäisiä TRAMP hiiriä hoidettiin

pitkäaikainen

ajoneuvon (n = 47) tai kalsitriolin (n = 49) i.p. 3 x /viikko MWF, kunnes palpoitavissa kasvaimia kehittyi (kuvio 1A). Kasvaimet kerättiin kun havaittavissa vatsan tunnustelemalla.

(A) Kaaviokuva ajankul- kemopreventiota tutkimuksia. Kaikki hiiret kastroitu 12 viikkoa hormoneille resistentti tutkimuksissa. (B-C) Neljä viikkoa vanhoja TRAMP-hiiret käsiteltiin vehikkelillä (kontrolli), kalsitriolin (20 ug /kg) tai QW (50 ug /kg) i.p. 3 x /viikko 14 viikon ajan. (B) Lopullinen kehon paino (g) ohjaus (n = 40), kalsitriolin (n = 41) ja QW (n = 42) hiirillä, mitattiin 72 tuntia viimeisen käsittelyn jälkeen. (C) seerumin kalsiumpitoisuus (mg /dl) tasot ohjaus (n = 39), kalsitriolin (n = 40) ja QW (n = 42) hiirillä, mitattiin 72 tuntia viimeisen käsittelyn jälkeen. Kaikki tiedot ovat edustettuina rasiakuvaajien kanssa keskilinjan ja viikset edustaa 5

th ja 95

th persentiilit. • (pisteet), edustaa pistettä ulkopuolella 5

th ja 95

persentiili. Kaikki p-arvot on luotu käyttäen Mann-Whitneyn testi.

kaksi tutkimusta oli suunniteltu arvioimaan vaikutusta kalsitriolin tai QW estämisestä kastraatio resistenttien PCA kirurgisesti kastroitu TRAMP hiirillä.

kastraation jälkeen

tutkimus, hoito aloitettiin välittömästi kastraatio TRAMP hiirillä 12 viikon-of-ikä. Kolme ikäluokat 12 viikon ikäistä kastroitu hiiriä hoidettiin vehikkelillä (n = 33), kalsitriolin (n = 31) tai QW (n = 30) i.p. 3 x /viikko MWF varten 12 viikkoa (kuvio 1A). Hiiret lopetettiin klo 24 viikkoa-of-ikä ja kudosnäytteet hankittiin kuten edellä on kuvattu.

ennalta kastraation

tutkimuksessa 4 viikon ikäiset TRAMP hiiriä hoidettiin vehikkelillä (n = 29) tai kalsitriolin (n = 34) i.p. 3 x /viikko MWF 8 viikon ajan. 12 viikon-of-ikä, kaikki hiiret kastroitiin, ja hoitoa jatkettiin vielä 12 viikkoa (kuvio 1A). Hiiret lopetettiin klo 24 viikkoa-of-ikä ja kudosnäytteet hankittiin kuten edellä on kuvattu.

Histopatologinen analyysi

kudokset otettiin talteen, kiinnitettiin käsitelty, parafiiniin upotettuja ja kudosleikkeiden (5 um ) leikattiin histologista analyysiä. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H E-värjätään dioja. Ennen raportit osoittavat, että vatsanpuoleiseen lohkoon on herkin terapeuttisen intervention [27], [28], siis yleisesti kasvaimen laadut ventraalisen eturauhasen verrattiin hoitoryhmien välillä (kuvio 3). Matala-asteisia (LG) vauriot olivat ei-invasiivisia ja oli ominaista lisääntynyt epiteelin kerrostuneisuus ehjät rauhas arkkitehtuuri (kuvio 3A). Väli-tason (IG) vauriot olivat myös ei-invasiivisia, mutta näytössä näkyvä nucleoli, epiteelin tuftauskoneet, micropapillary rakenteet, seulamaisessa arkkitehtuuria, ja ehjä rauhas arkkitehtuuria (kuvio 3B). Lopuksi myöhäisvaiheen syöpiä näkyvästi koostui arkkia anaplastinen solujen menetys rauhas arkkitehtuuria (kuvio 3C). Ilmaantuvuus LG esiintyvyys oli 40% ajoneuvojen käsitelty, 54% vuonna kalsitriolin käsitelty, ja 39% QW käsitellyissä hiirissä (kuvio 3D). Sen sijaan, IG vaurioita ja myöhäisvaiheen syöpä kehittyi useammin kontrolliryhmässä (60%) ja QW (61%) ryhmissä verrattuna kalsitriolialtistus-käsitellyistä hiiristä (46%) (kuvio 3D). Lisäksi esiintyvyys pahanlaatuisten vaurioiden oli 25% kontrolliryhmässä, 34% QW ryhmässä, ja 20% vuoden kalsitriolin ryhmässä (kuva 3D), mutta nämä muutokset eivät olleet merkittäviä (p = 0,4699, Chi-Square test). Interventio ei myöskään ollut vaikutusta kasvaimen selän ja sivusuunnassa lohkoa eturauhasen (tuloksia ei ole esitetty).

H E-värjäys suoritettiin kudososat TRAMP-hiiret käsiteltiin kantajaa (kontrolli), kalsitriolin (20 ug /kg) tai QW (50 ug /kg) i.p. 3 x /viikko 14 viikon ajan. Eturauhaskudoksiin luokiteltiin perustuvat histopatologinen luokitusjärjestelmä käsitellään

Materiaalit ja menetelmät

osassa. Edustavia mikrovalokuvia (20-kertainen suurennus) H E värjäys vatsanpuoleisiin lohkoihin kuvaa (A) Matala-asteisia (LG) eturauhasen vaurio päässä kalsitriolin ryhmästä, (B) väli-tason (IG) leesion, ja (C) myöhäisvaiheen syövän kontrolliryhmässä. (D) esiintyvyys (%) LG leesiot, IG leesiot, ja syövän ventraalisessa lohkoa ohjaus (n = 40), kalsitriolin (n = 41) ja QW (n = 41) ryhmät. Chi-Square koe suoritettiin sen määrittämiseksi, oliko jokin yhdistyksen välillä hoidon ja sairauden vaiheessa.

tautikuormituksesta TRAMP voidaan suoraan sidoksissa eturauhasen ja urogenitaalialueen (UG) paino [25]. Vaikutus D-vitamiinin yhdisteiden sairauksien esiintyvyys oli alun perin tutkittu kaikissa näytteissä kuten LG, IG, ja myöhäisen vaiheen syöpiä. Mitään merkittäviä eroja ei havaittu, todennäköisesti johtuvat kehittämisestä vieviä kasvaimista myöhäisvaiheen syöpiä. Kun tilaa vieviä kasvaimet ovat kehittyneet, painot näistä kasvaimista voivat peittää mitään vaikutusta D-vitamiinilla on LG ja IG vaurioita. Siksi kaikki myöhemmät analyysit suoritetaan androgen stimuloimaa PCa tehtiin ei-invasiivisia LG ja IG eturauhasen vaurioita. Kalsitrioli (p = 0,0022) ja QW (p = 0,0009) laski merkittävästi UG paino verrattuna ajoneuvon androgeeni stimuloiman tauti (kuvio 4A). Lisäksi kalsitrioli (p = 0,0178) ja QW (0,0086) sekä vähentää eturauhasen painoa (kuvio 4B). Kuitenkin kastraatio kestävä TRAMP kasvaimia histologisesti verrattavissa myöhäisvaiheen syöpä, D-vitamiini yhdisteet eivät tilastollisesti muuttanut tautikuormituksesta hoidetuilla kastraation jälkeen (kuvio 4C) tai pre-kastraatio (kuvio 4D). Kaiken kaikkiaan tulokset viittaavat siihen, että D-vitamiini yhdisteet olivat tehokkaita kasvun hidastumisesta alkuvaiheessa androgen stimuloimaa PCa, mutta tehoton myöhäisessä vaiheessa kastraatio vastustuskykyisiä TRAMP tauti.

(A-B) Hiiriä käsiteltiin kantajaa (kontrolli) , kalsitriolin (20 ug /kg) tai QW (50 ug /kg) ip 3 x /viikko 14 viikon ajan. Vain näytteiden yleistä ei-invasiivisia huono laatu (LG) ja väli-tason (IG) eturauhasen vaurioita selkä-, sivu- ja vatsanpuoleisiin lohkoihin analysoitiin, kun taas kaikista syövistä jätettiin pois analyyseistä. (A) virtsa- ja sukupuolielinten (UG) painot (mg) ohjaus (n = 30), kalsitriolin (n = 32) ja QW (n = 28) hiirillä. (B) Prostate painot (mg) ohjaus (n = 29), kalsitriolin (n = 32) ja QW (n = 28) ryhmät. (C) UG painot (mg) 24 viikon ikäisiä kastraatiotason TRAMP hiiriä hoidettiin auton ohjaus (n = 33), kalsitriolin (n = 30) tai QW (n = 30)

kastraation jälkeen

. (D) UG paino (mg) 24 viikon ikäisiä kastraatiotason TRAMP hiiriä hoidettiin auton ohjaus (n = 29) tai kalsitriolin (n = 34)

pre-kastraation

. Kaikki tiedot ovat edustettuina rasiakuvaajien kanssa keskilinjan ja viikset edustaa 5

th ja 95

th persentiilit. • (pisteet), edustaa pistettä ulkopuolella 5

th ja 95

persentiili. Kaikki p-arvot on luotu käyttäen Mann-Whitneyn testi.

kalsitriolin edistää erilaistumista ja estää proliferaation androgen stimuloimaa TRAMP hiiret

havaintojen perusteella, että kalsitriolin esti UG ja eturauhasen paino vatsanpuoleisissa koru (kuva 4), lisäksi analyysit suoritettiin ei-invasiivisia LG ja IG vaurioita. Menetys kadheriinin 1 (CDH1) ilmentyminen liittyy PCa etenemiseen ja laski eriyttäminen TRAMP [25], [29]. CDH1 ilmentyminen on pääasiassa sijaitsee solukalvoon. Kuitenkin, kun syöpäsolut menettävät erilaistumista asema, sääntely CDH1 voidaan hajottaa johtaa soluliman ja ydin- ekspressiokuvioiden [30]. Lisäksi korotukset ilmentyminen CDH1 korreloi erilaistumisen induktion aiheuttama D-vitamiinin analogien PCa solulinjoissa [31]. Näin ollen ilmentyminen CDH1 arvioitiin vaikutuksen määrittämiseksi kalsitriolin erilaistumista. Toisin kontrollihiiriin (kuviot 5A-B), CDH1 voimakkaasti ilmaistu ventraalisessa lohkoa kalsitriolin käsiteltyjen hiirten (kuviot 5C-D). Vaikka jotkut sytoplasminen värjäys CDH1 havaittiin molemmissa hoitoryhmissä, suurin osa CDH1 värjäys pysyi kalvo sidottu. Myöhemmät kvantifiointi vahvisti, että kalsitriolin merkittävästi lisännyt CDH1 positiivisia rauhasten verrattuna ajoneuvoon (kuvio 5G) (p = 0,0086). Lisäksi CDH1, androgeenireseptorin (AR) ilmentyminen tutkittiin myös vatsanpuoleisissa prostates ajoneuvojen ja kalsitriolin käsitellyistä hiiristä (kuviot 5E ja 5F). Vaikka eroa AR ilmentyminen havaittiin, että on tärkeää huomata, että AR-ilmentyminen säilyy. Lopuksi on stokastinen syntyminen neuroendokriinisten syöpiä TRAMP malli, joka on merkitty lisääntyneen ilmentymisen synaptofysiinin aikana kasvaimen etenemisen [25]. Tarkastelu synaptofysiinin ilmaisun osoitti, että kalsitrioli ja QW käsittely ei muuttanut esiintyvyys neuroendocrine fenotyypin (tuloksia ei ole esitetty).

Immunohistokemia suoritettiin anti-CDH1, anti-AR ja anti-MKI67 vasta-aineiden kudososat ohjaus, kalsitriolin ja QW hoitoryhmissä. (A-D, G) CDH1 ilmentymistä ei-invasiivisia huono laatu (LG) ja väli-tason (IG) ventral eturauhaskudoksiin. Edustavia mikrovalokuvia CDH1 värjäyksen ohjaus (A-B) ja kalsitriolin (C-D) ryhmiin. Inset (A) edustaa positiivinen CDH1 värjäytyminen normaalien paksusuolen epiteelisolujen. Mikrovalokuvia jotka otettiin 40-kertaisella suurennuksella (A, C) ja boxed alueet edustavat 100-kertainen suurennus (B, D). Edustavia mikrovalokuvia (40-kertainen suurennus) AR ilmaisun ei-invasiivisia eturauhasvaurioiden alkaen ventral lohkoa (E) valvonta ja (F) kalsitriolin ryhmä. (G) CDH1 pisteet noninvasiivisten vatsanpuoleiseen lohkoon vaurioita kontrollista (n = 25) ja kalsitriolin (n = 27) ryhmät on laskettu määrällisesti määrä E-kadheriinin positiivinen rauhaset kuvatulla

Materiaalit ja menetelmät

osiossa. (H) Proliferative indeksi LG ja IG vatsanpuoleiseen lohkoon vaurioita valvonnan (n = 30), kalsitriolin (n = 33) ja QW (n = 27) ryhmät määritettiin määrällisesti MKI67 värjäystä kuvatulla

Materiaalit ja menetelmät

osiossa. Vain LG ja IG eturauhasvaurioiden analysoitiin, kun taas myöhäisvaiheen syöpiä jätettiin sekä CDH1 pisteytys ja MKI67 värjäystä. Kaikki tiedot ovat edustettuina rasiakuvaajien kanssa keskilinjan ja viikset edustaa 5

th ja 95

th persentiilit. • (pisteet), edustaa pistettä ulkopuolella 5

th ja 95

persentiili. Kaikki p-arvot on luotu käyttäen Mann-Whitneyn testiä.

Lisäksi tutkitaan erilaistumisen tilasta LG ja IG vatsanpuoleisiin lohkoihin, immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin MKI67 vasta-aineen vaikutuksen tutkimiseen kalsitriolin ja QW proliferaatioon ventraalisen koru. Verrattuna ajoneuvo, kalsitrioliksi merkittävästi vähentynyt proliferaatio vatsanpuoleiseen lohkoon (p = 0,0467), kun taas QW oli tehoton (p = 0,2667) (kuvio 5H). Apoptoosin analysointi osoitti, että yleinen ilmaus pro-apoptoottisten kaspaasi 3 oli hyvin alhainen (tuloksia ei ole esitetty).