Krooninen sairaus

tiivistelmä

Ubiquitin kaltainen kanssa PHD ja RING sormidomaini 1 (UHRF1), koska epigeneettisestä säädin, on merkittäviä rooleja siinä tuumorigeneesiin ja syövän etenemisessä. KiSS1 toimii etäpesäke vaimennin erilaisissa syövissä, ja epigeneettiset hiljentäminen KiSS1 kasvattaa metastaattista potentiaalia syöpäsolujen. Siksi tutkimme, UHRF1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota estämällä KiSS1. Ilmaisu tasot UHRF1 ja KiSS1 tutkittiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR

in vitro

ja

in vivo

. Rooli UHRF1 säätelyssä virtsarakon syövän etäpesäkkeiden arvioitiin virtsarakon syöpäsolun. Huomasimme, että UHRF1 tasot yläreguloituja useimmissa kliinisissä näytteissä virtsarakon syöpään verrattuna pariksi normaaleista kudoksista, ja UHRF1 ekspressiotasot ovat merkittävästi lisääntyneet ensisijainen kasvaimia, jotka myöhemmin etäpesäkkeitä verrattuna ei-etäpesäkkeitä. Pakko ilmentymisen UHRF1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota, kun taas UHRF1 knockdown pienenee soluinvaasiota. Yliekspressio UHRF1 lisää metylaatio CpG nukleotidien ja vähentää ilmentymistä KiSS1. UHRF1 ja KiSS1 ekspressiotaso korreloi negatiivisesti

in vivo

ja

in vitro

. Knockdovvn KiSS1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota. Tärkeää on, pakko ilmaus KiSS1 osittain kumoaa UHRF1 aiheuttama soluinvaasiota. Nämä tiedot osoittivat, että ilmen- tymisen lisääntymisen UHRF1 lisää virtsarakon syövän solujen invaasion epigeneettisellä hiljentäminen KiSS1.

Citation: Zhang Y, Huang Z, Zhu Z, Zheng X, Liu J, Han Z, et al. (2014) voimistuvan UHRF1 Edistää virtsarakon syövän Cell Invasion Epigeneettiset vaiennettu KiSS1. PLoS ONE 9 (10): e104252. doi: 10,1371 /journal.pone.0104252

Toimittaja: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences keskus, Yhdysvallat

vastaanotettu: 02 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 07 heinäkuu 2014; Julkaistu: 01 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Ihmisen virtsarakon syöpä toisella sijalla taajuus urogenitaalinen syöpä [1], ja noin 50% potilaista on diagnosoitu lihas-invasiivisen virtsarakon syöpä (MIBC) kehittää kaukaisia ​​etäpesäkkeitä keuhkoihin ja maksassa, mikä johtaa huonoon 5 vuoden eloonjäämisluvut [2]. Tällä hetkellä kehitys sopiva hoito parantaa eloonjäämisaste on rajoitettu, koska taustalla olevien mekanismien aiheuttavan syöpää etäpesäkkeiden ei ymmärretä hyvin. Siksi on erittäin tärkeää, paljastaa molekyylimekanismi virtsarakon syövän etäpesäkkeiden kehittää tehokasta hoitoa.

UHRF1, jota kutsutaan myös ICBP90 ihmisissä ja Np95 hiirillä, on multido- proteiinia, jota tarvitaan epigeneettisellä asetukseksi geenien ilmentyminen ja chromatin muutos [3], [4]. UHRF1 kasvattaa G1 /S siirtymää kohteena E2F transkriptiotekijän [5], ja muutokset UHRF1 ekspressiotaso säätelee solusyklin etenemisen, solujen lisääntymisen ja solumigraatio [6], [7]. UHRF1 ylössäädellään useita syöpiä, ja yli-ilmentyminen UHRF1 on kasvaimien syntyyn liittyvien ja syövän etenemistä [8], [9]. Useat raportit osoittivat, että UHRF1 voi olla tärkeä biomarkkerina diagnoosin ja ennusteen syöpien [5]. Unoki

et al

osoittivat, että UHRF1 yliekspressio liittyy luokan ja vaiheen virtsarakon syöpään [10]. N yli-ilmentyminen UHRF1 virtsarakon syöpä on myös korreloi lisääntyneen syöpäriskin etenemisen jälkeen höyläysleikkaus [10]. Wang

et al

osoitti UHRF1 on yli-ilmentynyt kolorektaalisyövässä (CRC) solulinjat ja kliinisissä näytteissä [5]. UHRF1 ekspressiotasoja korreloivat syöpäsolujen leviämiseen ja huono Dukes lavastus. UHRF1 Knockdown indusoi apoptoosia ja solusyklin pysähtyminen G0 /G1 vaiheeseen ja tukahduttaa soluproliferaatiota ja muuttoliike.

UHRF1 on erittäin tärkeä säätelijä DNA: n metylaatio, ja poikkeava DNA: n metylaatio on usein epigeneettiset tapahtuma virtsarakon syöpä [6], [11]. UHRF1 tunnistaa hemimetyloidulle DNA syntyvän DNA: n replikaation ja rekrytoi DNMT1 (DNA methyltransferase1) varmistaa uskollisesti ylläpitoon DNA-metylaatiovyöhykkeiden tytärsolut [6]. KiSS1 tunnistetaan tukahduttaa etäpesäkkeitä erilaisissa syövissä, kuten virtsarakon syöpä, rintasyöpä soluja ja melanooma [12]. KiSS1 koodaa 145 aminohapon proteiini, joka on jalostettu KiSSpeptins (KP), mukaan lukien KP10, KP13, KP14 ja KP54 [12], [13], [14]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että KiSS1 on epigeneettiseltä vaiennetaan hypermetylaation virtsarakon syöpä [15]. Cebrian

et al

osoittivat, että KiSS1 hypermetylaation havaitaan usein, ja korreloi alhaisen geenin ilmentymisen, kunnostetaan demetyloimalla atsasytidiini virtsarakon syövän soluissa [12]. Hypermetylaatiota KiSS1 on myös korreloivat korkea kasvaimen ja vaihe. Huolimatta näistä kiehtova havaintojen vähän tiedetään onko UHRF1 lisää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota mukaan epigeneettisellä vaiennettu KiSS1.

Tutkimuksessa testasimme ovatko UHRF1 /KiSS1 edustaa uutta koulutusjakson säätelevä virtsarakon syöpäsoluinvaasiota. Tuloksemme paljasti, että UHRF1 ilmentyminen ylössäädellään perusterveydenhuollossa kasvaimia, jotka myöhemmin etäpesäkkeitä, ja yli-ilmentyminen UHRF1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota mukaan epigeneettisellä vaiennettu KiSS1.

Materiaalit ja menetelmät

Kliiniset näytteet ja solulinjat

Ihmisen virtsarakon kudokset saatiin kirjallinen suostumus Pekingin Friendship sairaala sidoksissa Capital Medical University. Tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea Capital Medical University. 47 yksilöt (taulukko 1) patologisesti ja yleensä diagnosoitu kudosnäytteistä (≥3 senttimetrin päässä virtsarakon syöpään kudokset) kerättiin virtsarakon syöpä, mukaan lukien 22 ei-lihas-invasiivisia [NMI, vaihe PTA-pT1] ja 25 kanssa lihas-invasiivisia [MI, vaiheessa ≥T2] .Human virtsarakon syövän solut saatiin American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA), ja niitä pidettiin RPMI 1640, jossa oli 10% FBS: ää (GIBCO, Carlsbad, CA).

Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR

Yhteensä-RNA virtsarakon syöpään solulinjojen ja näytteet uutettiin käyttäen Trizol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA). RT (reverse-transkriptio) reaktio suoritettiin käyttäen M-MLV-käänteistranskriptaasia (Invitrogen). Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR suoritettiin käyttäen standardia SYBR Green PCR Master Mix (Life Technologies) pöytäkirja StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems) ohjeiden mukaisesti vastaavista valmistajalta. p-aktiini käytettiin sisäisenä kontrollina mRNA. Vastaavat ACt-arvoja (sekä UHRF1 ja KiSS1) saatiin normalisoinnin P-aktiini. Suhteellinen ekspressio laskettiin suhteessa kontrolliin. Tulokset ilmaistiin 2

-ΔΔCt. *

p

0,05.

yli-ilmentyminen ja Sirna

yli-ilmentävät UHRF1, plasmidi pcDNA-UHRF1 rakennettiin tuomalla

Hindlll-EcoRI

fragmentti, joka sisälsi UHRF1 cDNA samaan sivustoja pcDNA3.1. UHRF1-geeni monistettiin PCR: llä käyttäen eteen- ja taaksepäin-alukkeita: cccaagcttgggATGTGGATCCAGGTTCGGACCATGGACGGG ja ggaattccTCACCGGCCATTGCCGTAGCCGGGGAAG. pcDNA-UHRF1 transfektoitiin virtsarakon syövän solulinjoissa käyttämällä Lipofectamine 2000 (Invitrogen).

estävät endogeenisen UHRF1 ja KiSS1 ilmaisun, virtsarakon syöpä solut transfektoitiin 30 nM osoitetuista merkitty siRNA tai negatiivinen kontrolli käyttämällä Lipofectamine 2000. UHRF1-siRNA (referenssijaksoa, sc-76805) hankittiin Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). KiSS1-siRNA (referenssijaksoa, sc-37443) hankittiin Santa Cruz Biotechnology.

TranswellTM invaasiomääritys

Solun hyökkäystä tutkittiin käyttäen TranswellTM invaasiomääritys kanssa insertit 8-um huokoskoko (Corning Costar), kuten aiemmin on kuvattu [16]. Lyhyesti, virtsarakon syöpä soluja (RT4 tai T24) suspendoitiin seerumittomassa väliaineessa, ja sitten ympättiin Matrigel kuorrutettu TranswellTM suodattimia BioCoat matrigeeliin hyökkäystä kammioita. Seerumia sisältävää väliainetta käytettiin kemiallis-houkutin alemmassa kammiossa. Virtsarakon syöpä solut käsiteltiin osoitetulla reagenssit 72 tuntia, ja sitten soluja, jotka eivät hyökätä huokosten läpi poistettiin käyttäen pumpulipuikolla. Solujen alapinnalle kalvon värjättiin Crystal violetti. Solumäärät määritettiin laskemalla lävistyselimen soluja mikroskoopilla 200-kertaisena suurennoksena satunnaisessa aloilla kussakin kaivossa.

metyloituvuutta

KiSS1

Haku rikastuminen CpG KiSS1 tehtiin ja bisulfiitti sekvensointialukkeita suunniteltiin käyttäen CpG Island Searcher online-työkalu (MethPrimer, https://www.urogene.org/methprimer/). Eteenpäin alukkeet ovat GATGGAAGGGGAATAGTTTTATTAGA, ja reverse-alukkeet ovat TACAACTAAAACTCCTTCCACCTAC [12].

Genominen DNA valmistettiin virtsarakon syövän soluista käyttämällä QiAmp DNA veren Mini Kit, ja sitten genominen DNA bisulfiitti muutetaan käyttämällä EZ DNA Metylointi -kullattu Kit Zymo tutkimuksen [17]. PCR-tuotteet kloonattiin PMD-18T (TaKaRa) valmistajan ohjeiden mukaisesti. 9 positiivista kloonia sekvensoitiin. Aineisto analysoitiin käyttämällä BiQ analysaattorin [17].

Tilastollinen analyysi

Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD (keskihajonta) ainakin kolmesta erillisestä kokeesta. Erot ryhmien välillä analysoitiin käyttäen Studentin

t

testi. Ero katsottiin tilastollisesti merkitsevä

p

0,05.

Tulokset

UHRF1 taso on yliaktiivista metastaattinen virtsarakon urothelial karsinooma

UHRF1 tuloksia epänormaali DNA: n metylaatio ja syövän etäpesäkkeiden, ja UHRF1 ilmentyminen korreloi huonoon ennusteeseen useissa syövissä. Sen arvioimiseksi, onko UHRF1 säätelee virtsarakon syövän etäpesäkkeiden ensin tutkittu UHRF1 ilmentymistä virtsarakon syövän solulinjoissa ja syöpä kudoksiin. Kuvio 1A osoittaa, että ilmentymisen tasot UHRF1 merkittävästi voimistunut useimmissa virtsarakon syövän kudoksissa verrattuna viereisen normaaleilla verrokeilla. UHRF1 kasvaa huomattavasti ilmentymistä 77% (36/47) virtsarakon syövän kudoksissa (kuvio 1A). Kun 47 tuumorikudokset stratifioitiin perustuu kliiniseen etenemiseen, UHRF1 ilmentyminen lisääntyy merkittävästi ensisijainen kasvaimia, jotka myöhemmin etäpesäkkeitä verrattuna ei-etäpesäkkeitä (kuvio 1 B). Sitten määritetään ilmentymistasojen UHRF1 sekä invasiivisia virtsarakon syövän solulinjojen ja invasiivinen virtsarakon syövän solulinjat. Niistä kolme invasiivisia solulinjoissa (253J, T24 ja KU7) UHRF1 tasot ovat suhteellisesti suuremmat kuin vuonna invasiivisen niitä (kuvio 1 C). Nämä tiedot viittaavat siihen, että UHRF1 overexpressoin voi liittyä virtsarakon syövän etäpesäkkeiden.

(A) määrällinen analyysi UHRF1 ekspressiotason tehtiin virtsarakon syövän kudoksissa (n = 47) ja viereisen normaaleissa kudoksissa. Kokonais-RNA uutettiin ja suoritettiin reaaliaikainen PCR-analysoida ekspression UHRF1 kussakin näytteessä. β-aktiini on käytetty sisäisenä kontrollina. Suhteellinen UHRF1 taso laskettiin 2

-ΔΔCt jossa ACt = Ct (UHRF1) – Ct (β-aktiini) ja ΔΔCt = ACt (kasvainkudoksen) – ACt (viereiseen normaaliin kudokseen). (B) toinen virtsarakkosyöpänäytteiden jaettiin kahteen ryhmään sen perusteella, kliiniseen etenemiseen. UHRF1 tasot etäpesäkkeitä ryhmässä (n = 25) olivat korkeammat kuin ei-etäpesäkkeitä (n = 22). *

p

0,05. (C) UHRF1 ilmentymistaso määritettiin reaaliaikaisella PCR: llä kolmen invasiivinen ja kolme invasiivinen virtsarakon syövän solulinjoissa. Normaali urothelial soluja käytettiin kontrollina. *

p

0,05.

voimistunut UHRF1 lisää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota

in vitro

roolin tutkimiseksi UHRF1 säätelyssä soluinvaasion, virtsarakon syöpä solulinjoja käsiteltiin UHRF1-siRNA tai pcDNA-UHRF1 analysoitiin. Ensin osoittanut, onko RT4 ja T24 soluja voidaan käyttää

in vitro

mallin tutkimiseksi UHRF1 määrittämällä ilmaisunsa RT4 tai T24 soluja jälkeen yliekspressio tai knockdovvn UHRF1. Kuvio 2A ja C osoittivat, että pcDNA-UHRF1 käsittely lisää merkittävästi UHRF1 tasoilla non-invasiivisia RT4 soluissa, kun taas UHRF1-siRNA käsittely vähenee UHRF1 ilmentymistä invasiivisia T24-soluissa. Lisäksi säätelyä UHRF1 edistää RT4 soluinvaasiota (kuvio 2B), kun taas siRNA-välitteinen UHRF1 hiljentäminen estää T24 soluinvaasiota (kuvio 2D). Nämä tulokset osoittivat, että UHRF1 säätelee positiivisesti virtsarakon syöpäsoluinvaasiota.

(A) RT4 soluja käsiteltiin pcDNA-UHRF1, ja suhteellinen taso UHRF1 määritettiin reaaliaikainen PCR. *

p

0,05. (B) UHRF1 yliekspressoitiin RT4-soluissa, ja invaasio määritys suoritettiin, kuten on kuvattu materiaalit ja menetelmät. Edustavia luvut kunkin kokeen näkyvät. Nämä tulokset osoittavat tiedot viidestä itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (C) T24-soluja käsiteltiin UHRF1-siRNA, ja suhteellinen taso UHRF1 määritettiin reaaliaikainen PCR. *

p

0,05. (D) Invasion analyysi suoritettiin jälkeen UHRF1 knockdown. Edustavia luvut kunkin kokeen näkyvät. Nämä tulokset osoittavat tiedot viidestä itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05.

UHRF1 kasvattaa metyloinnin CpG nukleotidin ja vähentää ilmentymistä KiSS1

Aiemmat tutkimukset osoittivat, että KiSS1 usein hypermetyloitunut virtsarakon syöpä ja korreloi syövän etenemisessä [12]. Täällä, tutkimme UHRF1 säätelee virtsarakon syöpäsoluinvaasiota mukaan epigeneettisellä vaiennettu KiSS1. Ensin analysoidaan onko UHRF1 säätelee KiSS1 ilme. Kuten kuviossa 3A ja B, pakko ilmentyminen UHRF1 estää KiSS1 ilmentymistä, kun taas knockdovvn UHRF1 lisää KiSS1 ilmentymistä. Sitten määritettiin ilmentymistason UHRF1 ja KiSS1 sekä invasiivisia virtsarakon syövän solulinjojen ja invasiivinen virtsarakon syövän solulinjat. Kuva 3C osoitti, että UHRF1 tasot ovat suhteellisesti korkeammat samanaikaisen alhainen KiSS1 invasiivisessa solulinjoissa. Merkittävä negatiivinen korrelaatio havaitaan myös väliin UHRF1 mRNA-tasoja ja KiSS1 mRNA-tasot

in vivo

(

r

2 = 0,0648,

p

= 0,0063, Kuva 3D). Tutkimme lisäksi, onko UHRF1 estää KiSS1 ilmentymistä lisäämällä metylaation CpG nukleotidin

KiSS1

. Analysoimme metylaatiostatuksen CpG saarista KiSS1 by bisulfiitti sekvensointi, kuten on raportoitu aiemmin [12], [15]. Metylointi määritys tulokset

KiSS1

geenin 14 virtsarakon syöpä kudoksiin ja viereiset normaalit kontrollit on esitetty yhteenvetona kuviossa 4A. Bisulfiitti sekvensointi paljasti, että

KiSS1

metylaatio taajuus lisääntyy selvästi virtsarakon syövän kudoksissa verrattuna viereisen kontrolleihin (kuvio 4A). Korrelaatio analyysi osoitti, että

KiSS1

metylaatio taso korreloi positiivisesti UHRF1 ilme sekä virtsarakon syöpään ja normaalin virtsarakon kudoksissa (kuvio 4B, p = 0,0036, R

2 = 0,2091). Bisulfiitti sekvenssianalyysi osoitti lisäksi, että UHRF1 yli-ilmentyminen lisää metylaatio CpG-nukleotidit

KiSS1

(kuvio 4C, D). Nämä tulokset viittaavat siihen, että UHRF1 estää KiSS1 ilmentyminen epigeneettisellä hiljentäminen KiSS1.

(A ja B) KiSS1 ilmentymisen taso määritettiin RT4-solujen yli-ilmentynyt kanssa UHRF1 tai T24-soluja käsiteltiin UHRF1-siRNA. *

p

0,05. (C) UHRF1 ja KiSS1 tasot määritettiin reaaliaikaisella PCR: llä kolmen invasiivinen ja kolme invasiivinen virtsarakon syövän solulinjat. Normaali urothelial soluja käytettiin kontrollina. *

p

0,05. (D) Negatiivinen korrelaatio UHRF1 mRNA-tasoja ja KiSS1 tasot 24 virtsarakon syövän näytteet (

r

2 = 0,0648,

p

= 0,0063).

(A) metyloituvuutta

KiSS1

geenin 14 virtsarakon syöpä kudoksiin ja vieressä normaali näytteitä. BSQ analyysi paljasti, että

KiSS1

metylaatio taajuus lisääntyy selvästi virtsarakon syöpään näytteitä. ** P 0,01. (B) positiivinen korrelaatio on havaittu

KiSS1

metylaatio ja UHRF1 lauseke (R

2 = 0,2091, p = 0,0036). (C ja D) CpG-saarekkeen metylaatiostatus KiSS1 analysoitiin bisulfiitti sekvensointi RT4 soluissa. Yhdeksän yksittäistä kloonia per solulinja. CpG dinukleotidit olivat edustettuina tumma neliöt metyloidulle sytosiinien ja avoimet neliöt metyloitumattomien sytosiinien.

UHRF1 lisää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota estämällä KiSS1

UHRF1 pienenee KiSS1 ilmentymistä lisäämällä metyloinnin CpG nukleotidit

KiSS

, ja downregulation KiSS1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota. Siksi arveltu, että rooli UHRF1 säätelyssä soluinvaasiota osittain välittyy KiSS1. Ensin analysoidaan onko KiSS1 esto lisää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota. Kuten kuviossa 5A ja B, knockdovvn KiSS1 edistää RT4 soluinvaasion. Tärkeämpää, KiSS1 yliekspressio osittain estää UHRF1 aiheuttavia RT4 soluinvaasiota (kuvio 5C ja D). Nämä tulokset vahvistavat, että UHRF1 edistää virtsarakon syöpäsoluinvaasiota, ainakin osittain epigeneettiset vaimentaminen KiSS1.

(A ja B) RT4 soluja käsiteltiin KiSS1-siRNA ja invaasiomääritys suoritettiin jälkeen KiSS1 knockdown. Edustavia luvut kunkin kokeen näkyvät. Nämä tulokset osoittavat tiedot viidestä itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (C ja D) RT4-solut yli-ilmentyy kanssa UHRF1 tai UHRF1 plus KiSS1, ja invaasio-määritys suoritettiin. *

p

0,05.

Keskustelu

Nisäkkäillä DNA metylaatio tapahtuu asemassa C5 sytosiinin yhteydessä CpG dinukleotideissä, jolloin 5 -methylcytosine (5mC) [18]. Muutokseen, genomisen DNA: n metylaatio on tärkeä epigeneettisiä signaalin, ja muutokset rakenteessa DNA: n metylaation on ollut johdonmukainen havainto useissa kasvaintyypeissä [19]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että epigenetic perintö DNA: n metylaatio edellyttää UHRF1, joka värvää DNMT1 DNA replikaatiota haarukat läpi ainutlaatuisen hemimetyloidulle CpG-sitovaa toimintaa [20]. Liu

et al

raportoitu että UHRF1 rekrytoi DNMT1 DNA huoltoa metylaation kautta sitovan joko hemi-metyloitu CpG tai H3K9me2 /3, ja että läsnäolo molempien sitovien toimintojen varmistaa hifi DNA huolto metylaatio [20].

UHRF1 yliekspressio liittyy kasvaimen vaiheet ja ennustaa huono ennusteita erilaisissa syövissä [21]. UHRF1 koordinaatit PPARg (peroksisomiproliferaattoriaktivoidun reseptorin γ) epigeneettisellä hiljentämisen ja välittää peräsuolen syövän etenemistä [22]. Knockdovvn UHRF1 saa aikaan PPARg uudelleenaktivointi, mukana positiivinen histonimerkkien ja DNA demetylaation vahvistavia sen rooli PPARg hiljentäminen. Babbio

et al

osoitti UHRF1 myötävaikuttaa epigeneettiset geenien eturauhasen syövän etenemisessä [23]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että ekspressiotasot UHRF1 merkittävästi lisääntynyt useimmissa virtsarakon syövän kudoksissa verrattuna viereisen normaaleilla verrokeilla. Lisäksi UHRF1 ilmentyminen lisääntyy merkittävästi ensisijainen kasvaimia, jotka myöhemmin etäpesäkkeitä verrattuna ei-etäpesäkkeitä. Olemme myös havainneet, että UHRF1 tasot ovat suhteellisesti korkeammat invasiivisia virtsarakon syövän solulinjoja kuin niille noninvasive niistä. Lisäksi upregulated UHRF1 edistää invasiivisen RT4 soluinvaasiota, kun taas knockdovvn UHRF1 estää invasiivisen T24 soluinvaasiota. Nämä tiedot osoittivat, ettei säätelyä UHRF1 vaikuttaa virtsarakon syöpäsoluinvaasiota.

KiSS1 on kasvaimen etäpesäke vaimennin geeni useisiin syöpiin. KiSS1 ilmentyminen merkittävästi vähentynyt invasiivisia virtsarakon kasvaimissa verrattuna niiden normaaliin uroteeliin [24]. Alempi KiSS1 taso korreloi eloonjäämiseen virtsarakon kasvaimissa [24]. KiSS1 merkittävästi metyloitu. Inaktivointi KiSS1 promoottoriaktivoinnilla metylaatio on harvinainen tapahtuma haiman adenokarsinooma (PDAC) [25]. KiSS1 myös epigeneettiseltä muutettu peräsuolen syövän, ja KiSS1 metylaatio liittyy kasvaimen, ennusti toistuminen ja eloonjäämiseen [15]. Täällä olemme huomanneet, että UHRF1 säätelee negatiivisesti KiSS1 ilme. UHRF1 tasot ovat suhteellisesti korkeammat samanaikaisen alhainen KiSS1 invasiivisessa virtsarakon syövän solulinjoissa. Merkittävä negatiivinen korrelaatio havaitaan myös väliin UHRF1 mRNA-tasoja ja KiSS1 mRNA-tasot

in vivo

. Bisulfiitti sekvensointi osoitti, että UHRF1 estää KiSS1 ilmentymisen nousu metyloinnin CpG nukleotidin

KiSS1

. Tärkeämpää, KiSS1 yliekspressio osittain estää RT4 soluinvaasiota in UHRF1 yli-ilmentäviä soluja.

Johtopäätös

Tuloksemme osoittivat, että ilmen- tymisen lisääntymisen UHRF1 vaikuttaa virtsarakon syöpäsoluinvaasiota mukaan epigeneettisellä vaiennettu KiSS1.