Krooninen sairaus

tiivistelmä

Pieni keuhkosyöpä (SCLC) on aggressiivinen kasvain ja ennustetta edelleen heikko. Näin ollen, kehittäminen tehokkaampaa hoitoa tarvitaan. Raportoimme aikaisemmin, että korkea anti-c-kit-vasta-aine (12A8) kertynyt SCLC ksenografteissa. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioimme tehoa kahta vasta-ainetta (12A8 ja 67A2) varten radioimmunoterapiassa (RIT) sellaisen SCLC hiirimallissa merkinnöin kanssa

90Y isotooppia.

Methods

olevaan 111In tai

125I-leimattujen vasta-aineiden arvioitiin

in vitro

solujen sitoutumisen, kilpailevan eston ja solujen sisäistämisen määritykset c-kit-ilmentävien SY solujen ja

in vivo

jonka biologinen jakautuminen in SY kantavien hiirten. Terapeuttinen tehokkuus

90Y-leimattu vasta arvioitiin SY kantavien hiirten lähetettävään päivänä 28 ja histologinen analyysi suoritettiin päivänä 7.

Tulokset

[

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 sitoutuivat spesifisesti SY soluihin suurella affiniteetilla (8,0 ja 1,9 nM, vastaavasti). 67A2 on sisäistetään samanlainen 12A8. Korkea [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 kertyy kasvaimiin, mutta ei tärkeimpien elinten. [

111In] 67A2 ottoa kasvain oli 1,7 kertaa suurempi kuin [

111 In] 12A8. [

90Y] 12A8, mutta ei [

90Y] 67A2, esti tuumorin kasvua annoksesta riippuvaisella tavalla. Kasvaimet käsiteltiin 3,7 MBq: lla [

90Y] 12A8, ja 1,85 ja 3,7 MBq [

90Y] 67A2 (absorboituneet annokset olivat 21,0, 18,0 ja 35,9 Gy, vastaavasti) lähes kokonaan hävinnyt noin 2 viikon kuluttua injektion, ja uusiutumista ei havaittu lukuunottamatta yhdellä hiiren käsiteltiin 1,85 MBq [

90Y] 67A2. Alue kuolion ja fibroosia lisääntynyt riippuen RIT vaikutus. Apoptotic solujen määrä lisääntyi korotettuihin annoksiin [

90Y] 12A8, kun taas mitään annosriippuvainen nousu havaittiin seuraavat [

90Y] 67A2 hoitoa. Kehon paino oli tilapäisesti alennettu mutta kaikki hiiret sietivät RIT kokeissa hyvin.

Johtopäätös

hoito [

90Y] 12A8 ja [

90Y] 67A2 saavutti täydellisen terapeuttisen vasteen SY kasvaimet sai absorboitunut annos on yli 18 Gy ja siten ovat lupaavia RIT aineita metastasoineeseen SCLC solujen kaukaisiin kohtiin.

Citation: Yoshida C, Tsuji AB, Sudo H, Sugyo A, Kikuchi T, Koizumi M, et ai. (2013) terapeuttinen teho C-Kit-Kohdennettu radioimmunoterapiassa käyttäminen 90Y-leimattu anti-C-Kit vasta-hiirimallissa on pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 8 (3): e59248. doi: 10,1371 /journal.pone.0059248

Toimittaja: Javier S. Castresana, Navarran yliopisto, Espanja

vastaanotettu: 02 syyskuu 2012; Hyväksytty: 13 helmikuu 2013; Julkaistu: 14 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Yoshida et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoittivat National Institute of säteilytieteet TS. Rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on johtava syy syövän liittyvän kuoleman maailmanlaajuisesti [1]. Pienisoluinen keuhkosyöpä (SCLC) on selvä ennusteeseen viittaavia kokonaisuus, joka muodostaa jopa 20% kaikista keuhkosyövässä ja eroaa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä sen kasvaimen nopeasta kaksinkertaistaa ajan, korkean kasvun murto ja varhaista kehitystä laajaa etäpesäkkeiden [ ,,,0],2]. Vaikka SCLC on hyvin herkkä kemoterapiaa ja sädehoitoa, yleinen ennuste on edelleen heikko, koska korkeat uusiutuminen tai metastaattisen hinnat, ja huono vaste tulenkestäviä SCLC [2], [3]. Keskimääräinen elinaika potilailla, joilla on toistuvia SCLC on noin puoli vuotta [3].

Viime aikoina monet molekyyli kohdennettuja lääkkeitä on kehitetty, jotka edistävät parannettua potilaiden selviytymiseen useita syöpiä [4]. SCLC erittäin ilmaista useita molekyylejä, kuten c-kit, c-Met, ja verisuonten endoteelin kasvutekijä [4]. C-kit-proto-onkogeenin koodaa 145 kDa: n transmembraaninen tyrosiinikinaasireseptori, joka koostuu solunulkoisen osan, jossa on viisi immunoglobuliinin kaltaista domeenia: kolme ensimmäistä sisältävät ligandin sitoutumiskohdan sekä neljäs ja viides domeenit liittyvät reseptorin dimerisaatio, transmembraani- osa, ja solunsisäinen osa, jossa kinaasin entsymaattisen aktiivisuuden [5], [6], [7]. Kantasolujen tekijä on ligandi c-kit ja sen sitoutuminen johtaa reseptorin aktivoitumisen ja laukaisee aktivoituminen loppupään signaalien kulkureiteillä osallistuvat solujen kasvuun, erilaistumiseen ja kehitystä. C-sarja on osallisena nopean solukasvun havaittu SCLC ja siten pidetään ehdokkaana kohdemolekyyli diagnostiikan ja terapeuttisten SCLC [8]. Imatinibi estäjä c-kit-tyrosiinikinaasin aktiivisuuden, on erittäin tehokas kemoterapia-resistenttejä maha-suolikanavan strooman tuumorit (GIST) [9], [10]. Vaikka useissa prekliinisissä tutkimuksissa todettu, että tukahduttaminen c-kit signalointi inhiboi SCLC solujen kasvua [4], [11], vaihe II imatinibi tutkimuksissa potilailla, joilla oli uusiutunut c-kit-positiivisten SCLC ilmoiteta mitään objektiivisia vasteita tai jatkuva sairaus stabilointi [12], [13], [14]. Tämä viittaa siihen, että eteneminen ei saa riippua c-kit puuttumisen vuoksi aktivoivan mutaatioiden toisin GIST huolimatta korkeasta c-kit ilmentymisen SCLC [15], [16]. Vaikka salpaus c-kit-reitin ei ehkä ole terapeuttista vaikutusta SCLC, c-kit voivat olla lupaava kohde selektiivisen terapeuttisten aineiden, kuten toksiineja ja radioisotooppeja c-kit positiivisia SCLC kasvainsolujen avulla, kantajia, kuten vasta-aineita.

aiemmin raportoitu, että korkea

111In-leimatun anti-c-kit-vasta, 12A8, kertynyt c-kit-ilmentävien SCLC ksenografteissa, kun sen kerääntyminen oli alhainen normaalissa elimiin [ ,,,0],17], [18]. Näin ollen, 12A8 on mahdollista käyttää radioimmunoterapiassa (RIT) korvaamalla γ lähettävä

111In kanssa β- tai α-emittoivat radionuklidit, sopivilla ydin- ominaisuuksia. Käsite RIT on toteutettu klinikoilla hoitoon non-Hodgkin B-solujen lymfooma, käyttäen anti-CD20-vasta-aine on leimattu

90Y tai

131I [19].

90Y on puhdas β-päästötason paljon energiaa (maksimi energia, 2,3 MeV), pitkä hiukkasten kantaman (maksimikantama vedessä, 11,3 mm), sopivan puoliintumisaika (64,1 h) RIT lgG ja soveltuu RIT joiden sisäistäminen vasta-aineella [19], [20]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme arvioida ja verrata

in vitro

ja

in vivo

ominaisuuksien kahden radioleimatun anti-c-kit-monoklonaalisia vasta-aineita, 12A8 ja 67A2, ja niiden käyttöä kokeellisen RIT ja SCLC käyttämällä

90Y-leimattu vasta-aineita.

Materiaalit ja menetelmät

Solut

ihmisen SCLC solulinja SY (Immuno-Biological Laboratories (IBL), Takasaki, Japani ), jossa on korkea c-kit-ekspressio säilyi RPMI1640 (Sigma, St. Louis, MO, USA), joka sisälsi 5% naudan sikiön seerumia (Sigma, St. Louis, MO, USA) kosteutetussa inkubaattorissa pidettiin 37 ° C: ssa 5% CO

2.

vasta-aineet

kaksi anti-c-kit-hiiren monoklonaalisia vasta-aineita (12A8 [17] ja 67A2) hankittiin IBL. Kukin vasta-aine sitoutuu eri epitooppiin solunulkoisen osan c-kit: 12A8 sitoutuu viidennen domeenin lähinnä transmembraanidomeeni ja 67A2 sitoutuu toiseen domeeniin. Tasapainodissosiaatiovakio (Kd), 12A8 ja 67A2 on 1,06 ja 0,26 nM, vastaavasti, mitattuna pintaplasmoniresonanssilla määrityksessä. 12A8 on vahva neutralointi ja kohtalainen antituumoriaktiivisuuksia mutta ei indusoi vasta-aineesta riippuvaista solun sytotoksisuus (ADCC) tai komplementista riippuva sytotoksisuus (CDC). 67A2 ei omista edellä mainittujen toimien (tiedot syötetään valmistajalta).

radioleimaus vasta

Vasta-aineet (12A8 ja 67A2) konjugoitiin

p

-SCN-Bz-CHX-A ” – DTPA (DTPA; Macrocyclics, Dallas, TX, USA) kuten aikaisemmin on kuvattu [17], [18], ja sitten DTPA-konjugoidut vasta-aineet puhdistettiin käyttämällä Sephadex G-50 (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) sarakkeessa. Nämä DTPA-konjugoiduilla vasta-aineilla (20 ug) sekoitettiin 1,2 MBq: lla [

111In] CI

3 tai 9,25 MBq [

90Y] CI

3 0,5 M (pH 6,0) , ja seosta inkuboitiin 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Radioaktiivisesti leimatut vasta-aineet erotettiin vapaasta

111In tai

90Y käyttäen Sephadex G-50 pylväs. Konjugointi suhde DTPA sekä vasta arvioitiin olevan 1,1, määritettynä selluloosa elektroforeesilla, ja erityinen toiminta [

111 In] 12A8, [

111 In] 67A2, [

90Y] 12A8 ja [

90Y] 67A2 oli noin 50, 50, 300 ja 450 kBq /ug, vastaavasti. Leimaussaanto oli noin 80%,

111In merkintöjä ja 65%: sta 97% ja

90Y merkintöjä, ja radiokemiallinen puhtaus ylitti 96%. 67A2 myös merkitty

125I käyttäen kloramiini-T internalisaation määritystä kuten aiemmin on kuvattu [17]. Spesifinen aktiivisuus [

125l] 67A2 oli noin 500 kBq /ug.

In vitro

määrityksessä

solusitoutumisen, kilpailevan eston ja sisäistämisen määritykset toteutettiin aikaisemmin kuvatulla tavalla [17]. Lyhyesti, solussa sitoutumismäärityksessä, sarjoittain laimennettu SY-soluja PBS: ssä, inkuboitiin

111In-leimatun vasta-aineen jäissä 60 min. Pesun jälkeen sitoutunut radioaktiivisuus soluihin mitattiin. Immunoreaktiivisuutta

111In-leimattujen vasta-aineiden arvioitiin mukaisen menetelmän Lindmo

et ai

[21]. Vuonna kompetitiivisen inhibition määrityksessä

111In-leimattua vasta-ainetta inkuboitiin SY-solujen läsnä ollessa vaihtelevia pitoisuuksia leimaamatonta vasta-aineen jäissä 60 min. Pesun jälkeen sitoutunut radioaktiivisuus solujen laskettiin. Tiedot analysoitiin ja Kd arvioitiin käyttämällä GraphPad Prism-ohjelmiston (Graphpad Software, La Jolla, CA, USA). Eräässä sisäistämisen määrityksessä, SY-soluja esi-inkuboitiin elatusaineessa, jossa

125I- tai

111In-leimatun vasta-aineen jäissä 60 min. Pesun jälkeen kerättiin soluja viljeltiin edelleen 37 ° C: ssa tai jäällä tuoretta väliainetta ilman radioaktiivisesti vasta-aineita. Eri ajankohtina, supernatantti ja solut erotettiin sentrifugoimalla. Trikloorietikkahappoa lisättiin supernatanttiin jäällä ja sitten erotettiin sentrifugoimalla määrittää ei-proteiiniin sitoutuneen fraktion (supernatantti) ja proteiiniin sitoutuneen fraktion (pelletti). Solut pestiin happamalla puskurilla ja sitten erotettiin sentrifugoimalla määrittämiseksi sekä kalvoon sitoutuneena (supernatantti) ja sisäistetään osa (pelletti).

bioleviäminen

111In-leimatun vasta-aineen

BALB /c-nu /nu-hiiriä (5 viikkoa vanhoja, CLEA Japan, Tokyo, Japani) inokuloitiin subkutaanisesti 2 x 10

6 SY solujen vasempaan reiteen. Hiiret (19-23 g kehon painoa) laakerin SY kasvaimia injisoitiin laskimonsisäisesti 37 kBq

111In-leimatun vasta. Injektoidun proteiinin annos säädettiin 20 ug hiirtä kohti. 1, 2, 4, 7 ja 10 päivää injektion jälkeen

111In-leimatun vasta-aineen, viisi hiirtä kullakin ajanhetkellä tapettiin, ja otettiin verta sydämestä. Kasvain ja tärkeimpien elinten poistettiin ja punnittiin, ja radioaktiivisuus lasketaan mitattiin käyttämällä gamma-laskurilla. Tiedot ilmaistiin prosentteina injektoidusta annoksesta grammaa kudosta (% ID /g) decay korjattu ja normalisoidaan 20 g painoa hiiri.

Kasvain absorboitunut annos

90Y- leimattuja vasta-aineita arvioitiin biojakaantumi- tiedot

111In-leimatun vasta-aineita.

90Y lähettää β-hiukkasen ja keskiarvo pääsee energia 0,9331 MeV, jolloin keskimääräinen energia vapautuu kohti siirtyminen laskettiin 1,495 x 10

-13 Gy kg (Bq s)

-1 Yhteensä 1 eV vastaa to1.60218 × 10

-19 J [22]. Kasvaimeen eri ajankohtina piirrettiin aikaa vastaan, josta alue käyrän alla (AUC) laskettiin. Annos imeytyy kasvain jopa 10 päivää injektion jälkeen arvioitiin käyttäen AUC ja keskimääräinen energia vapautuu kohti siirtyminen seuraavasti: AUC × 1,495 × 10

-13 × pistetään aktiivisuutta. Absorboitunut annos punaista luuytimen on 70 kg viitaten mies arvioitiin meidän biojakaantumi- dataa OLINDA /EXM versio 1.0-ohjelmisto (Vanderbilt University, Nashville, TN, USA) aikaisemmin kuvatulla [23].

radioimmunoterapiassa

Kaksi viikkoa siirrostuksen jälkeen ja SY-solujen, hiirille annettiin suonensisäinen injektio 0,74, 1,85 tai 3,7 MBq

90Y-leimattu vasta-aine (n = 5 kussakin ryhmässä). Kasvaimen koko oli 4,4 ± 3,2 mm

3 ajankohtana hallinnon. Proteiini annos säädettiin 20 ug kummankin valmisteen lisäämällä leimaamatonta vasta-ainetta. Negatiivisina kontrolleina, hiiriä injisoitiin laskimonsisäisesti leimaamattoman vasta-aineen (20 ug proteiinia /hiiri) tai PBS: ää yksinään (määritelty käsittelemätön), vastaavasti. Kehon paino ja kasvaimen kasvu määritettiin kahdesti viikossa. Kasvaimen tilavuus (mm

3) laskettiin leveys x korkeus x syvyys (mm) /2. Hiiret lopetettiin, kun ksenosiirrettyjä tuumorin tilavuus oli yli 200 mm

3. Tämä tutkimussuunnitelma hyväksyi Institutional Animal Care ja käyttö komitea National Institute of säteilytieteet, ja kaikki eläinkokeet suoritettiin noudattaen institutionaalisten suuntaviivat eläinten hoitoon ja käsittelyyn.

Histologinen analyysi

Kasvaimen näytteet poistettiin 1 viikko injektion jälkeen ja kiinnitettiin 10% (v /v) neutraali puskuroitu formaliini ja upotettiin parafiiniin leikkeiden (n = 5 kussakin ryhmässä). Kohdissa (3 um paksuus) värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

In vitro

luonnehdinta

111In-leimattujen vasta-aineiden

solusta sitoutumismääritys, sitoutuminen [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 käyttäen 1 x 10

7 SY-soluissa oli 50 ja 76%: lla (Fig. 1A). Sitoutuminen [

111In] 67A2 SY soluihin suurempi verrattiin [

111 In] 12A8, erityisesti matalissa cellular pitoisuuksina. Immunoreaktiivinen osa [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 oli 83 ja 88%, vastaavasti. Vuodesta kilpailukykyinen inhibitioanalyysi, Kd [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 arvioitiin olevan 8,0 ja 1,9 nM (kuvio. 1 B). Me tutkimme väliaikaisen muutoksen radioaktiivisuuden [

111In] 67A2 ja [

125I] 67A2 on solunosafraktio (Fig. 1 C ja D). Radioaktiivisuus solu- kalvoon sitoutunut osa [

111In] 67A2 ja [

125I] 67A2 nopeasti väheni ajan. Kun kyseessä on [

111In] 67A2, radioaktiivisuus internalized osa lisääntyi ajan ja oli noin 55%, kun 20 tunnin inkuboinnin 37 ° C: ssa (Fig. 1 C). Sen sijaan sisäistetty radioaktiivisuus [

125l] 67A2 tilapäisesti nostaa 3 h mutta sen jälkeen laskivat vähitellen. Radioaktiivisuus ei-proteiiniin sitoutuneen fraktion elatusaineessa lisääntyi ajan kuluessa, mikä dehalogenointi on

125I-leimattua vasta-ainetta soluissa (Fig. 1 D). Kun soluja inkuboitiin jäillä, membraaniin sitoutuneen fraktion ei muuttunut ja sisäistämisen ei havaittu vähintään 3 tuntia (dataa ei esitetty). Nämä tulokset sisäistämisen määrityksessä olivat samanlaisia ​​kuin 12A8 edellisessä tutkimuksessa [18].

(A) Cell sitova määritys [

111In] 12A8 (umpinaiset ympyrät) ja [

111In ] 67A2 (avoimet ympyrät). (B) Kilpailukykyinen inhibitiokoe [

111In] 12A8 (umpinaiset ympyrät) ja [

111In] 67A2 (avoimet ympyrät). Internalisaatio määritys [

111In] 67A2 (C) ja [

125l] 67A2 (D). Muutokset% kokonaisradioaktiivisuudesta kunkin osan piirretään inkubaatioaika 37 ° C: ssa (umpinaiset ympyrät, sisäistetään jae, avoimet ympyrät, kalvoon sitoutunut osuus, mustat kolmiot, proteiiniin sitoutunut osuus viljelyalustassa; ristimerkit ei- proteiiniin sitoutuneen fraktion viljelyalustassa).

bioleviäminen [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2

Pitkäaikainen biologinen jakautuminen kokeilut [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 tehtiin kantavissa nude-hiirissä SY kasvaimen päivinä 1-10 injektion jälkeen (taulukot 1 ja 2). [

111In] 12A8 kertyneet kasvainsolut 7,3 ± 1,3% ID /g päivänä 1, ja huippuarvo on 18,9 ± 2,9% ID /g saatiin päivänä 4 (taulukko 1). Kasvaimen otto [

111In] 67A2 oli 15,7 ± 0,9% ID /g päivänä 1, ja huippuarvo on 31,5 ± 7,7% ID /g saatiin päivänä 4 (taulukko 2). AUC [

111In] 67A2 oli 1,7 kertaa suurempi kuin [

111 In] 12A8. Omaksumista radioleimattujen vasta-aineiden tärkeimpien elinten oli vähäistä ja laski vähitellen ajan myötä, samankaltainen kuin aikaisemmissa tutkimuksissa radioleimattu IgGs spesifisiä muita antigeenejä [25], [26]. Kasvain-to-verta suhde [

111In] 12A8 ja [

111In] 67A2 1. päivänä oli 0,6 ja 0,9, vastaavasti, ja saavutti huippunsa arvot 3,6 ja 4,0, vastaavasti, 10 päivään mennessä

imeytynyt kasvainten arvioitiin AUC kunkin

111In-leimatun vasta-aineen biologiseen jakaantumiseen tiedot. Annos imeytyy käsitellyt kasvaimet 0,74, 1,85 ja 3,7 MBq [

90Y] 12A8 arvioitiin olevan 4,2, 10,5 ja 21,0 Gy, vastaavasti, ja että [

90Y] 67A2 oli 7,2, 18,0 ja 35,9 Gy, vastaavasti. Absorboitunut annos punaista luuydin arvioitiin meidän biojakaantumi- tietojen olevan 0,5 mGy /MBq on 70 kg viite man molemmille

90Y-leimattu vasta-aineita.

radioimmunoterapiassa

jälkeen [ ,,,0],

90Y] 12A8 hoitoa, kasvaimen tilavuus kaikissa ryhmissä kasvanut päivään 3 injektion jälkeen, mutta sen jälkeen laski 3,7-MBq hoitoryhmissä ja täysin kadonnut noin 2 viikkoa injektion jälkeen (Fig. 2A). Antaminen 1,85 MBq [

90Y] 12A8 myös tukahdutti kasvaimen kasvua vasta noin 2 viikon kuluttua injektion, mutta sen jälkeen kasvainten alkoivat jälleen kasvaa (Fig. 2A). Ryhmissä käsiteltiin leimaamattoman IgG yksin ja 0,74 MBq [

90Y] 12A8, havaitsimme kasvaimen kasvua viive verrattuna käsittelemättömään (PBS) ryhmä (

P

0,05) (Fig. 2A). [

90Y] 67A2 hoito oli suurempi terapeuttinen vaikutus verrattuna [

90Y] 12A8 klo puolivälissä korkean annostasoilla. Antaminen 1,85 ja 3,7 MBq [

90Y] 67A2 merkittävästi tukahdutti kasvaimen kasvun ja kasvaimet hävisivät kokonaan noin 2 viikon kuluttua injektion paitsi yhdellä hiiren käsiteltiin 1,85 MBq: lla [

90Y] 67A2. Vaikka me havaittu kasvaimen kasvun viivästyminen hoitoryhmässä 0,74 MBq: lla [

90Y] 67A2 verrattuna käsittelemättömään (PBS) ryhmä (

P

0,05), ei ollut merkitsevää eroa kasvaimen kasvua verrattuna merkitsemätön IgG hoitoryhmässä (Fig. 2C). Kehon paino hoidettujen hiirien [

90Y] 12A8 ja [

90Y] 67A2 tilapäisesti laski noin 15%, mutta alkoivat nousta ensimmäisen viikon hoidon jälkeen (Kuva. 2B ja D), ja kaikki hiiret siedetty RIT kokeilun jopa päivänä 28 (viimeinen havaittu).

Kasvaimen kasvu käyrä (A) ja paino (B) hiirissä, joita käsiteltiin [

90Y] 12A8. Kasvaimen kasvu käyrä (C) ja paino (D) hiirille hoidettiin [

90Y] 67A2 (umpinaiset ympyrät, käsittelemätön (PBS), avoimet ympyrät, leimaamaton IgG yksin mustat kolmiot, 0,74 MBq, avoimet vinoneliöt, 1,85 MBq ; musta neliö, 3,7 MBq).

Histologinen analyysi

korkea määrä mitoosi soluissa havaittiin H 0,01 (Opiskelijan

t

-testi).

Keskustelu

SCLC on aggressiivinen kasvain ja 2 vuoden eloonjäämisaste potilaiden, joilla on rajallinen-vaiheessa ja laaja-vaiheen sairauksista on välillä 20- 40% ja 2-5%: lla [27], [28], [29]. Siksi lisäksi tehokas syövän hoitoon tarvitaan, erityisesti potilaille, joilla on laaja-vaiheen tauti. SCLC ilmentää korkeita c-kit, joka mahdollistaa nopean solujen kasvua ja siten on keskeinen ehdokas molekyylin diagnosointiin ja terapeuttisia SCLC [30], [31], [32]. Olemme aiemmin osoittaneet, että korkeat tasot anti-c-kit-vasta-aineella [

111In] 12A8 kertynyt c-kit-ilmentävien kasvainten, mutta ei normaalissa elimissä [17], [18]. Koska SCLC on herkkä säteilylle, RIT käyttäen 12A8 leimattu sytotoksisten radionuklidien kuten

90Y tai

131I on potentiaalia olla tehokkaampi hoito SCLC kuin nykyiset hoidot. Tässä tutkimuksessa käytimme ylimääräinen vasta-aine 67A2 joka on suurempi affiniteetti c-kit verrattuna 12A8, ja arvioitiin terapeuttinen teho

90Y-leimattu 12A8 ja 67A2 käytettäessä SCLC hiirimallissa.

In vitro

luonnehdinta

111In-leimatun 12A8 ja 67A2 osoitti, että [

111In] 67A2 oli neljä kertaa suurempi sitoutumisaffiniteetti kuin [

111 In] 12A8, odotetusti. Vaikka tunnistama epitooppi 67A2 on eri kuin 12A8, sisäistämisen määritys osoitti, että 67A2 on internalisoidaan nopeasti sitoutumisen jälkeen c-kit samanlainen kuin on 12A8 [17]. Kuten raportoitu 12A8 jälkeen c-kit sitova ja sisäistämisen radioaktiivisesti 67A2 oli metaboloituu ja

125l aktiivisuus poistui soluista, kun taas

111 In aktiivisuus säilyi, osoittaa metalli radionuklideja soveltuvat kuvantamisen (

111In) ja hoito (

90Y) käyttäen 67A2 kohdistaa kasvainsoluihin.

määrittää, onko vasta-aineita voitaisiin käyttää RIT c-kit-ilmentävien kasvainten, arvioimme pitkän aikavälin bioja-

111In-leimattuja vasta-aineita, joista kasvain absorboitunut annos arvioitiin varten

90Y-leimattu vastaavien vasta-aineiden. [

111 In] 67A2, jossa on neljä kertaa suurempi sitoutumisaffiniteetti kuin [

111 In] 12A8, osoitti suurempaa kasvaimeen jokaisessa aikapisteessä tutkittu. AUC kasvaimen ajan toimintaa käyrä oli 1,7 kertaa suurempi [

111In] 67A2 kuin [

111 In] 12A8, joissa on osoitettu suurempaa kasvain absorboitunut annos käyttämällä [

90Y] 67A2.

Seuraava meidän leimattu molemmat vasta-aineet

90Y ja suoritettiin kokeellisen RIT hiirissä, jotka kantoivat SY kasvaimia. Anto 3,7 MBq on [

90Y] 12A8 tai 1,85 ja 3,7 MBq [

90Y] 67A2 lähes täysin tukahdutetaan kasvaimen kasvua. Vertailu absorboitunut annos laskelmissa että kasvaimia saaneen absorboitunut annos on yli 18 Gy saavutti täydellisen vasteen SY kasvaimia. RIT sietivät hiirillä, mikä vain kehittynyt ohimenevä painonmenetystä. Nämä havainnot viittaavat siihen, että

90Y-leimattu vasta-aineilla on potentiaalia tuottaa tappavan annoksen sädehoidon c-kit-ilmentävien SCLC. Annosta rajoittava elin RIT kanssa IgG on usein punainen luuydin, ja käsittelyn absorboitunutta annosta punaisen luuydin on tärkeä määritettäessä terapeuttinen säteilyannos potilaille [33]. Esillä olevassa tutkimuksessa, absorboitunut annos arvioidaan meidän biojakaantumi- data oli 0,5 mGy /MBq on 70 kg viite man molemmille

90Y-leimattu vasta-aineet; ≤2 Gy yleisesti pidetään turvallisena säteilyannos [33] , mikä osoittaa, että arvioitu maksimi terapeuttinen annos on 4 GBq. Kuitenkin Tolvanen

et al

. kertoi, että oli eroavaisuuksia absorboituneet annokset arvioitiin luoki- ja ihmisperäisten data [23]. Lisäksi, anti-c-kit-vasta-aineiden 12A8 ja 67A2 sitoutuvat ihmisen c-kit, mutta ei hiiren c-kit. Siksi tarvitsemme tulevaisuuden kliinisestä tutkimuksesta

111In-leimatun 12A8 ja 67A2 potilailla arvioida tarkasti dosimetriasta. 38%: sta 78% SCLC yksilöiden ja 42%: sta 52% SCLC solulinjaa on korkea ilmentymisen c-kit [30], [34]; siksi, yli noin 40% SCLC potilaista saattaa hyötyä c-kit kohdistettuja radioimmunoterapiassa. Tämä olisi edelleen validoitu tulevaisuudessa kliinisissä tutkimuksissa.

Mielenkiintoista, [

90Y] 12A8 esti tuumorin kasvua annoksesta riippuvaisella tavalla, kun taas [

90Y] 67A2 käyttäytyi kuin jos se vaaditaan kynnysarvon annos olisi tehokasta. Ei merkittävää eroa kasvaimen kasvun välillä havaittiin leimaamatonta IgG yksin ja 0,74 MBq [

90Y] 67A2 hoitoryhmissä, vaikka 0,74 MBq [

90Y] 67A2 antoi kasvain absorboitunut annos 7,2 Gy, mikä on 1,7 kertaa suurempi kuin in 0,74 MBq [

90Y] 12A8. Histologinen analyysi osoitti, että alue kuolion ja fibroosia heijastuu RIT vaikutus. Sen sijaan, induktio kuvio apoptoosin oli erilainen näiden kahden välillä

90Y-leimattuja vasta-aineita. Vaikka ei ole selvää, ovatko erot apoptoosin induktio liittyy eri mallia RIT vaikutuksen erot biologiset ominaisuudet vasta-aineet voivat aiheuttaa tämän ristiriita. Mukaan valmistajan tiedot, 12A8 on vahva neutraloiva ja lievä antituumorivaikutuksen, kun taas 67A2 ei ole tässä, ja molemmat vasta-aineet eivät hallussaan ADCC ja CDC toimintaa. Vaikka ei ole suoraa näyttöä siitä, että c-kit on mukana apoptoosireittiä, c-kit pudotus lyhyillä hiusneula-RNA aiheuttaman apoptoosin rintasyöpäsoluissa [35] ja c-kit ehtyminen kumoamalla vasta-, johti huomattavasti lisääntynyt apoptoosin erottaa spermatogonioiden hiirillä [36]. Nämä havainnot esiin mahdollisuuden, että yhdistetyn c-kit ehtyminen sädehoitoon voi aiheuttaa synergistisiä vaikutuksia, jolloin tukahduttamaan kasvaimen kasvua käyttämällä pienellä annoksella [

90Y] 12A8 huolimatta pienempi absorboitunut annos verrattuna [

90Y] 67A2 . Koska potilaat saavat yleensä suurina annoksina radikaali RIT, meidän havainnot viittaavat, että korkea affiniteetti on erittäin tärkeä ominaisuus käytetty vasta-aine RIT kliinisessä ympäristössä, vaikka emme voi sulkea pois mahdollisuutta, että muut ominaisuudet voivat vaikuttaa RIT tehoon. Olisi mielenkiintoista arvioida mahdollisuutta, että terapeuttisia vaikutuksia voitaisiin vielä täydentää muilla biologinen merkki (s) vasta-aineen tulevissa tutkimuksissa.

Vaikka RIT on potentiaalia voimistaa vasta-hoidon monenlaisissa kasvaimia, kliinisessä käytössä radioimmunoterapiassa on tähän asti ollut käytössä vain hematologisten maligniteettien, mutta ei ei-hematologisten pahanlaatuisten kasvainten [19], [37], [38]. Koska on vaikea vasta tunkeutua koko kiinteitä kasvaimia, radioaktiivisesti vasta-aineita ei voi antaa kuolettavan annoksen kaikkien kasvainsolujen sisällä kiinteä kasvain. Koska radioleimattuja vasta-aineita voidaan systeemisesti toimittaa sytotoksisen radionuklidit kasvaimen sivustoja, RIT kiinteisiin kasvaimiin katsotaan yleensä sopivaa kohdella pienikokoisen etäpesäkkeitä (alle useita cm halkaisijaltaan), mutta ei tilaa vieviä ensisijainen kasvaimia (yli useita cm halkaisijaltaan) . Tältä osin SCLC, jolla on korkea riski merkittävästä etäpesäkkeiden mutta joka on suhteellisen säteilylle, voi olla hyvä ehdokas RIT. Vaikka potilaille, joilla on laaja-vaiheen SCLC perinteisesti ole saanut sädehoitoa, Slotman

et al

. kertoi, että profylaktinen kraniaalisäteytyksestä potilailla, joilla on laaja-vaiheen SCLC johti merkittävään vähentämiseen aivometastaasi esiintyvyys ja parantaminen selviytymisen [39]. Siksi [

90Y] 12A8 ja [

90Y] 67A2 voisi olla tehokas metastasoituneen syöpäsolujen kaukaisilla sivustoja ja saattaa olla mahdollista vähentää esiintymistä etäpesäkkeiden lisäksi aivojen SCLC, varsinkin laajoja taudin vaiheesta.

Johtopäätös

arvioitiin kaksi radioleimattua anti-c-kit-vasta-aineita 12A8 ja 67A2 niiden mahdollisen hakemuksen RIT SCLC. Affiniteetti [

111In] 67A2 oli neljä kertaa korkeampi kuin [

111 In] 12A8 ja kasvaimen otto [

111In] 67A2 oli 1,7 kertaa suurempi kuin [

111In] 12A8 . Keski korkea annoksia

90Y-leimattu vasta, kasvaimen ohjaus yksinkertaisesti heijastuu kasvain absorboitunut annos, jossa kasvain absorboitunut annos on yli 18 Gy voisi aiheuttaa lähes täydellisen regression SCLC ksenograftin. Tämä viittaa siihen, että SCLC voi olla hyvä kohde RIT kanssa

90Y-leimattu anti-c-kit-vasta-aineita. [

90Y] 12A8 ja [

90Y] 67A2 ovat lupaavia RIT aineita laaja-vaiheen SCLC.

Kiitokset

Kiitämme Maki Okada teknisistä kysymyksistä ja hyödyllisiä ehdotukseni dosimetriasta .