Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

tutkimiseksi kliinistä merkitystä MHC-luokan I ketjuun liittyvä geeni A (MICA) potilailla, joilla on edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ja tutkia suhde MICA ilmaisun ja tehoa sytokiinin aiheuttaman tappajasolujen (CIK) hoito hoitoon kehittyneen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä.

Methods

Saimme tietoja 222 potilasta, joilla on edennyt ei- pienisoluinen keuhkosyöpä, joka sisältää tiedot MICA ilmaisun, ikä, sukupuoli, ECOG pisteet, patologinen tyyppi, vaiheessa hoitohistoriaan (mukaan lukien 38 potilasta, joille annettiin autologiset CIK soluinfuusion), ja kokonaiseloonjääminen (OS). MICA ilmentyminen keuhkosyöpä kudosta arvioitiin immunohistokemiallisella värjäyksellä. Analyysit MICA ilmaisun, ja CIK hoito yhdessä selviytymisen tuloksia suoritettiin käyttäen Coxin suhteellisen malleja, Kaplan-Meier menetelmiä, ja log-rank-testi.

tulos

s

MICA ilmaistiin sekä kalvo ja solulimassa. MICA ilmaisu korreloi vaiheessa keuhkosyöpään, ECOG pisteet, sukupuoli ja ikä. Monimuuttuja COX regressioanalyysi osoitti, että ekspressio MICA oli itsenäinen ennustetekijä kehittyneiden ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (p = 0,002). Vuonna Alaryhmäanalyysissä, jaoimme 222 potilaita CIK ja kontrolliryhmiin. Vuonna CIK ryhmässä, keskipitkällä OS (MOS) potilaista, joilla on korkea ilmaus MICA oli pidempi kuin ne, joilla on alhainen ilmentyminen MICA (27 kk vs. 13 kuukautta). Kontrolliryhmässä, MOS potilailla, joilla on korkea ilmaus MICA oli lyhyempi kuin potilailla, joilla on alhainen KIILTEESTÄ ilme (9 kk vs. 18 kk). COX regressioanalyysi osoitti, että MICA lauseke vaikuttaa vaikutusta CIK hoitoa (p 0,0001).

Johtopäätös

1) korkea ilmentyminen MICA on yksi indikaattoreista huono ennuste Pitkälle edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita. 2) korkea ilmentyminen MICA saattaa olla yksi ennakoivan tekijöitä onnistuneen CIK terapia.

Citation: Chen Y, Lin G, Guo Zq, Zhou Zf, hän Zy, Ye Yb (2013) Effects of MICA ilme prognoosi Advanced ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ja tehon CIK Therapy. PLoS ONE 8 (7): e69044. doi: 10,1371 /journal.pone.0069044

Editor: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Espanja

vastaanotettu: 02 maaliskuu 2013; Hyväksytty: 5. kesäkuuta 2013. Julkaistu: 23 heinäkuu 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii unrestrict`ed käyttö, jakelu, ja lisääntyminen tahansa mediassa, kunhan alkuperäisen tekijän ja lähteen hyvitetään.

Rahoitus: projekti on Foundation for Young Scholars Fujianin maakunnan Department of Health, Kiina. (Grant nro 24.1.2011). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

keuhkosyöpä on edelleen suurin syy syöpään liittyvien kuolleisuus maailmassa, ja noin 1,4 miljoonaa ihmistä on diagnosoitu keuhkosyöpä vuosittain [1]. Noin 85% kaikista keuhkosyöpää luokitellaan ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), ja yli 50% NSCLC potilaista on kehittynyt paikallinen invaasio ja /tai etäispesäkkeitä. Viime vuosikymmenen aikana, monet tutkimukset ovat keskittyneet immunologisiin näkökohtia keuhkosyöpään. Immunoterapia on viime aikoina tullut neljäs merkittävä hoitomodaliteetti varten pahanlaatuisten kasvainten leikkauksen jälkeen sädehoidon, ja kemoterapia [2], [3], [4], [5].

synty ja eteneminen kasvaimen ovat läheisesti liittyvä vasteen immuunijärjestelmän. Teoria ”immunoediting” on yrittänyt kuvata monimutkaisia ​​vuorovaikutus kehittää kasvain kehittyvä immuunivaste. Tämän ajatellaan sisältyy kolme vaihetta; eliminaation vaihe, jossa immuunijärjestelmä tuhoaa kasvaimen, tasapainotilan vaihe, jossa kasvaimen ja immuunijärjestelmän rinnakkain, ja paeta vaiheeseen, jossa kasvain kehittyy mekanismeja kiertää tuhoaminen immuunijärjestelmän. Molekyylit, jotka ovat ylös tai alas säädellään aikana immunoediting voivat edustaa mahdollisia ennustetekijöitä merkkiaineita [6]. Major histocompatibility monimutkainen luokan I ketjuun liittyvä (MIC) proteiineja edustaa uutta perheen erittäin glykosyloitunut, kalvo-ankkuroitu MHC-luokan I-kaltaisia ​​molekyylejä. Vaikka niillä samanlainen rakenne klassisen luokan I raskasketjujen, MICA ja MICB eivät seurustele β2-mikroglobuliinin tai kuljetusliikkeen liittyy antigeenin prosessointia (TAP) [7]. MIC proteiinit on rajoitettu kudosjakautumisessa ne ovat harvoin ilmaistaan ​​normaalit solut. On raportoitu, että MICA ilmentävät konstitutiivisesti suolen epiteelisolujen ja ilmentyy laajasti erilaisissa maligniteetteja. Näin ollen, sen katsotaan olevan kasvaimeen liittyvä antigeeni (TAA) [8], [9], [10].

MIC proteiinit toimivat ligandeina stimuloivan C-tyypin lektiinin kaltainen NKG2D reseptori, ensimmäinen tunnistettu NK-solujen ja myöhemmin todettu ilmentyvän CD8 +, αβ ja γδ T-soluja. NKG2D on tyypin II kalvon läpäisevä glykoproteiini, joka on ilmaistu disulfidikytketyn homodimeerinä solun pinnalla. Se toimii aktivoiva reseptori jälkeen ligandin sitoutumista, joka tukee sytotoksista aktiivisuutta NK-solujen ja T-solujen kasvainsoluja vastaan ​​[11], [12]. Kasvainsolujen stabiilisti transfektoitu ilmaista MICA ja hiiren versiot NKG2D ligandien RAE-1 tai H60 korkealla tasolla, poistetaan CD8 + T-solujen ja NK-solujen [13], [14], mikä osoittaa, että kasvainsolut yli-ilmentävät NKG2D ligandit yhä herkemmin immuunisolujen sytolyysin. Kuitenkin viimeaikaiset raportit ovat tunnistaneet mekanismi, jolla kasvaimia näyttävät pystyvän horjuttaa valvontajärjestelyn. Liukoiset muodot MICA tunnistettiin olisi voitu selvittää kasvaimia ja osoitettu aiheuttavan downregulation NKG2D auttamalla reseptorin kasvaimen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL), heikentäen T-solujen toiminta [15]. Tutkimuksessa on tarkoitus tutkia kehittynyttä NSCLC tapauksissa tekemään retrospektiivinen analyysi tutkia yhdistyksen välillä MICA ilmaisun ja ennusteen kehittyneiden pienisoluista keuhkosyöpää.

Sytokiini aiheuttama killer (CIK) solut ovat ainutlaatuinen populaatio sytotoksisten T-lymfosyyttien kanssa ominaisuus CD3 + /CD56 + fenotyyppi, ja ne voidaan tuottaa sytokiiniseoksessa aiheuttaman perifeerisen veren mononukleaarisissa soluissa (PBMC). Nämä solut ovat osoittaneet suurempia proliferatiivisia ja sytolyyttinen toiminta verrattuna CD3- /CD56 + lymfokiiniaktivoiduiksi tappaja solujen (LAK) [16]. Tällä hetkellä, CIK soluja pidetään uuden tyyppinen anti-kasvain efektorisolujen kanssa voimakkaampi kasvaimen vastainen aktiivisuus ja laajempi kohdennettujen kasvaimia kuin muut raportoitiin anti-kasvain efektorisolujen. Lisäksi CIK solut voivat säädellä ja yleensä parantaa immuunijärjestelmän toiminnot syöpäpotilailla [17], [18]. Nykyiset tiedot vaiheen I /II tutkimuksissa anti-NSCLC vaikutukset CIK solut ovat erittäin rajalliset, ja terapeuttisia hyötyjä CIK solut ovat tuntemattomia pienisoluista keuhkosyöpää. Kuten täsmähoitoihin ja kemoterapia ovat tehneet aineellisia läpimurtoja yksilöllistä hoitoa, meidän pitäisi tutkia ennakoivan tekijöitä immuuni hoidon tehon parantamiseksi CIK hoidon pienisoluista keuhkosyöpää. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että NKG2D reseptori ilmentyy voimakkaasti pinnalla CIK soluja, ja on odotettavissa, että sytolyyttisen vaikutus voidaan välittää vuorovaikutusta NKG2D reseptorin CIK soluja ja MICA ligandin syöpäsoluihin [19], [20], [21]. Joten teoriassa, CIK solut voivat tunnistaa MICA ligandien keuhkosyöpään solukalvojen ja tappaa syöpäsoluja. Olipa korkea MICA ilmaisua voidaan käyttää ennakoivaa kertoimella CIK hoidon lopputulos on vielä määriteltävä. Aiomme tutkia MICA ilmaisun ja vaikutus CIK hoidon onko MICA lauseke on ennustava tekijä onnistuneen CIK terapia.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Kaikki menetelmät suoritettiin noudattaen Helsingin julistuksen, ja luvalla eettisen komitean Fujianin maakunnan Cancer Hospital. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta osapuolilta.

Potilaat ja näytteet

Potilaat (n = 222), joilla on edennyt tai paikallisesti edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (III-IV vaihe) oli 12

th laitos Fujian Cancer sairaalan otettiin joulukuun 2005 ja joulukuun 2010 keskeinen poissulkuun oli riittämätön kudoksen immunohistokemiallinen (IHC). Keskeiset kliinis tiedot kerättiin näistä potilaista, mukaan lukien TNM, ECOG pisteet, sukupuoli, ja ikä. Yleistä potilastiedot on esitetty taulukossa 1. Kaikki kasvaimet vastaanotetut resektion on leikkaussali tai transbronchial keuhkojen koepaloja tai aspiraation koepalat välittömästi kiinteä ja sijoitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin ennen käsittelyä ja parafiiniin optimaalisen kudoksen kiinnitys ja säilyttäminen histologista tutkimusta. Alkuperäinen histopatologisia dia sarjaa ja raportit saatiin kussakin tapauksessa, ja nämä tarkistettiin diagnoosin varmistamiseksi ja tarkkuus nykyisten tietojen ja täydentää tietoja puuttuu tietokannasta aina kun mahdollista.

Hoidot

Out of 222 potilasta 32 kiellettäisi jälkeen diagnosoitu. Loput 190 potilasta sai hoitoja, kuten kemoterapiaa, täsmähoitoihin, sädehoito, CIK hoitoa, ja paras oireenmukainen hoito. Tapauksissa paikallisesti edenneen keuhkosyöpä (22 tapausta, jossa vaiheessa IIIA, 6 tapausta vaiheen III B) hoitoon malli koostui preoperatiivisen induktiokemoterapiaa, leikkaus, ja leikkauksen jälkeinen adjuvanttia kemosädehoito. Neljä kaksikymmentäneljä potilaat saivat neljän jakson Täydentävien CIK hoito (taulukko 2). Potilaille annettiin autologiset CIK solun hoidon jälkeen sädehoitoa. CIK solujen hoito annettiin 1 kuukauden välein. Potilaat olivat oikeutettuja CIK ylläpitohoidon kunnes ne eivät enää sopineet jatkavansa ylläpitohoidon tai taudin etenemiseen asti esiintynyt. Kunkin hoidon jälkeen potilaille annettiin infuusiona vähintään 1,0 × 10

10 CIK soluja.

Advanced tapauksissa (34 tapauksessa vaiheen III B, 128 tapauksissa vaihe IV), sai hoito-ohjelmat kemoterapiaa, EGFR-TKI täsmähoitoihin, ja CIK hoito. Kemoterapiaryhmissä ensilinjan, toisen linjan, ja kolmannen linjan hoito. Ensivaiheen kemoterapiaa käytetään kolmannen sukupolven kemoterapeuttisia aineita, jotka sisältävät platinaa kahden lääkitykseen. Toisen linjan kemoterapia Yksittäisillä doketakselia ja pemetreksediä käytettiin useammin kuin kolmannen linjan kemoterapiaa ja hoito annettiin mukaan tautitilanteen. EGFR-TKI hoito 250 mg gefitinibin qd tai 150 mg erlotinibia jatkettiin taudin etenemiseen tai kunnes myrkyllisyyttä ei voida suvaita. Oli 34 potilasta, joilla on edennyt sairaus, jotka saivat CIK hoitoa (taulukko 2). CIK solujen hoito annettiin 1 kuukauden välein. Kunkin hoidon jälkeen potilaille annettiin infuusiona vähintään 1,0 × 10

10 CIK soluja.

CIK Cell valmistaminen

CIK soluja eristetään ja viljellään standardin protokollan. Perifeerisen veren (50 ml), vedetään potilailla, jotka käyttävät hepariinia antikoagulanttina. Yksitumaiset solut eristettiin Ficoll-Conray tiheysgradienttisentrifugoinnilla ja niiden elinkelpoisuus määritettiin trypaanisiniekskluusiolla. Noin 2,0 x 10

6 /ml mononukleaarisoluja maljattiin kuusi hyvin maljoihin ja viljellään kanssa Medium I, jossa RPMI 1640 plus 1,0 x 10

6U /L ihmisen interferoni-gamma (IFN-γ), 5,0 x 10

5U /L rekombinantti ihmisen interleukiini-2 (IL-2), 10% lämpöinaktivoitua ihmisen seerumia, 25 mM HEPES, 2 mM L-glutamiinia, 100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä. Soluja inkuboitiin kostutetussa atmosfäärissä, jossa 5% CO

2 37 ° C: ssa. 24 tunnin kuluttua, 100 ug /L monoklonaalinen vasta-aine (MAb), CD3: a vastaan, ja 1,0 x 10

5U /L IL-1α lisättiin. Sen jälkeen vielä 48 h, supernatantti imettiin pois ja solut viljeltiin Medium II; Medium I puuttuessa INF-γ. Väliaine vaihdettiin joka kolmas päivä. Solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen trypaanisininen-värjäystä. CIK soluja verensiirron takaisin luovuttajilla kahdeksan päivän kulttuuria. Kaikki CIK soluviljelmät testattiin saastumisen (bakteerien, sienten ja mykoplasman) koko tutkimuksen varmistamiseksi kulttuuriin laadun ja verensiirtojen turvallisuuden.

fenotyypin analyysi CIK solujen

fenotyypit viljeltyjä soluja oli määritetään virtaussytometrialla (BD FACSCalibur). Solut leimattiin monoklonaalisilla vasta-aineilla (m Ab: t), jotka tunnistavat ihmisen CD3, CD4, CD8, CD56, ja NKG2D.

immunohistokemia

immunohistokemiallinen tunnistus MICA suoritettiin rutiininomaisesti streptavidiini-biotiini- peroksidaasi tekniikka käyttämällä kanin polyklonaalista anti-MICA vasta-aine. Rutiini parafiini leikkauksessa vahanpoisto ja nesteytys käyttäen 3% vetyperoksidia suoritettiin estää endogeenisen peroksidaasin aktiivisuus. Mikroaaltouuni antigeeni haku tehtiin ennen estää naudan sikiön seerumia 2 tuntia. Noin 50 ui (1:25) kanin polyklonaalista anti-ihmis-MICA lisättiin, ja seosta inkuboitiin 4 ° C: ssa yön yli. Noin 50 ui biotinyloitua vuohen anti-kani-IgG sekundääristä vasta-ainetta työliuosta lisättiin, ja seosta inkuboitiin 37 ° C: ssa 30 minuuttia, mitä seurasi diaminobentsidiinin väri. Näyte vastavärjätään hematoksyliinillä, pestiin etanolilla ja suolahapolla, kylläisellä litiumkarbonaatilla kunnes väri palautetaan sininen, ja sitten kuivattu kaltevuus alkoholin ja ksyleenin ennen asennusta neutraali hartsi.

jättäminen primaarista vasta-ainetta ja sen korvaaminen PBS: ää käytettiin negatiivisena kontrollina, ja kasvaimen cross- käytettiin sisäisenä positiivisina kontrolleina MICA värjäystä. Osa peräsuolen kudosta, jota oli osoitettu olevan positiivinen MICA käytettiin myös positiivisena kontrollina [22], [23].

arviointi immunovärjäyty-

Kaksi riippumatonta patologia tutkinut immunohistokemian koetettiin diat ilman aiempaa tietoa siitä kliinisestä historiasta potilaista. MICA ilmentyminen arvioitu värjäytymisen intensiteettiä ja teki seuraavasti. Intensiteetti Immunovärjäyksen luokiteltiin neljään ryhmään: 0 = ei värjäytymistä tai vain epäspesifistä taustaväri, 1 = vaaleankeltainen, 2 = keltainen tai syvä keltainen, ja 3 = ruskea tai rusketus. Niiden positiivisten solujen arvioitiin semikvantitatiivisesti ja luokiteltu viiteen ryhmään: 0 = ≤5% positiivisia soluja, 1 = 6% -25% positiivisia soluja, 2 = 26-50% positiivisia soluja, 3 = 51-75% positiivisia soluja, ja 4 = 76% -100% positiivisia soluja. Histokemiallista pistemäärä immunoreaktiivisuus saatiin lisäämällä intensiteetti ja prosenttiosuus tulokset. Histokemiallinen pisteet jaettiin kahteen ryhmään, tapausta pistein 0-4 määriteltiin alhaisen ilmentymisen ryhmässä, ja tapaukset pistein 5-7 määriteltiin korkean ilmentymisen ryhmässä. [23], [24], [25].

Ennuste arviointi

yleinen (OS) toimii kultakantaan arviointi terapeuttista tehoa tuumoriterapian, joten otimme OS arvioitaessa ennustetta. Potilaita seurattiin alkaen diagnoosi vaiheen III B /IV sairaus kuolinpäivä. Potilaat ilman tunnettua kuolinpäivä sensuroitiin aikaan viimeisen seurannan.

Tilastollinen

Tilastollinen analyysi tiedoista suoritettiin käyttäen SPSS paketin (versio 13 Windows) . Chi-neliö testi (Fisherin tarkka testi) ja Studentin t-testiä käytettiin arvioimaan eroja kategorisen muuttujat ja jatkuvia muuttujia, vastaavasti. Potilaat, joiden kuolema liittyy heidän keuhkosyöpään otettiin huomioon tautikohtaisia ​​selviytymisen laskelmia. Ne, jotka kuolivat ulkopuolisista keuhkosyöpään liittyvien syiden ilman näyttöä toistumisen sensuroitiin aikaan kuolema. Eloonjäämiskäyrät arvioitiin Kaplan-Meier menetelmällä, ja erot selviytymistä arvioitiin log-rank-testi. Monimuuttuja-analyysi, jonka Coxin suhteellisten riskien suhde mallia käytettiin testaamaan merkitys ennustetekijöiden kuten MICA ilme, sukupuoli, ikä, histologia, ECOG-pisteet, ja CIK hoito. P-arvo 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

MICA ilmaisu

immunohistokemiallinen ilmaus MICA sisällä keuhkotuumoreiden laajasti homogeeninen. Se yhdisti rakeinen sytoplasminen värjäys solukalvon värjäys. Ei värjäystä stroomamääriin, soluväliaineen tai ytimet havaittiin, kun taas kasvain cross- värjättiin positiivinen KIILTEESTÄ (kuva 1).

Expression of MICA normaalissa keuhkojen epiteelin (A). MICA alhaisen ilmentymisen keuhkojen kasvain kudoksissa (B), MICA korkea-ilmentyminen keuhkossa tuumorikudoksissa (C).

analyysi MICA ilmentymisen 222 NSCLC tapauksissa ilmeni, että 98,2%: n keuhkotuumoreiden osoittivat positiivista värjäytymistä MICA. Neljäkymmentäviisi (20,3%) näytteistä osoitti vaaleankeltainen värjäystä, 33,8% (n = 75) oli keltaista tai syvä keltainen, ja 44,1% (n = 98) olivat ruskea tai vaalean värin (taulukko 3). Vaihteleva osuus MICA-positiivisia soluja havaittiin myös; 47,3% (n = 105), kasvainten osoittivat laaja ilmentyminen MICA-positiivisten solujen (76% -100%), kun taas 1,8% (n = 4) tapauksissa osoitettu MICA immunoreaktiivisuus alle 5% tuumorisolujen (taulukko 4 ).

karakterisointi ja fenotyyppien CIK solujen

laajentunut CIK solut analysoitiin virtaussytometrialla. Fenotyyppianalyysi CIK solujen 38 potilaasta sen jälkeen, kun 14 päivää viljelyn osoitti, että prosenttiosuudet CD4 +, CD8 +, CD3-CD56 +, CD3 + CD56 + -solut olivat 45,2 ± 7,5%, 37,1 ± 9,2%, 25,2 ± 9,8%, ja 18,2 ± 5,6 %, vastaavasti (kuvio 2). Analysoimme ilmentymistä NKG2D in vitro laajeni CIK soluja. Huomasimme, että vain 2,6 ± 1,2% CD4 + T-solut olivat NKG2D +, kun taas muut CIK solut ilmensivät NKG2D. Prosenttiosuus NKG2D + CD8 +, CD3-CD56 +, ja CD3 + CD56 + populaatiot olivat 88,6 ± 5,4%, 97,2 ± 2,1%, ja 92,8 ± 3,8%, vastaavasti (kuvio 3).

vertailu MICA ilmaisun potilaan ja kasvainten ominaisuuksiin

histokemiallisen pisteet immunoreaktiivisuuskuvion saatiin lisäämällä intensiteetti ja prosenttiosuus tulokset. Tapaukset pistein 0-4 määriteltiin alhaisen ilmentymisen ryhmässä, ja tapaukset pistein 5-7 määriteltiin korkean ilmentymisen ryhmässä. Matala-ilmentymisen ryhmässä 84 tapausta (37,8%) ja korkean ilmentymisen kuului 138 tapausta (62,2%). Analyysi hyödyntäen histokemiallista pisteet menetelmä paljasti tilastollisesti merkitsevä suhteita MICA ilmaisun ja lavastus keuhkosyöpään, ECOG pisteet, sukupuoli, ja ikä. Ei ollut mitään merkittävää korrelaatiota MICA ilmaisun ja patologinen tyyppi (taulukko 5).

Univariate eloonjääminen analyysi

joukossa 222 potilasta oli 160 urosta ja 62 naarasta ja mediaani kokonaiselinaika oli 13 kuukautta, 95% CI (11,918-14,082), ja 1 vuoden pysyvyys ja 2 vuoden elossaolo oli 52,3% ja 19,8%, tässä järjestyksessä (kuvio 4A). Vuoteen univariate analyysi, MICA ilme, sukupuoli, ikä, TMN vaiheessa ECOG pisteet, ja CIK hoito olivat kaikki ennustavat kokonaiselinaikaa (kaikki p 0,05), kun taas histologinen alatyyppi ei ollut (p = 0,544) (taulukko 6). Mediaanielossaolosta potilailla, joilla on korkea-ilmaus MICA oli huomattavasti lyhyempi kuin ne, joilla on alhainen ilmentyminen MICA, p = 0,01 log-rank-testi (kuva 4B).

OS 222 potilasta (A ). OS kokonaisväestössä ja KIILTEESTÄ lauseke (B). OS yleisessä väestö MICA ilmaisun ja CIK hoito (C).

Vahvista tärkeyttä CIK-taudin hoidossa kehittyneiden NSCLC korkea ilmentymä MICA, jaoimme 222 potilasta osaksi CIK ryhmään ja kontrolliryhmään. Vuonna alaryhmäanalyysissä keskipitkällä OS (MOS) potilaista CIK ryhmässä korkea ilmaus MICA oli pidempi kuin OS potilailla, joilla on alhainen ilmentyminen MICA (27 kk vs. 13 kuukautta). Kontrolliryhmässä, MOS potilailla, joilla on korkea ilmentymisen MICA oli lyhyempi kuin potilailla, joilla on alhainen ilmentyminen MICA (9 kk vs. 18 kk) (kuvio 4C). Lisäksi COX regressioanalyysi osoitti, että MICA ilmaisu on merkittävä vaikutus CIK hoitoa (p = 0,001).

monimuuttuja eloonjääminen analyysi

Monimuuttuja-analyysissä MICA ilme, sukupuoli, ikä, ECOG pisteet ja CIK hoito olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 7). Näimme, että kuoleman riski potilailla, joilla on korkea ilmentymisen MICA oli 3,08 kertaa suurempi kuin potilailla, joilla on alhainen ilmaus MICA. Tämä viittaa siihen, että korkea ekspressio MICA oli osoitus huonon ennusteen pitkälle NSCLC syöpäpotilailla. Vuorovaikutus MICA ja CIK (p 0,0001), osoitti, että MICA yliekspressio oli itsenäinen ennustaja onnistuneelle CIK hoitoa. Tämä oli sopusoinnussa tulokset yhden muuttujan alaryhmäanalyysi. Emme käyttöön kliinisessä vaiheessa osaksi monimuuttuja analyysiin osallistuneista potilaista tutkimuksessamme olivat kaikki kehittyneet NSCLC tapauksissa.

Keskustelu

Therapy kokeneille NSCLC on aikakauteen yksilöllisten hoitoon. Kuten immunoterapiaa hoitoon keuhkosyöpään on tulossa saataville, nyt on tärkeää tunnistaa tekijöitä, jotka ennustavat mikä potilaat reagoivat parhaiten immuuniterapiassa.

MICA harvoin ilmaistaan ​​normaalit solut vaikka se on raportoitu, että MICA on konstitutiivisesti ilmaistaan ​​suolen epiteelisolujen ja ilmentyy laajasti erilaisissa maligniteetteja, kuten rinta-, munasarja-, paksusuoli-, munuais-, haima-, eturauhas- syöpä, hepatosellulaarinen karsinooma, ja melanooma [8], [9], [10]. Tämä retrospektiivinen analyysi 222 NSCLC kasvainten tutkittiin miten stressin proteiinin MICA ennustetyövälineenä merkki kehittyneissä NSCLC ja tutkia suhdetta MICA ilmaisun ja tehoa CIK terapian hoitoon kehittynyt NSCLC. Analyysi MICA ilmentymisen 222 NSCLC kasvaimia paljasti, että immunohistokemiallinen ilmaus MICA sisällä keuhkotuumoreiden laajasti homogeeninen. Suurin keuhkotuumoreiden tässä tutkimuksessa osoitti vahvaa soluliman ja solukalvon ilmaus MICA, mutta normaali keuhko epiteelin ei ilmaista niitä. Nämä havainnot viittaavat siihen, että ilmaus MICA vasta tapahtuu sen jälkeen pahanlaatuisiksi aikana keuhkosyöpä kehitys, joka on yhdenmukainen muiden havaintojen monien muiden pahanlaatuisten kasvainten. Näin ollen nämä molekyylit on mahdollista käyttää kasvainmerkkiaineet keuhkosyöpään. Andreas Busche et al. [26] havaittu MICA 40 NSCLC tapauksissa immunohistokemiallisesti, ja totesi, että 5 out of 17 adenokarsinooma tapauksissa ja 5 pois 23 squamous kohdunkaulan tapauksissa ollut myönteisiä MICA ilmaisua, mikä merkitsi sitä, että 27,5%: n NSCLC tapauksissa ollut myönteisiä MICA ilme. Korkeampi MICA ilmaus nähty meidän potilaat saattavat johtua eroista populaatioiden ja rotujen tai että kaikki rekisteröidyt potilaat tutkimuksessamme olivat edenneissä tapauksissa, kun 40 tapausta kirjoilla Busche tutkimuksessa kattoi välillä vaiheen I vaiheeseen IV. By chi-neliö testi ja tarkka todennäköisyys testi, huomasimme, että potilailla, joilla on vaiheen IV tauti ei näytteille huomattavasti korkeampi MICA ilmaisu kuin potilailla, joilla on vaiheen III tauti. Tuloksia tarkasteltaessa edellä, me päätellä, että positiivisten määrä MICA ilmaisun nousisivat vaiheessa keuhkosyövän edennyt. Mutta tarvitsemme vielä suurentaa otoskoko ja ilmoittamaan potilaat jokaisessa vaiheessa testata hypoteesin.

On tunnettua, että sytotoksisen funktion NK-solujen aktivoituu suoraan kasvainsoluihin, kun taas CD8 + T-solut edellyttävät samanaikaisesti pre-herkistymistä ja HLA stimulaatiota. Indusoituvat pinnan ilmentyminen MICA vasteena stressille tai pahanlaatuisiksi ajatellaan merkitä häiriintyneiden solujen hävittämistä varten sytotoksisten lymfosyyttien NKG2D-mekanismeilla [27], [28]. Todellakin, ektooppinen ilmentyminen NKG2D ligandien kasvaimista indusoi perforiini riippuvia vahva NK ja sytotoksisten T-lymfosyyttien (CTL) vasteita in vivo [13], [29]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että MICA ilme on itsenäinen markkeri hyvän ennusteen kolorektaalisyövissä ja luusarkoomissa [22], [30]. Käänteisesti säätelyä MICA on riippumaton indikaattori huonon ennusteen rintasyöpiä [23] ja MICA ilmaisua ei korreloinut ennusteiden munasarjasyöpä [24]. Kuitenkin meidän tutkimus kehittyneen NSCLC osoitti merkittävän korrelaation MICA ilmaisun ja lavastus keuhkosyöpään. Vuonna eloonjääminen analyysi, potilaat, joilla on huono ennuste olivat todennäköisemmin on korkea MICA niiden kasvaimia kuin ne, joilla on hyvä ennuste.

MICA ilme keuhkosyöpäsoluissa on kaksiteräinen miekka. MICA on stressin aiheuttama molekyyli, joka on liittynyt immuunivalvonnalle. Viimeaikaiset raportit kuitenkin ovat tunnistaneet mekanismi, jolla kasvaimia voi horjuttaa immuunivalvonnan avulla. Kasvainsolut tiedetään ekspressoivat konstitutiivisesti MICA-proteiinia solun pinnalla; kuitenkin, nämä solut myös irtoa MICA liukoisessa muodossa, mahdollisesti proteolyysi [8], [15]. Vuodattamisesta liukoisen MICA on kytketty kaventumiseen NK ilmentyminen solun pinnalla NKG2DL, mikä vähentynyt immunostimulatorisen signaalit sytotoksisten lymfosyyttien [15]. Lisäksi, liukoisen MICA liittyy systeemistä säätelyä alaspäin NKG2D ilmentymisen pinnalle CD8 + T-solujen ja γδ T-soluja, mikä edelleen estämällä antituumorivaikutuksen näiden immuunisolujen [31]. Keuhko- syöpäsoluja, MICA pääasiassa ilmaistu kalvon ja sytoplasmaan. Joten se voisi päätellä, että syöpäsolut, joilla on suuri ilmentyminen MICA kalvoon voisi estää NKG2D reseptoreja vapauttamalla sMICA, ja siten kiertää immuunijärjestelmän hylkäämistä. Tämä saattaa olla yksi syy heikkoon ennusteeseen keuhkosyöpää korkea ilmaus MICA. Siten MICA voi olla vaihtelevia vaikutuksia ennustetta ja biologisesta käyttäytymisestä kasvaimia ja vaikuttaa kasvaimen synnyn ja etenemisen.

Sytokiini aiheuttama killer (CIK) solut ovat heterogeenisiä ex vivo-laajennettu T-lymfosyyttejä, jossa on sekoitettu T -NK fenotyyppi, jotka pystyvät kohdistamaan laaja MHC-vapaan antituumorivaikutuksia sekä kiinteitä ja hematologisia syöpiä [18], [32], [33], kuitenkin kliinisten tutkimusten CIK soluja ovat vielä lapsenkengissä ja vain raportoida suhteellisen pieni määrä potilaita useimmissa näistä tutkimuksista. Tällä hetkellä, kertynyt näyttöä siitä, että vahvistus ja immuunivastetta CIK solujen liittyvät aktivoimalla reseptorin NKG2D signalointireitin [19], [20], [21], [34]. On osoitettu, että ilmentyy voimakkaasti NKG2D reseptorin CIK solut voivat olla vuorovaikutuksessa ligandien kanssa, kuten kiille, kasvainsolujen ja aktivoida toisen messenger signalointireittejä alavirtaan NKG2D reseptoriin. CIK solut sitoutuvat kasvainsoluihin lisäämällä ilmentymistä NKG2D ja sen ligaation stimuloi CIK soluja vapauttamaan perforiini, joka on rooli lysoimalla kasvainsoluissa. Tärkeä seuraus on, että CIK immunoterapia ei saa rajata tiettyyn syöpätyypin tai HLA-haplotyyppi, joka ulottuu välillä mahdolliset potilaat, jotka voisivat hyötyä tällaisesta lähestymistavasta. Lisäksi CIK solut voivat kiertää merkittävä kasvain immuuni paeta mekanismin kasvainsolujen alas-säädellä HLA ilme. Meidän laboratorio on myös vahvistanut, että, lukuun ottamatta CD4 + T-solut, muut CIK solut ilmentävät NKG2D. Näin ollen, odotamme, että suurin osa CIK solut voivat tunnistaa MICA ligandin keuhkojen kasvain solukalvon kautta NKG2D reseptorin ja aktivoituvat tappamaan kasvainsoluja.

kautta yhden tekijän analyysi 222 tapausta edenneen ei-pienisoluisen keuhkosyövän tutkimuksessamme havaittiin, että CIK hoito oli merkittävä vaikutus OS (p = 0,040). COX regressioanalyysi osoitti, että CIK hoitoa voidaan käyttää yhtenä itsenäisen ennustavat tekijät kehittyneitä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita. Tässä tutkimuksessa analysoitiin edelleen tapaukset alaryhmiä ja havaittiin, että potilaat, joilla on korkea MICA ilme oli merkittävästi suurempi selviytymisen hyötyvät CIK hoitoa. Lisäksi COX regressioanalyysi osoitti, että risteyksessä MICA ja CIK tehokkuus, p-arvo on 0,0001, mikä viittaa siihen, että CIK hoito on hyvä vaikutus potilailla, joilla on korkea MICA ilme ja korkea ilmentyminen MICA voidaan käyttää ennustava tehokkuuden CIK hoidon.

Tuloksemme rajoittavat pieni määrä CIK hoidetuista potilaista retrospektiivinen luonne analyysi, vaihteleva määrä hoitojaksoa, ja tutkimus puuttuu arvio lyhyen -term vaikutuksia. Siksi hoito malli MICA ilmaisun ohjattua CIK pitkälle ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita tarvitsee lisätutkimuksia kanssa laajennettu otoskoko edelleen mahdollisille kliinisissä tutkimuksissa.

Yhteenvetona arvioinnissa MICA ilmaisun kasvaimiin soluissa potilailla, joilla on edennyt ei-pienisoluinen keuhkosyöpä auttaisi edelleen määrittämään prognoosi potilaalle. Potilaat, joilla on korkea MICA ilmentävät kasvaimet ovat suhteellisen huonompi ennuste, mutta koska vuorovaikutus aktivoivan reseptorin NKG2D on CIK soluja ja MICA kasvainsoluihin, korkea ilmentyminen MICA voi parantaa tehoa CIK hoidon ja parantaa hengissä. Tämä tarjoaa uuden yksilöllinen hoito tulevia immunoterapian, ja teoreettinen perusta tuleville mahdollisille tutkimukset käyttäen laajennetun otoskoko.

Kiitokset

Kirjoittajat haluavat kiittää Drs Liyuan Zhang ja Weifeng Zhu (Department Patologian, Fujian Cancer Hospital) niiden teknistä neuvontaa ja histologiset havainnot.