PLoS ONE: kasvain-Koulutettu-makrofaagianalyysi korotus Maligniteetti Ihmisen haimasyövän estetään tsoledronihappo Acid
tiivistelmä
aiemmin määritellyn makrofagit korjattu vatsaonteloon nude-hiirten ihon alle ihmisen haiman kasvaimia kuin ” kasvain koulutettu-makrofagien ”(Edu) ja makrofagit talteen hiiristä ilman kasvaimia kuin” naiivi-makrofagien ”(naiivi), ja osoittivat, että Edu-makrofagit edistänyt kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden. Tässä tutkimuksessa, Education ja naiiveja-makrofagien verrattiin niiden kykyyn parantaa haimasyövän maligniteetti solutasolla in vitro ja in vivo. Estävää tehoa tsoledronihappo (ZA) on Edu-makrofagi-tehostettu etäpesäkkeiden määritettiin myös. XPA1 ihmisen haimasyövän soluja Gelatiini sienellä viljeltiin yhdessä Edu-makrofagien lisääntynyt suuremmassa määrin kuin XPA1 soluja viljeltiin naiivien-makrofagien (
P
= 0,014). XPA1 solut altistuvat väliaine kerättiin Edu kulttuuri huomattavasti lisääntymistä (
P
= 0,016) ja oli enemmän muuttoliike stimulaation valmiudet (
P
0,001) verrattuna viljeltyjen syöpäsolujen käsitelty väliaine Naiivi. Mitoosi-indeksi on XPA1 solujen, jotka ilmentävät GFP tumassa ja RFP sytoplasmassa, merkittävästi lisääntynyt in vivo läsnäollessa Education verrattuna Naiivi-makrofagien (
P
= 0,001). Tsoledronihappo (ZA) tappoivat Edu ja naiivi in vitro. Edu edistänyt kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden käytettäessä potilaalle tehdä hiiren malli XPA1 ihmisen haimasyövän solulinjassa. ZA vähensi ensisijaisen kasvaimen kasvua (
P
= 0,006) ja esti etäpesäkkeiden (
P
= 0,025) edistetään Edu-makrofagit. Nämä tulokset osoittavat, että Ö estää tehostettu primaarisen kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden ihmisen haimasyövän aiheuttama Edu-makrofageissa.
Citation: Hiroshima Y, Maawy A, Hassanein MK, Menen R, Momiyama M, Murakami T, et ai . (2014) kasvaimeen Koulutettu-makrofaagianalyysi korotus Maligniteetti Ihmisen haimasyövän estetään tsoledronihappoa. PLoS ONE 9 (8): e103382. doi: 10,1371 /journal.pone.0103382
Editor: Keping Xie, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, Yhdysvallat
vastaanotettu: toukokuu 17, 2014; Hyväksytty: 01 heinäkuu 2014; Julkaistu: 12 elokuu 2014
Copyright: © 2014 Hiroshima et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.
Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.
Rahoitus: Tämä tutkimus tukee osittain National Cancer Institute apurahan CA132971 ja JSPS KAKENHI lupanumeroita 26830081 ja Y. H., 26462070 ja I.E. ja 24592009 on K.T. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.
Kilpailevat edut: Yukihiko Hiroshima, Shinji Miwa, Mako Yamamoto, Shuya Yano ovat sidoksissa Cancer Inc. Mohamed K. Hassanein, Rhiana Menen, Masashi Momiyama, Fuminari Uehara ja Takashi Chishima olivat entisiä sidoksissa cancer Inc. Robert M. Hoffman on palkaton tytäryhtiö cancer Inc. cancer Inc. markkinoi syövän eläinmalleissa. Ei ole muita kilpailevia intressejä. Ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena online-oppaassa tekijöille.
Johdanto
Kasvaimen mikroympäristölle (TME) näyttelee merkittävä rooli määritettäessä kasvaimen käyttäytymisen. Olemme aiemmin osoittaneet, että stroomasolut ovat tarpeen etäpesäkkeitä esiintyy [1]. Toinen osoitus roolin TME vaikuttamaan tuumorin käyttäytyminen on ortotooppinen implantaatio hiirimalleissa ehjä kasvainkudoksen, mukaan lukien koko kasvaimen strooman, joka johtaa paljon suurempaan metastaattinen verrattuna sellaisiin ortotooppisten injektion syöpäsolujen yksin, jossa etäpesäke on harvinaista [2], [3].
kasvaimeen liittyvät makrofagit on osoitettu korreloivan huonon ennusteen useissa tutkimuksissa [4], [5]. Makrofagit voivat edistää syövän etenemistä krooninen tulehdus, matriisi remontin edistäminen kasvaimeen soluinvaasiota, intravasation, angiogeneesi, ja kylvö kaukaisiin sivustoja [6]. Vascular adheesiomolekyyli 1 (VCAM-1) edistää keuhkosyövän etäpesäke rintasyövän kytkettynä syöpäsolujen keuhkometastaasitestissä liittyviä makrofagien [7], [8].
laboratoriossa aikaisemmin verrattuna primaarinen ja metastaattinen kasvaimen kasvua lisäyksen jälkeen joko kasvaimen naiivi-makrofagit (naiivi) tai makrofageja aiemmin altistuneet haimasyövän hiirimallissa, joita kutsutaan kasvain koulutettuja-makrofagit (Edu) [8].
aikaisemmat tulokset viittaavat että makrofagit vaikutus kasvaimia ja kasvaimet vaikuttavat makrofageja, ja että Edu-makrofagit edistää syövän etenemistä [8].
Tässä tutkimuksessa, Education ja naiivi-makrofagien verrattiin niiden kykyyn edistää pahanlaatuisen solutasolla in vitro ja in vivo. Teho tsoledronihappo (ZA) estävän Edu-makrofagi-tehostettu maligniteetti määritettiin myös.
Materiaalit ja menetelmät
Solun viiva ja viljelyolosuhteet
XPA1 ihmisen haiman syövän solulinjaa käytettiin tässä tutkimuksessa, joka oli ystävällinen lahjoitus tri Anirban Maitra Johns Hopkins University [6] – [16]. XPA1 solulinjaa transformoitiin vakaasti ilmentämään GFP tumassa ja RFP sytoplasmassa [9], [17], [18]. Soluja ylläpidettiin RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS) ja 2 mM glutamiinia (Gibco-BRL, Life Technologies Inc., Grand Island, NY). Kaikki alustat täydennettiin penisilliiniä ja streptomysiiniä (Gibco-BRL). Soluja viljeltiin 37 ° C: ssa 5% CO
2 [19].
Eläimet
NOD /SCID-hiiriin ja atyymisissä nude-hiiriin (
nu /nu
), 4-6 viikkoa, (AntiCancer Inc., San Diego, CA) käytettiin. Siirtogeenisiä nude C57 /B6-GFP-hiiriä (AntiCancer, Inc., San Diego, CA). ilmentävät vihreää fluoresoivaa proteiinia (GFP) valvonnassa kanan β-aktiinin promoottori ja sytomegaloviruksen tehostajan käytettiin myös [20] – [23]. Hiiret pidettiin este laitokseen alle HEPA-suodatus. Hiiriä ruokittiin HÖYRYKARKAISTUT laboratorio jyrsijä ruokavaliota. Kaikki kirurgiset toimenpiteet ja kuvantamisen suoritettiin eläimet nukutetaan injektoimalla lihakseen 0,02 ml liuosta, jossa oli 50% ketamiini, 38% ksylatsiinia, ja 12% asepromatsiinia maleaatti. Kaikki eläinkokeet tehtiin syöpää ehkäisevällä Institutional Animal Care ja Käytä komitea (IACUC) -protokollan hyväksytty erityisesti tätä tutkimusta ja noudattaen päämiestensä ja menettelyt hahmoteltu National Institute of Health Guide for Care ja eläinten käyttöä alle Assurance Number A3873-1.
ihonalainen kasvain solun istutuksen
Ihmisen XPA1 dual-väri haimasyöpä solut kerättiin trypsinisaatiolla ja pestiin kaksi kertaa seerumittomassa elatusaineessa. Solut (2 x 10
6 100 ul seerumittomassa alustassa) injektoitiin ihon alle 30 minuutin kuluessa korjuu, yli kyljet siirtogeenisissä nude C57 /B6-GFP hiiriä tai siirtogeenisissä
nu /nu
hiiret välillä 4 ja 6 viikon iässä. Ihonalainen kasvainten annettiin kasvaa 2-4 viikon ajan, kunnes riittävän suuri lisäkokeita tai myöhemmin potilaalle tehdä istutusta.
Reaaliaikainen kuvantaminen välistä vuorovaikutusta isännän makrofageissa ja syöpäsolujen elävien hiirten
sen jälkeen, kun hiiret nukutettiin kuten edellä on kuvattu, kaaren muotoinen viilto tehtiin vatsan iho, ja sitten ihonalaisessa sidekudoksessa erotettiin vapauttaa ihon läppä vahingoittamatta ylävatsan kraniaalikaudaali valtimon ja laskimon [24]. Iho-läppä levitettiin ja kiinnitetään tasaiselle alustalle. XPA1-GFP-RFP-soluja (1 x 10
6 100 ui väliaineessa) on sirotellaan ihon pinnalle-läppä-hiirten (Fig. 1A) [25]. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin, sisäpinta ihon-läppä oli suoraan havaittu FV1000 konfokaalimikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani), jossa heräte puolijohde laserit 473 nm GFP ja 559 nm RFP heräte. Fluoresenssi kuvat saatiin käyttämällä 20 x /1,0 XLUMPLFLN tavoite [26]. Määrä fagosytoituvat ja mitoosi syövän solut laskettiin, ja keskimääräinen lukumäärä laskettiin viidestä näkökentät 20-kertaisella suurennuksella.
(A) Kaavio kuvantamisen välisestä vuorovaikutuksesta isännän makrofageissa ja syöpäsoluja live hiirillä. GFP nude-hiirissä ja kaksivärinen XPA1 ihonalainen kasvaimet olivat lähde Edu-makrofagien. GFP karvattomia hiiriä ilman kasvaimia olivat lähde Naiivi-makrofagi. Ihoa läppä levitettiin ja kiinnitetään tasaiselle alustalle. XPA1-GFP-RFP-soluja (1 x 10
6 100 ui väliaineessa) on sirotellaan ihon pinnalle-läppä-hiirillä. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin, sisäpinta ihon-läppä on suoraan havaittu FV1000 konfokaalimikroskoopilla (Olympus). Mittaviivat: 10 mm. GFP isäntä makrofagien ja dual-väri XPA1 syövän soluja, havaittiin Aiemmin hoitamattomat-makrofagi-hiiret (B) ja Edu-makrofagi-hiiret (C). Fagosytoituvat syöpäsolut (valkoinen nuolenpäitä) ja mitoosi syöpäsolujen (keltainen nuolenpäitä) havaittiin molemmissa ryhmissä. Keskiarvot phagocytosized ja mitoosi syöpäsolujen laskettiin neljä kenttää, jossa on 20-kertainen suurennus tavoite (D ja E). Mitoosin huomattavasti syöpäsoluissa hiirten Edu-makrofagien verrattuna syöpäsoluja hiirillä kanssa Naiivi-makrofagien (
P
= 0,001). Lisää fagosytoosia syöpäsolujen yleensä voidaan havaita hiirissä Aiemmin hoitamattomat-makrofagien, (
P
= 0,061). Mittaviivat: 20 pm.
makrofaagianalyysi sato
Siirtogeenisten nude C57 /B6-GFP hiirten dual-väri XPA1-GFP-RFP ihonalainen kasvaimet olivat lähde Edu-makrofagien . Siirtogeeniset nude C57 /B6-GFP hiiret ilman kasvaimia olivat lähde Naiivi-makrofageissa. Sen jälkeen, kun hiiret nukutettiin kuten edellä on kuvattu, 6 ml RPMI ruiskutettiin vatsaonteloon kunkin hiiren käyttäen 10 ml: n ruiskuun ja hiiriä sekoitettiin varovasti 5 minuutin ajan. Ruiskua käyttöön uudelleen, ja kaikki RPMI elatusaine poistettiin ja pantiin muoviseen petrimaljaan. Maljoja inkuboitiin sitten 37 ° C: ssa 4 tunnin ajan. RPMI poistettiin sitten ja kukin levy pestiin 10-15 kertaa 10 ml: lla PBS: ää, tai kunnes kaikki punasolut, fibroblastit ja muut solujätteet poistettiin. Levyt visualisoitiin nojalla IX71 fluoresenssimikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani), jotta vahvistaa läsnäoloa GFP-proteiinia ekspressoivien makrofagit. Makrofagit kaavittiin petrimaljaan, käyttäen kumi lastalla, kerätään pesu 10 ml PBS: ää ja sentrifugoitiin 850 rpm 10 minuuttia. PBS poistettiin sitten ja makrofagit suspendoitiin uudelleen RPMI.
Proliferaatiomääritys 3D-kulttuuri
Naïve- tai Edu-makrofagit olivat viljeltiin yhdessä dual-väri XPA1-GFP-RFP syöpäsoluja, mutta ne erotettiin toisistaan Gelatiini sienellä (Pharmacia valkoinen neliö: Edu, valkoinen kolmio: kontrolliryhmään. *
P
0,05, **
P
0,01 (vs. kontrolliryhmä). (E) Haavoittui alueet mitattiin 72 tunnin jälkeen raapiminen yksikerroksista syöpäsolujen ja hoidon väliaine kunkin makrofagi. (F) Edu-makrofagi-väliaine käsiteltyjä soluja kattaa huomattavasti suuremman haavan alueella kuin muissa ryhmissä jokaisessa aikapisteessä. Kartat ovat kuvaajia haavoittui alueiden jokaisen ryhmän mitattuna ImageJ kolme sattumanvaraisesti alueita 3 päivää. Kolmessa toistetuista kokeista esitetään keskiarvona ± SD (n = 5). *
P
0,05, **
P
0,01 (vs. kontrolliryhmä).
MTS runsaudenmäärityksessä
XPA1 GFP-RFP solut eksponentiaalisen kasvun vaiheen trypsinoitiin, jolloin saatiin solususpensio, ja ympättiin 96-kuoppalevyille (1 x 10
4 solua /kuoppa) kolmena kappaleena. Elatusaine kerättiin kunkin makrofagien viljeltiin RPMI 1640 10% FBS: ssa 72 tuntia. Elatusaine poistettiin kaivoista XPAI-GFP-RFP soluja ja elatusaine lisättiin sen jälkeen, kun solujen annettiin kiinnittyä 24 tunnin ajan. Sen jälkeen, kun levyjä inkuboitiin 37 ° C: ssa, 5% CO
2, MTS-määritys suoritettiin eri ajankohtina (0-72 h) käyttäen Cell Titer 96 määritystä (Promega, Madison, WI, USA) mukaisesti valmistajan ohjeita.
Haavan paranemista määritys
Soluja kasvatettiin 24-kuoppalevyillä 500 ul väliaineessa kuoppaa kohti konfluenssiin asti saavutettiin. Haava tehtiin raaputtamalla solut 10 ui pipetin kärki PBS, jota seurasi korvautuminen kasvualusta joka korjattiin talteen kustakin makrofagin tyypistä viljeltiin RPMI 1640 10% FBS: ssa 72 tuntia. Kontrolliryhmä sai saman tilavuuden tuoretta viljelyalustaa ilman seerumia. Haavoittunut yksikerroksista oli photomicrographed kanssa IX71 fluoresenssimikroskoopilla eri ajankohtina (0-72 h) jälkeen ei naarmuunnu. Solumigraation arvioitiin mittaamalla aukon koot useita kenttiä Image J (National Institute of Mental Health, Bethesda, MD).
Sytotoksisuusmääritvs
Naïve- tai Edu-makrofagit ympättiin 6 -kuoppaiset levyt (2 x 10
5 solua /kuoppa). Tsoledronihappo (ZA) (Novartis Pharmaceuticals Corporation, NJ, USA) lisättiin kuhunkin kuoppaan jälkeen solujen annettiin kiinnittyä 24 tunnin ajan. Lopulliset pitoisuudet ZA olivat seuraavat: 0, 10, 50 ja 100 uM. 48 tunnin kuluttua, ZA sisältävä väliaine poistettiin ja korvattiin kasvualustaan 24 tuntia. Sen jälkeen, kun kukin kuoppa pestiin 5 kertaa 3 ml: lla PBS: ää, määrä GFP-proteiinia ekspressoivien makrofaagien laskettiin kanssa IX71 fluoresenssimikroskoopilla. Keskimääräinen makrofagi määrä laskettiin viidestä näkökentät 10-kertainen suurennus. Kaikki mittaukset tehtiin kolmena kappaleena.
Orthotopic kasvaimen istutuksen
Pieni 6- 10 mm poikittainen viilto tehtiin läpi vasemmalta laidalta hiiren ihon läpi ja vatsakalvon. Pyrstö haima paljastettiin tämä viilto ja yksi kasvainpala (3 mm
3) peräisin XPA1 kaksivärinen ihonalainen kasvain ommeltiin pyrstö haima käyttää 8-0 nylon kirurgisia ompeleita (Ethilon; Ethicon Inc., NJ, USA). Päätyttyä, pyrstö haima palautettiin vatsan, ja viilto suljettiin yhteen kerrokseen käyttäen 6-0 nylon kirurgisia ompeleita (Ethilon) [2], [27] – [29].
ZA käsittely XPA1 ortotooppisten nude-hiirimallissa
nude-hiiriin ortotooppisesti istutettiin XPA1-GFP-RFP soluja, kuten edellä on kuvattu. Hiiriä käsiteltiin seuraaviin ryhmiin: (1) suolaliuosta (ajoneuvo /kontrolli), (2) Naïve- makrofageja (3) Edu-makrofagit, (4) Edu-makrofagien + ZA. Makrofagit (1 x 10
6 solua 200 ul: ssa PBS: ssä) injektoitiin ip kerran viikossa, kuten aikaisemmin on kuvattu [8]. ZA injektoitiin ihonalaisesti päivässä päivästä 21 tuumorin implantaation jälkeen ja 4 viikkoa. Jokainen hoitoryhmään mukana 8 on kasvain. Mitään merkittäviä vaikutuksia kehon painoon, sairastuvuus tai vakavaa myrkyllisyyttä ei havaittu mitään hoitoa käsivarteen. Eläimet tehtiin laparotomiaa 7 viikon, ja molemmat ensisijainen kasvaimia ja etäpesäkkeitä oli kuvattu käyttäen OV100 säädettävä suurennus pieneläinlääketieteen Imaging System (Olympus, Tokio, Japani) [24] ja punnittiin ja otettiin talteen analyysiä varten.
Tietojenkäsittely ja tilastollinen analyysi
PASW Statistics 18,0 (SPSS, Inc.) käytettiin kaikkiin tilastolliset analyysit. Studentin t-testiä käytettiin vertaamaan jatkuvia muuttujia kahden ryhmän välillä. Varianssianalyysi malleja käytettiin vertaamaan useita ryhmiä. P-arvo on 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitseviä kaikissa vertailuissa.
Tulokset ja keskustelu
Edu-makrofagit stimuloivat syöpää solu mitoosia in vivo
Dual-color XPA1-GFP -RFP-solut (1 x 10
6) on sirotellaan pinnan hiiren ihon läppä. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin, sisäpinta ihon-läppä on suoraan havaittu FV1000 konfokaalimikroskoopilla (Olympus) (Fig. 1A). GFP-proteiinia ekspressoivien isäntä makrofagien ja dual-väri XPA1 syövän soluja, havaittiin Aiemmin hoitamattomat-makrofagi-hiirissä (Fig. 1 B) ja Edu-makrofagi hiirissä (Fig. 1 C). Cancer-solun mitoosia merkitsevästi enemmän syöpäsoluja Edu-makrofagi hiirissä verrattuna syöpäsoluja Naiivi-makrofagi hiiriä (
P
= 0,001) (Kuva. 1 E). Fagosytoosin syöpäsolujen oli yleensä suurempi Naiivi-makrofagi hiirissä verrattuna Edu-makrofagi hiiriä (
P
= 0,061) (Kuva. 1 D).
Edu-makrofagit stimuloivat syöpäsolujen lisääntymistä
in vitro
Naïve- tai Edu-makrofagi viljeltiin ja kaksivärinen XPA1 syöpäsolujen erotettu toisistaan Gelatiini sienellä (Fig. 2A). Neljäkymmentä kahdeksan tuntia myöhemmin, konfokaalimikroskopialla kuvat saatiin pinnasta 200 pm syvyys välein 1 um ja pinottiin pitkin Z-akselia (Fig. 2B). Edu-makrofagi-käsiteltyjen syöpäsolujen lisääntynyt suuremmassa määrin kuin Aiemmin hoitamattomat-makrofagi-käsiteltyjen syöpäsolujen (
P
= 0,014) (Fig. 2C). Esikäsitelty väliaine Edu-makrofagien stimuloi syöpäsolujen lisääntymistä verrattuna ohjata käsittelemättömiin syöpäsoluja (24 h;
P
= 0,001, 48 h;
P
= 0,003, 72 h;
P
= 0,012, vastaavasti). Sitä vastoin ei ollut merkittävää eroa kunnostetun alustan välillä Aiemmin hoitamattomat-makrofagien ja tuoretta väliainetta proliferaatioon XPA1 soluja (Fig. 2D).
Edu-makrofagi-conditioned-väliaine-käsiteltyjen syöpäsolujen kattaa huomattavasti suurempi haava-alueella kuin käsittelemätön kontrolli soluja jokaisessa aikapisteessä (24 h;
P
= 0,008, 48 h;
P
= 0,002, 72 h;
P
0,001 , vastaavasti) (kuvio. 2E ja 2F).
ZA estää XPA1 haiman syövän etenemisen aiheuttama Edu-makrofagien
Edu-makrofagien edistänyt primaarikasvaimen kasvun verrattuna kontrolliin ja Naïve- makrofagi (kontrolli
P
= 0,026, Naiivi;
P
= 0,03). Edu-makrofagit myös edistänyt etäpesäke vertailuryhmän ja Naiivi-makrofagit (kontrolli;
P
= 0,012, Naiivi;
P
= 0,015) (Kuva. 3C-E). ZA on osoitettu tappavan makrofagien ja estää etäpesäkkeiden [30], [31]. Määrä sekä Naïve- ja Edu-makrofagien merkittävästi vähentää ZA jokaisen annoksen in vitro (Fig. 3A ja 3B). Eräässä ortotooppisten hiirimallissa haimasyöpä, ZA merkittävästi tukahdutti Edu-makrofagi, stimuloi kasvaimen kasvua, ja estää etäpesäkkeitä verrattuna hiirillä, joita hoidettiin vain Edu-makrofagit (primaarikasvaimen;
P
= 0,006, etäpesäke;
P
= 0,025) (Kuva. 3C-E).
(A) edustaja fluoresenssi kuvia Edu-makrofagien jälkeen ZA hoidon. Mittaviivat: 10 um. (B) Pylväsdiagrammeja määrä Naïve- tai Edu-makrofagien jälkeen ZA hoidon in vitro. Numerot Sekä Naïve- ja Edu-makrofagit hoidettiin ZA vähensi merkittävästi jokaisen annoksen. ZA tappoivat Naiivi ja Edu annoksesta riippuvaisella tavalla. **
P
0,01 (vs. kontrolliryhmä). (C) Elintensisäinen kuvantaminen XPA1-RFP kasvainta kantavien hiirten päättyessä kokeen. Mittaviivat: 10 mm. (D) Ensisijainen kasvain paino Edu-makrofagi-käsitellyistä hiiristä olivat merkittävästi lisääntynyt verrattuna valvoa tai Naiivi-makrofagi-käsiteltyihin hiiriin (kontrolli:
P
= 0,026; Naiivi:
P
= 0,03, vastaavasti). Primaarikasvaimen paino Edu-makrofagi + ZA-käsitellyistä hiiristä olivat merkittävästi laski verrattuna Edu-makrofagi-käsiteltyihin hiiriin (
P
= 0,006). *
P
0,05, **
P
0,01. (E) Minkään etäpesäke paino Edu-makrofagi-käsitellyistä hiiristä olivat merkittävästi lisääntynyt verrattuna valvoa tai Naiivi-makrofagi-käsiteltyihin hiiriin (kontrolli;
P
= 0,012, Naiivi;
P
= 0,015 , vastaavasti). Ei etäpesäke havaittu Edu + ZA-käsitellyissä hiirissä. Oli merkittävä ero Edu ja Edu + ZA-käsiteltyihin hiiriin (
P
= 0,025). *
P
0,05.
Aiemmassa tutkimuksessa, GFP-proteiinia ekspressoivien makrofagien GFP siirtogeenisiä nude-hiirissä, joissa on ihon alle BxPC3-RFP ihmisen haiman kasvainten käytettiin lähteenä Edu-makrofagien ja verrattuna Naiivi-makrofagien siirtogeeniset GFP paljaisiin hiiriin ilman kasvaimia. Kun Education tai naiiveja-makrofagien sitten istutettiin nude-hiirissä, joilla BxPC-3-RFP kasvaa ortotooppisesti, Edu-makrofagien stimuloi kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden suuremmassa määrin kuin Aiemmin hoitamattomat-makrofagit [8].
Eräässä toisessa edellisessä tutkimuksessa ihmisen perifeerisen-veren mononukleaarisia soluja altistettiin väliaine BxPC-3 ihmisen haimasyövän soluja, ja normaali tai korkea glukoosipitoisuus. Haiman syöpäsoluissa koulutettuja makrofagien olla invasiivisia in vitro, mikä on edelleen parantaa hyperglykemiaa [32].
Toisessa edellisessä tutkimuksessa, ZA vähensi makrofagien aiheuttama invasiivisuus rintasyövän soluissa. ZA vaikutti makrofagit mutta ei syöpäsolut [33].
Toinen edellinen tutkimus osoitti, että sekä vatsakalvon ja rinta-kasvaimeen liittyvät makrofagit nopeasti otti ZA in vivo, vielä viittaa makrofagit ovat kohteena antituumoritehoon ZA [34].
toisessa edellisessä tutkimuksessa, ZA suoraan aiheutti apoptoosin haimakarsinooma- soluihin ja esti niiden invasiivisuus ja sekä tehdä haiman syöpäsoluja alttiimpia T-solujen hyökkäys [35].
Tämä tutkimus käyttää subsellulaarisista kuvantamismenetelmiä olemme aiemmin kehittäneet [36] suoraan kuvan että Edu-makrofagit ovat vähentäneet fagosytoosin kykyä ja voi suoraan simuloida mitoosin syöpäsolujen, kuten visualisoitiin reaaliajassa. Toisin kuin aiemmat tutkimukset, tehokkuuden arvioimiseksi ZA, tässä raportissa käyttänyt potilaalle tehdä metastasoituneen hiirimallissa osoittaa vaikutuksen ZA stimulaatio Edu-makrofagien on etäpesäkkeitä sekä primaarikasvaimen. Esillä olevassa tutkimuksessa, makrofagit eristettiin vatsaonteloon, kasvaimeen, joissa on tai verrokkihiirten, kaukana kasvaimen ja antaa systeemisesti. Tulokset osoittivat, että kasvaimia oli kaukainen vaikutus makrofagien ja päinvastoin, ja että ZA voisi systeemisesti estää tällaisia vaikutuksia.
ZA vähensi Edu stimuloiman primaarikasvaimen kasvun ja etäpesäkkeiden noin säätöarvot viittaa suurten ZA vaikutus oli sen Edu-makrofagit, vaikka suhteellisen vähäinen suora estävä vaikutus kasvaimen itsensä ZA ei voida sulkea pois, kuten on kuvattu aiemmassa tutkimuksessa [35]. ZA on aikaisemmin raportoitu olevan suurempi makrofagien tappava vaikutus kuin muiden bisfosfonaattien ja valittiin siksi tässä tutkimuksessa [37].
Tämä tutkimus osoitti, että Edu-makrofagit edistää maligniteetti. Tämä osoittaa stimuloivaa vaikutusta Edu-makrofagien syövän solun mitoosia ja myöhemmät leviämisen sekä etäpesäkkeitä. Kuten edellä on todettu [8], kasvaimet voivat vaikuttaa makrofageja, mikä puolestaan voi vaikuttaa kasvaimia. Syövän etenemistä aiheuttama Edu-makrofagien estyi ZA, joka esti Edu-makrofagi-tehostettu primaarikasvaimen kasvun ja esti etäpesäke. Mekanismeja, joilla Edu-makrofagit stimuloivat syöpään solujen lisääntymistä ja etenemiseen tehdään tulevan tutkimuksen.
Kiitokset
Sitoutuminen. Tämä paperi on omistettu A. R. Moossa, M. D.