Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

SPARC on Soluvälitilan proteiini osallistuu kudoksen uudelleen, solujen vaeltamiseen ja angiogeneesiä, kun taas forkhead laatikko P3 (FOXP3) proteiini toimii transkriptiotekijä osallisena immuunisolujen asetuksessa . Sekä SPARC ja FOXP3 voi olla antituumorigeenistä rooli syövän etenemiseen. Tarkoituksena oli selvittää, SPARC, FOXP3, CD8 ja CD45RO ilmaisun arvot liittyvät peräsuolen syöpä (CRC) vaiheessa tauti tulos ja pitkän aikavälin syöpäspesifisessä eloonjäämisen (CSS) vaiheessa II ja III CRC.

menetelmät ja havainnot

SPARC ilmentyminen vahvistettiin alussa 120 pariksi normaalissa ja vaiheen I-IV CRC. Myöhemmin noin 1000 pariksi potilaan näytteitä vaiheen II tai III CRC in kudossiruina värjättiin SPARC, FOXP3, CD8 tai CD45RO. Suhteellinen vaarat mallinnus arvioida korrelaatioita näiden markkereiden ja kliinis tiedot, kuten sairauksien lopputulos ja syövän erityinen eloonjäämisen (CSS). Sekä SPARC ja FOXP3 ilme oli myös merkittävästi suurempi CRC kuin normaali paksusuoli (p 0,0001). Korkea SPARC ilme korreloi hyvän sairaus tulos (≥60 kk ilman tauti uusiutuu, p = 0,0039) ja parempi pitkäaikainen CSS II vaiheessa CRC ( 0,0001). Vaiheessa III CRC, korkea SPARC ilmaisu korreloi paremmin pitkäaikainen CSS (p 0,0001) ja vähemmän adjuvanttihoitoa käyttö (p = 0,01). Korkea FOXP3 korreloivat hyvän sairaus tulos, parempi pitkäaikainen CSS ja vähemmän adjuvanttihoitoa käytettäväksi vaiheessa II (p 0,0037, 0,0001 ja p = 0,04 vastaavasti), mutta ei vaiheessa III CRC. Korkea CD8 ja CD45RO ilmaisun korreloi paremmin taudin tulos vaiheessa II CRC, ja parempia CSS, mutta erot eivät olleet yhtä merkitty SPARC ja FOXP3.

Johtopäätökset

Nämä tiedot viittaavat siihen, että korkea SPARC ja FOXP3 liittyvät paremman tautien tulos vaiheessa II CRC ja ne voivat olla prognostiset indikaattorit CSS. Edelleen arvioitaessa, onko näitä markkereita ennustaa potilaiden suuri riski toistumisen vaiheen II CRC ja toiminnan tutkimuksessa nämä vaikutukset ovat käynnissä

Citation: Chew A, Salama P, Robbshaw A, Klopčič B, Zeps N, Platell C , et ai. (2011) SPARC, FOXP3, CD8 ja CD45 Korrelaatio tauti uusiutuu ja pitkäaikaissairaus vapaa elinaika in peräsuolen syövän. PLoS ONE 6 (7): e22047. doi: 10,1371 /journal.pone.0022047

Editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kiina

vastaanotettu: 10 tammikuu 2011; Hyväksytty: 15 Kesäkuu 2011; Julkaistu: 26 heinäkuu 2011

Copyright: © 2011 Chew et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tutkimus tehtiin tuella Fremantle Hospital Medical Research Foundation ja National Health ja Medical Research Council (NHMRC # 458755). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on erittäin yleistä Länsi väestön ja yksi johtavista syövän syiden sairastuvuus ja kuolleisuus kaikkialla maailmassa [1], [2]. Ilman ole melanoomaa ihosyöpä, CRC on yleisin syöpä Australiassa ja toiseksi yleisin kuolinsyy johtuu pahanlaatuisen sairauden [3], [4]. Amerikkalainen sekakomitea Cancer (AJCC) kehitti yleisesti käytetty lavastus järjestelmä määrittää potilaan ennustetta. On kuitenkin päällekkäisiä 5 vuoden eloonjäämisluvut välillä vaiheiden II ja III CRC [5], [6]. Vaihe III syövät ovat osoittaneet imusuonten leviäminen taas vaiheessa II syöpiä on kasvaimia lokalisoitu suolen limakalvolla. Osa II vaiheen kasvaimet voivat kuitenkin olla myös micrometastases että jäädä havaitsematta. Ottaen huomioon tämän, huomioon biologiset ominaisuudet kasvain, kautta tunnistaminen ennakoivia biomarkkereita, tauti määrin, voi antaa tarkemman keino korreloivat syövän vaiheessa tauti lopputulokseen, ja mahdollistaa soveltaminen sopivin hoidoista yksittäisille potilaille.

Kasvainten soluttautua T-lymfosyyttejä, jotka ilmentävät CD8 ja CD45RO on osoitettu korreloivan paremmin CRC tulokset [7], [8], [9], [10]. Läsnäolo suuritiheyksisen CD8

+ T-solujen liittyy myös ilman kasvaimen invaasio, aikaisemmassa taudin vaiheessa ja parantaa potilaan selviytymistä [11], [12]. Korkea CD45RO

+ T-solujen tiheydet imusolmuke etäpesäke ja kasvainten CRC myös liittää vähemmän kasvaimen invasiivisuus, alempi taudin vaiheessa ja paremman potilaan selviytymisen [9], [12]. Kaksi muuta mahdollisia biomarkkereita kiinnostuksen synnyssä ja ennusteen CRC ovat erittyvän proteiinin Happamat ja Runsaasti kysteiiniä (SPARC) ja forkhead laatikko P3 (FOXP3), koska ne ovat myös molemmat erittäin ilmaistu pahanlaatuisia sairauksia ja on osoitettu merkittävästi korreloivan taudin lopputulos.

SPARC on Soluvälitilan glykoproteiini, joka on mukana kudoksen uudelleen, haavan, solujen vaeltamiseen ja angiogeneesiin [13], [14], [15], [16]. Se ilmaistaan ​​useissa kudoksissa, erityisesti vahingoittuneiden kudosten, joissa soluväliaineen (ECM) remodeling on tarpeen vasteena vauriolle [17]. Korkea SPARC ilme on liittynyt parannettu kasvaimen kasvua, etäpesäkkeitä ja huono sairauden ennusteeseen oli erilaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia, mukaan lukien melanooma, rinta- ja ruokatorven syöpiä [6], [18], [19]. SPARC on myös liitetty paksusuolen polyyppi kehittämiseen ja CRC kasvaimen etenemiseen kautta sääntelyn oksigenaasia-2 (COX-2) [20] ja transformoiva kasvutekijä beeta-1 (TGF-1) [21]. Nämä ovat mukana asetuksessa, ja erittely, ECM ympäröivän syöpäsoluja. Vuonna munasarjasyöpiä kuitenkin korkeat SPARC ilmaisu arvot liittyvät hyvän ennusteen [22]. Tämä korrelaatio on seurausta SPARC kykyä alas-säädellä makrofagien värväyksen tuumoripaikkaan ja tuotantoa ja toimintaa interleukiini (IL) -6, prostanoideja ja matriksimetalloproteinaasien pienentää liittyvän tulehduksen [23].

FOXP3 on myös biologinen markkeri kiinnostava ja avain transkriptiotekijä valvoa sääntelyn T-solu (Treg) kehitystä ja toimintaa. Tregs tukahduttaa aktivointi immuunijärjestelmän, mikä ylläpitää immuunijärjestelmän homeostaasiin ja toleranssi omia antigeenejä. Tällöin kuitenkin, nämä solut voivat estää kasvaimen vastaisen immunologisen vasteen vähentämällä sytotoksisten T-solujen aktiivisuutta suoraan solu-solu-kontakti, tai sytokiinien [24]. Suora yhteys läsnäolon Tregs ja etenemisen munasarjasyöpä on osoitettu, missä kasvain FOXP3 + Tregs esti tuumorin immuniteetin ja osaltaan pienentää selviytymisen [25]. Rintasyövän, kasvuun Treg väestöstä, sekä perifeerisen veren ja kasvainkudoksessa, on myös raportoitu, ja äskettäisessä tutkimuksessa osoittanut korrelaatiota intratumoraalisesti tunkeutumisen FOXP3 + Tregs rintasyövän ja riski myöhään taudin uusiutumisen [26]. Koska keskeinen osuus FOXP3 ja Treg toiminto, ilmaus FOXP3 kasvaimen solut voivat edustaa uutta mekanismia, jolla syöpien immunosuppressiivisten paeta tuhoa.

Tässä tutkimuksessa selvitettiin SPARC ja FOXP3 II vaiheessa ja III CRC kudosten ja verrata ennusteen arvioinnissa vastaan ​​tunnetun CRC ennustetekijöitä markkereita CD8 ja CD45RO jotka ilmaistaan ​​kasvaimeen infiltroituvien T-lymfosyytit. Nämä on osoitettu korreloivan paremmin CRC sairauden lopputulos [7], [8], [9], [10]. Läsnäolo suuritiheyksisen CD8

+ T-solujen liittyy ilman kasvaimen invaasio, aikaisemmassa taudin vaiheessa ja parantaa potilaan selviytymistä [11], [12].

Tämän tutkimuksen tavoitteena olivat onko SPARC ja FOXP3 ilmaisun arvot liittyvät CRC vaiheessa tauti tulos ja pitkän aikavälin syöpää erityisiä selviytymisen vaiheessa II ja III CRC ja vertasivat ennusteen arvioinnissa näiden kahden markkereita vastaan ​​tunnetun ennustetekijöitä CRC markkereita CD8 ja CD45RO .

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Eettinen hyväksyntä tutkimuksen saatiin Human Research Ethics komitean Etelä Metropolitan Area Health Services ja Sir Charles Gairdner sairaala Human Research Ethics komitea. Kaikki potilaat tarjoavat kudosta kudos microarray allekirjoittivat suostumuslomakkeen ennen kirurgista poistoa suoliston syöpä, jotta tämä tutkimustoimintaan.

Potilaan tiedot

Väestörakenteen kerättiin takautuvasti kaikkiin potilaita patologian kirjaa, ja tietoja tautikohtaisiin eloonjäämisen saatiin Syöpärekisterissä Länsi-Australiassa. Kaikilla potilailla oli vähintään seurannan 60 kuukauden tai kuolemaan asti. Tiedot käytöstä adjuvanttihoitoa kanssa fluorourasiilin /leukovoriinin-pohjaiset hoidot leikkauksen jälkeen saatiin sairaalan potilastietoja. Potilaiden katsottiin olleen hyvän sairaus lopputulokseen, jos ei ollut uusiutunut 60 kuukauden kuluessa diagnoosista, kun taas potilaat, joilla oli uusiutunut 60 kuukauden kuluessa diagnoosista, tai oli kuollut sairauden, katsottiin olleen huono sairaus tulos .

Alustava SPARC arviointi

SPARC tasot alun perin arvioitiin histologista osissa AJCC vaiheen I-IV CRC kudokseen onko siellä oli yhdessä CRC ja jossa solut SPARC ilmaistiin. Tämä sisältyi näytteitä (n = 120) kerättiin 464 potilaan kohortin diagnosoitu CRC vuosina 1996 ja 2002.

Tissue mikrosiru (TMA) B

rakentaminen TMA tässä tutkimuksessa käytettyjen on aiemmin on kuvattu [27]. TMA lopussa noin 1000 tapauksia kunkin vaiheen II ja III CRC arkistointia kudosnäytteitä potilasta, joilla oli diagnosoitu CRC aikana 1990-1999 klo Sir Charles Gairdner Hospital. Jokainen tapaus koostui kahdesta 1 mm halkaisijaltaan kasvainkudoksen ydintä ja lisäksi 1 mm halkaisijaltaan ydin otettu histologisesti normaalin paksusuolen limakalvo.

Arvio SPARC ilmentyminen oli toteutettujen 233 potilaalla on AJCC vaiheen II ja 125 AJCC vaiheen III CRC. T-solujen tiheyden analyysi FOXP3, CD8 ja CD45RO oli peräisin suuremman potilaan kohortin saman arkistoitu AJCC vaiheen II ja III CRC näytteet, jotka on kuvattu aikaisemmin [28].

neljä mikrometriä paksu formaliinilla parafiiniin upotettujen leikkeiden päässä TMA oli korkean lämpötilan antigeeni haku 1 mM EDTA (pH 8) ja 10 mM sitraattipuskuria (pH 6). Ei-spesifistä värjäytymistä estettiin. Ensisijainen vasta anti-SPARC (1: 200; hematologinen Technologies Inc, Vermont, USA), anti-CD8 (klooni C8 /144B, käyttövalmis, DakoCytomation, Heverlee, Belgia), CD45RO (klooni UCHL1, käyttövalmis; DakoCytomation) ja anti-FOXP3 (1:100; Abcam, Cambridge, MA, USA) käytettiin, jossa on inkuboitu yön yli 4 ° C: ssa. Pesun jälkeen leikkeitä inkuboitiin 1:02 laimennetun biotinyloidun linkki universaali vasta-aine ja streptadvidin-HRP ratkaisut (Universal LSAB + kit, DakoCytomation Carpinteria, CA) 30 min. Väri kehitettiin inkuboimalla 3,3-diaminobentsidiiniä (DAB) liuos (Substrate Kromogeeni System, DakoCytomation, Carpinteria, CA) ja leikkeitä vastavärjättiin Mayers hemotoksyliini- ja peitettiin Depex. Värjäys ilman primaarista vasta-ainetta käytettiin negatiivisena kontrollina. Kuvat otettiin käyttäen digitaalikameralla (Nikon DS-L1) kirkkaan kentän käännettyä mikroskooppia (Nikon TE2000-U). Kudossiruina skannattiin käyttäen Aperio ScanScope XT Digital Dia Scanner (Aperio Technologies, CA), joka sijaitsee Australian Microscopy Mikroanalyysi Research Facility Centre for Microscopy, kuvaamista Analyysi, The University of Western Australia

Arvio SPARC ilmaisun

rooli SPARC patogeneesissä erilaisten kasvainten on hyvin kontekstuaalisen. Molemmissa CRC, ja normaali koolonkudoksessa, SPARC todettiin olevan lähes yksinomaan ilmaistaan ​​vimentiinista-positiivisten strooman mesenkyymisolujen. Sen ilmentymistä ei havaittu pahanlaatuisia soluja ja havaittiin vain hyvin pieni määrä normaalin epiteelisolujen. SPARC ilme sisällä pahanlaatuinen ja kontrollikudoksen siksi tarvitaan ohjattavissa määrän strooman kudosta läsnä. Serial kudosnäytteiden otettiin ja värjättiin SPARC ja erityisten mesenkymaalisten solumarkkerille, vimentiinistä (anti-vimentiinista, 30 yli 01; Novocastra Laboratories Ltd). Vimentiinista-positiiviset solut morfologisesti identifioi riippumaton histopathologist koska strooman mesenkyymisolujen. SPARC positiiviset alueet määritettiin käyttäen positiivista pikselimäärä algoritmia (ImageScope v8.0, Aperio Technologies, CA), joka mittaa värjäytymisen intensiteetti positiivinen, vahva-positiiviset ja negatiiviset pikseliä

(

Kuva 1

)

. SPARC ilmentyminen mitata pelkästään alueista vimentiinista-positiivisia soluja ja suhde SPARC on vimentiinista värjäystä jokaista TMA ydin käytettiin ohjaamaan varten strooman kudoksen sisältö kussakin näytteessä. Kaikki SPARC tulokset esitetään suhteessa SPARC on vimentiinista.

SPARC ja vimentiinista värjäys yhdestä potilaasta. Kuvat osoittavat serial DAB-värjätty kudosleikkeiden sekä (A) SPARC ja (C) vimentiinista ja tietokone analysoi kuvia vastaavien DAB värjäystä (B ja C). Sininen edustaa DAB-negatiivinen pikseliä (tummat alueet), oranssi DAB-positiivisia pikseliä ja punainen voimakkaasti DAB-positiivisten pikseliä (vaaleita alueita). SPARC ilmentyminen valikoivasti mitataan ainoastaan ​​alueilla kudos, joka oli myös vimentiinista-positiivisia.

arviointi FOXP3, CD8 ja CD45RO ilmaisun

mittaaminen T-solujen tiheys on aikaisemmin raportoitu [28] ja käyttää kuva-analyysi-ohjelmisto (Imagescope v8.0, Aperio) arvioida määrän FOXP, CD8 ja CD45RO positiivisia soluja (solua per neliömillimetrin). Yksittäiset sydämiä tutkittiin ja selityksin varmistaa, että vain normaalissa paksusuolen epiteelin tai elinkelpoisten kasvainkudoksen sisällytettiin alalla analyysin.

Tilastollinen

Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Opiskelijan paritonta t-testiä ja Kruskal-Wallisin analyysi Dunnin post testejä käytettiin vertailla SPARC ilmaisun ja T-solujen tiheys eri ryhmien välillä, ja P-arvo on 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. SPARC ilmaisun ja T-solujen tiheydet luokiteltiin

korkea

tai

matalan

suhteessa mediaani esitetyn Salama

et al

, 2008 [28]. Kaikki tilastolliset analyysit ja kaaviot luotiin käyttäen Graphpad PRISM® 4.0 ohjelmistopaketti Windows PC (Graphpad Software, San Diego, CA, USA). Kaplan-Meier tuote raja arvio eloonjäänti laskennassa käytetty pitkän aikavälin syöpää erityisiä selviytymisen. Tapahtuma muuttuja oli kuolema CRC (määritelty koodaamalla potilaan kuolintodistuksen). Kaikki elossaoloaika laskettiin alkaen histologisen diagnoosi CRC kunnes joko sattui tai he pysyivät elossa 1

st maaliskuuta 2008.

Tulokset

stroomakasvaimet SPARC ilmentymistä normaalissa paksusuolen kudos vs. vaihe I-IV CRC

SPARC tasoja tutkittiin 120 pariksi normaalissa paksusuolen ja AJCC vaiheiden I-IV CRC. SPARC ilmentyminen oli merkitsevästi enemmän kaikista syövistä verrattuna vastaavaan normaaliin koolonkudoksessa

(

Kuva 2A

).

Oli myös merkitsevästi enemmän CRC vaiheissa II-IV verrattuna vaiheeseen I, mutta ei ollut eroja vaiheiden II-IV

(

Kuva 2B

)

. Kun potilaalla on vaiheen II ja III CRC jaettiin niille, joilla on hyvä tulos (ei uusiutunut 5 vuoden kuluessa diagnoosin) ja huono tulos (uusiutunut 5 vuoden sisällä diagnoosista tai kuoleman tauti), potilailla, joilla on hyvä sairauden lopputulos sekä vaiheen II ja III oli korkeampi SPARC ilmentymisen primaarikasvaimen, mutta nämä löydökset eivät olleet merkittävästi erilaiset

(

Kuva 2C

).

(A) Prosenttia positiivisesti värjättyä solujen AJCC vaiheen I, II, III ja IV CRC verrattuna normaaliin koolonkudoksessa (Con). SPARC ilmentyminen oli merkitsevästi enemmän CRC verrattuna kontrolliin. Oli merkitsevästi suurempi määrä SPARC-positiivisten solujen vaiheen II, III ja IV CRC verrattuna vaiheeseen I (p = 0,092, p = 0,005 ja p = 0,0007 vastaavasti). Tiedot esitetään sirontakuvaajan kanssa keskiarvo ± SEM. (B) P-arvot verrataan prosenttiosuus SPARC-positiivisten solujen vaiheessa I, II, III ja IV CRC. (C) P vertailu- SPARC ilmentymistä vaiheen II III hyvän ja huonon tuloksen CRC. Mitään eroja SPARC tasojen välillä hyvän ja huonon vaiheen II CRC tai hyvän ja huonon vaiheen III CRC. Tiedot ilmaistiin prosentteina positiivisesti värjäytyneiden solujen ± SEM.

stroomakasvaimet SPARC ilmaisun vaiheen II ja III CRC

TMA käytettiin mittaamaan SPARC kohortin 358 vaiheen II tai III CRC potilailla. SPARC ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi kaikissa syövän (vaiheen II ja III yhdistetty) verrattuna normaaliin koolonkudoksessa (p 0,0001;

Kuva 3A

), jossa ei ole tilastollisia eroja havaittu SPARC ilmaisun välillä potilailla, joilla on vaiheen II ja III tauti (

Kuva 3B

). Kun potilaat jaettiin edelleen vaiheen II ja III tauti joko hyvä tai huono tulos, SPARC ilme oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on hyvä sairauden tulos vaiheessa II CRC (p = 0,0039;

Kuva 3C

) kuitenkaan ole tilastollista eroa ei havaittu ryhmien välillä vaiheessa III CRC (

Kuva 3D

).

(A) SPARC on vimentiinista suhde oli merkitsevästi enemmän CRC kudoksessa verrattuna normaaliin paksusuolen kudosta. (B) ei eroa SPARC ilmaisun välillä havaittiin vaiheen II ja III CRC. (C) SPARC oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on hyvä sairauden tulos vaiheessa II CRC, mutta ei (D) vaiheen III CRC. Jokainen piste edustaa yhtä potilasta ja pylväät edustavat mediaanin ± SEM.

T-solujen FOXP3, CD8 ja CD45RO ilmaisun CRC

Tutkitaan T-solujen tiheys käyttämällä TMA on 967 kohortti, FOXP3 oli merkitsevästi korkeampi CRC kudoksessa verrattuna normaaliin paksusuolen limakalvolle (p 0,002,

Kuva 4A

ja

Kuva 5

). Sen sijaan, CD8 ja CD45RO ekspressiotasot olivat merkittävästi alemmat normaalissa paksusuolen limakalvon (p 0,0001,

Kuva 4B ja C

), joka on aiemmin havaintoja. Kun jakamalla näytteet vaiheisiin II tai III, FOXP3 oli merkitsevästi suurempi II vaiheessa verrattuna vaiheen III (p 0,002,

Kuva 4D

). Samoin CD8 ja CD45RO ekspressiotasot olivat merkittävästi suuremmat potilailla, joilla on vaiheen II CRC verrattuna vaiheen III (p 0,0001 molemmille,

Kuva 4E ja F

). Verrattaessa näitä merkkiaineita sairauden lopputulokseen, FOXP3 oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on hyvä verrattuna huono tulos vaiheessa II CRC (p = 0,0037;

Kuva 6A

), kun taas mitään tilastollisia eroja ei havaittu vaiheessa III CRC (

Kuva 6B

). Nämä tulokset olivat samanlaiset CD8 ja CD45RO (p = 0,0195 ja 0,0054 vastaavasti

Kuva 6C, D, E ja F

).

(A) FOXP3 ilmentyminen oli merkitsevästi enemmän CRC kudoksessa verrattuna normaalin paksusuolen kudosta, kun taas (B) CD8 ja (C) CD45RO-ekspressiotasot olivat merkittävästi suuremmat normaalissa paksusuolen kudoksessa verrattuna CRC kudokseen. Kun tarkastellaan T-solujen tiheys ja taudin vaiheessa (D – FOXP3; E – CD8 ja F – CD45RO), ilmaus kaikkien kolmen merkkiaineita olivat merkittävästi suuremmat vaiheen II CRC verrattuna vaiheen III CRC. Jokainen piste edustaa yhtä potilasta ja pylväät edustavat mediaanin ± SEM.

Kuvat osoittavat DAB-värjätty kudosleikkeiden CD8 positiivisten solujen, CD45RO-positiivisten solujen ja FOXP3 positiiviset solut. Kuvat otettiin 20X skannauksen suurennuksella.

Kun jakamalla potilaita hyvän ja huonon sairauksien lopputulos, FOXP3 ilme oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on hyvä sairauden lopputulokseen (A) vaihe II CRC muttei (B) vaiheen III CRC. Samoin CD8 oli myös merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on hyvä sairauden lopputulokseen (C) vaihe II CRC mutta ei (D) vaiheen III, kuten CD45RO in (E) vaiheen II ja (F) vaihe III. Jokainen piste edustaa yhtä potilasta ja pylväät edustavat mediaanin ± SE.

Syöpä-tautivapaalle

Potilaita seurattiin vähintään 60 kuukauden ajan tai kunnes kuolema. Mediaani seuranta-aika oli 60,6 kuukautta potilailla, joilla AJCC vaiheen II tauti ja 41,3 kuukautta potilailla, joilla on vaiheen III tauti. Keskimääräinen SPARC ja FOXP3 ilmentymisen primäärikasvaimissa potilaiden kanssa ja ilman tauti uusiutuu kunakin ajankohtana mitattiin sen määrittämiseksi, tasot korreloivat sairauden uusiutumisen ajan. Vaihe II CRC potilailla, joilla ei tauti uusiutuu, oli merkittävästi korkeammat SPARC tasoilla niiden ensisijainen kasvaimia kaikkina ajankohtina jopa 60 kuukautta, ja eniten pisteitä jopa 138 kuukautta, kuin potilailla, jotka kärsivät sairaudesta toistuminen (

Kuva 7A

). Vaiheessa III CRC, SPARC tasot olivat merkittävästi korkeammat potilailla, joilla ei uusiutunut 84 kuukautta diagnoosista ja eteenpäin (

Kuva 7B

). Tämä assosiaatio korkea SPARC ilmaisun ja matalan tauti uusiutuu vahvisti yhden muuttujan analyysin osoittavat, että ero ryhmien välillä (jossa, ja ilman, sairauden uusiutumisen) oli merkitsevästi erilainen sekä vaiheen II ja III (p 0,0001;

Kuva 7A ja B

).

keskimääräinen SPARC ja FOXP3 ilmaisun primaarikasvaimen mitattiin ja korreloivat sairauden uusiutumisen. Potilaiden määrä tai ilman tauti uusiutuu kunakin ajankohtana näkyy alla kunkin kaavion. (A)

SPARC ilmaisun vaiheen II CRC

.

Potilaat ilman taudin uusiutumista oli merkittävästi korkeammat SPARC pienensi kaikkien aikaa osoittavat jopa 60 kuukautta ja eniten pisteitä jopa 138 kuukautta verrattuna potilaat, jotka kärsivät tauti uusiutuu. Yleinen SPARC ilmentyminen oli merkitsevästi erilainen ryhmien välillä (p 0,0001). (B)

SPARC ilmaisun vaiheessa III CRC

.

SPARC ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla ei uusiutunut 84 kuukauden ja sen jälkeen. SPARC oli myös merkitsevästi erilainen ryhmien välillä (p 0,0001). (C)

FOXP3 ilmaisun II vaiheessa CRC

. Korkeammat FOXP3 tasoilla oli myös merkitsevästi yhteydessä vähemmän tauti uusiutuu kuin (D)

FOXP3 ilmaisun vaiheessa III CRC

kuitenkaan eroja ei niin merkitty II vaiheessa CRC. FOXP3 ilmentyminen oli merkitsevästi erilainen ryhmien välillä sekä vaiheen II ja III (p 0,0001). Kukin datapiste edustaa keskiarvoa SPARC tai FOXP3 ilmentymisen taso kunakin ajankohtana. (*) P 0,05, (**) p 0,01.

Korkeammat FOXP3 tasot olivat myös liittyi vähemmän tauti uusiutuu II vaiheessa CRC (

Kuva 7C ​​

), ja vaikka FOXP3 ekspressiotasot primäärikasvaimissa olivat erilaiset potilaiden välillä ja ilman taudin uusiutumista vaiheessa III eri ajankohtina (

Kuva 7D

), nämä erot eivät olleet niin merkitty II vaiheessa tauti. Kuten SPARC, yleinen FOXP3 ilmaisu oli merkitsevästi erilainen potilaiden, ja ilman, taudin uusiutumisen sekä vaiheen II ja III (p 0,0001:

Kuva 7C ​​ja D

).

Kokonaiselossaoloaika

loppuun mennessä testin alussa, 27% potilaista oli kuollut CRC ja 22% oli kuollut muista syistä. Arvioimaan yleistä elossaololuku, Kaplan-Meier eloonjäämiskäyrien saatiin näyttämään korkean ja matalan markkeritasoihin suhteessa mediaanin SPARC-arvon, ja niiden yhdessä selviytymisen. Korkea SPARC ja FOXP3 tasoilla sekä korreloi merkitsevästi parempi säilyminen pitkällä aikavälillä (p 0,0001 ja 0,0002 vastaavasti;

Kuva 8A ja B

). Korkea CD8 ja CD45RO tasolla myös korreloivat paremmin pitkäaikaista säilyvyyttä, mutta verrattuna SPARC ja FOXP3, erottaminen käyrien ja merkityksen tasot eivät olleet yhtä suuria (

Kuva 8C ja D

). Univariate eloonjääminen analyysi käytettiin määrittämään ennustetekijöiden merkitys kunkin neljän markkereita.

Taulukko 1A

osoittaa korkea SPARC, FOXP3, CD8 ja CD45RO ilmaisun CRC kudoksessa kaikki ennustivat selviytymisen. Yhdistämällä kaikki neljä merkkiaineiden Monimuuttuja-analyysissä (

Taulukko 1B

) osoittivat, että vaikka kukin näistä merkeistä ollut merkittäviä ennusteen arvioinnissa omasta, käytetään yhdessä ne eivät parantaa ennustamista selviytymisen. Yhdistelmä SPARC ja FOXP3, tai SPARC ja CD8 kuitenkin merkittävästi ennustaa selviytymisen parempi käyttää kaikkia neljää merkkiaineiden konsertti, tai yhdistelmä FOXP3, CD8 ja CD45RO (

Taulukko 1B

). Mikään näistä yhdistelmistä olivat kuitenkin parempia ennustamaan selviytymistä kuin SPARC käyttää yksinään.

Kaplan-Meierin eloonjäämiskäyrien saatiin näyttämään korkean ja matalan markkeritasoihin suhteessa selviytymistä. (A) Korkea SPARC tasoilla korreloi merkitsevästi paremmin pysyvyyttä. (B) Korkean FOXP3 tasot myös korreloi merkitsevästi paremmin pysyvyyttä. Vaikka korkea (C) CD8 ja (D) CD45RO ekspressiotasoja liittyivät paremmin pysyvyyttä, erottaminen ja merkityksen välillä käyrät eivät olleet yhtä suuria.

Korrelaatio CRC patologian T-solujen tiheyden ja SPARC ilmaisun

patologiset ominaisuudet CRC, T-solujen merkkiaineiden ja SPARC ilmaisun luetellaan

Taulukko 2

. Tiheys CD8

+, CD45RO

+ ja FOXP3

+ solujen kasvainkudoksessa korreloi käänteisesti AJCC vaiheessa (yhdenmukainen TMA data;

Kuva 4A

), kun taas mitään merkittävää korrelaatiota välillä SPARC ilmaisun ja AJCC havaittiin (myös sopusoinnussa TMA data

Kuva 3B

). CD8

+ ja CD45RO

+ ilme korreloi käänteisesti hermoa hyökkäystä, ja suoraan korreloi lymfosyyttisen vaste ja Mikrosatelliittimarkkerien epävakautta.

adjuvanttihoitoa

TMA kokoelma tapahtunut vuodesta 1990 -96 ja ennen vuotta 1994 kemoterapia ei rutiininomaisesti annettu CRC. Niistä potilaista tässä kohortissa, 8% II vaiheen ja 44% vaiheen III potilaista sai adjuvanttihoitoa. SPARC ilmaisun ja T-solujen tiheydet verrattiin potilaiden välillä, joilla oli, eikä ollut, sai adjuvanttihoitoa leikkauksen jälkeinen resektio (

Taulukko 3

). Suhde SPARC on vimentiinista ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on vaiheen III CRC, jotka eivät olleet saaneet adjuvanttihoitona (p = 0,01), kun taas potilailla, joilla on vaiheen II CRC, FOXP3

+ solutiheys oli merkitsevästi suurempi niillä potilailla jotka olivat saaneet liitännäishoitona verrattuna niihin, jotka eivät olleet (p = 0,04).

keskustelu

Solun kulkeutumista tai invaasion tyvikalvon läpi ja kaukainen leviäminen kautta imusuonten tai suonistoissa ovat luontaiset ominaisuudet pahanlaatuisen sairauden ja on merkittävä vaikutus sairauden tuloksista [3]. Nämä vaeltavia prosessit vaativat ero sääntelyä liima ja anti-liima molekyylejä, ja on ehdotettu, että SPARC voi olla avainasemassa alkuperäiseen prosesseissa kasvaimen invasiivisuus ja ECM modulaatio johtuu sen anti-liima ominaisuuksia. Treg solut voivat myös edistää pahanlaatuisen sairauden tukahduttamalla paikallinen anti-kasvain immuunivasteen sisällä kasvaimen microenvironment [29], [30]. Läsnäolo suuri määrä FOXP3-positiivisten T-solujen on liittynyt suurempi riski taudin uusiutumisen ja huono eloonjäämisaste potilailla oli kiinteitä kasvaimia [29]. AJCC tauti lavastus perustuu histologiset soluttautumisen ja etäpesäkkeiden, se oli siis oletettu, että SPARC ja FOXP3 ilmaisu saattaa liittyä ensisijainen CRC taudin vaiheessa ja syövän erityisiä selviytymistä.

Tässä tutkimuksessa havaittiin korkeampi suhde SPARC ja vimentiinista vuonna CRC riippumatta sairauden vaiheessa, kuin verrokeilla kudokseen, mikä viittaa rooli SPARC kolorektaalisyövän karsinogeneesissä. Vaiheet II, III ja IV CRC kaikki oli merkittävästi korkeammat SPARC ilmaisu kuin vaiheen I kuitenkaan ei ollut merkittäviä eroja havaittu vaiheiden II, III tai IV CRC, mikä osoittaa, että vaikka SPARC ilmaisu oli suurempi väli ja pisimmällä vaiheissa CRC , se ei aina korreloi syöpä vaiheessa on aikaisemmin ehdotettu [6], [18], [31]. Nämä tutkimukset, toteutetut ihmisen mahakarsinoo- [6], CRC [31] rintojen [18] ja ruokatorven syöpä [32], jonka tunnuksena että SPARC oli huono ennuste markkeri, ja liittyi enemmän aggressiivinen ja erittäin etäpesäkkeitä. Tutkimuksemme kuitenkin osoittaa, että korkeampi SPARC ilmentymisen ensisijainen CRC liittyi hyvän sairaus lopputulos ja parempi pitkäaikainen syöpä elinaika 60 kuukautta sekä vaiheen II ja III CRC, ja toisaalta, että alempi SPARC ilmentyminen liittyi kehittyneempi kliinisen sairauden vaiheessa.

havainnot ovat yhdenmukaisia ​​sen havainnon kanssa, että vähennetään SPARC tasoilla ensisijainen CRC ksenografteissa voi lisätä kasvaimen Säteilynsietotestin ja kemoterapia-aineiden [33]. Säteilyherkkyyttä ja vaste 5-fluorourasiilin ja irinotekaani hiiren ksenografteissa kuitenkin voitiin palauttaa uudelleen ilmentymä SPARC, kun taas yli-ilmentyminen SPARC CRC ksenografteissa parannettu kasvaimen herkkyys säteilylle ja kemoterapia [33]. Vaikka ennen vuotta 1994 kemoterapia ei ollut rutiinia, tutkimuksessamme, joka keräsi näytteitä 1990-1996, suurin osa potilaista kanssa III CRC ja korkeamman SPARC ilme ei saanut kemoterapiaa. Tämä viittaa siihen mahdollisuuteen, että ei ole vain SPARC kykenee herkistävät CRC solujen kemoterapia [33], [34], mutta korkeampi SPARC ilmaisu saattaa liittyä muita kliinisiä piirteitä, jotka lääkäri ajattelee tekee kasvain vähemmän aggressiivisia ja siten vaadi täydennyshoidot terapiassa.

SPARC voi mahdollisesti olla antituumorigeenisiä indusoimalla mikroympäristön, joka on ei-sallivassa kasvaimen etenemiseen [35]. Chlenski

et al

, osoitti, että parannettu SPARC ilmentymistä hiiren ksenografteissa kautta transfektoituja soluja, pienensi sileän lihaksen aktiinin ilmentymistä sekä alentunut ksenografti kasvua, angiogeneesin estäminen ja kasvaimen strooman verrattuna villin tyyppi ja vektori-ohjaus 293 ksenografteissa [35]. Co-viljely SPARC-transfektoidut solut villityypin tai vektorin-ohjaus ksenograftien johtanut myös vähemmän aktivoituneiden fibroblastien että eivät pystyneet tuottamaan riittävästi ECM kasvaimen kasvun tukemiselle. Muuttamalla koostumusta kasvaimen strooman läpi estämällä verisuonten solujen rekrytointi isäntä fibroblastien ja ehkäisy fibroblastien aktivointia, ehdotettiin, että SPARC voi olla merkitystä ”normalisoi” kasvain strooman johtaa mikroympäristölle, joka ei ole tukea