Krooninen sairaus

tiivistelmä

Maksasyövän tai maksasyövän on yksi johtavista syistä syöpään liittyvien kuolemien . Tavanomaisen kemoterapian rajoittavat lääkeresistenssin kehittymisen ja erilaisia ​​sivuvaikutuksia. Koska sen ei-myrkyllisyys ja voimakas biopharmacological toimintaa, aineenvaihduntatuotteiden peräisin sienet ovat saaneet enemmän huomiota syövän hoidossa. Meidän aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet syöpää ehkäisevistä vaikutuksista polysakkaridi-proteiini-komplekseja, jotka on saatu

Pleurotus

sieniä. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia taustalla molekyylitason mekanismi syövän vastaista aktiivisuutta kuuman veden uute sisältää polysakkaridi-proteiini monimutkainen eristetty

koivuvinokas

(PP) maksan syöpäsoluja. Tuloksemme osoittivat, että altistuminen maksasyövän solujen PP paitsi vähensi

in vitro

syöpäsolujen lisääntymistä ja invaasiota, että parantaneet huumeiden herkkyys kemoterapeuttisen lääkkeen Cisplatin. Sekä suun kautta ja vatsaonteloon PP merkittävästi esti kasvaimen kasvua vierassiirrekokeissa BALB /c-nude-hiirissä. PP laukaisi selvästi tukahduttaminen PI3K /AKT signalointireitille maksan syöpäsoluja

in vitro

ja

in vivo

, ja yli-ilmentyminen konstitutiivisesti aktiivisen muodon AKT, Myr-AKT, kumottu tämä vaikutus ja estivät leviämisen ja invaasion PP. Sekä western blot ja ELISA-tulokset osoittivat, että PP-käsiteltyjen maksasyövän solut olivat vähentyneet ilmentymisen ja erittymisen verisuonten endoteelin kasvutekijän (VEGF). Lisäksi ihmisen rekombinantti-VEGF: n heikennetty estovaikutukset PP PI3K /AKT-reitin ja syövän fenotyypit. Tuloksemme osoittivat, että PP tukahdutetaan leviämisen, invaasio, ja lääkeresistenssideterminantit maksan syöpäsolujen

in vitro

ja

in vivo

, välittämän eston autokriininen VEGF: n indusoiman PI3K /AKT signaloinnin polku. Tämä tutkimus viittaa siihen mahdollisia terapeuttisia vaikutuksia PP hoidossa ihmisen maksasyövän.

Citation: Xu W, Huang JJ-h, Cheung PCK (2012) Ote

koivuvinokas

vaimentaa Maksa syöpä kehittymisen ja etenemisen kautta VEGF aiheuttama PI3K /AKT signalointireitin. PLoS ONE 7 (3): e34406. doi: 10,1371 /journal.pone.0034406

Editor: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 marraskuu 2011; Hyväksytty: 01 maaliskuu 2012; Julkaistu: 28 maaliskuu 2012

Copyright: © 2012 Xu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Maksasyövän on viidenneksi yleisin syöpä ja kolmas johtava syy kaikkien syöpään liittyvistä kuolemantapauksista maailmassa [1] – [3]. Valitettavasti kokonaisvasteeseen maksasyövän hoitoon on epätyydyttävä johtuen pääasiassa myöhäinen diagnosointi ja heikko teho hoitoja, erityisesti vastustuskykyä kemoterapeuttisten ja etäpesäkkeiden muihin elimiin [4]. Alternations useiden solun signalointipolkujen havainnoitiin useasti monenlaisia ​​ihmisen syövissä, mukaan lukien maksasyöpä, jossa PTEN /PI3K /AKT signalointiryöpyn on raportoitu ratkaiseva rooli säätelyssä pahanlaatuinen käyttäytymistä, kuten solujen lisääntymisen, selviytyminen ja hyökkäys [5], [6]. Kehittyvät todisteita osoitti, että PI3K /AKT-reitin voidaan säädellä autokriinisellä tavalla erilaisia ​​kasvutekijöitä, kuten insuliinin kaltainen kasvutekijä (IGF) ja endoteelikasvutekijä (VEGF) [7], [8].

Natural phytochemicals ja aineenvaihduntatuotteiden kasvien kiinnitetään yhä enemmän huomiota niiden farmakologisia vaikutuksia hoidossa ja ehkäisyssä syövän, koska niiden vähäinen myrkyllisyys ja mahdollinen biologinen aktiivisuus [9]. Molemmat

in vitro

ja

in vivo

tutkimukset ovat osoittaneet, että nämä bioaktiiviset luonnontuotteet voi estää aloittamista, edistäminen ja eteneminen syövän häiritsemällä signalointireittien ihmisen syöpäsoluja ja niiden kulutus on tullut lupaava chemopreventive ja kemoterapeuttisen strategia syöpiä vastaan ​​[10], [11]. Niistä, syötävät sienet tiedetään olevan runsaasti syöpälääkkeiden, niiden polysakkaridien ja polysakkaridi-proteiini-komplekseja on kaikkein tehokkaita ne [12], [13]. Lukuisat raportit ovat osoittaneet, että

in vitro

ja

in vivo

syövänvastainen toimintaa polysakkaridien eristettyjen syötävät sienet, kuten

Lentinula edodes

,

blazei

ja

Phellinus linteus

vastaan ​​eri ihmisen syöpäsoluja [14] – [18]. Tuore tutkimus osoitti, että raakaöljyn ote polysakkaridin

Phellinus linteus

esti fosforylaatiota AKT rintasyöpäsoluissa [19]. Raakauute polysakkaridien läsnä

Ganoderma lucidum

havaittiin olevan anti-metastaattinen vaikutus modulaation kautta PI3K /AKT-reitin [20].

Viime aikoina monet

in vitro

osoittavia tutkimuksia antioksidantti ja anti-proliferatiivista vaikutusta raakauutteista polysakkaridien ja polysakkaridi-proteiini kompleksit päässä

Pleurotus

sieni-suvun eri ihmisen syöpäsoluja [2] – [25]. Antioksidantti on monia luonnollisia tuotteita on myös ehdotettu edistää niiden syövänvastainen vaikutus [26] – [28]. Perustuen antioksidantti tutkimuksen sienilajeista kokoelma laboratoriossamme, aktiivinen polysakkaridi ja proteiini monimutkainen eristetty sieni

koivuvinokas

, koodataan PP, seulottiin pois mahdollisten syöpälääkettä johtuen merkittävistä antioksidantti ( julkaisematon data) tässä tutkimuksessa. Nämä kiehtova alustavat havainnot ovat saaneet meidät tutkimaan taustalla molekyylitason mekanismeja anti-karsinogeeninen vaikutus, jonka PP kohdistuvan kaksi ihmisen maksan syöpäsoluja, Huh7 ja Hep3B. Nämä tulokset osoittivat ensimmäistä kertaa, että VEGF /PI3K /AKT Cascade välittämän

in vitro

ja

in vivo

tukahduttava vaikutus PP kehitykseen ja etenemiseen ihmisen maksan syöpäsoluja. Chemosensiti- maksan syöpäsoluja kohti hoitava lääke sisplatiini tehostui myös PP hoitoa. Esillä olevassa tutkimuksessa, terapeuttisten mahdollisuuksien PP hoidossa ihmisen Maksasolukarsinoomaa osallisena.

Tulokset

In vitro

antiproliferatiivista vaikutusta PP maksasyövän solut

määrittämiseksi estävää vaikutusta PP maksan syöpäsoluja, ensin arvioitiin kasvun ja elinkelpoisuuden neljä maksasyövän solulinjoja (Huh7, Hep3B, HepG2 ja SMMC-7721), jossa käsittely PP käyttämällä MTT määritys. Tulokset osoittivat, että PP kohdistama huomattava estävä vaikutus Huh7, Hep3B, HepG2 ja SMMC-7721 solut ja ajasta riippuvaisella tavalla (Kuva. 1A). Tämä löydös vahvistettiin lisäksi pesäkkeen muodostumisen määritys (Fig. 1 B). Virtaussytometria analyysi osoitti, että hoitoon maksasyövän solujen PP aiheutti kertymistä solut G2 vaiheisiin (korottamista 12,42 ± 0,25-19,66 ± 1,12 sisään Huh7 ja 13.30 ± 1,04-20,38 ± 1,11 Hep3B) (taulukko 1) . Lisäksi, sopusoinnussa hieman kasvanut osa-G1 väestön PP-käsitellyissä soluissa (taulukko 1), on tärkeä apoptoosin markkereita, pilkottiin caspase3 ja pilkotaan Poly (ADP-riboosi) polymeraasi (PARP) on säädelty in PP-käsitellyissä soluissa , mikä viittaa proapoptoottiset vaikutus PP maksasyövän solut voivat olla kaspaasivälitteinen. Western blot osoitti annoksesta riippuvaa ilmentyminen vähenee sykliini B1, joka on tärkeä G2 tarkastuspiste-proteiinin, kahden maksasyövän soluja, mikä viittaa siihen, että PP-induced G2 vaiheen solusyklin pysähtymisen voi välittää alas-säädellä ilmentymistä sykliini B1 (Fig. 1 C). Samaan aikaan, sulkemaan pois sitä mahdollisuutta, että syövän vastaisen vaikutuksen ja polysakkaridi-proteiini-kompleksi on eristetty

koivuvinokas

ovat epäspesifisiä, polysakkaridi-proteiini-kompleksi on eristetty toisesta Pleurotus

sieni, Pleurotus mukuloita regium

(PTR) levitettiin ohjaus, mikä viittaa siihen erityinen vaikutus PP (Fig. S1).

. MTT-analyysi otettiin arvioimiseksi maksan syöpäsolun (Huh7, Hep3B, HepG2 ja SMMC-7721) elinkelpoisuus käsittelyn jälkeen eri pitoisuuksilla PP (0, 25, 50, 100, 200 tai 400 ug /ml) enintään 96 h. Tiedot ovat välineet (palkit, SD) on kolmen erillisen kokeen. B. pesäkkeitä muodostuminen määrityksessä osoitti annoksesta riippuvaista väheneminen maksan syöpäsolun proliferaatiota (Huh7, Hep3B, HepG2 ja SMMC-7721), kun altistuminen PP. C. Western blot suoritettiin ja annoksesta riippuvainen väheneminen sykliini B1 ilmentymistä ei havaittu. Aktiini oli mukana latauskontrollina.

Toisaalta, PP tutkittiin sytotoksinen vaikutus normaalin maksan solujen WRL-68 käyttämällä MTT-määritystä ja pesäkemuodostusta. Tulokset osoittivat, että normaalissa maksassa solu WRL-68 ovat vastustuskykyisempiä PP kuin maksan syöpäsoluja, mikä viittaa siihen, selektiivinen sytotoksisuus PP syöpäsolujen ja sen mahdollisuuksia kehittää syövän vastaisina aineina (Fig. S2). Tutkia tarkemmin mahdolliset vaikutukset PP hoidossa ihmisen syöpien, laajensimme tutkimukset muissa syöpätyyppeihin. Tulokset osoittivat merkittävää vähenemistä proliferaationopeus annoksesta riippuvalla tavalla, kun PP hoitoa ihmisen syövän solulinjoissa rinta- (T47D), keuhkoissa (A549), vatsa (AGS), ja eturauhasen (DU145) (Fig. S3).

vaikutus PP on VEGF: n ilmentymisen ja inaktivaation PI3K /AKT-reitin

Western blot osoitti, että hoito PP erityisesti vähentää proteiinin ilmentymiä fosfo-AKT (p-AKT), aktivoitua muoto AKT, ja sen loppupään tavoitteita kuten fosfo-GSK3p (p-GSK3p), surviviinia Bcl-annoksesta riippuvalla tavalla, mutta ei se Bax ja kokonaistaso AKT ja GSK3p sekä maksasyöpä soluja (kuvio. 2A). Lisäksi, sopusoinnussa hieman kasvanut osa-G1 väestön PP-käsitellyissä soluissa (taulukko 1), on tärkeä apoptoosin markkereita, pilkottiin caspase3 ja pilkotaan Poly (ADP-riboosi) polymeraasi (PARP) on säädelty in PP-käsitellyissä soluissa , mikä viittaa proapoptoottiset vaikutus PP maksan syöpäsoluja voidaan kaspaasi välittämä. Samaan aikaan, N-kadheriinin ja vimentiinista, mikä voi selittää käänteinen epiteelin-mesenkymaalitransitioon (EMT), olivat alassäädetty PP-käsitellyissä soluissa (kuvio. 2A). Sen sijaan, ilmentymistaso fosfo-ERK (p-ERK), toinen tärkeä signalointireitille osallisena syöpäsolujen sääntelyä, ei oleellisesti muutu, kun PP hoito, mikä viittaa spesifisyys sääntelyn PI3K /AKT-reitin PP (Fig. 2A ). Huh7 solut transfektoitu tilapäisesti AKT-plasmidilla johdonmukaisesti paljasti kumotaan estävä vaikutus, kun altistuminen PP kuten MTT: llä (Fig. 2B) ja western blot-analyysi (Fig. 2C). Nämä havainnot vahvistivat lisäksi, että PI3K /AKT-signalointireitin saattavat myötävaikuttaa syöpää ehkäisevistä vaikutuksista PP maksan syöpäsoluja.

. Huh7 ja Hep3B-soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla PP (0, 50 tai 100 ug /ml), ja solulyysi kerättiin 48 tunnin western blot -analyysillä. PP hoito aiheutti huomattavaan vähenemiseen ekspressiotasot p-AKT ja sen loppupään tavoitteita kuten p-GSK-3β, Bcl-x L, ja surviviini. Kuitenkin, PP ei vaikuttanut ilmauksia p-ERK ja PTEN mutta VEGF-ilmentyminen väheni PP-käsitellyissä soluissa. Kokeet toistettiin 3 kertaa. B. Huh7-solut transfektoitiin AKT yli-ilmentyvä vektori tai vektori ohjaus, käsiteltiin sitten PP (50 ug /ml), ja solujen elinkyky mitattiin MTT 72 tunnin ajan. Tulokset paljasti kumotaan estävän vaikutuksen AKT-transfektoiduissa soluissa, kun kontrolliin verrattuna. Tiedot annetaan prosentteina käsittelemättömien solujen kontrolli, joka asetettiin 100%. Tiedot ovat keskiarvoja ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. C. Huh7-solut transfektoitiin AKT-yli-ilmentävät vektoria tai vektorisäätö ja käsiteltiin sitten PP. Solulysaatti kerättiin ja sovellettiin western blot. Merkittävät erot PP-käsiteltyjen ja käsittelemättömien solujen analysoitiin tilastollisesti ANOVA (Tukeyn monivertailutesti *,

P

0,01; **,

P

0,001).

vaikutus PP on VEGF: n eritystä ja inaktivoituminen PI3K /AKT-reitin

on mielenkiintoista todeta, että PP vähensi VEGF: n ilmentymistä, joka on tärkeä kasvutekijä mukana leviämisen ja invaasion ihmisen syövän [29]. On hyvin dokumentoitu, että PI3K /AKT-reitti aktivoituu vasteena erilaisia ​​kasvutekijöitä [30]. Koska meidän western blot tulokset osoittivat vähensi proteiinin ilmentymiä p-AKT: n ja VEGF muttei fosfataasi ja tensin homologi (PTEN), ylävirran proteiinia AKT (Fig. 2A), on hyvin todennäköistä, että PP säätelee PI3K /AKT-reitin kautta VEGF-välitteistä autokriinisten tavalla. Mielenkiintoista on, että ELISA-tiedot osoittivat vaimennusta VEGF eritystä annoksesta riippuvalla tavalla, kun PP hoitoa Huh7 ja Hep3B-solut (Fig. 3A). Tärkeintä on, lisäämällä ihmisen rekombinantti-VEGF: n (rhVEGF) 0,6 ng /ml, konsentraatio alennetaan PP verrattuna käsittelemättömän ryhmän 72 tunnin aikapisteessä, heikennetty inhiboiva vaikutus PP soluproliferaatioon (Fig. 3B) ja PI3K /AKT signaalireitin (Fig. 3C). Nämä tiedot viittaavat siihen, että inaktivaatio PI3K /AKT-reitin PP voidaan välittämää VEGF autokriinisellä tavalla.

. Vaikutukset PP eritykseen VEGF Huh7 ja Hep3B soluja. Sen jälkeen, kun soluja käsiteltiin PP eri pitoisuuksilla (0, 50 tai 100 ug /ml) 48 tuntia, esikäsitelty väliaine otettiin talteen ja VEGF tasolla elatusaine määritettiin ihmisen VEGF ELISA Kit. Tuloksena osoitti tukahduttaminen VEGF eritystä annoksesta riippuvalla tavalla, kun PP hoitoon. B. MTT-määritys suoritettiin arvioimaan leviämisen, kun altistuminen PP (50 ug /ml) läsnä ollessa tai ilman rhVEGF (0,6 ng /ml) 72 tuntia in Huh7-soluissa. C. Huh7-soluja käsiteltiin PP (50 ug /ml) yksinään tai yhdessä rhVEGF (0,6 ng /ml), ja solulysaatti kerättiin ja soveltaa western blot. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. Merkittävät erot PP-käsiteltyjen ja käsittelemättömien solujen analysoitiin tilastollisesti ANOVA (Tukeyn monivertailutesti *,

P

0,01; **,

P

0,001).

vaikutus PP tehostamisesta kemosensitiivisyys maksasyövän solujen sisplatiini

suuri määrä todisteita on ilmoittanut, että PI3K /AKT-reitin kriittisesti myötävaikuttaa lääkeresistenssin ihmisen syövässä [31] ja inaktivoituminen PI3K /AKT PP voisi johtaa vuorottelu huumeiden herkkyys maksan syöpäsoluja. Vuodesta pesäkemuodostusta, sisplatiini (DDP) 5 uM tai 10 uM vain hieman vähentynyt solujen elävyys, että huomattava synergistinen vaikutus pesäkkeenmuodostusta Huh7 ja Hep3B soluja havaittiin, kun DDP yhdistettiin vähäisiä määriä PP (25 ug /ml) (Fig. 4A), mikä viittaa siihen, että PP voi olla herkistävä ja kemoterapeuttisen lääkkeen. Transfektio AKT plasmidin (Fig. 4B) ja lisäämällä rhVEGF (0,6 ng /ml) (Fig. 4C) johti kumottu herkistyminen, mikä tukee keskeistä roolia AKT-reitin aktivaation ja VEGF pelataan säätelyssä maksan syöpäsolujen PP .

. Huh7 ja Hep3B solujen käsiteltiin DDP (10 uM), PP (25 ug /ml), tai yhdistelmällä, ja sitten pesäkemuodostusta suoritetaan. B. Huh7-solut transfektoitiin AKT yli-ilmentyvä vektori tai vektori ohjaus, käsiteltiin sitten pieni annos PP (25 ug /ml), DPP (5 uM), tai yhdistelmällä 72 tunnin ajan, ja solujen elinkyky mitattiin MTT-määrityksellä . C. MTT-määritys suoritettiin arvioimaan leviämisen, kun altistuminen pieni annos PP (25 ug /ml), DDP (5 uM) yksin tai yhdistelmänä, puuttuessa tai läsnä rhVEGF 72 tuntia in Huh7-soluissa. Lisäämällä rhVEGF (0,6 ng /ml) johti kumotaan herkistymistä. Data on esitetty prosentteina käsittelemättömien kontrollien, joka asetettiin 100%, keskimääräinen ± SD vähintään kolmen itsenäisen kokeen. Merkittävät erot PP-käsiteltyjen ja käsittelemättömien solujen analysoitiin tilastollisesti ANOVA (Tukeyn monivertailutesti *,

P

0,01; **,

P

0,001).

PP vähentää invasiivisia mahdollisia maksasyövän solujen

käyttäen kammion invaasiomääritys, todettiin, että PP on pieni annos (50 ug /ml), joka ei ollut merkittävää vaikutusta solun lisääntymistä 24 tunnin aikapisteessä merkittävästi vähentynyt invasiivisuus on Huh7 ja Hep3B soluja (Kuva. 5A). Mielenkiintoista, estävä vaikutus PP hyökkäystä Huh7 lievitti yliekspressio konstitutiivisesti aktivoitua AKT (Fig. 5B) ja lisäämällä rhVEGF (Fig. 5C), mikä myös osoittaa, osallistumista VEGF /PI3K /AKT kaskadin säätelyssä maksasyövän solut PP. Lisäksi annoksesta riippuvainen pienentää ilmentymisen tasoja N-kadheriinin ja vimentiinin, tärkeät päättäjät solun kulkua ja invaasio, todettiin Western blot-analyysi on esitetty kuviossa. 2A, tukee havaittu estävän vaikutuksen PP invasiivisuus maksan syöpäsoluja.

. Boyden kammio määritystä käytettiin määrittämään invasiivisuus on Huh7 ja Hep3B soluja käsiteltäessä ohjaus tai PP (50 ug /ml) PP 24 tuntia. PP merkittävästi tukahdutti maksan syöpäsoluinvaasiota. Oikea paneeli osoitti kvantifiointiin upottamalla kammiot 1% SDS ja mittaamalla liuoksen absorbanssi 570 nm: ssä. Keskiarvoa kolmesta määritykset kullekin kokeelle kunnossa laskettiin ja arvojen normalisoitu käsittelemättömistä soluista. B. Huh7 transfektoitujen solujen AKT-yliekspressoivassa vektorin tai vektorin ohjaus käsiteltiin PP, ja solu invasiivisuus testattiin. Oikea paneeli esittää määrällisesti. C. Huh7-soluja käsiteltiin PP puuttuessa tai läsnä ollessa 0,6 ng /ml rhVEGF, ja invasiivisia potentiaali määritetään. Oikea paneeli esittää määrällisesti. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. Merkittävät erot PP-käsiteltyjen ja käsittelemättömien solujen analysoitiin tilastollisesti ANOVA (Tukeyn monivertailutesti *,

P

0,01; **,

P

0,001).

PP merkittävästi vaimentaa ihmisen maksasyöpä ksenograftin kasvua nude-hiirissä

edellä esitetyn

in vitro

tulokset osoittavat, että PP vähensi leviämisen maksasyövän solut, se ratkaisevan tärkeää arvioida, PP voisi estää kasvainten muodostumiseen maksasyövän solujen

in vivo

. Ensinnäkin, nude-hiirissä, joille on vahvistettu s.c. -tuumoriksenografti alkaen Huh7 soluista käytettiin ja käsiteltiin joko suun kautta tai intraperitoneaalisesti (i.p.) PP. Sekä suun kautta ruokinta ja ip-injektio PP merkitsevästi (p 0,001) alentunut kasvaimen kasvua (Fig. 6A) vaikka vaikutus suun kautta annettuna (estämissuhde ~82%) oli vähäisempää verrattaessa ip injektio (estämissuhde ~99% ).

. Kasvukäyrät ja edustavia valokuvia nude-hiirten hoidettiin i.p. (vasen paneeli) tai suun kautta (oikea paneeli) PP ajoneuvon ohjaus (vesi). Piste edustaa kasvaimen keskimääräinen koko yhtälön V = (pituus x leveys

2) /2. B. kasvaimet kerättiin vesi-käsitelty tai PP-käsitellyissä hiirissä oli vahvistettu, upotettu, leikattiin, ja lisättiin Ki-67 immunohistokemiallisella värjäyksellä ja kvantifiointi. Määrä positiivisesti värjättyä ytimien vähintään kuuden satunnaisesti valitun kentät edustavien tuumorisektioiden jaettuna solujen määrä on esitetty oikeassa paneelissa. C. Kasvain kudokset kerättiin western blot. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. Merkittävät erot PP-käsiteltyjen ja käsittelemättömien solujen analysoitiin tilastollisesti ANOVA (Tukeyn monivertailutesti *,

P

0,01; **,

P

0,001).

Kasvaimen xenograftes kerättiin neljä ryhmää hiiriä altistettiin immunohistokemian ja western blot -analyysillä. Merkitsevästi alhaisempi Ki-67-positiivisia soluja löytyy PP-käsitellyssä ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään (Fig. 6B), ehdotti, että inhiboiva vaikutus PP voi johtua vähentyneestä solujen lisääntymistä. Vuorottelu-proteiinin ilmentymisen PP-käsiteltyjen ksenografti eläimiä, kuten alas-säädellä ilmentymistä p-AKT, P-GSK3p, Bcl-x L, ja sääteli ilmentyminen katkaistun kaspaasi-3 näissä

in vivo

kokeita (Fig. 6C) olivat samankaltaiset kuin

in vitro

tutkimuksissa (Fig. 2A).

Lisäksi mitään ilmeistä sivuvaikutuksia tai muutoksia havaittiin vertaamalla histologiset piirteet sisäelinten kuten maksan, keuhkojen ja munuaisten (Fig. 7A), ja kehon paino eläinten (Fig. 7B) hoidettaessa ja kontrolliryhmissä, mikä viittaa siihen, turvallisuutta ja kliinisiä vaikutuksia PP syöpälääkkeenä.

. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H & E) värjäys keuhko-, maksa-, munuais- neljän ilmoitettu hiirten ryhmissä. B. Kehon paino (grammaa) käsiteltyjen hiirien PP ja valvontaa.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa osoitettiin, että PP, kuumaa vettä uute, joka sisältää polysakkaridi-proteiini-kompleksin eristetty

koivuvinokas

esti kehittymistä ja etenemistä maksan syöpäsoluja

in vitro

ja

in vivo

. Tällaiset syöpää ehkäisevistä vaikutuksista ovat kautta VEGF-välitteistä autokriinisten sääntely PI3K /AKT-reitin. Merkitys Näiden havaintojen käsitellään alla.

Ensinnäkin, osoitimme, että hoito PP vähensi tuumorigeenisyyden maksasyövän solujen ksenograftissa nude-hiirimallissa ilman ilmeisiä haittavaikutuksia. Huolimatta edistysaskel kemoterapeuttisten viime vuosina kemoterapiaa liittyy edelleen vakavia sivuvaikutuksia, kuten munuaistoksisuus, pahoinvointi, hiustenlähtö, ihon ärsytys, anemia, hedelmättömyys [32], [33]. Siksi luonnossa esiintyviä syövän vastaisia ​​yhdisteistä läsnä ihmisen ruokavalion on merkittäviä vaikutuksia kemoterapiaa ja kemopreventiossa, erityisesti niille, joilla on alhainen myrkyllisyys ja korkea teho kuten resveratroli [34] ja teen polyfenolit [35]. Enemmän kiinnostavaa,

koivuvinokas

itiöemän otteet on raportoitu viivästyttää etenemistä kemiallisesti indusoidun Maksasolusyövän CBA hiirissä [36]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että molemmat i.p. injektio ja suun kautta PP merkittävästi esti kasvaimen kasvua. Suhteellisen vähäisempiä kasvaimen inhibitiota havaittiin suun kautta PP voisi johtua farmakokineettisen rajoitukset ja suoliston hajoamista yhdisteiden [37]. Mitään merkittäviä eroja ei havaittu vertaamalla histologia keuhkojen, maksan, munuaisten ja kehon paino PP-käsiteltyjen ja kontrolli hiirillä, mikä viittaa siihen, että ei ollut havaittavia haitallisia terveysvaikutuksia vaikutus käsiteltyjen hiirien PP. Merkittävä syöpää ehkäisevistä vaikutuksista ja alhainen myrkyllisyys eläimille antaa tukensa toteutettavuutta PP ihmisen maksasyövän hoitoon.

Toiseksi esillä olevat tulokset osoittivat, että PP inhiboivat määrä maksan syöpäsoluja, ja tämä vaikutus saattaa olla läpi G2 solusyklin pysähtymiseen. Mielenkiintoista, lisäksi G2 vaihe, samanaikaisen kertymät S-vaiheessa havaittiin, mahdolliset molekyylimekanismeja aihetta lisätutkimuksia. Lisäksi tuloksemme osoittivat, että PP lisäsi merkittävästi lääkeaineen herkkyys maksasyövän solujen sisplatiinin (Fig. 4). Huolimatta viimeaikaisista etenemisen kehittämisessä solunsalpaajahoitojen viime vuosikymmeninä, useimmat potilaat lopulta uusiutunut hoidon jälkeen, mikä tarkoittaa, että kasvaimet hankittu mekanismeja lääkeresistenssi, joka ratkaisevasti vaikutti korkea kuolleisuus maksasyövän [38]. Jotta päästäisiin eroon chemoresistance, Chemosensiti- joka perustuu yhdistelmä toisen lääkkeen säätelemällä yhden tai useamman resistenssin on otettu yhdeksi houkutteleva strategia, erityisesti osallistuminen luonnon nykyisten yhdisteiden [39]. Mielenkiintoista, suuri määrä todisteita on syntymässä osoittamaan, että useat signalointipolkujen ovat kriittisesti mukana välittämisessä hankittu resistenssi kemoterapeuttisia lääkkeitä ihmisen syövässä, kuten PI3K /AKT, MEK /ERK, JNK ja AMPK reittejä [40], [41]. Estyminen PI3K /AKT-reitin farmakologinen lähestymistapa saattaa aiheuttaa palauttaminen huumeiden herkkyys [42], [43]. Tässä suhteessa, inaktivaatio PI3K /AKT PP (Fig. 2 ja 3), ehdotti, että altistuminen PP voi parantaa lääkeherkkyysmenetelmien maksan syöpäsoluja. Lisäksi se, että PP-induced down-regulation of Bcl-xL: n ja Surviven (Fig. 2A), jotka molemmat ovat tärkeitä päättäjät monilääkeresistenssi, edelleen osoitti lupaavia rooli PP kuin chemosensitizer.

Toinen kohokohta olisi käsiteltävä on, että PP hoito pienensi invasiivisuus maksasyövän solut (Fig. 5A), jota tukee lisäksi vähentynyt proteiinipitoisuus ilmaisuja N-kadheriinin ja vimentiinista PP-käsitellyissä soluissa (Fig. 2A ). Se oli raportoitu, että N-kadheriinin on ratkaisevan tärkeää tuumorin-alusten vuorovaikutusta, ekstravasaatio ja metastaattisen levittäminen [44], [45] ja vimentiinin on laajalti käytetty markkerina osuus epiteelin ja mesenkymaalitransitioon (EMT) [46], [ ,,,0],47]. EMT on trans-eriyttäminen tarvittava ohjelma kudoksen morphogenesis alkionkehityksen aikana. Se voi kuitenkin haitallisesti aiheuttaa urut fibroosia ja edistää kohdunkaulan etenemisen kautta erilaisia ​​mekanismeja, hankkiminen invasiivisia ja metastaattinen ominaisuudet [48] – [50]. Tutkimus EMT estäjä on avannut uuden oven ohjaamiseen etäpesäke, joka ratkaisevasti myötävaikuttaa korkeaan kuolleisuuteen maksasyövän [51]. Siten esillä oleva löydökset estäviä vaikutuksia PP on invasiivisen potentiaali maksasyövän solujen kliinistä vaikutusta hoidossa maksasyövän.

lisäksi toiminnallinen tutkimus, selvittää sellaisten mekanismien on ratkaiseva ymmärtämiseksi PP mahdollisina syöpälääke. Koska konstitutiivisen aktivaation PI3K /AKT signalointiryöpyn havaitaan usein ihmisen syöpään ja fenotyyppien ratkaisevasti liittyvät syöpäsolujen lisääntymistä, eloonjääntiä, invaasio ja angiogeneesi, esto PI3K /AKT-reitin on tullut houkutteleva lähestymistapa maksasyövän hoitoon [52] , [53]. AKT-inhibiittoreita on raportoitu tukahduttaa kasvaimen kasvua maksassa, mikä viittaa siihen, järkevä kohdentamiseksi PI3K /AKT-reitin tässä sairaudessa. Kuitenkin työllisyys AKT-estäjällä liittyy odottamattomia sivuvaikutuksia [54].

Militaris

, lääkettä sieni oli raportoitu aiheuttavan solusyklin pysähtymisen ja apoptoosin avulla inaktivoinnin PI3K /AKT-reitin rintasyövässä [55]. Myös suun kautta polyfenolisia murto eristetty vihreä tee merkittävästi estää eturauhassyövän kehitykseen ja etäpesäkkeiden kautta PI3K /AKT-reitin siirtogeenisissä adenokarsinooman hiiren malli [56]. Mielenkiintoista, tuloksemme osoittivat, että PP alassäädetty ilmentymistä p-AKT, aktiivinen muoto PI3K /AKT, annoksesta riippuvaisella tavalla, linjassa tuloksen toiminnallisen tutkimuksen. Lisäksi, tulokset rinnakkaisten kokeiden transfektoimalla AKT plasmidin johdonmukaisesti havainnollistettu kumotaan inhiboivaa vaikutusta PP, joka edelleen varmistaa osallistuminen PI3K /Akt signalointiryöpyn (Fig. 2B ja 2C) kantavassa vapautuminen PI3K /AKT-reitin merkittävästi vaikuttaneet kehittäminen maksasolusyövän [57]. Henkilökohtainen lähestymistavat perustuvat tarkentaminen molekyyli luokittelu HCC on otettu mahdollisina strategioita kliinisessä hoidossa HCC [58]. Samaan aikaan tunnistaminen reagenssien, jotka häiritsevät signalointi polkuja, jotka edistävät HCC saattaisi johtaa kehitystä yksilöllisiä hoitoja potilaille, ja siten maksimoida tehokkuus ja kustannus hyöty [59]. Tutkimus tarjoaa uuden mahdollisia terapeuttisia vaihtoehto potilaista oli konstitutiivista PI3K /AKT aktivointi. Toisaalta, vaikka mitään selvää vaihtelussa havaittu ERK-reitin, kun altistuminen PP, vaikutus PP muihin signaalinvälitysreittien ansaitsee lisätutkimuksia.

Mielenkiintoista, havaittiin, että VEGF alassäädetty sekä proteiinin ilmentymisen ja erityksen tasojen päälle PP hoitoa. Lisäksi stimulaatio solujen rhVEGF elatusaineessa heikennetty estävää vaikutusta PP AKT-reitin aktivaation ja syövän fenotyypit (Fig. 3). Carcinogenesis on monivaiheinen prosessi, välittävät monet kasvutekijät, kuten istukan kasvutekijä (PIGF), verihiutaleista peräisin oleva kasvutekijä (PDGF), ja verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF) [60]. Kasvaimen mikroympäristössä, eri kasvutekijöiden ohjata paitsi syöpäsoluja, mutta myös strooman on autokriininen ja parakriinisesti [61], [62]. VEGF on yksi tärkeimmistä tekijöistä angiogeneesin joka ohjaa muodostuu uusia verisuonia nykyisten verisuoniston, ja sillä on keskeinen rooli kasvaimen kasvua, invaasio ja etäpesäkkeiden [63], [64]. On tutkimukset osoittivat, että ote

Phellinus linteus

voisi merkittävästi tukahduttaa angiogeneesiä kautta downregulation VEGF erityksen kohdentamalla AKT rintasyövän tai Wnt /β-kateniinin signalointireitin paksusuolen syöpä [65], [ ,,,0],66]. Anti-angiogeenisen terapian, joka perustuu VEGF /VEGF-reseptori uskotaan olevan tehokas kliinisissä strategia syövän hoidossa, erityisesti maksasyövän, joka on erittäin verisuoni kasvain [67], [68] kantavassa estävä vaikutus PP VEGF ehdottaa antiangiogeenisiä toimintaa PP ja sen mahdolliset vaikutukset anti-angiogeenisen terapian. Tässä tutkimuksessa uudet havainnot liittyvät VEGF /PI3K /AKT kaskadin maksasyövän soluissa PP hoito toimittamaan tietoa molekyylitason mekanismeja, joilla tuetaan sen potentiaali kliinisissä sovelluksissa.

Yhteenvetona PP, joka on

Pleurotus

sieni polysakkaridi-proteiini-kompleksin, on sekä

in vitro

ja

in vivo

syövänvastainen toimintaa vastaan ​​maksan syöpäsoluja kautta estämällä erittävien VEGF-välitteistä autokriinisten sääntely PI3K /AKT signalointi. Lisätutkimukset syövänvastainen vaikutus

Pleurotus

sieni polysakkaridi-proteiini-kompleksin maksasyövän varsi syövät tehdään arvioimiseksi sen mahdollisen soveltamisen syövän hoitoon ja ehkäisyyn.

Materiaalit ja menetelmät

valmistelu ja luonnehdinta sieni kuumaa vettä uute

syötävä sieni (

koivuvinokas

) ostettiin paikallisen supermarketin ja lajit positiivisesti tunnistaa perustuen sen morfologia. Kuivattu jauhe valmistettiin jauhamalla pakastekuivattu sieni itiöemiä osaksi hiukkaskoko on alle 0,5 mm ja sitten altistettiin kuumavesiuutolle 95-100 ° C: ssa 3 h, jossa on näytteen ja liuottimen suhde 01:25 ( w /v).