Krooninen sairaus

tiivistelmä

Olemme suorittaneet ensimmäisen tutkimuksen määrittää diagnostisen potentiaali CD14 ++ CD16 + väli- monosyytit verrattuna pro-angiogeenisten osajoukko CD14 ++ CD16 + TIE2 + TIE2-ilmentävien monosyyttien (TEM) syövän. Nämä monosyyttipopulaatioista tutkittiin virtaussytometrialla terveillä vapaaehtoisilla (n = 32) ja peräsuolen karsinooma potilailla, joilla oli paikallinen (N = 24) tai metastaattinen (N = 37) tauti. Olemme edelleen määritelty veren sytokiinien liittyy monosyytti sääntelyä. Tulokset paljastivat väli monosyytti osajoukon selvästi kohonneet peräsuolen syöpäpotilaiden ja osoittaa korkeimman taajuudet lokalisoitu tauti. Monimuuttuja regressioanalyysi tunnistaa väli- monosyytit merkittävänä riippumaton muuttuja syövän ennuste. With cut-off-arvoon 0,37% (väli monosyyttejä kokonaismäärästä leukosyyttien) diagnostisen herkkyyden ja spesifisyyden vaihteli 69% ja 81%, vastaavasti. Sen sijaan, TEM tasot olivat koholla lokalisoitu syöpä, mutta ei eronnut merkittävästi ryhmien välillä ja yksikään sytokiinien korreloi monosyytti osapopulaatioiden. Kiinnostaa,

in vitro

analyyseissä tukenut havainto, että väli- monosyyttejä voimakkaammin aiheuttama ensisijainen verrattuna metastasoituneen syöpäsoluja, jotka voivat liittyä immunosuppressiiviseen miljöön perustettu pitkälle edennyt etäpesäkkeitä. Lopuksi väli monosyytit verrattuna TIE2 ilmentävien monosyytit ovat herkempiä diagnostinen indikaattori paksusuolisyövän.

Citation: Schauer D, Starlinger P, Reiter C, Jahn N, Zajc P, Buchberger E, et ai . (2012) Intermediate Monosyytit mutta ei TIE2 ilmentävä monosyyttejä Sensitive Diagnostic ilmaisin peräsuolen syövän. PLoS ONE 7 (9): e44450. doi: 10,1371 /journal.pone.0044450

Editor: Isaac Yang, UCLA, Yhdysvallat

vastaanotettu: 25 helmikuu 2012; Hyväksytty: 07 elokuu 2012; Julkaistu: 04 syyskuu 2012

Copyright: © Schauer et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Medical tieteellinen Fund pormestarin Wienin kaupungin (https://www.wien.gv.at/gesundheit/einrichtungen/med-wiss-fonds/) mukaan avustus ei. 8064 myönnetty T. Gruenberger. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saatiin tähän tutkimukseen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Monosyytit pidetään keskeisiä toimijoita luontaisen immuniteetin ; niiden osuus on noin 8-10% ihmisen leukosyyteistä ja on ominaista ilmentymistä koreseptorissa CD14 maksullisena kaltainen reseptori 4 (TLR4) [1]. Pieni alijoukko ihmisen ääreisverenkierron monosyytit, jotka toimivat yhdessä ilmentää CD16 (Fcy reseptori III) on tunnistettu vuonna 1988 [2] ja todettiin edustavan noin 10% kaikista verimonosyyteissä [3]. Heterogeenisyys tämän CD16 + väestöstä sittemmin tunnustettu [4]. Olemassaolo 3 monosyyttien osapopulaatioiden perustuu erilaiseen ekspressioon CD14 ja CD16 on hiljattain osaksi uuden nimikkeistön monosyyttien jossa erotetaan CD14 ++ CD16- ”klassinen”, CD14 ++ CD16 + ”keskitason” ja CD14 + CD16 ++ ”ei-klassiset” monosyyttien alaryhmä [5].

Viimeaikaiset tutkimukset geeniekspressioprofiilien viitata kehityshäiriöitä suhde kolmeen ryhmään asteittain muutoksia pintamerkkiaineita kypsymisen aikana [6] – [7]. Vertailun vuoksi

in vitro

kulttuuriin ja kypsyminen verimonosyyteissä johtaa asteittainen nostaminen CD16 ilmaisun [8] – [9], joka laukaisee sytokiinien kuten MCP-1 (monosyyttien kemoatrak- proteiini 1), TGF -β (transformoiva kasvutekijä beeta), tai M-CSF: ää (makrofagikasvutekijä) [10] – [12]. Lisäksi kolme alapopulaatiot osoittavat erillistä toiminnallisia eroja, klassisen monosyyttien, jolla on suurin fagosytoosia potentiaalia [6]. Sen sijaan ei-klassisen monosyyteissä on alhainen kapasiteetti fagosytoosia, näyttää partiointi käyttäytymistä pitkin astian seiniä ja reagoivat voimakkaasti vastaan ​​nukleiinihapot ja virukset [13]. Geeniekspressiota profiilia väli- monosyyttien on liittänyt ne antigeenin käsittely ja esittely, tulehduksellinen vastauksia bakteeripatogeeneihin ja lipopolysakkaridi (LPS) [6], [14]. Kohteisiin, angiogeneesiä markkereita, kuten endogliinin, verisuonten endoteelin kasvutekijän reseptori 2 (VEGFR-2) ja angiopoietiini Tie2 selektiivisesti yliekspressoituvat välissä monosyytti osajoukko [6], [15].

TEM (TIE2-ilmentävien monosyyttien) on alun perin kuvattu hiirillä käsittää angiogeneesiä monosyyttien väestöstä, jotka voivat parantaa kasvaimen kasvua parakriinisen eritystä angiogeenisten tekijöiden, kuten VEGF: n ja emäksisen fibroblastikasvutekijän [16]. Verenkierrossa TEM havaitaan perifeerisen veren terveillä ihmisillä ja syöpäpotilailla, ja ne havaitaan pääasiallisesti välissä monosyytti osajoukko [15], [17]. Ne vastaavat angiopoietiini-2 (ANG-2), proteiini ilmentyy voimakkaasti kasvaimia, pinnan kautta Tie2 ja sen co-reseptorin TIE1, joka voi edistää signalointia irtoaminen liukoinen TIE1 fragmentti [18] – [19]. Siten TEM ensisijaisesti kerääntyvät kasvaimen kohteita kuten kolorektaalisyöpää vaan näyttää olevan poissa normaalista kudoksesta [17].

monosyyttien subsets on seurattu ihmisen veressä yhteydessä sairauksia. Kuitenkin suurimmassa osassa tutkimuksia ei erotella ei-klassisen ja väli monosyyttien vaan keskittyi ero CD16 positiivisia ja negatiivisia -alapopulaatioiksi. Kohonneisiin veren CD16 + monosyyteistä on raportoitu patologisia tiloja, kuten sepsis [20], krooninen hepatiitti B [21], sepelvaltimotauti [22], ja syöpä [23]. Näin ollen CD16 + monosyytit ovat osoittaneet ja ennustavia potentiaalia tulehdus- ja pahanlaatuinen sairaus. Uudemmat tutkimukset osoittavat, että edelleen eroa ei-klassisen ja välituotteita monosyytit voivat tarjota parempaa tietoa. Erityisesti väli monosyytit vastakohtana ei-klassisen monosyyttejä osoitettiin selektiivisesti koholla vakavia astmapotilailla [24] ja ennustaa vahingollisia potilailla, joilla on suuri kardiovaskulaarinen riski [25]. Vertailukelpoinen analyysit syöpäpotilailla puuttuvat tasalla.

Koska romaanin käsityksen erillisten ominaisuuksien välituotteiden monosyyttien ja angiogeneesiä (pro-kasvain) fenotyyppi TEM me arveltu, että nämä monosyyttipopulaatioista saattaa olla diagnostista potentiaalia peräsuolen syöpä (CRC). Odotimme TEM ja keskitason monosyyttien selvästi kohonneet perifeerisessä veressä sairastavien potilaiden CRC ja kasvaa edelleen kehittynyt sairaus. Käsittelemään tätä asiaa teimme kartoittava tutkimus 93 osallistujaa myös terveillä vapaaehtoisilla, CRC vaiheen I-III potilaat (paikallinen peräsuolen syöpä) ja CRC vaihe IV potilaat (metastasized peräsuolen syöpä, metastasoituneen kolorektaalisyövän). Olemme tunnettu alapopulaatioiden väli- monosyyttien ja TEM perifeerisen veren suhteen kliinisten parametrien sekä monosyytti liittyvien sytokiinien, mukaan lukien MCP-1, ANG-2, liukoinen TIE1 (sTIE1), ja verisuonten endoteelin kasvutekijä A: n (VEGF-A ). Välissä monosyytti osajoukko vastakohtana TEM havaittiin ensisijaisesti indusoida alkuvaiheessa sairauden ja muodostamaan uusi, herkkä markkeri paksusuolisyövän.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics Statement

Tämä kuin interventiotutkimuksista, kliininen tutkimus tehtiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistus. Analyysi verinäytteiden hyväksyi institutionaalisten ”eettinen komitea Medical University of Vienna” (# 331/2010 ja # 791/2010); kaikki potilaat ja terveillä vapaaehtoisilla antoivat tietoon suostumus.

Patient Collective

verinäytteet kerättiin kolmesta aihe ryhmään: terveillä vapaaehtoisilla (n = 32), potilailla, joilla on paikallinen kolorektaalisyöpä (N = 24 ) ja potilailla, joilla on etäpesäkkeitä peräsuolen syöpä (N = 37). Valtaosa metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilaista oli heidän ensisijainen kasvain resektoitiin ja esittelyyn maksametastaaseihin toissijainen peräsuolen syöpä. Veri peruutettiin ennen potilaan hoitoa, eli yleensä päivää ennen leikkausta tai välittömästi ennen neoadjuvanttikemoterapian. Taudin vaiheesta mukaan unionin International Cancer valvonta (UICC) määritettiin kaikista CRC potilaista tietokonetomografia skannaus ja kasvaimen resektion. Terveillä vapaaehtoisilla oli ilmeisesti vapaa kroonisten ja tulehdussairauksien.

Analyysi monosyyttipopulaatioista

Etyleenidiamiinitetra-etikkahappoa (EDTA) käsiteltiin kokoverta käsitellään huoneenlämpötilassa. Pinta-ilmentymisen CD14, CD16 ja TIE2 arvioitiin soveltamalla suoraan immunfluorescence värjäyksessä, mitä seurasi hajottavat-no-pesun yhteydessä. Lyhyesti, 100 ui kokoverta inkuboitiin seuraavilla vasta-aineilla on kyllästää pitoisuuksilla 20 minuuttia: CD14-FITC (Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA), CD16-PC5 (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) ja TIE2-PE (R 0,001) alainen, mediaani tasolla 0,66% vs. 0,25% kaikista veren valkosoluja, vastaavasti. Pitkälle edenneessä sairaudessa, väli- monosyytit laski jälleen tuloksena mediaani taajuus 0,40% Metastasoitunutta CRC potilailla, mutta pysyivät huomattavasti korkeampi kuin terveillä verrokeilla (p = 0,003). Kun arvioidaan välituote monosyyttien solujen määrä per ml perifeeristä verta tai prosentteina kokonaismäärästä monosyyttien, vertailukelpoisia tuloksia saatiin (tietoja ei esitetty).

monosyyttien alapopulaatiot määritettiin virtaussytometrialla, ja annetaan% kaikista valkosolujen terveillä henkilöillä, potilailla, joilla on paikallinen CRC ja potilaille metastasoituneen kolorektaalisyövän. Taajuus yhteensä (CD14 positiivinen) monosyytit (A) verrattiin klassisen CD14 ++ CD16- monosyytit (B), väli- CD14 ++ CD16 + monosyytit (C), ja CD14 ++ CD16 + TIE2 + TEM (D).

Samalla tavoin (CD14 ++ CD16 + TIE2 +) TEM alijoukon monosyyttien osoittivat ei-merkitsevä taipumus nousta paikallisissa tauti (p = 0,055), jossa mediaani taajuudella 0,05%, 0,07%, ja 0,05% yhteensä leukosyytit terveitä, paikallisten CRC ja metastasoituneen kolorektaalisyövän kollektiiveja, vastaavasti. Arviointi TEM perustuu ilmentäminen rinnakkain CD14 + TIE2 + vastakohtana kolminkertainen gating CD14 ++ CD16 + TIE2 + ei muuttanut tuloksia (tuloksia ei ole esitetty).

veren Intermediate monosyyttejä Diagnostic Indicator CRC

arvioidaan edelleen suorituskykyä väli monosyyttien CRC diagnoosi riippumatta taudin vaiheessa. ROC analyysi soveltaa arvioitaessa diagnostisten vallan käyrän alapuolisen alueen (AUC = 0,785, p 0,001) ja perustaa kynnystä syövän havaitsemiseen (Fig. 2). With cut-off-arvo 0,37% väli- monosyyttejä kokonaismäärästä leukosyyttien diagnostisen herkkyyden ja spesifisyyden vaihteli 69% ja 81%, vastaavasti.

Tasapaino diagnostisen herkkyyden ja spesifisyyden välituotteiden monosyyttien tasot arvioitiin ROC kaavio ja AUC.

Monosyytit CRC Potilaat Näytä Altered Expression tasot CD14 ja CD16

keskimääräinen fluoresenssin intensiteetti (MFI) virtaussytometristen mittausten kuvaa keskimääräistä lauseke taso tutkittujen pinnan molekyylejä soluihin ja liittyy monosyyttien toiminto. Vaikka CD14 ilme korreloi monosyyttien reagointikykyä ja sytokiinien erityksen [27], niiden CD16 arvot liittyvät niiden kyky vasta-aineista riippuvainen soluvälitteinen sytotoksisuus [28].

Huomasimme, että yhteensä monosyytit osoitti merkittävää menetystä CD14 vuonna pitkälle edennyt metastaattinen CRC (Fig. 3). Tämä CD14 vähennys havaittiin myös, kun arvosteltiin erikseen klassisen ja väli monosyyteissä. Sisällä alapopulaatio TEM korkeimman CD14 ekspressiotasoja kirjattiin paikallisen sairaus. Intermediate monosyytit ja TEM lisäksi paljastui huomattavasti korkeampia ekspressiotasoja CD16 syöpäpotilailla kuin terveillä vapaaehtoisilla (Fig. 4), kun taas TIE2 ekspressiotasot TEM ei muuttunut tautia.

CD14 ekspressiotasot terveillä henkilöillä, potilailla, joilla on paikallisesti CRC tai metastasoituneen kolorektaalisyövän arvioitiin fluoresenssin keskimääräinen intensiteetti (MFI) CD14-FITC värjäytymisen yhteensä (CD14 positiivinen) monosyytit (A) tai osajoukot klassisen CD14 ++ CD16- monosyytit (B), väli- CD14 + + CD16 + monosyytit (C), ja CD14 ++ CD16 + TIE2 + TEM (D).

ilmaisu taso CD16 ja TIE2 on monosyyttien alaryhmiä määritettiin terveille henkilöille että potilaille paikallisluonteisia metastasoituneen kolorektaalisyövän syöpä. Mean fluoresenssin intensiteetti (MFI) CD16-PC5 värjäys arvioitiin väli- CD14 ++ CD16 + monosyyttien (A), ja CD14 ++ CD16 + TIE2 + TEM (B). TIE2 ekspressiotasot heijastuvat MFI TIE2-PE sidottu vasta TEM (C).

Intermediate monosyyttejä itsenäisesti ennusta peräsuolen syövän

Sen arvioimiseksi, syöpään liittyvien muutosten monosyytti alapopulaatioiden voi liittyä tekijöiden tiedetään säätelevän rekrytointi ja aktivointi väli- monosyyttien ja TEM, tutkimme veren MCP-1, ANG-2, sTIE1 ja VEGF-A terveillä vapaaehtoisilla ja CRC potilaita. Analyysi liukoisen parametrien plasmassa osoittivat voimakasta kasvua VEGF-A (p 0,001) ja ANG-2 (p = 0,004) potilailla, joilla metastasized sairaus (Fig. 5), kun taas liukoisen TIE1 tasot eivät merkittävästi eroa ryhmien välillä ( dataa ei esitetty). MCP-1-pitoisuudet määritettiin plasmassa (Fig. 5), ja osajoukko seeruminäytteitä (koetuloksia ei ole esitetty), mutta ei tuota mitään merkittäviä eroja kolmen tutkitun yhteisöjä. Vertailun vuoksi tuumorimarkkeri CEA (perustettua rutiini sairaala analyysi) arvioitiin potilailla ja paljasti merkittävän kasvun CEA Veren metastasoitunutta kolorektaalisyöpää verrattuna paikallinen syöpä osoittaen näin pitkälle edennyt tauti. Huomattavaa on, että mikään tutkittujen plasman parametrit osoittivat merkittävää korrelaatiota monosyyttien osapopulaatioiden.

Liukoinen muuttujat, kuten VEGF-A (A), MCP-1 (B) ja ANG-2 (C) mitattiin plasmasta näytteitä terveitä yksilöitä, potilaat paikallisluonteisia CRC tai metastasoituneen kolorektaalisyövän. Pitoisuus veressä tuumorimarkkeri CEA (D) oli saatavilla rutiini sairaalasta analyysiin syöpäpotilaita, mutta ei määritetty (ND) varten terveillä verrokeilla kollektiivinen.

Logistinen regressioanalyysi edelleen arvioimiseksi suoritettiin merkityksen käytettävissä olevat parametrit syövän ennuste. Taulukko 2 määrittelee kunkin merkityksen tasoja ja kertoimet suhdeluvut 95%: n luottamusväli. Univariate analyysi paljasti ikä, plasma, VEGF-A: n ja veren CD14 ++ CD16 + väli- monosyyteissä (p = 0,004, kerroinsuhde = 22) kuin ennustavia peräsuolen syövän. Vuonna Monimuuttuja-analyysissä, potilaan ikä ja väli- monosyyteissä (p = 0,024, kerroinsuhde = 83) vallitsi merkittäviksi riippumatonta muuttujaa syövän ennuste.

CD16 Expression monosyyteihin aiheutetaan koolonkarsinoomasoluissa

in vitro

Koska mikään tutkittujen plasman parametrit korreloivat induktioon väli- monosyyttien syöpäpotilailla, pyrittiin tutkimaan by

in vitro

kokeita onko kasvainperäinen ärsykkeitä voi todellakin laukaista CD16 ilme verimonosyyteissä ja tihentää välissä osajoukon. PBMC eristettiin terveillä vapaaehtoisilla ja analysoitiin CD14 ja CD16 ilmaisun jälkeen 24 tunnin inkuboinnin kasvaimen solusupernatanttien. Vertasimme stimulaation supernatanteista peräisin ensimmäisen (SW480 ja HT-29) ja metastaattinen (SW620) paksusuolensyöpä linjat. Lähtötilanteessa väli- monosyytit muodosti 22% CD14 ++ soluja (Fig. 6). 24 tunnin kuluttua

in vitro

inkubaation supernatantti ala-johdettu (SW480 ja HT-29) CRC-solut, taajuus välituotteen CD14 ++ CD16 + monosyyttien oli merkittävästi lisääntynyt ja 71-87%. Mielenkiintoista on, että PBMC-inkuboinnin supernatantti metastaattisen paksusuolen syövän SW620 johti lievää nousua 37% väli monosyyttejä joukossa CD14 ++ soluissa, sen jälkeen 24 h.

PBMC-solut eristettiin terveiden vapaaehtoisten ja inkuboitiin 24 tunnin ajan supernatantin kasvainsolujen viljelmiä, jotka ovat peräisin CRC linjat HT-29, SW480 ja SW620. Kiinnittyneet solut kerättiin ja värjättiin CD14-FITC: llä ja CD16-PC5-vasta-aineita; mIgG

1-PC5 käytettiin isotyyppikontrolli. Virtaussytometrinen dataa yhdestä edustavasta kokeesta on esitetty isotyypin kontrolli (A) verrattuna CD16-PC5 värjäys SW480 (B), ja SW620 (C) stimuloitujen PBMC-viljelmissä. Keskiarvo ja keskihajonta kolmen riippumattoman kokeilee erilaisia ​​verenluovuttajia annetaan baari kaavion (D), joka kuvaa prosenttiosuutta CD16 + (väli) versus CD16- (klassinen) solujen CD14 ++ monosyytti väestöstä.

keskustelu

seuranta monosyyttien osajoukkojen ääreisverenkierrossa on alun perin perustuu siihen yksinkertaiseen havaitsemiseen CD14 ja CD16 pintamarkkerien [10], [23], [29]. Tämä on johtanut siihen päätelmään, että CD16 + monosyytit muodostavat noin 10% kaikista verimonosyyteissä ja määrä 50 solua kohden mikrolitraa kokoverta [30]. Kahden-kertainen tässä tulehduksellisten monosyytti osajoukko on havaittu systeemisiä infektioita, korreloi sairauden vakavuuden ja palautuu, kun potilaan hoitoa ja hyödyntämistä [31] – [33].

Kehittynyt protokolla arviointia varten monosyytti osajoukkoja julkaistiin vuonna 2010 [34], joka perustuu samanaikaisesti havaitsemiseen HLA-DR, CD14, ja CD16 välttää häiriöitä granulosyyttien ja luonnollisten tappaja solupopulaatioiden. Tutkimuksessamme päätimme keskittyä välissä CD14 ++ CD16 + ja TIE2 ilmentävien monosyyttipopulaatioista kanssa markkeriyhdistelmä CD14, CD16, ja TIE2. On huomattava, että tämä havaitseminen lähestymistapa ei salli yksiselitteinen tunnistus ei-klassisen monosyyttejä, joka voi olla ”saastunut” luonnollisten tappajasolujen ja jotka on näin ollen jätetty pois tästä analyysistä. Vastaavaa värjäys strategia on aiemmin raportoitu onnistuneen TEM havaitsemiseen keskikokoisten monosyytti osajoukon [35]. Arvioimme näiden pitoisuus monosyyttipopulaatioista veressä terveillä vapaaehtoisilla ja havainnut mediaani 16 (kvartiiliväli 11-30) väli- CD14 ++ CD16 + monosyyttien ja 3 (kvartiiliväli 2-6) TEM per mikrolitra perifeeristä verta. Kun lasketaan prosentteina, väli- ja TEM osajoukot oli 0,25% ja 0,05% kaikista veren valkosoluja ja 3,39% ja 0,63% monosyyttien, vastaavasti.

Tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää, ovatko nämä monosyytti alapopulaatioiden ovat koholla kolorektaalikarsinoomasta potilaiden ja on diagnostinen markkeri potentiaali. Löysimme osajoukko väli monosyyttien olevan 2,2-kertainen kohonnut taudin mediaani tasolle 0,55% veren valkosolujen CRC potilaalla (0,66% paikallisessa tauti ja 0,40% vuonna etäpesäkkeitä). ROC-analyysi johti valintaan rajakohta on 0,37%, mikä johti diagnostinen herkkyys 69% ja spesifisyys 81%. Ennustearvo Tämän monosyyttien osajoukko vahvistettiin edelleen monimuuttuja regressioanalyysin mukaan lukien kaikki käytettävissä olevat parametrit. Sen lisäksi potilaan ikä, väli- monosyytit olivat ainoat merkittävät riippumatonta muuttujaa syövän ennusteen. Tässä yhteydessä on syytä huomata, että palvelukseen yhteisöjä terveiden yksilöiden ja syöpäpotilaiden erosivat mediaani-ikä (56 ja 68 vuotta, vastaavasti) – bias joka on kirjanpidossa monimuuttujamenetelmin.

rajoittaminen monosyyttipopulaatioista syövän diagnoosi saadaan se, että vaihtelut monosyyttimäärät veressä havaitaan myös muita ehtoja, erityisesti tulehdussairauksien [20], [22]. Veri profiilia monosyyttien osajoukkoja voisi siten heijastavat epiphenomenon liity kasvaimeen. Ongelman ratkaisemiseksi, olemme verranneet leukosyyttimäärät keskuudessa opintoryhmiä, koska kasvu valkosolujen pitoisuus liittyy yleisesti tarttuva ja tulehdustiloja. Ei ollut merkittävää eroa terveiden yksilöiden ja peräsuolen syövän potilaiden tutkittu myös tutkimuksessa (Fig. S2). Lisäksi veren tulehduksellinen merkki C-reaktiivisen proteiinin (CRP) oli saatavilla rutiininomaisesti sairaaloiden analyysi syöpäpotilailla. Vaikka CRP korreloivat merkitsevästi valkosolujen määrä (P 0,001; k = 0,474), ei ollut korrelaatiota CRP tai leukosyyttien pitoisuuksia ja välissä monosyyttimäärät. Tulokset tukevat käsitystä, että tehostetun välituotteiden monosyyttien syöpäpotilailla ei indusoitunut havaitsematta tulehdustiloja Tutkimuksessamme.

Aiemmin julkaistut analyysit syöpäpotilaiden keskittyivät yksinkertainen syrjiä CD16 positiivinen tai negatiivinen monosyytit eli olivat yhdistämällä ei-klassisen ja väli- solupopulaatioiden niiden havaitsemisstrategiaa. CD16 + monosyyttien osajoukko kerrottiin selvästi kohonneet potilailla, joilla on pahanlaatuinen sairaus [36]. Erityisesti tuoreessa tutkimuksessa rintasyöpää osoittivat, että CD16 + monosyyttejä 1,7-kertaisesti lisääntynyt potilailla verrattuna terveisiin verrokkeihin. Kirjoittajat totesi, että taso oli korkeampi vaiheen I kuin vaiheen II-IV sairaus [10]. Verrattain, löysimme väli CD14 ++ CD16 + monosyyttien alijoukon selvästi kohonneet kolorektaalisyövässä potilaille, vaan näyttää suurempia määriä paikallisissa kuin etäpesäkkeitä. Sen lisäksi, että taajuutta välituotteen monosyyttien, niiden keskimääräinen CD16 lisätään, mahdollisesti parantaa niiden kykyä vasta-aineista riippuvainen soluvälitteinen sytotoksisuus [28].

CD16 monosyyteissä voidaan indusoida sytokiinien, kuten MCP -1 [10], TGF-β [37], tai M-CSF: ää [11]. Käänteisesti tämä vaikutus voidaan estää Th2-tyypin sytokiinien kuten IL-4 [12] ja GM-CSF [37]. Siten on mahdollista, että kasvu väli- (CD14 ++ CD16 +) monosyyttien on aktiivisemmin laukaisee primaarikasvaimen, kun syövän etenemisen etäpesäkkeitä johtaa Th2-tyypin sytokiinien miljöö kanssa vastakkain vaikuttavasta. Kun seulonta potilaamme yhteisöjä varten MCP-1 veressä emme havaitse mitään lisäystä tai korrelaatio taajuuteen väli monosyyteissä. Kuitenkin muut kasvainperäinen tekijät voivat selittää korkeamman useita välivaiheen (CD14 ++ CD16 +) monosyytit havaittu syöpäpotilailla. Linjassa meidän

in vitro

analyysit osoittivat, että inkubointi PBMC kasvaimen soluviljelysupernatantit tuloksia nopean induktion CD14 ++ CD16 + monosyyteissä. Yllättävää kyllä, tämä lisäys oli vähäisempää vastaus viljelmäsupernatanttia metastaattinen SW620 peräisin samasta potilaasta kuin ensisijainen masolulinjassa SW480 tai jotka eivät liity ensisijaisen CRC linja HT-29. Vaikka nämä

in vitro

kokeita ei yksilöidä alkuperää CD14 ++ CD16 + monosyytti induktio

in vivo

, ne tukevat käsitystä, että väli- monosyyttejä voidaan tehokkaammin indusoida alkuvaiheessa sairauden.

CD16 + monosyytit ovat tiettävästi tärkein monosyyttien väestön syövän vaste ja erittävät suuria määriä TNF-α: n ja IL-12, kun kasvainsolujen vuorovaikutus [38]. Kuitenkin toiminnallinen ero ei-klassisen ja välituotteita monosyyttien puuttuu tässä yhteydessä. Se, että väli- monosyytit voivat ilmaista angiogeneesiä (ja siten mahdollisesti pro-kasvain) tekijät, kuten TIE2, endogliini tai VEGFR-2 on saanut meidät tutkimaan tietyn osajoukon väli- monosyyttien, CD14 ++ CD16 + TIE2 + TEM. Vaikka voimakas kasvainta edistävät vaikutukset on osoitettu TEM hiiren kokeiluja [16], [39], kliinisiä tutkimuksia niiden merkki potentiaali syöpäpotilailla puuttuvat yleensä [17]. Mukaisesti erittäin tuoreessa raportissa TEM taajuuksilla kolorektaalikarsinoomasta [40], huomasimme, että TEM ei merkittävästi kohonnut veren paksusuolen syövän potilaiden eikä korreloinut kiertävän angiogeneesitekijät ANG-2, sTIE1 ja VEGF-A tiedetään säätelevän TEM rekrytointi tai toimintaa [18]. Vaikka emme havaitse merkittävää eroa TEM laskee terveiden yksilöiden ja syöpäpotilaiden, havaitsimme suuntaus korkeamman TEM tasoilla lokalisoitu tauti. Johtopäätös että kiertävä TEM muodostavat huono diagnostinen markkeri peräsuolen syöpä voi siis johtua pienemmän kasvuun TEM arvoja verrattuna väli- monosyyttimäärät taudin. Suurempi kollektiivinen tutkimukseen osallistuneista olisi tarpeen selvittää, onko tämä ero on tilastollista merkitystä.

Yhteenvetona verrattaessa väli CD14 ++ CD16 + monosyytit ja CD14 ++ CD16 + TIE2 + TEM veressä 32 tervettä aiheista ja 61 CRC potilaita, huomasimme, että väli- monosyytit vastakohtana TEM merkittävästi koholla tauti. Korkein taajuus CD14 ++ CD16 + solujen määrässä oli, kiehtovan, kirjataan lokalisoitu vastakohtana etäpesäkkeitä, joka voi heijastaa suosivista induktio välituotteiden monosyyttien alkuvaiheessa syöpä – käsite, joka tukivat

in vitro

tutkimuksissa. Taajuus välituote monosyyttien havaittiin olevan riippumaton ennustaja peräsuolen syöpä. Ottaen samalla huomioon, että väli- monosyytit voidaan koholla muihin tulehdustiloja, tämä parametri voi osoittautua arvokas lisä vakiintuneiden CRC diagnoosimarkkereina heijastamalla alussa immuunivasteen kasvainta vastaan. Se edustaa vähemmän invasiivisia seulontaa vaihtoehto, joka olisi lisäksi arvioitava laajemmassa potilaalla kollektiivista tueksi kolonoskopia ja muita diagnostisia tutkimuksia, erityisesti havaita alkuvaiheessa sairauden.

tukeminen Information

Kuva S1.