Krooninen sairaus

tiivistelmä

Pediatric syöpä on suhteellisen harvinainen ja heterogeeninen ryhmä hematologisten ja ei-hematologisten maligniteettien, joka edellyttää useita menettelyjä sen diagnostiikkaan seulonta ja luokitus. Tähän asti virtaussytometria (FC) ei ole systemaattisesti sovellettu diagnostista työtä-up tällaisten maligniteettien, erityisesti kiinteiden kasvainten. Täällä arvioimme FC paneeli merkkiaineita diagnostisen seulontaan lasten syöpä ja edelleen luokittelu lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten. Ehdotettu strategia tähtää Erotusdiagnostisesti välillä kasvainten

vs

. reaktiivisia näytteitä, ja hematologiset

vs

. ei-hematologisten maligniteettien, ja alaluokitus kiinteiden kasvainten. Yhteensä 52 näytettä 40 potilasta epäilyttäviä sisältävän kasvaimen solut analysoitiin FC rinnakkain tavanomaisten diagnostisia menetelmiä. Yleinen vastaavuutta korko molempien lähestymistapojen oli 96% (50/52 diagnostiset näytteet), jossa on 100% sopimuksen kaikkien reaktiivisten /tulehdus- ja ei-suodatettuja näytteitä sekä ne, jotka vastaavat kiinteä kasvain (n = 35), jossa on vain kaksi väärää negatiivista tapausta diagnosoitu Hodgkinin lymfooma ja anaplastinen lymfooma, vastaavasti. Lisäksi selvä syrjiä näytteiden soluttautunut verta muodostavan

vs.

Ei-hematopoieettisten kasvainsolujen systemaattisesti saavutettiin. Distinct alatyyppejä kiinteiden kasvainten osoittivat eri proteiinin ilmentymisen profiilit, mahdollistaa erotusdiagnoosiin neuroblastooma (CD56

hi /GD2

+ /CD81

hi), primitiivisiä neuroectodermal kasvaimet (CD271

hi /CD99

+), Wilms kasvaimet ( 1 solupopulaation), rabdomyosarkooma (

nuMYOD1

+ /

numyogenin

+), karsinoomien (CD45

– /EpCAM

+) , sukusolujen kasvaimet (CD56

+ /CD45

– /NG2

+ /CD10

+) ja lopulta myös hemangiopericytomas (CD45

– /CD34

+). Yhteenvetona tuloksemme osoittavat, että Multiparametrimäärityksessä FC tarjoaa nopean ja hyödyllistä täydentävää tietoa rutiini histopatologia diagnostisen seulontaa ja luokittelua lasten syöpä.

Citation: Ferreira-Facio CS, Milito C, Botafogo V, Fontana M, Thiago LS, Oliveira E, et ai. (2013) osuus Multiparametrimäärityksessä virtaussytometria Immunofenotyypitys että Diagnostic seulonta ja luokittelu Pediatric syöpä. PLoS ONE 8 (3): e55534. doi: 10,1371 /journal.pone.0055534

Editor: Syed A. Aziz, Health Canada, Kanada

vastaanotettu: 20 syyskuu 2012; Hyväksytty: 27 joulukuu 2012; Julkaistu 5 maaliskuuta 2013

Copyright: © 2013 Ferreira-Facio et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ on osittain tukevat seuraavat avustukset: EO oli osittain tuettu avustuksen CNPq- Brasilian National Research Council (Brasilia, Brasilia). MF oli osittain tuettu avustusta FAPERJ- Tutkimuksen tuki perusta Rio de Janeiro, (Rio de Janeiro, Brasilia) ja nyt hän on osittain tuettu avustusta CAPES /Ministério da Educação (Brasilia, Brasilia). VB oli osittain tuettu FAPERJ- Tutkimuksen tuki perusta Rio de Janeiro, (Rio de Janeiro, Brasilia). ESC oli osittain tuettu avustuksen CNPq- Brasilian National Research Council (Brasilia, Brasilia) ja FAPERJ- Tutkimuksen tuki perusta Rio de Janeiro, (Rio de Janeiro, Brasilia). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saanut tätä tutkimusta.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Yli 200000 lapsipotilailla ( 15 vuotias) on diagnosoitu syöpä vuosittain [1]. Huolimatta syöpä on johtava syy taudin liittyvän kuoleman lapset useimmissa maissa [2], yksittäiset tulokset riippuvat pitkälti nopeasti kasvain diagnoosin, luokittelun ja lavastus, asianmukaisen hoidon valinta ja maksimoitu paranemisasteet [3]. Koska merkittävä osa lapsipotilaiden kasvainten puuttuu morfologisten näyttöä erilaistumisen ja histologiset alkuperää, akulla immunosolukemiallisten merkkiaineiden ja in situ hybridisaatio, Mikroskooppitutkimus ja molekyylidiagnoositekniikoiden menettelyjä, tyypillisesti tarvitaan diagnostisten luokittelun taudin [3] – [7].

useiden vuosikymmenien ajan Multiparametrimäärityksessä virtaussytometrillä (MFC) Immunofenotyypitys on osoittautunut välttämättömäksi nopean diagnoosin, luokittelun ja hoidonseurannan useimpien hematologisten maligniteettien, mukaan lukien pediatriset leukemiat ja lymfoomat. Toisaalta se on edelleen tutkimus työkalu lapsipotilaille kiinteitä kasvaimia [8] – [15]. Tällainen rajoitettu käyttö MFC diagnosoinnissa lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten luultavasti liittyy tarpeeseen yksisolususpensioi- ja saatavuutta suhteellisen rajoitettu paneelien luotettava ja validoitu markkereita, muiden tekijöiden joukossa [16] – [18]. Siten käyttö virtaussytometria lapsipotilailla kiinteitä kasvaimia on lähes rajoitettu arviointiin kasvainsolun DNA sisältö sekä parafinoidut ja jäädytetyt kudosnäytteet, yhdistelmänä tai samanaikaisen värjäys yhden tai muutaman fenotyyppisten markkerien [19] – [24]. Näin ollen vaikka immunofenotyyppisiä tutkimuksia rutiininomaisesti käytössä useimmissa lapsipotilailla lymfoomat erotusdiagnostiikkaa välillä B- ja T-solujen esiasteen lymfoblastinen lymfooma ja Burkittin lymfooma 25-28, harvat tutkimukset ovat toistaiseksi raportoitu, jossa MFC järjestelmällisesti tutkimiseen käytetään ilmiasun pediatristen kiinteiden kasvainten [29] – [31]. Lisäksi muutaman raportoidussa tutkimuksessa on keskitytty pääasiassa kuvaileva analyysit värjäyskuvioiden yhden tai muutaman markkereita, yleensä yhden diagnostisen alatyypin tauti.

Vaikka kaikki edellä mainitut, alustavat tutkimukset ovat osoittaneet, että neuroendokriininen kasvaimet näyttää CD45

– /CD56

+ fenotyyppiä [32] – [35]; puolestaan ​​syöpäsolujen neuroblastooma koekspressoimaan GD2 [35], kun taas primitiivisiä neuroectodermal kasvaimet (PNET) koekspressoimaan CD57 ja CD99, sekä CD56 [31], [34], [36] – [38], ja myosarkoomatuumorisoluja solut myogeniinin

+ [31], [39] – [41]. Tästä huolimatta spesifisyys näiden fenotyyppien keskuudessa selvä alatyyppejä lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten vielä ole tiedossa, eikä tutkimus on toistaiseksi raportoitu, joissa kattava paneeli markkereita, joilla pyritään diagnostiikkaan seulonta, erotusdiagnoosi ja luokitus eri tyyppisistä lapsipotilailla kasvaimia, on ehdotettu ja tutkittu.

Tässä arvioimme uutta kattavaa MFC paneelissa merkkiaineita diagnostisen seulontaan lasten syöpä ja oikean määrittämisen lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten tiettyihin taudin yhteisöille.

materiaalit ja menetelmät

potilaat ja näytteet

yhteensä 52 näytettä 40 potilasta epäilyttävien lasten syöpä -21 miehillä (52,5%) ja 19 naisilla (47,5%) – kerättiin välillä marraskuu 2009 ja joulukuuta 2011 kello kolme erillistä keskuksissa: Instituto de Puericultura e Pediatria Martagão Gesteira /Universidade Federal do Rio de Janeiro (IPPMG /UFRJ) ja Hospital Servidores do Estado (HSE), niin Rio de Janeiro (Brasilia), ja Hospital de Clínicas /Universidade Federal do Paraná (HC /UFPR) Curitibassa (Brasilia). Mediaani potilaan ikä oli 5 vuotta (vaihteluväli: 1-14 vuotta). Useimmat näytteistä (48/52; 92,3%) analysoitiin diagnoosin.

Kaikissa tapauksissa lopullinen diagnoosi ja luokittelu perustettiin perustuu morfologisiin ja immunohistokemiallinen analyysit suoritetaan viitelaboratorio jälkeen Maailman terveysjärjestön (WHO ) perusteet [42] – [44] Kolmekymmentä-potilasta (78%) oli syöpä, 17, joista (55%) oli metastaattinen sairaus; loput 9 lasta (23%) oli tulehdussairauksien /reaktiivisia sairauksista. Mukaan histopatologisia /immunohistokemiallinen diagnoosi, 11 potilasta (12 näytettä) oli neuroblastooma, 3 (4 näytettä) oli poikkijuovaislihassarkoomaa 2 (2 näytettä) primitiivisen neuroektodermaalinen kasvain (PNET), 8 (9 näytettä) oli lymfooma, 2 (2 näytettä) Wilms kasvaimet, 2 (3 näytettä) itusolukasvaimet, ja yksi potilas oli lisämunuaissyöpäpotilailla, yksi nenänielun karsinooma, ja yksi hemangioperycitoma; muut 17 yksilöitä vastasi 9 reaktiivisia näytteitä ja 8 näytettä potilaista, joilla on kasvainsairautta joka ei todettu kasvain tunkeutuminen. Erityinen alkuperä yksilöt on esitetään taulukossa S1.

Ethics lausunto

Tutkimus hyväksynyt eettinen komitea IPPMG ja HSE sairaaloiden ja näytteet jälkeen saatu tietoisen suostumuksen antoivat lasten ja heidän vanhempiensa tai huoltajiensa mukaan Helsingin julistuksen protokollaa. Vanhemmat /huoltajat, jos niiden kirjallinen suostumus osallistua tähän tutkimukseen ja tähän kirjallinen suostumus hyväksyi paikallinen eettiset toimikunnat.

Kudosnäytteiden valmistus ja ruumiinnesteiden

kudosnäytteitä vapaa rasvasta ja nekroottista kudosta (keskipaino: 144 mg; alue: 3 3600 mg) kerättiin kirurgiseen yksikköön. Ne suoraan arvioi kokenut patologi, ja jaettu kahteen peräkkäiseen lohkoja. Yksi lohko on kiinnitetty formaliiniin, valettiin parafiiniin ja käsitellään rutiini histopatologia, kun taas toinen asetettiin kylmään (4 ° C) fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta (PBS; pH = 7,4) edelleen virtaussytometria-analyyseillä. Myöhemmin näyte punnittiin, laitettiin petrimaljaan PBS, joka sisälsi 1% naudan seerumin albumiinia (BSA; Calbiochem, La Jolla, CA), jauhettiin pieniksi palasiksi (2-4 mm) leikkausveitsen terällä ja mekaanisesti eriteltyjä kaksi steriiliä neuloja; jälkeenpäin, se suodatettiin steriilin Filcon ruisku (100 pm huokoskoko) poistamiseksi soluklimppien ja roskia, sentrifugoitiin (10 min, 540 g) ja suspendoitiin uudelleen PBS: ään, joka sisälsi 1% BSA: ta lopulliseen konsentraatioon 10

6 solua /ml. Jälkeenpäin näyte värjätään heti MFC Immunofenotyypitys. Luuytimen (BM) ja muita kehon nesteen näytteistä värjättiin joko suoraan tai sen jälkeen, sentrifugointivaiheessa (esimerkiksi virtsan), kuten alla on kuvattu.

Multiparametrimäärityksessä virtaussytometria immunofenotyyppisiä Studies

Jokainen näyte värjättiin seuraavat yhdistelmät fluorokromiin konjugoituja monoklonaalisia vasta-aineita (MAb: t) – fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) /fykoerytriini (PE) /PE-cyanin7 (PECy7) /peridinin klorofylli proteiini-Cy5.5 (PerCP-Cy5.5) /allofykosyaniini (APC) /APC-Hilite7 (APC-H7) /pacific blue (PacB) /Tyynenmeren oranssi (Paco) – omistettu samanaikainen tunnistaminen kasvainsoluissa ja normaali /reaktiivisen B- ja T-lymfosyytit, monosyytit ja neutrofiilit: i) soluliman (Cy) MPO /

CyCD79a /CD19 /CD34 /CD7 /pintakalvon (Sm) CD3 /

CyCD3 /CD45 [45]; ii) CD8-pinnan kalvo immunoglobuliini (

SMIG) λ /CD56-sIgκ /- /CD19 + CD4 /CD3 /- /CD20 /CD45 (suunta paneeli taulukossa S2). Aina kun epäilyttäviä kasvainsolut havaittiin sen jälkeen, kun ruiskutus strategiaa kuviossa 1, lisäksi fenotyyppinen karakterisointi kuten epäilyttävien kasvainsolujen suoritettiin erilliset luonnehdinta paneelit riippuen solujen luonteesta: ei-hematopoieettiset vs B vs T vs muita hematopoieettisia soluja (taulukko S2). Solujen värjäys kiinteistä kudoksista tai BM, perifeerisen veren (PB) ja muiden kehon nesteiden suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu yksityiskohtaisesti [46], [47]. Lyhyesti, näytteet (50 ui per putki) inkuboitiin 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa pimeässä, kun läsnä on 3-20 ui kutakin edellä mainittua monoklonaalista vasta-ainetta (MAb), suositusten mukaisesti valmistajille. Sen jälkeen 2 ml FACS-lyysiliuosta (Becton Dickinson) laimennettuna 1:10 (v /v) lisättiin tislattua vettä, ja näytteitä inkuboitiin vielä 10 minuutin ajan samoissa olosuhteissa kuin edellä mainitut, jotta lyse non -nucleated punasoluja. Sitten solut sentrifugoitiin (5 min 540 g) ja solupelletti pestiin kahdesti 4 ml: lla PBS: ää. Lopuksi solut suspendoitiin uudelleen 0,5 ml: aan PBS: ää. Arviointia varten sytoplasmista (Cy) tai ydin (nu) antigeenejä, solut kiinnitettiin, heti kun ne inkuboitiin MAb suunnattu solun pinnalla kalvon markkereita (katso edellä); Sitten ne tehtiin läpäiseviksi ja värjättiin MAb suunnattu sytoplasmisen ja /tai ydin- antigeenejä, käyttämällä Fix Perm reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), kun noudatetaan valmistajan suositusten. Konjugoimattomaan MAb, inkuboinnin jälkeen eiden, pesuvaihe, jota seuraa toinen inkubointi vaiheen FITC-konjugoidun anti-hiiri-IgG-reagenssia (Cytognos SL, Salamanca, Espanja), suoritettiin (15 min) pimeässä. Jotta voitaisiin vahvistaa spesifisyyden labelings, negatiivista kontrollia leimaamatonta näyte järjestelmällisesti rinnakkain. Stained solut hankittiin alhaisella nopeudella FACSCanto II virtaussytometrillä -Becton /Dickinson Biosciences (BD), San Jose, CA, USA, – käyttäen FACSDiVa ohjelmistoa (BD). Kaikki paitsi kaksi näytettä, käsiteltiin ensimmäisten 4 tunnin kuluttua leikkauksen. Tietojen analyysi, INFINICYT ™ ohjelmiston (Cytognos SL) käytettiin. Antigeeniekspressiota käytettiin tunnistamaan eri tyyppisiä soluja läsnä näytteessä ja kunkin solun määriteltyyn luokiteltiin negatiivinen (-), hämärä positiivinen (+ lo), väli- positiivinen (+) ja vahvasti positiivinen (+ hi) käyttäen mielivaltainen suhteellinen lineaarinen keskifluoresenssi intensiteetti (MFI) arvoja 10

0-10

2, 10

2-10

3, 10

3-10

4, 10

4, vastaavasti, riippuen rahalaitos todetut arvot vs perustason autofluorisaatiota todetulle tasolle säätöputken; antigeeniekspressiota tietylle markkeri kuvattiin olevan heterogeeninen, kun muuttuva ekspressiotasoja havaittiin, että markkeri sisällä solupopulaation.

paneeli A, havainnollistavana esimerkkinä gating strategian ja bivariate pistekuvaajan yhdistelmiä käytetään tunnistaminen CD45- kasvainsolujen, CD45- jäljellä stroomasolut (esim endoteelisolujen ja mesenquimal solut) ja infiltroivia hematopoieettisten solujen (esim neutrofiilit, B- ja T-solut) on esitetty. Puolestaan ​​paneeleissa B j immunofenotyyppisiä profiilia CD45- tuumorisolut neuroblastooma (paneelit B ja H), joka on PNET (paneelit C ja I) ja rhabdomyossarcoma (paneelit D ja J) kasvain on esitetty yhdessä edustajan kuvia n histophathological ja immunohistokemiallinen profiilit saman kasvaimia värjätty hematoxilin eosiini plus cromogranin (neuroblastoomasoluissa paneelissa E), CD99 (PNET solujen paneelissa F) ja

(nu) myogeniinin (rhabdomyossarcoma solujen paneelissa G).

poissulkeminen elinkelvottomien kasvain solut perustui niiden alempi eteenpäin (FSC) ja sivusuunnassa (SSC) valon hajaantuminen ominaisuuksia; mediaani solujen elinkelpoisuus kudosnäytteiden oli 75%. In 19/33 (57,5%) kiinteää kudosnäytteiden, rinnakkain propidiumjodidilla (PI, Sigma, St Louis, MO, USA) suoritettiin arvioida solun elinkykyä, ja gt; 90% PI-värjättiin kuolleiden solujen systemaattisesti vastaavan tapahtumiin jotka jätettiin kuten elottomia soluja FSC /SSC portti.

Histologinen ja immunohistokemiallinen analyysit

Histophatological tutkimus suoritettiin hematoxilin /eosiini (H SPSS ohjelmiston, versio 18,0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Määrä oikeiden positiivisten (TP; näytteitä läsnäolo tuumorisolupopulaatioon havaittuna sekä perinteisen diagnostisia menetelmiä ja virtaussytometria), true-negatiivinen (TN; näytteet ilman tuumorisolupopulaatioon mitattuna tavanomaisilla lähestymistapoja ja virtaussytometria) vääriä positiivisia (FP, näytteet läsnäolo tuumorisolupopulaatioon virtaussytometrialla ei havaitse vertailumenetelmiä) ja vääriä negatiivisia tapauksia (FN; näytteitä havaita kasvainsolujen virtaussytometrialla mutta positiivinen viitenumerolla lähestymistavat), olivat laskettu. Herkkyys ja spesifisyys määriteltiin TP /TP + FN ja TN /TN + FP vastaavasti, kun taas positiivinen (PPV) ja negatiiviset ennustearvot (NPV) laskettiin TP /TP + FP ja TN /TN + FN, vastaavasti.

tulokset

erotusdiagnoosi välillä Reaktiivinen /Non-suodatettuja ja kasvain /tunkeutunut näytteitä

Perustuu seulonta paneeli (paneeli 1 taulukossa S2), 9/52 näytteitä (17 %) vastasi reaktiivisia näytteitä; toinen 8 (15%) näytteistä saatu syöpäpotilaiden sairaus lavastus tai valvontaa varten, olivat myös negatiivisia maligniteetti. Kaikki muut näytteet (n = 35; 68%) osoitti levinnyt kasvain soluja. Yleinen vastaavuutta välinen kurssi MFC ja tavanomaisten histopatologisia immunohistokemiallinen ja /tai sytologiseen diagnostisia menetelmiä oli 96% (50/52 näytettä). Yksityiskohtaisesti, 100% sopimukseen päästiin varten 17 reaktiivisen /tulehdus- ja ei-suodatettuja näytteitä, kun taas 94% konkordanssin korko (33/35 näytettä) saavutettiin MFC soluttautunut kasvainnäytteestä. Kaksi kasvainnäytteestä jotka luokiteltu väärin by MFC vastasivat näytteitä tunkeutunut Hodgkinin lymfooman soluissa ja anaplastinen lymfooma, vastaavasti. Kaikki näytteet tunkeutunut kiinteitä kasvaimia ja B- tai T-solulymfooma tunnistettiin oikein (taulukko 1). Siksi kokonaishyötysuhde on 96% (100% tarkkuus ja 94% herkkyys) päästiin (PPV 100% ja NPV 90%). Solun koostumus on molemmat reaktiiviset /tulehdus- ja muiden ei-suodatettuja näytteitä on esitetty taulukossa S3, kun taas jakelu stroomasolut (tulehduksellinen, endoteeli- ja fibroblastit /mesenkymaaliset solut) 14/26 näytteistä, jotka sisälsivät ei-hematopoieettiset kiinteät kasvaimet on esitetty taulukossa S4.

tunnistaminen lymfooma

Versus

Non-hematopoieettista tuumorisoluissa

yhteensä 35 näytettä (31 potilasta) sisälsi tuumorisolujen perustuu seulonta paneeli (paneeli 1 taulukossa S2) ja luonnehdinta paneelit (paneelit 2-5 taulukossa S2). Niistä, 9 vastasi pahanlaatuisten hematopoieettisten solujen ja 26 ei-hematopoieettista kiinteitä kasvaimia. Kahdessa väärien negatiivisten lymfooman tapauksissa rikas polyklonaalinen lymfosyyttien infiltraatiota havaittiin MFC, ilman selkeästi määriteltyä tuumorisolupopulaatioon. Puolestaan ​​kaikki B-solulymfooma tapausta (5/5) voitaisiin helposti erottaa lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten seulonta paneeli 1 (taulukko S2), jonka ilmentymistä B-solujen markkereita (CD19

+, cyCD79a

+ , CD22

+) yhdessä CD45

+ lo tai CD45

+, vaikka nämä merkkiaineet olivat järjestelmällisesti poissa kaikkiaan 26 lapsipotilailla kiinteitä kasvaimia. Kun B-solun luonnehdinta paneeli (paneeli 3 taulukossa S2) kolme B-solulymfooman näytteet osoittivat pinnalle kalvon

(Sm) Ig kevytketju rajoitus (2 tapausta

SmIgλ

+ ja yksi

SmIgκ

+) yhdessä Tdt

+, CD20

+ hi, CD38

+ hi, CD10

+ hi, cyBcl2

– immunofenotyyppiä joka on erittäin tyypillistä lapsuuden Burkittin lymfooma, paitsi TdT ilme. Kaksi muuta B-solu kasvaimia esitteli kanssa CD45

+ lo, CD19

+, CD20

-, CD22

+, CD10

-, CD38

+, CD58

+, CD81

+, CD9

+,

SMIG

-,

CyIgμ

– fenotyyppi yhteensopiva B-solujen esiaste akuutti lymfaattinen lymfooma (BCP-ALL) sekä MFC ja histopatologia. Puolestaan ​​2 T-solulymfooma näytteet voitaisiin helposti erottaa molemmat lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten ja B-solulymfooma kanssa seulonta paneeli (paneeli 1 taulukossa S2), joka perustuu niiden CD45

+ lo,

SmCD3

+ lo ja

CyCD3

+ fenotyyppi; Lisäksi nämä solut osoittivat myös CD4

+, CD8

-, CD1

+, CD99

+, CD2

+, CD5

+, CD27

+, CD71

+ ja CD81

+ fenotyyppisten profiilin, josta puuttuu CD7

-, CD117

– ja B-solujen markkereita, kun tarvittava seulonta ja luonnehdinta paneelit (paneelit 1 ja 4 taulukossa S2, tässä järjestyksessä) olivat käyttää. Kaikki 26 ei-hematopoieettista kiinteät kasvaimet analysoitiin olivat negatiivisia kaikkien B- ja T-solujen antigeenejä tutkittu seulonnan paneeli (paneeli 1 taulukossa S2), ja ne olivat CD45

-. Kaksikymmentäkaksi näistä myöhemmin tapauksista (84%) ilmaistuna CD56

+ yhdessä vaihtelevan kuvion ilmaisun muiden merkkiaineiden liittyvät eri ei-hematopoieettista kudoksia, jotka olivat mukana luonnehdinta paneelissa kiinteisiin kasvaimiin (paneeli 2 Taulukko S2) kuten alla on kuvattu.

immunofenotyyppisiä Characterization of non-hematopoieettinen tuumorisoluissa

Lähes puolet ei-hematopoieettista kasvaimia vastasi neuroblastooma (12/26; 46%). He osoittivat yhtenäinen populaatio CD45

-, CD56

+, CD9

+, CD81

hi, GD2

+ kasvainsolujen heterogeeninen ilmaus CD57

– /+ ja CD58

+ /++; CD90 oli positiivinen kaikissa paitsi yhdessä kasvain, kun taas CD271 osittain ilmaistu vain yhdellä kasvain (taulukko 2). Mielenkiintoista on, että vain ganglioneuroblastoma kasvaimen analysoitiin, havaittiin kaksi selvästi eri populaatioissa kasvainsolujen: 39% oli immunofenotyyppi identtinen muiden neuroblastoomat, kun taas jäljellä olevia soluja (61%), joka näkyy korkeampi valonsironta (FSC ja SSC) ja lisäämään ilmentymistä CD56, CD81 ja CD57. Mikään muu merkkiaineiden testattu (esim CD99, CD38, CD19, CD20,

CyCD79a, CD34,

numyogenin,

nuMYOD1) ilmaistiin neuroblastoomasoluilla. Kaikki kasvaimet, neuroblastooma oli ainoa GD2

+ hi neoplasia, samalla se osoitti myös korkeampia CD56 tasolla solua kohti (taulukko 2, kuviot 1 ja 2). Vaikka PNET kasvaimia osoitti fenotyypin, joka muistutti neuroblastooma (CD45

-, CD56

hi, CD90

+, CD9

+, CD81

+,

nuMYOD1

–

numyogenin

– puuttuessa B-, T- ja myelooinen liittyvä markkereita), ne olivat negatiivisia GD2, lukuun ottamatta yhtä alhainen ilme pieni kasvain väestö 48%, ja osoitti painokkaammin CD99

hi ja CD271

hi (taulukko 2, kuviot 1 ja 2).

paneeli A: Heat kartta yhteenveto intensiteetti ja rakenteessa ilmaisun eri merkkiaineiden selvä diagnostinen alatyyppejä lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten perustuu keskimääräisen fluoresenssin voimakkuus per /solutasolla. Paneeli B: vertailu keskimääräisestä fluoresenssin voimakkuus ilmaus yksittäisiä merkintöjä kohden /solu eri WHO alatyyppiä lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten. Laatikot ulottuvat kahdeskymmenesviides-seitsemäskymmenesviides persentiilit, rivit keskellä edustavat mediaaniarvot kun vaakaviivoja vastaa 95%: n luottamusväli.

Se perustuu samaan seulonta ja luonnehdinta paneelit (paneelit 1 ja 2 taulukossa S2, vastaavasti), kaikki neljä rabdomyosarkoomiin (RMS) osoitti tiettyä

nuMYOD1

hi,

numyogenin

hi fenotyyppi. Lisäksi RMS tapaukset olivat myös CD45

-, CD56

+ lo, CD90

+ ja CD57

-; kaksi ilmaisi CD81

+, CD9

+ ja CD58

+ ja yksi oli osittain positiivinen CD99 (40% kasvainsolujen), fenotyyppisen malli, joka oli spesifinen tämän kasvain alatyypin (taulukko 2, kuviot 1 ja 2).

loput 8 kasvainnäytteestä vastasi 5 erillistä kasvaimen alatyyppiä (Wilmsin kasvain, 2 tapausta; itusolutuumoritapauksia, 3, lisämunuaisen syöpä, nenänielun karsinooma ja hemangiopericytoma, yhdessä tapauksessa kukin). Vahva EpCAM ilmentyminen rajoittui kaksi karsinoomat, kun taas hemangiopericytoma solut olivat vain näyttää CD34

+ hi ilmaisu; molemmat ryhmät kasvainten systemaattisesti puuttui CD45, B- ja T-solujen markkereita (taulukko 2, kuviot 1 ja 2). Puolestaan ​​kaikki itusolutuumorit esitetään selvä CD45

-, CD56

+, CD10

+, CD38

-, CD19

-, CD22

-, NG2

+ fenotyyppiä, lukuun ottamatta CD10 ja NG2 jotka olivat negatiivisia 1/3 tapauksissa (taulukko 2 ja kuva 2). Sitä vastoin kaksi Wilms kasvaimia osoitti kahdesta selvästi (muut olemassa) kasvainsolupopulaatioissa yhteisellä CD56

+ ja CD58

+, CD45

-, CD99

-, GD2

-,

nuMYOD1

-,

numyogenin

-, CD10

– ja NG2

– fenotyyppi, mutta erillisiä reaktiivisuus (negatiivinen vs. positiivinen ilmaus) ja CD90, EpCAM ja CD57 (taulukko 2, kuviot 1 ja 2).

Kaiken kaikkiaan nämä tulokset osoittavat, että selvä lapsipotilailla kasvaimeen alatyyppejä liittyi ainutlaatuinen ja erityinen fenotyyppejä.

NuMYOD1 ja

numyogenin ilmentyminen rajoittui RMS (kuvio 1J, Figure2), CD99 ilmentyi merkittävästi korkeammat tasot PNET ja alipopulaatio (alkion) RMS (Kuva 1I; kuva 2), kun taas voimakas reaktiivisuus GD2 oli spesifinen neuroblastooma (Kuva 1 H; kuva 2), ja CD34

hi CD45

– fenotyyppi rajoitettiin hemangiopericytoma asiassa tutkittu (kuva 2). Muita vähemmän erityisiä markkereita, kuten CD56, CD9, CD57, CD81, CD99 osallistui myös joitakin erotusdiagnooseissa, esim. erottelu neuroblastooma ja RMS (CD56, CD57, CD81) ja välillä PNET ja molemmat RMS (CD9) ja neuroblastooma (CD99, CD56, CD81 ja CD57) (kuva 1I-J; kuva 2).

Keskustelu

Pediatric syöpä pääosin peräisin varhain lymfoidiedeltäjä- ja alkion mesenkymaalisten ja neuroektodermaaliset esiasteita, jotka voivat osoittaa samanlaisia ​​morfologisia ja histopatologisia kuviot [3], [5] – [7]. Näin ollen, diagnoosi useimmat lapsipotilailla kasvainten vaatii usein edelleen karakterisointi neoplastisten solujen esim. immunophenotypical /immunosytokemiallisia syistä. Puolestaan ​​nopea diagnoosi tällaisissa tapauksissa on ratkaisevan tärkeää, koska se vaikuttaa suoraan hoitoon päätöksentekoprosessi ja potilaiden hoitotuloksiin [2], [3]. Siksi saatavuus nopea tekniikoita tarkasti seulomiseksi kasvainsolun linjaa ja vahvistaa asiaan ero diagnoosit ovat enimmäkseen tervetulleita.

Tähän asti joitakin tutkimuksia on raportoitu, jotka mittaavat hyödyllisyyttä MFC Immunofenotyypitys diagnostisen seulontaan ja alaluokkiin pediatristen kiinteiden kasvainten [11] – [13], [27] – [28], [31], [35] – [39], [41], [48] – [51] on huomattava, että suhteellisen alhainen (59%) vastaavuutta välinen kurssi Immunofenotyypitys hienoksi neula ilmanotto yksilöt virtaussytometrialla ja tavanomaisten sytologiseen analyysejä on raportoitu, alhaisen näytteen soluihin [36]. Mielenkiintoista, tässä saimme tarpeeksi elinkelpoisia soluja jokaisessa näytteessä analysoitiin mekaanisesti erittelemään menettelyjä juuri saatua ja käsitellyistä näytteistä, tukee käsitystä, että mekaaninen erittelemään pitää antigeeniekspressiota sekä hyväksyttävää solujen elinkelpoisuus [16] – [18], [52 ].

Huomattavaa on, että yksikään näytteistä luokiteltu reaktiivisia /tulehduksellinen mukaan sytologisten /histopatologisia kriteereitä oli misdiagnosed syövän MFC. Puolestaan ​​kaikki kasvain näytteet vaan kaksi pikemminkin harvinainen lymfooma näytteitä, tunnistettiin sisältävän kasvaimeen MFC. Kaksi väärä negatiivinen tapauksissa havaittu voi johtua puute erityisiä merkkiaineita Reed-Stenberg ja anaplastinen lymfooma solujen (esim CD30) meidän seulonta paneeli (paneeli 1 taulukossa S2) ja suhteellisen matalien taajuuksien ja /tai elinkelpoisuutta näiden solujen in yksisolususpensioi-. Prospective Otettaessa uusia markkereita (esim CD30) seulonnassa paneelissa tunnistamiseksi näiden solujen saattavat voittaa tämä rajoitus [53], [54].

lapsipotilailla, MFC on pääasiassa sovellettu tutkimus PB ja BM näytteitä potilailta epäluuloinen akuutti leukemia. Tästä huolimatta varhainen tutkimukset neuroblastoomapotilaista jo osoitti BM tunkeutuminen CD45

– /CD56

+ kasvainsoluja, puuttuessa proteiineista ilmaiseva hematopoieettisten sitoutuminen [29], [33]. Koska suhteellisen tiheä metastaattisen BM osallistumista neuroblastooma, tämä on ylivoimaisesti kuin hematopoieettista lapsipotilailla kasvain useimmiten tutkittu MFC. Itse asiassa fenotyyppi neuroblastoomasoluja on ollut toistuvia arvioitu yhden tai monivärinen (3- tai 4-väri) vasta-aineen yhdistelmiä sekä BM ja kasvaimen kudosnäytteiden [35], [48] – [51], [55]. Kuitenkin suurin osa näistä tutkimuksista pyritään arvioimaan minimaalinen jäljellä tauti tasot BM neuroblastoomapotilaista, ilman tutkia hyödyllisyys Immunofenotyypitys varten diagnostisen seulontaan ja erotusdiagnoosia neuroblastooma

vs.

Muiden lasten kasvaimet, tehdyksi täällä.

kaikista markkereita arvioitiin toistaiseksi lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten, CD56 (NCAM) on useimmin tutkittu [31] – [34]. Mielenkiintoista, CD56 ilmentyy useimmissa lapsipotilaiden kiinteiden kasvainten [37] – [39], [51], kuten myös löytyy meidän tapauksissa. Kuitenkin määrä CD56 ilmaisun laajalti vaihteli eri kasvain alatyyppejä. Neuroblastooma ja PNET olivat ne kasvaimia, jotka näkyvät korkeimman CD56 tasolla, tukevat hyödyllisyys CD56 sekä erottamaan ei-hematopoieettista vs. hematopoieettiset kasvaimet [31], [34], ja erotusdiagnoosia välinen selvä alatyyppejä CD45

– ei-hematopoieettiset lapsipotilailla kiinteitä kasvaimia. Vastaavasti useat tutkimukset ovat arvioineet hyödyllisyys CD81 ja CD9 (yhdessä CD45

– ja CD56

+), että syrjiä neuroblastoomasoluilla ja BM hematopoieettisten solujen, sillä lavastus tarkoituksiin [13], [48] – [49], [55], ilman ulottuu tällainen analyysi muihin alatyyppeihin pediatristen kiinteitä kasvaimia. Keskuudessa tapauksissa CD81 ja CD9 osoitti vaihteleva ja heterogeeninen kuvio lausekkeen vähäisiksi yksittäisinä markkereita, erotusdiagnostiikassa välillä neuroblastooma ja muiden pediatristen kasvaimia. Kuitenkin, kun yhdistettynä muihin molekyyleihin, CD81 osaltaan syrjinnän neuroblastooma ja PNET. Tästä huolimatta GD2 ja CD271 olivat kaksi hyödyllisin markkereita erottamaan neuroblastooma (GD2

+ hi CD271

– /lo) ja PNET (GD2

– /lo CD271

+ hi). Kaiken kaikkiaan nämä tulokset tukevat käsitystä, että CD271

hi ilme tunnistaa PNET voivat liittyä mesenkymaalisten kantasolujen alkuperä näistä kasvaimista [56]. Mielenkiintoista on, että ainoa neuroblastooma potilas, joka osoitti CD271

– /+ lo kasvainsoluja, CD271 ilmentyminen rajoittui primaarikasvaimen, kun taas negatiivinen metastaattisen BM-soluissa; tämä saattaa johtua eriasteisen tuumorisolun kypsymisen sekä sivustoja, puuttuminen CD271 olla mukana enemmän kehittymätön ja aggressiivinen kasvain käytös [57] – [58]. Huomattavaa on, että CD99 oli myös erittäin ilmaistu PNET, kun taas tyypillisesti negatiivinen muissa kasvaimissa, mikä viittaa siihen, että lisäksi CD271, CD99 voi myös edistää diagnoosi PNET.

Harvat MFC immunofenotyyppisiä tutkimukset RMS on toistaiseksi raportoitu. Mukaisesti havaintojemme niin tutkimukset osoittivat, että RMS solut tyypillisesti näyttää CD45

-, CD56

+, CD90

+,

numyogenin

+ ilmiasuun vaihteleva ilmentymä CD57, desmiini, vimentiinistä ja CD99 [31], [36], [39], [41].