Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Tuumorinekroositekijä-α (TNF-α) on keskeinen rooli kehitettäessä ja etenemisen mahasyövän. Toimiva polymorfismi, -308 G A (rs1800629), joka sijaitsee promoottorin

TNFA

-geeni, on ehdotettu muuttaa TNF-α ja vaikuttaa syövän riskiä. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme pyrkineet tutkimaan, onko tämä polymorfia on vaikutuksia riskiin ja etenemisen mahasyövän kiinalaisessa väestöstä.

Methods

genotyyppi

TNFA

-308 G polymorfismi käyttäen TaqMan menetelmää kaksivaiheisessa tapauskontrollitutkimuksessa käsittää yhteensä 1686 mahasyöpäpotilaista ja 1895 syöpää vapaa aiheista. Logistinen regressio käytettiin arvioimaan geneettisiä kytkentöjä esiintyminen ja eteneminen mahasyövän.

Tulokset

Olemme löytäneet merkittävän assosiaatio variantin genotyyppien ja lisääntynyt mahalaukun syövän riski [

P

= 0,034, kerroinsuhde (OR) = 1,39, 95%: n luottamusväli (CI) = 1,01-1,67, GA /AA vs. GG]. Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin seurannassa lisääntymään tutkimus. Kun yhdistetään tietoja kahdessa tutkimuksessa, löysimme enemmän merkittävää yhteyttä (

P

= 0,001, OR = 1,34, 95% CI = 1,13-1,59), erityisesti ikääntyvien aiheista ( 65 vuotta). Lisäksi potilaat kuljettaa variantti genotyypit oli merkittävästi suurempi esiintyvyys T4 taudin vaiheesta (

P

= 0,001, OR = 2,19, 95% CI = 1,39-3,47) ja etäpesäkkeiden (

P

= 0,013, OR = 1,61, 95% CI = 1,10-2,35).

Johtopäätökset

Tuloksemme viittaavat siihen, että funktionaalinen promoottori -308 G polymorfismi

TNFA

vaikuttavat alttiuteen ja etenemisen mahasyövän Kiinan väestöstä.

Citation: Hong Y, Ge Z, Jing C, Shi J, Dong X, Zhou F, et ai. (2013) Functional Promoottori -308G muunnos, tuumorinekroositekijä a Gene liittyy riski ja eteneminen mahasyövän kiinalaisessa väestöstä. PLoS ONE 8 (1): e50856. doi: 10,1371 /journal.pone.0050856

Editor: Ramon Andrade de Mello, Porton yliopisto, Portugali

vastaanotettu: toukokuu 27, 2012; Hyväksytty: 29 lokakuu 2012; Julkaistu: 10 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Hong et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tuettiin osittain ”Six Talent Summit” Project Jiangsun maakunnassa (SWYY-71-028), National Natural Science Foundation of Jiangsu (BK2011194) ja National Natural Science Foundation of China (30872084, 30972444 ja 81001274). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpä on neljänneksi yleisin syöpä ja toiseksi yleisin syy syövän liittyvät kuolemat maailmanlaajuisesti, ja erityisen yleistä tietyissä maissa, kuten Kiinassa [1], [2]. Vaikka tarkkaa etiologiaa mahasyöpä vielä tunnistettu, varaamiseen epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että ruokavalio, tupakointi, alkoholin ja erityisesti

Helicobacter pylori

(

H. Pylori

) infektio, ovat hyvin tiedossa syitä mahasyöpä [3], [4]. Kuitenkin hyvin yleisiä näistä riskitekijöistä eivät aina johda korkea esiintyvyys mahasyövän, mikä viittaa siihen, että muita herkkiä tekijät, kuten geneettiset variaatiot ja ympäristön erot voivat vaikuttaa myös mahasyövän. Viime aikoina kehittyvien tutkimusten mukaan geneettinen polymorfia kandidaattigeenit liittyi herkkyys syöpään [5], [6], [7].

On esitetty, että krooninen tulehdus mahalaukun limakalvon indusoi

H. pylori

infektio on kriittinen vaihe kehityksessä mahasyövän [8], [9]. Siinä tapauksessa, geneettisiä vaihteluita tulehdukseen liittyvien sytokiinien geenit voivat olla mahdollisia herkkyystekijöitä tähän sairauteen. Yksi tärkeistä sytokiinien liittyy

H. pylori

infektio on tuumorinekroositekijä (TNF) -α, joka koodaa

TNFA

geenin [10]. TNF-α on pleiotrooppinen sytokiini, tuotetaan pääasiassa aktivoidut monosyytit ja makrofagit, ja sillä on tärkeä rooli inflammatorisen vasteen [11]. On ehdotettu, että yli TNF-α osoitti merkittävää vakavuudesta-annos-vaste-riskin markkereita pre-neoplastisia vaurioita syöpään [12].

TNFA

geeni on sijaitsevat HLA luokan III alue kromosomissa 6 (6p21) ja on erittäin polymorfinen. Polymorfismien

TNFA

geeni on osoitettu vaikuttavan suuresti sen ekspressiotason [13]. Näin ollen, monet tutkimukset yrittivät tutkia polymorfismien promoottori

TNFA

voidaan käyttää oletetun ratkaiseva tekijä herkkyys eri sairauksia, mukaan lukien mahasyöpä. Useiden polymorfismien

TNFA

promoottori,

TNFA

-308 G polymorfismi oli villisti tutkittiin ja on toiminnallinen tutkimus viittaa siihen, että -308A alleeli liittyy lisääntynyt TNF-α tuotanto [14]. Kuten mahasyövän, useat tutkimukset suoritettiin tutkimaan assosiaatioita

TNFA

-308 G polymorfismi ja mahasyövän eri populaatioissa, mutta tulokset muodostavat nämä tutkimukset ovat edelleen osallisuutta [15], [16], [17], [18], [19]. Tähän mennessä kaksi julkaistua meta-analyysit tästä asiasta ovat ehdottaneet, että -308 G polymorfismi oli yhteydessä mahasyövän Länsi väestön, mutta ei aasialaisilla [20], [21]. Tässä esillä olevassa tutkimuksessa, teimme suhteellisen suuri kaksivaiheisen tapauskontrollitutkimuksessa joka sisälsi yhteensä 1686 mahasyöpäpotilaista ja 1895 syöpää vapaa aiheita arvioitava edelleen vaikutus

TNFA

-308 G polymorfismi mahalaukun syövän riskiä ja etenemistä Kiinan väestöstä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of Nanjing Medical University, Nanjing, Kiina. Tällä rekrytointi, kirjallinen suostumus saatiin kaikki osallistujat mukana tässä tutkimuksessa.

Tutkimuskanta

Tämä on jatkuva molekyyli- epidemiologinen tutkimus mahasyövän suoritettiin ensimmäinen Affiliated sairaala Nanjing Medical University Nanjing, Kiina. Suunnittelu Tutkimuksen ja mukaanottokriteereihin koehenkilöistä aiemmin kuvattu muualla [22]. Lyhyesti, kaksi riippumatonta sairaala-pohjainen tapausverrokkitutkimukset sisällytettiin tässä tutkimuksessa. Kaiken Koepakettia mukana 750 mahalaukun tapauksissa ja 835 iän ja sukupuolen verrokit palvelukseen toisessa sidoksissa sairaalaan Nanjing Medical University, Nanjing ja Cancer sairaalan Nantong, Nantong, Kiina maaliskuusta 2006 tammikuuhun 2010 ja validointi asettaa mukana 936 tapauksissa ja 1060 tarkastuksia ilmoittautunut alkaen Yixing kansan sairaalassa, Yixing, Kiina tammikuusta 1999 joulukuuhun 2006. Kaikki koehenkilöt olivat etninen Han-kiinalaiset tulevat eri perheiden ja ei ollut verta suhdetta. Kaikki potilaat olivat vasta diagnosoitu histopatologisesti vahvistettu, tapaus mahasyövän ja otettiin peräkkäin palvelukseen ilman rajoituksia iän ja sukupuolen. Histologinen osa kaikista tapauksista tarkistettiin kaksi patologia itsenäisesti. Niillä potilailla, joilla oli aikaisempaa syöpä, metastasized syöpä muista tai alkuperältään tuntematonta, tai edellinen sädehoitoa tai kemoterapiaa suljettiin pois. Kontrollit rekrytoitiin terveillä koehenkilöillä, jotka etsivät lääkärintarkastus että poliklinikoilla jatkaa vastaavassa sairaalassa ja oli taajuus-sovitettu tapauksiin iän (± 5 vuotta) ja sukupuoli. Syöpä-vapaa ohjaus ei geneettisesti liity tapauksiin ja ei ollut yksilöllinen syöpä. Kukin potilas lahjoitti 5 ml laskimoverta jälkeen tarjoamalla kirjallinen lupa. Vastausprosentti tapausten ja verrokkien oli sekä yli 85%.

DNA: n eristämistä ja genotyypityksen

Koko genominen DNA eristettiin ja puhdistettiin valkosolut ääreisverenkierron proteinaasi K: ruoansulatusta ja fenoli /kloroformiuutolla.

TNFA

-308 G polymorfismi on genotyyppi käyttäen TaqMan-MGB-menetelmää (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), joka käyttää kahta alleeli-spesifinen TaqMan MGB-koettimia ja PCR-alukeparia havaitsemaan erityiset SNP tavoite. Sekvenssi alukkeiden ja koettimien ovat saatavilla pyynnöstä. Reaktioseos 10 ui sisälsi 20 ng genomista DNA: ta, 3,5 ui 2 x TaqMan-genotyypin Master Mix, 0,25 ui alukkeita ja koettimia sekoitetaan ja 6,25 ui kahteen kertaan tislattua vettä. Monistus suoritettiin seuraavissa olosuhteissa: 50 ° C 2 min, 95 ° C: ssa 10 min, mitä seurasi 45 sykliä 95 ° C 15 sekuntia, ja 60 ° C 1 min. Sen jälkeen valmistajan ohjeita, tiomonistukset suoritettiin 384-hyvin ABI 7900HT Real Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ja alleelinen syrjintä suoritettiin käyttäen SDS 2.4 ohjelmisto (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Genotyypin hinnat Näiden SNP olivat kaikki yli 98%. Tarkkuuden varmistamiseksi genotyypityksen, kaksi negatiivista kokeellinen kontrolli (vesi) ja kaksi positiivista kokeellista säätimet tunnetun genotyypin sisällytettiin kussakin reaktiossa levyyn. Lisäksi noin 5% näytteistä valittiin satunnaisesti toistuvaa genotyypitystä vahvistusta; ja tulokset olivat 100% sopusoinnussa.

Tilastollinen

Ennen tarkempaa analysointia, alleelifrekvenssien

TNFA

-308G polymorfismi ohjaimissa Koepakettia, validointi set ja yhdistelmän arvioitiin vastaan ​​poikkeamat Hardy-Weinberg tasapaino (HWE) käyttäen hyvyys fit χ2-testi. Erot jakaumat iän, sukupuolen ja taajuudet genotyyppien

TNFA

-308G polymorfismi välillä tapausten ja kontrollien arvioitiin Pearsonin χ2 testi. Liitot välinen -308G genotyypit ja mahalaukun syövän riski sekä kliinisen potilaiden ominaisuuksiin mitattiin laskemalla kertoimet suhdeluvut (syrjäisimmillä alueilla) ja 95%: n luottamusvälit (CI) alkaen ehdoton regressioanalyysimme kanssa säätö iän ja sukupuoli. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin ohjelmiston SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, USA) ja kahden puolen

P

arvo on alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

tulokset

ominaisuudet tutkimuspopulaation

frekvenssijakaumat demografisten ominaisuuksien ja kliinisiä piirteitä kahdet tutkimusryhmä on esitetty taulukossa 1. tapaukset ja verrokit sovitettu iän ja sukupuoli (

P

= 0,383 ja 0,424 testissä set ja

P

= 0,164 ja 0,061 in validointi asetettu, vastaavasti). Vaikka yhä vanhempia aiheita ( 65 vuotta) ja naisille esiteltiin koepaketin kuin validointi asetettu, ei merkittävää eroa iän ja sukupuolen välillä tapausten ja kontrollien havaittiin, kun yhdistimme kaksi populaatioiden (taulukko 1). Vuonna Koepakettia oli 295 cardia mahasyövän (CGC) potilasta ja 455 ei-cardia mahasyövän (NCGC) potilasta; 406 potilaasta diagnosoitu hajanainen tyyppi mahasyövän ja 299 kuten suoliston tyyppi. Kliiniset TNM luokitellaan sen mukaan syvyyteen hyökkäystä, imusolmuke etäpesäke ja etäinen etäpesäke. Prosentuaalinen TNM potilaiden testissä asettaa I-IV oli 26,8%, 22,0%, 35,5%, ja 15,7%, tässä järjestyksessä. Niistä 936 potilaasta validointi asetettu, 358 olivat CGC ja 578 olivat NCGC; 539 potilasta diagnosoitu hajanainen tyyppi mahasyövän ja 397 kuten suoliston tyyppi. Noin 27,7%, 19,8%, 42,2% ja 10,3% potilaista todettiin TNM I, II, III ja IV sairauksia, vastaavasti.

välisestä assosiaatiosta

TNFA

-308 G polymorfismi ja mahalaukun syövän riski

Genotyyppaustulokset tulokset

TNFA

-308 G polymorfismi keskuudessa potilaiden ja verrokkien kahdessa tutkimuksessa joukko on esitetty taulukossa 2. havaittu genotyyppi taajuuksia ohjaimissa Koepakettia, validointi asettaa ja yhdistetyt asettaa olivat kaikki sopeutui HWE (

P

= 0,481, 0,448 ja 0,946, tässä järjestyksessä). Sitten käytetään Pearsonin χ2 testi ja logistista regressioanalyysiä arvioida yhdistyksen välillä

TNFA

-308 G polymorfismi ja mahasyövän riskiä. Testissä set, huomasimme, että siellä oli enemmän variantti genotyyppejä (GA /AA) jos ryhmässä kuin kontrolliryhmässä (

P

= 0,034). Verrattuna yksilöiden GG-genotyyppi, löysimme niistä aiheista, joilla GA /AA genotyyppien oli lisääntynyt mahalaukun syövän riski (oikaistu OR = 1,39, 95% CI = 1,01-1,67). Vastaavia yhteyksiä havaittiin replikointi tutkimuksessa (GA vs. GG: OR = 1,29, 95% CI = 1,02-1,65 ja GA /AA vs. GG: OR = 1,31, 95% CI = 1,03-1,65). Kun yhdistimme tietoja kahdesta tutkimuksesta, merkittävämpi havaittu yhteyttä (GA vs. GG: OR = 1,33, 95% CI = 1,12-1,59 ja GA /AA vs. GG: OR = 1,34, 95CI% = 1,13-1,59 ).

arvioimiseksi jos

TNFA

-308 G polymorfismi lla eri rooli alaryhmien ikä, sukupuoli, kasvaimen kohdalle ja histologiset tyypit, me sitten suoritetaan kerrostunut analyysi perustuu näistä muuttujista. Kuten taulukosta 3, kerrostunut analyysi osoitti, että lisääntynyt riski liittyy

TNFA

-308GG /GA genotyyppien oli selvempää ikääntyneiden koehenkilöillä ( 65 vuotta) (

P

0,001, OR = 1,70, 95% CI = 1,28-2,25). Sitä paitsi, ei havaittu merkittävää eroa Ositusmenetelmässä sukupuoleen, kasvaimen kohdalle ja histologisia tyyppejä.

välisestä assosiaatiosta

TNFA

-308 G polymorfismi ja kliininen potilaiden ominaisuuksiin mahalaukun syöpä

polymorfismit kandidaattigeenit on ehdotettu vaikuttavan syövän etenemiseen. Sitten arvioitiin, onko

TNFA

-308 G polymorfismi on vaikutuksia kliinisten potilaiden ominaisuuksiin, kuten TNM, kaukainen etäpesäke, imusolmuke etäpesäke ja syvyys kasvaimen tunkeutuminen. Kuten taulukossa 4 on esitetty, olemme huomanneet, että potilaat kuljettavat variantin genotyypit oli merkittävästi suurempi esiintyvyys T4 vaiheen hyökkäsi syvyys (

P

= 0,001, OR = 2,19, 95% CI = 1,39-3,47) ja kaukainen etäpesäke (

P

= 0,013, OR = 1,61, 95% CI = 1,10-2,35), joka osoittaa polymorfismia saattaa liittyä mahalaukun syövän etenemisessä.

keskustelu

tärkeimmät havainnot Tutkimuksemme ovat merkittäviä assosiaatioita

TNFA

-308 G polymorfismi ja mahalaukun syövän riskiä ja etenemiseen. TNF-α on tärkeä immuunijärjestelmän välittäjä tulehdusvasteen ja on ehdotettu olevan endogeenisen kasvaimen promoottori ihmisen karsinogeneesissä [23], [24], [25]. Mahasyövän, Senthilkumar

et al.

Osoittaneet, että TNF-α-mRNA: n ja proteiinin ilmaisuja lisättiin merkittävästi mahalaukun adenokarsinooman potilailla, käyttäen RT-PCR: llä, Western blotting ja immunohistokemia [12]. Vaikutuksesta -308G polymorfismi ilmenemistä tasolla

TNFA

on aiemmin tutkittu. Karen

et al.

Osoitti, että -308G polymorfismi voi vaikuttaa affiniteetti tekijä sitovia ja johtaa tekijän sitoutuminen -308A alleelin, mutta ei -308G alleeli, joka sitten johtaa lisääntynyt ekspressio on

TNFA

[14]. Ottaen huomioon, että TNF-α on säädelty mahasyövän, on mahdollista, että yksilöt kantavat -308A alleelin (ts. GA /AA), joka liittyy tehostettuun TNF-α, on lisääntynyt riski mahasyövän. Siksi on biologisesti uskottava, että

TNFA

-308G annetaan ihmisten alttiutta syöpään.

Toistaiseksi useat molekyylien epidemiologiset tutkimukset on tehty tutkimaan assosiaatiota

TNFA

-308G polymorfismi ja mahasyövän riskiä. Kuitenkin tulokset näistä tutkimuksista ovat edelleen epäselviä. On kaksi julkaistu meta-analyysejä assosiaatioita

TNFA

-308G A ja mahalaukun syövän riski, jotka ovat tunnistaneet tämän polymorfismi riskitekijänä mahasyövän valkoihoisilla populaatioiden mutta ei aasialaisilla [20] , [21]. Kun tarkastellaan kahta meta-analyysit, löysimme vain 3 tutkimuksissa yhteensä 513 tapausta ja 714 valvontaa ja 5 tutkimuksissa yhteensä 833 tapausta ja 1375 valvontaa Kiinan populaatiot olivat mukana meta-analyysit Zhang

et al.

[20] ja Gorouhi

et al.

[21], vastaavasti (taulukko 5). Tutkimusten lukumäärä ja näytteen kokoa Näiden tutkimusten voi olla liian rajoitettu saavuttaa vakaa tulos. Näistä tutkimuksista, vain Lu

et al.

Löytyi Merkitsevä yhteys

TNFA

-308GA genotyypin ja kohonnut mahalaukun syövän riskiä (OR = 1,81, 95% CI = 1,04-3,14) . Tutkimuksemme lisäksi täsmentää

TNFA

-308G polymorfismi riskitekijänä mahasyövän Kiinan väestöstä, joka voi olla hyötyä arvioitaessa rooli TNF α on mahasyövän. Kuten Power ja Sample Size Laskentaohjelmisto, tutkimuksemme oli 96% teholla havaitsemaan OR = 1,50 tai suurempi ja minimaalinen OR 0,62 altistumisen taajuus 9% vuoden näytekoko (1686 tapausta ja 1895 tarkastukset) , mikä viittaa siihen, että otoskoko Tutkimuksemme on tehokasta.

lisäksi huomasimme, että

TNFA

-308G polymorfismi oli yhteydessä lisääntyneeseen mahalaukun syövän riski keskuudessa alaryhmiä vanhemmissa koehenkilöissä (ikä 65 vuotta) sijasta nuoremmilla potilailla. Tämä havainto on hyvin tuettu runsaasti tutkimuksia, jotka yhdistävät heikko immuunijärjestelmä ikääntymiseen [26], [27]. Immuunijärjestelmän ikäisten yksilöiden läpi muutoksia, jotka voivat selittää lisääntynyt alttius syöpäsairauksia [26]. On ehdotettu, että korkean ilmentymisen TNF-α voi olla mukana kasvaimen kasvun ja leviämisen vaikuttamalla kudoksen uudelleen ja strooman kehittämiseen [28], [29]. Tutkimuksessamme löysimme myös

TNFA

-308G polymorfismi oli yhteydessä kliinisissä aggressiivisuutta kuten kehittyneitä kasvain vaiheessa ja etäinen etäpesäke. Samanlaisia ​​havainto on myös raportoitu muissa tutkimuksessa [30]. Jos vahvistettu lisätutkimuksia, tämä polymorfismi voisi auttaa ennustaa kliinistä kulkua mahalaukun syöpään. Näitä tuloksia on tulkittava varovaisesti, koska on olemassa mahdollisuus, että yhdistysten huonon ennusteen johtuu myöhäisessä vaiheessa diagnoosi.

tulkittaessa tuloksemme, jotkut muut rajoitukset tulisi myös olla huolissaan. Ensinnäkin, koska tutkimuksemme oli sairaalassa-pohjainen suunnittelu, mahdollisuus valinta bias aiheista, jotka liittyivät tiettyyn genotyypin voisi olla. Kuitenkin genotyyppi jakaumat meidän valvonta olivat samankaltaisia ​​jakaumat raportoitu muissa Kiinan tutkimuksen ja sopeutui HWE. Siksi valinta bias kannalta genotyypin jakaumien ei olisi merkittävää. Toiseksi,

H. pylori

infektio tila on hyvin tunnettu syy mahasyövän ja on ehdotettu vaikuttavan ilmentymisen TNF-α [31]. Geneettinen vaihtelut

TNFA

voivat olla vuorovaikutuksessa tämä tekijä vaikuttaa mahalaukun Caner riski. Valitettavasti puute saatavilla olevat tiedot

H. pylori

tartuntatilanne tutkimuksessamme rajattu voimme jatkaa näiden vuorovaikutusta. Siten lisätutkimukset yksityiskohtaisemmat tiedot

H. pylori

infektio ovat perusteltuja.

Yhteenvetona tuloksemme viittaavat siihen -308G polymorfismi edistäjä

TNFA

on merkittävä vaikutus esiintymiseen ja etenemiseen mahalaukun vuonna Kiinan väestön. Vaikka yhdistysten näytti olevan tilastollisesti merkitsevä Väestön nämä havainnot tulisi itsenäisesti varmistanut muiden mahdollisten tutkimusten suurempi otoskoko samanaikaisesti hyvin verrokit ja puolueeton-Hyväksytty homogeeninen osallistujia.