Krooninen sairaus

tiivistelmä

autoimmuunipankreatiitti (AIP) on määritelty ominaisuus lymfoplasmasyyttinen soluttautua, duktaalisia ahtaumat ja haiman laajentumista tai massa, jotka voivat jäljitellä haimasyöpä (PaCa). Ero tämän hyvänlaatuinen tauti ja haimasyövän voi olla haastavaa. Kuitenkin tarkka diagnoosi voi ennakoida diagnosoida syövän, jolloin asianmukaista hoitoa AIP ja siten vähentää turhia haiman asemointia.

Massaspektrometria (MS) ja kaksiulotteinen ero geeli elektroforeesi (2D-DIGE) on sovellettu analysoida seerumiproteiiniin muutoksiin liittyvät AIP ja PaCa, sekä tunnistaa proteiinin allekirjoitukset osoitus sairauksia. Potilaiden seerumit immunodepleted päässä 20 näkyvin seerumin proteiineihin ennen edelleen 2D-DIGE ja kuva-analyysi. Identiteetti eniten syrjivä proteiineista havaitaan, suoritettiin MS ja ELISA sovellettiin vahvistamaan ilmaisua. Seerumin profilointi tietojen analysointi 2D-DIGE paljasti 39-proteiinia huiput pystyvät erottelemaan AIP ja PaCa. Proteiinit puhdistettiin ja analysoitiin edelleen MALDI-TOF-MS. Peptidi massa sormenjälkien johti tunnistamiseen yksitoista proteiineja. Niistä apolipoproteiini AI, apolipoproteiini A-II, transtyretiini, ja tetranectin tunnistettiin ja löydettiin 3.0-, 3,5-, 2- ja 1,6-kertaisesti vähentynyt PaCa seerumista, vastaavasti, kun taas haptoglobiinin ja apolipoproteiini E: n havaittiin olevan 3.8- ja 1,6-kertaiseksi koholla PaCa seerumeissa. Lukuun ottamatta haptoglobiini ELISA tulokset tunnistettujen proteiinien vahvisti 2D-DIGE kuva-analyysin ominaisuuksia. Integrointi tunnistettu seerumin proteiinit AIP markkereita voivat olla huomattavia mahdollisuuksia antaa lisätietoja diagnosoimiseksi AIP valita sopiva hoito.

Citation: Felix K, Hauck O, Fritz S, Hinz U, Schnolzer M , Kempf T, et ai. (2013) Serum Protein allekirjoituksista eriyttäminen autoimmuunipankreatiitti versus Haimasyöpä. PLoS ONE 8 (12): e82755. doi: 10,1371 /journal.pone.0082755

Editor: Henrik Einwaechter, Klinikum rechts der Isar der TU München, Saksa

vastaanotettu: 02 tammikuu 2013; Hyväksytty 4 marraskuuta 2013 Julkaistu: 09 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Felix et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tuettiin osittain Saksan Research Foundation (DFG) FE 940 /2-1. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saanut tätä tutkimusta varten. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

autoimmuunipankreatiitti (AIP) on selvä kliininen kokonaisuus, kuvattu krooninen tulehduksellinen prosessi haima kanssa autoimmuunisairaus mekanismeja. Kliinisesti ja histologisesti, kaksi osajoukot autoimmuunipankreatiitti (tyypin 1 ja tyypin 2 AIP) on olemassa, ja olisi erotettava [1] – [4]. Tyyppi 1 AIP, joka on lymfoplasmasyyttinen sklerosoiva haimatulehdus (LPSP), esitetään joitakin tyypillisiä piirteitä: periductal lymfoplasmasyyttinen soluttautua, fibroosia, obliteroiva venuliitti, ja soluttautumista IgG4-positiivisten plasmasolujen. Tyypin 2 AIP idiopaattisen kanava-keskeinen haimatulehdus (IDCP) on tyypillistä massiivinen tunkeutuminen granulosyyttien haiman parenchyma ja ductal epiteelin vaurioita (GEL). Nämä piirteet on kuvattu Mayo HISORt kriteerit, joita käytämme klinikalla [5]. Tyypin 1 AIP pääasiassa vaikuttaa aikuisten miesten kanssa 90%: lla potilaista oli yli 40-vuotiaita [6]. Yleisin kliininen esittelyä tyypin 1 AIP on akuutti obstruktiivinen keltaisuus, joka raportoidaan jopa 75%: lla potilaista [7]. Lisäksi haiman laajentumista tai massa voi jäljitellä haimasyövän jopa 80%: lla potilaista [1]. Läsnäollessa uuden diabeteksen ja laihtuminen, erottelu AIP ja haimasyövän voi olla haastavaa. Lisäksi on CT tai magneettikuvaus (MRI), tietty ”makkaranmuotoista” laajentuminen haima viivästymistä oheislaitteiden lisälaite (vanne lisälaite) on kuvattu [8] – [10]. Endoskooppinen Retrograde Cholangio-Pancreatography (ERCP) paljastaa tyypillisiä segmentaalista kaventaminen ja useita ahtaumien, jonka avulla voidaan erottaa haimasyövän ja ensisijainen sklerosoiva kolangiitti [11] – [13]. Tyypin 1 AIP esittelee useita serologisia ominaisuuksia. Näkyvin niistä on kohonnut seerumin IgG4, mikä on ratkaisevaa diagnoosia puuttuessa histologian mukaan Mayo HISORt kriteerit [5]. Lisäksi ydinvoimaa vastustava vasta, anticarbonic anhydrase ja antilactoferrin voidaan lisätä myös. AIP voi usein olla vaikea erottaa PaCa kuin potilaiden väestötiedot sekä kliiniset ja kuvankäsittelyominaisuuksia (esim haiman laajentumista, obstruktiivinen keltaisuus 76%, laihtuminen 35% potilaista), ovat samankaltaisia. Siksi on toivottavaa tunnistaa AIP koska 2,5-11% kaikista potilaista, joille tehdään leikkaus, joiden epäillään PaCa todella ottaa hyvänlaatuinen tulehduksellinen sairaus haiman [14] – [16]. AIP voidaan hoitaa steroideja, ja korkeat vastaus tähän hoito on tärkeä diagnostinen kriteeri. Siksi on äärimmäisen tärkeää diagnosoida AIP valita sopiva hoito ja välttää turhia kirurgian.

tavoitteena alustavan tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää seerumin proteiineihin (seerumin biomarkkerit), jotka mahdollistavat erotteleva AIP alkaen PaCa. Tätä varten käytimme proteomic strategiaa hahmoteltu kuvassa 1. proteiinien identiteetin havaittujen määritettiin yhdistämällä useita tekniikoita, mukaan lukien seerumin proteiini fraktiointi immuuniaffiniteettikromatografialla vähennys- näkyvästi proteiinien 2D-geelielektroforeesilla ja massaspektrometrialla ja lopulta vahvistettu ja arvioida seerumin proteiinin tasot entsyymi-immunologiset määritykset (ELISA).

Kuusi seerumia kunkin ryhmän (AIP, PaCa ja Ctr) ensin alistetaan vähentämiseen seerumin monimutkaisuutta poistamalla 20 runsaimmin seerumin proteiineja immunodepletion sarakkeita. Immunoaffiniteettipylvää–käsitellyt seerumit tehtiin rinnakkain 2D-DIGE ja 2 D PAGE, ja ilmennetty eri proteiineja tunnistetaan DIGE kuva-analyysi oli sovitettu preparatiivisessa geelin, Proteiinin täplät leikattiin kuten geeli tulpat, valmistettu tryptisiin ruoansulatusta ja tunnistaa NEITI. Konformaatio ja pilotti validointi tunnistettu proteiinien suoritettiin ELISA.

Materiaalit ja menetelmät

Näytteiden kerääminen

Haiman kudosnäytteet prospektiivisesti kerättiin tammi 2003 ja maaliskuun 2010 Department of Surgery, Heidelbergin yliopisto. Diagnoosi krooninen haimatulehdus (CP), PaCa tai AIP varmistettiin histopatologisesti. Mikäli AIP, Mayo Clinic (HISORt) käytetyt perusteet [5]. Histologinen tarkastelu formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut ja H 3 proteiineja, joka on osoittanut erinomaista sopimuksen (kappa = 0,70) kaupallisella serologisiin määritys luokitus [20].

proteomianalyysi

2D-DIGE Ennen kaksiulotteinen eriyttäminen analyysi AIP, PaCa ja kontrolliseerumeita erotusvaihe poistaa 20 näkyvin seerumin proteiineihin suoritettiin saavat paremman pääsyn vähemmän näkyvästi seerumin proteiineihin. Tätä tarkoitusta varten seerumit alistettiin immunodepletion vaiheessa käyttäen ProteoPrep 20 kit ja käyttöohjeet (Sigma, Deisenhofen, Saksa). Köyhdytettyä ja laimennettiin seerumit jälkeen säädettiin haluttuun proteiiniin pitoisuudet 1,0 mg /ml proteiini saostustoimenpiteet Wessel ja Flügge, ja proteiini sakat käyttövalmiiksi lyysipuskuriin (8 M urea, 20 mM Tris, 4% CHAPS, pH 8,5) [23]. Näytteitä käytetään 2D-DIGE analyysi leimattiin CyDye DIGE Fluor minimaalinen väriaineet (GE-Healthcare GmbH, Freiburg, Saksa) ennen 2D geeli analyysiin. Tätä tarkoitusta varten 50 ug proteiinia sekoitettiin 400 pmol CyDye liuotetaan DMF: ään, vorteksoitiin, kehrätty, ja inkuboitiin pimeässä jäissä 30 min. Ylimääräinen väriaineen sitoi lisäämällä 1 ui 10 mM lysiiniä seokseen. Yksityiskohtainen protokolla on kuvattu käyttöohjeen Ettan DIGE System (GE-Healthcare 2005) ja [24].

Immobiline- DryStrips 24 cm ja pH 3-10 NL (GE Healthcare) on passiivisesti ladattiin 300 ug proteiinin näytteet suspensoitiin uudelleen 350 ul: ssa seokseen, jossa oli 150 ui lyysipuskuria (7 M urea, 2 M tioureaa, 4% paino /tilavuus CHAPS) ja 200 ui destreak liuosta (2% w /v IPG-amfolyyttiä, 2% w /v ditiotreitolin DTT). IEF suoritettiin kanssa Ettan IPGphor IEF-järjestelmän (GE Healthcare) ja jännite kaltevuus enintään 8 kV (yhteensä 35,5 KVH). Ennen toisen ulottuvuuden ajaa 15% PAGE, IPG liuskat vaiheittain tasapainotettiin 15 min Tris /HCl-puskuria (pH 8,8, 6 M ureaa, 30% glyserolia, 2% SDS), 1% DTT: tä, minkä jälkeen 2,5% jodiasetamidi. Molekyylipainomerkkiaineena (SM0671 Sigma) käytettiin, ja elektroforeesi kulkee yön yli jatkuva 12 W. geelit skannattiin käyttäen Typhoon 9410 skanneri (GE Healthcare). Proteiini määritysrajan kaikissa näytteissä suoritettiin käyttäen DeCyder 2D 6.5 ohjelmisto (GE Healthcare). Hakeminen DIA moduulin Cy2 merkittyä sisäistä standardia sallittu normalisoituminen proteiinitäplien kaikissa geelit. Kun BVA moduuli, Studentin t-testi (pariton, kaksi tailed) käytettiin laskemiseen merkitsevä (p 0,05) erot suhteellisessa proteiinin määrä /paikalla kuudessa AIP seerumeissa verrattuna kuusi PaCa sera. Täplät siellä todettiin olevan tilastollisesti merkitsevä kartoitettiin ja eristettiin lisätutkimuksia varten alla kuvatulla tavalla.

tunnistaminen proteiinien 2D geelit MALDI-TOF MS.

Kohdistettuasi hopeavärjätyssä geelien vastaavan preparatiivisella geelit, toistuva ja vastaavat täplät merkitty tunnus. Valitun proteiinin kohdetta stanssattiin 2D geelit, sijoitetaan yksittäisiä ID-leimattua 200 ui putket, ja pestiin kahdesti 70% asetonitriiliä (ACN), 40 mM NH

4HCO

3. Pelkistyksen jälkeen 10 mM DTT: ssa 1 h 56 ° C: ssa ja alkylointi 55 mM jodiasetamidilla 30 min huoneenlämpötilassa, geeli tulpat pestiin kolme kertaa vuorotellen 40 mM NH

4HCO

3 ja etanolia. Kuivaamisen jälkeen asetonitriilillä, in-geeli trypsiinihajotuksen suoritettiin lisäämällä 100 ng trypsiiniä 40 mM NH

4HCO

3 yön yli 37 ° C: ssa. Saatu peptidit uutettiin geelistä pistokkeet ja siihen lisättiin 15 ui uuttoliuosta (1% ACN, 1% muurahaishappoa).

massaspektrometrinen tunnistaminen tryptinen Näyteliuokset peptidi massa sormenjälkien, näytteet valmistettiin on PrespottedAnchorChip (PAC) tavoitteet protokollan mukaisesti valmistajan toimittamat (Bruker-Daltonik, Bremen, Saksa). a-syaani-4-hydroksikanelihappoa käytettiin matriisina [25]. Massaspektrit rekisteröitiin positiivinen ioni heijastin tilassa hidastunutta uuttamalla koskevasta Ultraflex I aika-of-lennon välineen (Bruker-Daltonik, Bremen, Saksa). Ion kiihdytys olisi 25,0 kV, heijastin 26,3 kV, ja ensimmäisen uuton levyn 21,75 kV. Massaspektrit saatiin laskemalla yhteen 500-1500 yksittäisen laser laukausta. Kalibrointi-spektrit suoritettiin ulkoisesti asteen fit käyttämällä peptidin kalibrointistandardilla sisältävä seos bradykiniiniä (1-7) m /z 757,399, angiotensiini II: n m /z 1046,542, angiotensiini I: n m /z 1296,685, neurotensiini m /z 1672.917, reniinisubstraatti m /z 1758.933, ACTH clip (1-17) at m /z 2093,086, ACTH clip (18-39) kohdissa m /z 2465,198, ACTH clip (1-24) at m /z 2932,588, ja ACTH leike (7-38) at m /z 3657,929. Yksin veloitetaan monoisotooppinen peptidin massat käytetään panoksena hakuja tietokannoista. Haut tehtiin vastaan ​​NCBInr tietokannasta (julkaistu 2009-09-09) käyttäen Mascot hakualgoritmi versio v2.2 (Matrix Science, London, UK). Taksonomia on nisäkkäiden, proteiinin massa on rajoitettu 100 kDa, ja isoelektriset pisteet annettiin vaihdella välillä 0 14. Carbamidomethylation kysteiinin otettiin mukaan vahvistettu muutos, ja metioniinin hapetuksen annettiin vaihtelevan muutoksia. Jopa osunut tryptiseen pilkontapaikkaa pidettiin, ja massa toleranssi monoisotooppinen peptidin massat asetettiin +/- 75 ppm.

Entsyymi immunologinen määritys (ELISA) B

Kiinteäfaasiset kaapata sandwich ELISA suoritettiin käyttäen kaupallisesti saatavilla sarjoja apolipoproteiini AI (ALerCHEK Inc., Portland, Maine). Apolipoproteiini A-II, apolipoproteiini E ja haptoglobiini olivat AssayPro (AssayPro, St. Charles, MO), tetranectin alkaen USCN Life Science Inc. (Wuhan, PRC), ja transtyretiini alkaen Immundiagnostik AG (Bensheim, Saksa). Haptoglobiini ELISA AssayPro on myös kerros-ELISA mutta kilpailukykyinen entsyymi-immunomääritys tekniikkaa. Kuusi käytetty ELISA määrällisesti summa antigeenejä, jotka sitovat vasta-aineen ja näin ollen eivät paljasta suhteellinen panos isoformeja tai muokattu translaation muotoja. Kaikki seerumit laimennettiin mukaisesti valmistajan ohjeiden puskurit säädetty, tai TBS-puskuria, ja määritykset suoritettiin valmistajan protokollia. Hiilihydraattiantigeeniä 19-9 (CA 19-9) määritettiin seerumista sandwich-immunoassay kanssa käyttämällä Elektrokemoluminesenssin immunomääritys (ECLIA, Roche Diagnostics, Mannheim, Saksa).

Biometrinen analyysi

tilastollinen analyysi suoritettiin GraphPad Prism 5 ohjelmisto (GraphPad Software, Inc., San Diego, Kalifornia, USA) ja SAS ohjelmistoversio 9.1 (SAS Institute, Cary, North Carolina, USA).

Biometrinen analyysi tehtiin tutkia vahvuus korrelaatio kliinisten parametrien kehon massa-indeksi (BMI) ja tuumorimarkkeri CA 19-9 kanssa tasojen ELISA-pohjainen validointien kuuden proteiinimarkkereita. Riippuen luonteesta jakaumat määrällisten muuttujien kussakin ryhmässä korrelaatiokertoimen r sen vastaavan p-arvoa Pearson ja Spearman käytettiin analysoimaan korrelaatioita. Luonnetta jakaumat määrällisten muuttujien määritettiin käyttämällä Shapiro-Wilk testi ja normaalijakauman kuvaajalle.

Tulokset

Serologiset poikkeavuuksia

Kaksi kliinistä kuviot eroavat potilailla diagnosoitu AIP: luokitellaan tyypin 1 ja tyypin 2 Analysoimme potilaan kohortin vastaavasti. Tunnusmerkki AIP tyyppi 1 on korkeus gammaglobuliinia ja sen osajoukko, immunoglobuliini G4 (IgG4) pitoisuus seerumissa; Siksi olemme analysoineet näytteitä näitä poikkeavuuksia. Vuodesta analysoiduista näytteistä (n = 32), kolme potilasta tunnettu siitä, epänormaali yhteensä IgG 16 g /l, ja 18 näytettä (59%) oli kohonnut IgG4 tasolla (yläraja 1,4 g /l), joka vaihtelee välillä 1,8 ja 16,6 g /l (Fig. 2).

Seerumin IgG- ja IgG4 määritettiin automatisoidulla immunonephelometry, ja pidetään korotetussa kun ≥16.0 g /l ja ≥1.4 g /l vastaavasti (katkoviivat).

H. pylori ja AIP

Koska

helikobakteeri

infektio on liittynyt patogeneesin AIP, tutkimme yhdistys vasta 15 erilaista

H. pylori

proteiinit 32 AIP seerumeista ja verrattuna muihin haiman sairauksien ja valvontaa. Vasta-aine-analyysit tehtiin multiplex serologia perustuu rekombinanttisesti ilmaistu ja Affinitettipuhdistettu

H. pylori

proteiinit yhdistettynä loisteputki helmi (Luminex) tekniikkaa.

H. pylori

seropositiivisuus oli 43,8% AIP ja 56,9% CP verrattuna 64,7% vuonna PaCa, 69,7% eri GI syöpiä ja 50,4% vuonna valvonta (yhteenveto taulukossa 1).

H. pylori

seropositiivisilla potilailla, joilla AIP osoittivat huomattavasti alhaisemmat vasta-ainevasteet 3 antigeenejä (Cagδ, CagA, HP0231) ja potilaat, joilla on krooninen haimatulehdus 9 (Cad, Cagδ, CagA, CagM, HP0305, HpaA, HyuA, Omp, ja VacA) verrattuna

H. pylori

seropositiivisilla potilailla muita ruoansulatuskanavan syöpien apuna, jossa siellä on lisääntynyt merkittävästi vasta reaktiivisuudet VacA in

H. pylori

seropositiivisilla potilailla, joilla on AIP ja Napa niissä haimasyöpä. Niistä haiman sairaus potilailla, meidän tiedot eivät tue merkittävää yhdistys

H. pylori

infektio AIP.

Seerumin proteiinin ilmentymisen profilointi soveltamalla immunodepletion ja 2D-DIGE: Voit etsiä ja tunnistaa mahdolliset diagnostiset biomarkkereita erotusdiagnoosiin AIP ja PaCa, analysoimme seerumit kuusi AIP ja kuusi PaCa potilaiden mukaan strategian esitetty kuvassa 1. tätä tarkoitusta varten seerumit ensimmäisen immunodepleted korkean runsaasti proteiineja, sitten leimattu fluoresenssivärejä ja erotettiin 2-geelielektroforeesi. Tilastollinen analyysi saadun geelin kuvat, joissa on DeCyder ohjelmistopaketin paljasti 39 muuttunut merkittävästi (p 0,05) proteiinien välillä AIP ja PaCa ryhmiä. Sopiva proteiini täplien korkein ero asetuksen (n = 14) leikattiin preparatiivisella 2D-PAGE-geeleissä ja altistettiin in-geeli tryptinen ruuansulatusta. Tryptic peptidi seoksia analysoitiin MALDI-TOF-MS ja tunnistaa tietokannan haun avulla MASCOT-algoritmia. Luettelo tunnistettu, säädellään eri tavalla proteiinit AIP ja PaCa on esitetty yhteenvetona taulukossa 2. Yksi paikka oli menetetty valmistuksen aikana mutta myöhemmin todettu apolipoproteiini A-II. Sen Tunnistamisen Cy 2-värjätty geeli oli myöhemmin hopeavärjätyssä, paikalla oli leikattu pois, pilkottiin trypsiinillä ja alistettiin massaspektrometria analyysiä.

tunnistettu apolipoproteiini AI, apolipoproteiini A-II ja transtyretiiniä jossa AIP /PaCa suhde 3, 3,5 ja 2, vastaavasti. AIP löysimme myös seerumin tasot tetranectin ja immunoglobuliinit, kun taas PaCa seerumit, apolipoproteiini E ja haptoglobiini (PaCa /AIP suhde 1,6 ja 3,8 vastaavasti) löydettiin kohonnut.

Lihakkuus differentiaalisen ilmentymisen ehdokas biomarkkereiden proteiinit

diagnoositietoja tarkkuus biomarkkerit ehdokkaiden saapuvat 2D-DIGE ja MS, mittasimme seerumin apolipoproteiini-AI, apolipoproteiini-A-II, apolipoproteiini-E, transtyretiini, tetranectin, ja haptoglobiini tasot kaupallisesti saatavilla ELISA kohortin 32 AIP, 30 PaCa, ja 30 tervettä verrokkia satunnaisesti poimittu näytteitä. Näillä määritykset pystyimme syrjiä AIP seerumeista PACA ryhmästä, ja vahvisti massaspektrometrialla tuloksia. Lukuun ottamatta haptoglobiini (p = 0,1), kaikkien testattujen markkerien tässä paljasti merkitseviä eroja (p 0,05). Kuvio 3 esittää käyriä proteiinin tulokset kullekin ryhmälle. Arvot näkyvät keskimääräinen SEM.

Dot tontit apolipoproteiini A-I, apolipoproteiini A-II, apolipoproteiini E, transtyretiini, tetranectin, ja haptoglobiini kullekin ryhmälle. Tilastollinen analyysi suoritettiin GraphPad Prism5 soveltamalla Mann Whitneyn testi (kaksi tailed). Arvot näkyvät keskimääräinen SEM.

Biometrinen analyysi

luokiteltu CA 19-9 ja BMI data kolme ryhmää on esitetty taulukossa 3 ja taulukossa 4 ja levinneisyysalueella on esitetty Rasia ja hiuksenhienosti juoni kuviossa 4A. Arvioida vahvuus lineaarisen välisiä ELISA-pohjainen validoinnit, joiden painoindeksi (BMI) ja tasot CA 19-9 korrelaatiokertoimet kaikkien kuuden proteiinimarkkereita määritettiin.

V: Painoindeksi ja CA 19-9 tasoilla AIP-, PaCa- ja valvonta-ryhmä käytettiin ELISA-pohjainen validoinnit. BMI ja CA 19-9 arvot kolmesta ryhmästä AIP, PaCa, ja valvonta esitetään Rasia ja hiuksenhienosti tontteja. Vertailuja kolmen ryhmän suoritettiin käyttäen Kruskal-Wallisin testiä, kuten yleinen jälkeen suoritetaan Mann-Whitney U-testi pareittain vertailuissa. B: uudelleenarviointi on ELISA kuuden markkereita käyttämällä CA 19-9 katkeamisen 37 U /ml. Mitä tulee 6 proteiinimarkkereita alaryhmistä AIP ja PaCa määritelty CA 19-9 arvo 37 U /ml verrattiin yksipuolinen U-testi. Merkitys hyväksyi 95%: n tason. Rasiakuvaajien max, Q3, mediaani, Q1 ja min.

Yhdistyksen analyysin kuusi markkereita ja BMI vain tetranectin paljasti, että kolme ryhmää kokonaisuudessaan negatiivisena korrelaatiokerroin, joiden arvo on r = -0,374, ja p = 0,01. Tämä negatiivinen korrelaatio oli vieläkin selvempi, kun PACA ryhmä yksin analysoitiin r = -0,588 ja p = 0,006.

yhdistys analyysi kuudesta markkereita ja CA 19-9 tasot kolmelle ryhmälle kokonaisuutena paljasti negatiivinen korrelaatio apolipoproteiini AI ja transtyretiini kanssa korrelaatiokertoimet r = -0,388 (p = 0,012) ja r = -0.372 (p = 0,0235), tässä järjestyksessä. Analysointi PaCa yksin negatiivinen korrelaatiokerroin havaittiin vain apolipoproteiini A-II, joiden arvo on r = -0,439; mutta epäonnistui merkitsevyystasolla p = 0,08.

Koska kaikki AIP näytteet osoittivat CA 19,9 seerumin alle 37 U /ml vertasimme sen ELISA dataa vastaavan PaCa alaryhmä (n = 21), jossa CA 19-9 tasot alle 37 U /ml. Tilastollinen analyysi paljasti edelleen huomattavia eroja apolipoproteiini A-I, tetranectin ja thransthyretin. Apolipoproteiini A-II (p = 0,053) ja apolipoproteiini E (p = 0,061) hieman epäonnistunut merkitsevyystaso (Fig. 4B).

Keskustelu

Distinguishing AIP peräisin PaCa kautta ei-invasiivisia lähestymistapoja kuten seerumin biomarkkereita tai kuvantaminen on tärkeää, koska jopa 11%: lla potilaista, joille tehdään leikkaus haimasyövän diagnosoidaan olla hyvänlaatuinen tulehdustila. Serologiset markkereita, kuten kohonnut γ-globuliinit, erityisesti IgG4 ehdotettiin niin hyviä ehdokkaita erotusdiagnoosia. Kohonnut IgG4 tasot pidetään herkin seerumimarkkerina diagnosoimiseksi AIP [18]. Kuitenkin on äskettäin osoitettu, että IgG4: n voi myös olla koholla jopa 10% PaCa potilaista, ja on näin ollen aina ole spesifinen erottaa AIP päässä PaCa [26]. Lisäksi seronegatiivisilla tapausta AIP kuvattiin Ghazale [27].

tässä tutkittu AIP tutkimuskohortissa osoitti vain 58% näytteistä, joissa IgG4 arvot ylittävät 1,4 g /l. Erilaisia ​​autovasta-aineiden joukossa niitä tuma-antigeeni, laktoferriinin tai hiilihappoanhydraasi II (CAII) on raportoitu AIP potilailla seerumeissa, mutta yksikään niistä tiedetään olevan IgG4-alaluokan. On vielä epäselvää, onko muodostumista näiden autovasta-aineiden ja lisääntynyt IgG4 tasoilla olla patogeeninen rooli tai ovat epiphenomena AIP [28], [29]. Tutkimusryhmä Japanissa onnistunut taivuttaa AIP vastasyntyneillä kateenkorvattomissa hiirissä immunisoimalla ne laktoferriinin ja CAII [30]. Toinen tutkimusryhmä havaita vasta-aineita amylaasi α2 AIP [31]. Yksikään raportoitu markkereita ovat niin erityisiä, että ne voivat syrjiä turvallisesti välillä AIP ja PaCa.

Mahdollinen välisinä

helikobakteeri

infektio ja AIP on raportoitu [19]. Useat laboratoriot ehdotti molekyyli mimiikka syynä, jossa vasta-aineita suunnattu

H. pylori

proteiinit sitoutuvat myös kehon omaa peptidisekvenssejä ja indusoi immuunivastetta haimassa [32] – [36]. Erityisesti äskettäin työssä osoitettiin, että 19 ulos 20 seulottu AIP potilaille, autovasta vastaan ​​plasminogeeni-sitovien proteiinien

H. pylori

havaittiin, jotka olivat todennäköisesti käyttökelpoinen serologinen merkitsin erottaa AIP päässä PaCa ja CP [19]. Kuitenkin seulonta kaikkien AIP potilaat paljasti

H. pylori

seropositiivisuus 43,8% ja oli alhaisin kaikkien ryhmien testattu. Yksi selitys ristiriita tutkimusten tulokset voisivat olla maantieteellisesti ja ekologisesti eri alkuperää potilaista. Tuloksemme vahvistavat myös aikaisemmassa tutkimuksessa, jossa haiman 11 AIP potilaista ei

H pylori

ureaasia A ja 16S rDNA havaittiin nested PCR [37].

profilointi tasoittuvat ja subfractionated sera alkaen AIP ja PaCa potilaiden ProteinChip yksi meidän aiempien tutkimusten soveltamalla seldi-TOF-MS tekniikalla paljasti 38 potentiaali proteiinimarkkereita vaihtelee 3,14 ja 42,23 kDa [38]. Analysoida edelleen profilointi saatujen tulosten seldi-TOF-MS, teimme tässä 2D-DIGE tutkimus immunoaffiniteetti- köyhdytettyä seerumin tunnistaa merkki ehdokkaita erotusdiagnoosiin kahden taudin. Verrataan AIP ja PaCa 2D-DIGE proteiinin ekspressiota tietoja käyttämällä DeCyder kuva-analyysi, löydettiin seerumeissa AIP potilaista kolme kertaa korkeampi apolipoproteiini AI, 3,5-kertaa korkeampi apolipoproteiini A-II ja kaksi kertaa korkeampi transtyretiini (TTH). AIP löysimme myös kohonnut tetranectin ja immunoglobuliinit, kun taas PaCa, apolipoproteiini E ja haptoglobiini olivat korkeammat. Havainnot alentuneet apo AI, apo A-II ja Tth PACA ja CP verrattuna normaaliin yksilöitä tehtiin edellisessä tutkimuksessa [17], [38], [39].

Koska että tässä kuvatut havainnot voidaan edistää parempaa ero diagnostisia AIP ja PaCa, suoritimme ELISA kuuden proteiinien vahvistamaan 2D-DIGE /MS-tiedot ja arvioida niiden yleistä suorituskykyä. Lukuun ottamatta haptoglobiini, joille ei havaittu merkittävää eroa, suhteet ryhmien välillä paljasti samanlaiset ominaisuudet mutta suhteet olivat vähemmän näkyvästi. Kohonnut seerumin apolipoproteiini E tasojen PaCa potilailla arvioitu tässä alkuperäisessä tutkimuksessa 2D-DIGE ja ELISA ovat yhdenmukaiset tuoreessa tutkimuksessa on Chen et al. Appling erilaisia ​​lähestymistapoja, mukaan lukien ELISA he löysivät ylös-säätely apolipoproteiini E PACA-kudoksissa ja kohonnut apolipoproteiini E tasoja PaCa potilailla seerumin [40].

ryhmä AIP ja kontrolliseerumeita osoitti samanlaista levinneisyysalueella varten apolipoproteiinit, mikä osoittaa, että seerumin pitoisuus näiden proteiinien on verrattavissa. Seuraava askel on testata, onko yhdistelmä tunnistettu markkereita voimme tehdä luotettavan ennusteen tuntemattomissa seeruminäytteet. Myös muut tässä tutkimuksessa tunnistettu proteiineja voitaisiin integroida tällaiset testit. Syynä alentuneesta edellä mainittujen proteiinien PaCa ja CP seerumit, kuin terveillä vapaaehtoisilla tai AIP, on epäselvä, mutta joitakin selityksiä olemassa. Sekä CP ja PaCa potilaat kärsivät aliravitsemuksesta ja kakeksia stimuloimalla akuutin faasin proteiinien maksassa, mutta synteesi apolipoproteiinien, transtyretiini, ja retinolia sitova proteiini tippaa. Kuitenkin tunnistaminen kakeksian ei ollut mahdollista, ei laihtua merkittävästi potilaan sairaushistoria kirjattiin, suurin osa potilaista tässä analysoitu osoitti normaalia tai hieman koholla BMI ja vain yksi PaCa potilaalla oli BMI alle 19, kuten on esitetty taulukossa 4. merkittäviä eroja yksittäisten proteiinien havaittu tutkimuksessamme osoittavat täysin erilainen etiologia AIP yhdellä päällä ja CP: n ja PaCa toisaalta.