PLoS ONE: Association between P16INK4a Promoottori Metylointi ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä: Meta-analyysi
tiivistelmä
Background
Aberrant metylaation CpG-saarekkeiden hankitun kasvainsolujen promoottorialueille tärkeä rooli syövän synnyssä. Kertyneet näyttö osoittaa
P
16INK4a
geenin promoottori hypermetylaation on mukana ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), joka osoittaa se voi olla potentiaalinen biomarkkereiden tähän tautiin. Tutkimuksen tavoitteena on arvioida taajuus
P
16INK4a
geenin promoottori metylaatio välillä syöpäkudoksessa ja autologisia valvontaa yhteenveto julkaistuja tutkimuksia.
Methods
etsimistä Medline, EMBSE ja CNKI tietokannat, avoin julkaistu tutkimuksia
P
16INK4a
geenin promoottori metylaatio ja NSCLC tunnistettiin käyttämällä järjestelmällinen haku strategiaa. Yhdistetty kertoimella
P
16INK4A
promoottori metylaation keuhkosyöpää kudosta vastaan autologisia verrokkeihin meta-analyysillä.
Tulokset
Kolmekymmentäneljä tutkimuksissa mukaan lukien 2 652 NSCLC potilaalla on 5 175 näytettä kuuluivat tähän meta-analyysiin. Yleensä taajuus
P
16INK4A
promoottorin metylaation vaihteli 17%: sta 80% (mediaani 44%) on keuhkosyöpä kudosten ja 0-80% (mediaani 15%) on autologisen valvonnan joka osoitti metylaation esiintymistiheys syöpäkudoksessa oli paljon korkeampi kuin autologisen näytteissä. Olemme myös vahva ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja autologisia valvonnan
P
16INK4A
promoottori metylaatio taajuus eri tutkimuksissa (Korrelaatiokerroin 0,71, 95% CI: +0,51-+0,83,
P
0,0001). Ja pooliin kertoimet suhde
P
16INK4A
promoottori metylaatio syöpäkudoksen oli 3,45 (95% CI: 2,63-4,54) verrattuna kontrolleihin alle random-vaikutus malli.
Johtopäätös
taajuus
P
16INK4a
promoottori metylaatio syöpäkudoksen oli paljon suurempi kuin autologisen vertailuista, mikä osoittaa promoottorin metylaation on tärkeä rooli syövän synnyssä on NSCLC. Vahva ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja autologisia näytteitä
P
16INK4A
promoottori metylaatio osoittanut lupaavia biomarkkeri NSCLC.
Citation: Gu J, Wen Y, Zhu S, Hua F Zhao H, Xu H, et al. (2013) välisestä assosiaatiosta
P
16INK4a
Promoottori Metylointi ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä: meta-analyysi. PLoS ONE 8 (4): e60107. doi: 10,1371 /journal.pone.0060107
Toimittaja: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Yhdysvallat
vastaanotettu: 26 marraskuu 2012; Hyväksytty: 21 helmikuu 2013; Julkaistu: 05 huhtikuu 2013
Copyright: © 2013 Gu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.
Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.
kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.
Johdanto
Keuhkosyöpä osuus 13% (1,6 miljoonaa ) kaikista tapauksista ja 18% (1,4 miljoonaa) ja kuolemia, oli yleisimmin diagnosoitu syöpä sekä johtava syy syövän kuoleman maailmanlaajuisesti vuonna 2008 [1]. Hyötyvät tupakoinnin torjuntaa, keuhkosyöpä kuolleisuus vähenee Länsi kehittyneissä maissa. Kuitenkin kasvaa kehitysmaissa kuten Kiinassa, missä tupakointi on edelleen kasvussa [1]. Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, osuus 80% ensisijainen keuhkojen karsinoomat, oli yleisin on 5 vuoden pysyvyys vaihtelee 2: sta 47% eri kliinisistä vaiheista ja histopatologia [2]. Noin kaksikymmentä prosenttia NSCLC potilaiden soveltuvat leikkaus aikaan diagnoosi, ja muut 80%, sai perinteisen chemoradiation, voi selvitä vain lyhyen aikaa [3]. Siksi varhainen diagnoosi on välttämätön pitkäaikainen säilyminen tämän taudin.
tuumorisuppressorigeeniä promoottori metylaatio pidetään tärkeä mekanismi sen inaktivaation, joka esiintyy alkuvaiheessa tumorigeneesin monien syöpien [2], [4]. Näin ollen, havaitseminen poikkeavan metylaation tuumorisuppressorigeeneille voisi olla mahdollinen menetelmä varhaisen diagnoosin eri syöpätyyppien, mukaan lukien NSCLC. Poikkeavaan metylaatiostatuksen primaaristen kasvainten voidaan havaita metylaatiospesifisen PCR: llä (MSP), joka voi havaita yhden metyloitu alleeli: n läsnä ollessa 10
3-10
4 metyloitumattomat alleelit [5]. Ja monet tutkimukset ovat myös osoittaneet, että syöpää erityisiä metylaatio tuumorisuppressorigeeneille löytyy autologisia kliinisissä näytteissä, kuten plasma, seerumi, yskös tai bronkoalveolaarinen huuhtelu nesteen (BALF) NSCLC, mikä osoittaa, että se voi olla mahdollisia biomarkkereita ei-invasiivisia diagnoosi tämän taudin [6] – [8]. Mutta taajuus DNA metylaation tuumorisuppressorigeeneille välillä syöpäkudoksessa ja autologisen kliinisissä näytteissä vaihteli paljon joukossa julkaistut tutkimukset pienestä näytteestä. Niinpä teimme meta-analyysi pohjalta julkaissut artikkeleita
P
16INK4a
promoottori metylaatio ja keuhkosyöpä, jotta voidaan paremmin tunnistaa korrelaation metylaatiostatus välillä syöpäkudoksessa ja autologisen näytteitä.
Materiaalit ja menetelmät
tutkimukset Identification
valintamenettely tutkimusten havainnollistettiin PRISMA (Preferred Reporting Kohteiden-katsaukseen ja Meta-analyysit) lausuma vuokaavio (Fig. 1 ). Tutkimuksia
P
16INK4a
geenin promoottori metylaation NSCLC, julkaistu ennen tammikuuta 2012 tunnistettiin sähköisellä herkkä etsimään Medline, EMBSE ja CNKI tietokantoja. Etsintä strategia suoritettiin käyttäen ”ei-pienisoluinen keuhkosyöpä” JA ”metylaatio”, kuten Medical Subject Headings (MeSH) ja vastaavan vapaan tekstiä sana hakuja aikavälillä. Otsikko ja tiivistelmä alkuperäisestä tunnistettu artikkeleita arvioitiin tarkoituksenmukaisuutta sisällyttämisen kriteerit. Sitten kaikki mahdollisesti asiaankuuluvat artikkelia arvioitiin koko teksti paperi- ja kaikki viittaukset mukana artikkelit edelleen skannataan lisäanalyysi.
(Tiedot Joissakin tutkimuksissa käytettiin useammin kuin kerran, koska ne ilmoitetaan tiedot monilla valvontaa. ).
Data Extraction ja laadun arviointi
kriteereillä meta-analyysi oli seuraava: potilaat rajattiin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä rajoituksetta vaiheita. Käytettävät menetelmät metylaation havaitsemiseen rajoittuivat metylaatiospesifistä polymeraasiketjureaktio (MSP), reaaliaikainen MSP (RT-MSP) ja määrälliset MSP (q-MSP). Tulokset olivat
P
16INK4A
geenin promoottori metylaatiostatuksen kasvainkudoksessa ja vastaavat autologisen valvontaa, myös ei-kasvain keuhkokudoksessa (NLT), plasma, yskös ja bronkoalveolaarinen huuhtelu nestettä (BALF) NSCLC potilaiden . Tietoa nimen ensimmäinen kirjoittaja, julkaisuvuosi, alueen mukana aiheita ja metylaatiostatuksen
P
16INK4A
geenin syöpäkudoksessa ja valvonta rekisteröitiin kunkin tutkimuksen. Yksityiskohtaiset tiedot kunkin artikkelin uutettiin kaksi arvioijat (JG ja YW) ja sitten tarkistetaan kolmannen tarkistajan (SZ) kuvatulla tavalla Cochrane Handbook järjestelmälliseen arviot [9].
Tilastollinen analyysi
STATA /SE 11,0 (StataCorp LP, https://www.stata.com) ja MetaAanlyst 3,13 (https://www.biomedcentral.com) käytettiin tilastolliseen analyysiin. Metylaatiostatuksen kasvainkudoksessa ja valvontaa laskettiin metylointi korko. Todennäköisyys
P
16INK4A
promoottori metylaation keuhkosyöpää kudosta verrattuna autologiseen valvontaa ilmaistiin kerroinsuhde (OR) ja sen 95%: n luottamusvälit (CI). Tilastollinen heterogeenisuus tutkimuksissa arvioitiin chi-neliö (χ
2) testi [10], ja epäjohdonmukaisuus on laskettu I
2 [11]. Jos heterogeenisuus oli merkitsevä (χ
2,
p
0,1 tai I
2 50%), meta-regressioanalyysi käytettiin arvioida edelleen lähde heterogeenisyys. Ja alaryhmäanalyysissä mukaan lähde heterogeenisuus suoritettiin lisäarviointia. Lopuksi, jos merkittäviä heterogeenisuus tutkimuksissa havaittiin eikä asianmukaista kliinistä selitystä heterogeenisuus havaittiin, random-vaikutus menetelmällä (Dersimonian-Laird menetelmää) käytettiin yhdistämään tietoja. Kääntäen, ilman merkittäviä heterogeenisyys välillä tutkimuksissa kiinteän vaikutus menetelmää ostettiin. Ja herkkyysanalyysi suoritettiin myös arvioida osuus kunkin tutkimuksen lopputulokset meta-analyysi. Begger n suppilo juoni ja Egger testi käytettiin arvioimaan mahdollisia julkaisu bias [12]. Korrelaatio
P
16INK4A
geenin promoottori metylaatio välillä kasvainkudoksen ja autologisen kliinistä kontrollinäytteiden verrattiin Spearmanin rank korrelaatio testi.
Tulokset
Tutkimus Ominaisuudet
yhteensä kolmesataayhdeksänkymmentäneljä tutkimuksessa tunnistettiin aluksi etsimällä sähköisiin tietokantoihin. Ja 268 potentiaali sovellettavan artikkeleita, julkaistu 2000 ja 2012, haettiin kokoteksteinä. Näistä 234 tutkimukset suljettiin syistä: muista geeneistä metylaatiostatuksen ilman
P
16INK4A
, monistaa julkaisu, ei asianmukaisen lopputuloksen dataa, noin solulinjat, eläimistä, ilman asianmukaista valvontaa. Lopuksi kolmekymmentäneljä tutkimuksissa [6] – [8], [13] – [43], että ilmoitettujen tietojen metylaation taajuus ei-pienisoluinen keuhkosyöpä kudosta, ja autologisia valvonta lopulta yhdistettiin meta-analyysissä (kuvio . 1). Niistä 34 sisällytit, 25 tehtiin Aasian-Tyynenmeren (18 Manner-Kiinan, 3 Taiwanissa, 1 Hong Kong, 2 Koreassa, 1 Japanissa), 4 USA: ssa ja 5 Euroopassa (3 Italia, 1 Kreikassa, 1in Englanti). Osa mukana raportoiduissa tutkimuksissa metylaatiostatuksen erikseen sukupuolen mukaan, histopatologia tyypit, tupakointi ja kasvaimen vaiheissa. Yleiset ominaisuudet sisältyvät tutkimukset yhteenveto taulukossa 1.
yhdistetyt tulokset Meta-analyysi
meta-analyysi, data 2 652 ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaat mukaan lukien 5 175 näytettä yhdistettiin joiden kertoimet suhde 3,45 (95% CI: 2,63-4,54) kasvainkudoksessa verrattuna autologiseen suorittamaa valvontaa random-vaikutus menetelmällä (Fig. 2). Herkkyys analyysi osoitti, että riskisuhde välillä 3,28 (95% CI: 2,52-4,28) ja 3,57 (95% CI: 2,72-4,68) jättämällä pois yksi tutkimuksen alla random-vaikutus malli (Fig. 3). Vain hyvin pieni muutos kerroinsuhde nähtiin Herkkyysanalyysissä, mikä osoitti, että yhdistetyssä ristitulosuhteen ollut herkkä yhden tutkimuksen.
neliöt ja vaakasuorat viivat edustavat tutkimuksittain OR ja 95%: n luottamusväli . Alue neliöiden heijastaa paino (käänteinen varianssi). Timantti edustaa yhdistettiin OR ja 95%: n luottamusväli.
piireissä ja vaakasuorat viivat edustaa yhdistettiin OR ja 95%: n luottamusväli jättämällä pois tietty tutkimus. Alue, piireissä heijastaa paino (by näytteen koko). Timantti edustaa yhdistettiin OR ja 95%: n luottamusväli sisällyttämällä kaikki tutkimukset.
Meta-regressio ja alaryhmäanalyysi
Koska merkittävä heterogeenisyys havaittiin kaikissa tutkimuksissa (I
2 = 69,8%, χ
2 = 135,7,
P
0,0001), meta-regressio suoritettiin arvioida edelleen lähde heterogeenisyys kanssa Knapp-Hartung muutos menetelmällä. Oletimme heterogeenisyys voi syntyä ohjaus tyypit, ikä aiheista, etnisen potilaista, histologia tyypit, tupakointi, kasvain vaiheissa, otoksen koosta ja menetelmät metylaation havaitsemiseen. Kuitenkin täydellinen alatyypin tiedot voidaan ainoastaan saatu ohjaus tyypit, etnisyys, otoskoko ja metylaation analyysimenetelmiä. Joten, regressio suoritettiin mukaan jokainen täydellinen alatyyppien tietojen kovariantit. Tuloksissa meta-regressio, ei lähde merkittävää heterogeenisyyttä löytyi ne kaikki lukuun ottamatta ohjaustyypin (kerroin = -0,36,
P
= 0,018, taulukko 2). Τ
2 laski 0,48-0,37, joka osoittaa 23% [(0,48-0,37) /0.48] heterogeeninen voidaan selittää eri ohjaus tyypit. Sen sijaan oikaisua kaikkien muiden tekijöiden kanssa täydelliset tiedot edellä mainittujen vähentänyt jäljellä varianssi eri tutkimuksissa vain 6%, mikä osoittaa, että eri etnisyys, otoskoko ja metylointi havaitsemismenetelmät voivat selittää vain vähäinen osa heterogeenisuus tutkimuksissa. Mutta yksinkertainen vielä suoritettu alaryhmäanalyysissä mukaan mahdollisen heterogeenisyyden lähteistä. Kun alaryhmien analyysissä merkittävä kertoimella
P
16INK4A
promoottori metylaatio kasvainkudoksessa oli vain muuttuneet tupakoimattomilla (OR = 4,53, 95% CI: ,68-+30,26,
P
= 0,120) ja yskös autologista ohjaus (OR = 1,49, 95% CI: +0,86-+2,57,
P
= 0,151, taulukko 3). Kuitenkin muuttui tulosten pitäisi tulkita varoen, koska vain pieni aihe sisältyi tupakoimattomilla ja yskös ohjaus alaryhmäanalyysi (taulukko 3).
korrelaatio
P
16INK4A
geenipromoottorin metylointi välillä Tuumorikudoksen ja Autologinen Clinical näytteitä
Yleensä taajuus
P
16INK4A
promoottori metylaatio vaihteli 17%: sta 80% (mediaani 44%) keuhkoissa syöpäkudoksessa ja 0-80% (mediaani 15%) kun autologisten valvonta mukaan sisältyi tutkimuksia. Metylointi taajuus syöpäkudoksessa oli paljon suurempi kuin kliinisessä valvontaa. Olemme myös vahva ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja autologisia näytteitä
P
16INK4A
promoottori metylaatio eri tutkimuksissa (Korrelaatiokerroin 0,71, 95% CI: 0,51-0,83,
P
0,0001,). Kuva. 4 osoittaa, että useimmissa tutkimuksissa sijaitsevat yläpuolella yhtäläinen linjan välillä kasvainkudoksen ja valvontaa, mikä kuvaa kasvainkudoksen liikaa. Plasmanäytteissä, metylointi taajuus vaihteli 6% 74% (mediaani 33%), joka osoitti merkittävää korrelaatiota on
P
16INK4A
promoottorin metylaation syövän kudoksen (Korrelaatiokerroin 0,72, 95% CI : 0,27-0,91,
P
= 0,0059, kuvio 5A). Samanlainen korrelaatio havaittiin myös välillä syöpäkudoksessa ja yskös /BALF (Korrelaatiokerroin 0,85, 95% CI: 0,35-0,97,
P
= 0,0082, Fig. 5B). Vahva ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja kliininen autologisen valvonta osoitti, että havaitseminen metylaatiostatuksen Kliinisissä näytteissä kuten plasma, yskös tai BALF voi olla mahdollinen menetelmä diagnosoimiseksi NSCLC ilman hyökkäystä.
Julkaisu bias
Begg n suppilo juoni ja Egger testi käytettiin arvioimaan mahdollisen julkaisemisen bias [13]. Kuten osoitettu kuvassa. 6, muoto suppilon juoni lievään epäsymmetria alareunassa, jossa suuntauksena raportointi isompi riskisuhde. Kuitenkin Egger n testi ei kuvituksena näyttöä Tilastojulkaisun bias (t = 0,78,
P
= 0,44).
Jokainen ontto ympyrä edustaa erillistä tutkimusta varten osoitettuun -alueella. Pinta-ala ontto ympyrä vastaa paino (käänteinen varianssi). Vaakasuora viiva edustaa keskiarvon vaikutuksen suuruuteen.
Keskustelu
hypermetylaatiota CpG inlsnds in promoottorialueille on yksi tärkeimmistä mekanismeista inaktivoimiseksi kasvaimeen synnyssä, johon apoptoosin , solusyklin, DNA: n korjaukseen ja jne. vapautuminen solusyklin ohjausjärjestelmä pidettiin tärkeänä menettelyä kasvaimen.
P
16INK4
tunnetaan yhtenä tärkeimmistä tuumorisuppressorigeeneille, joka on tärkeä rooli säätelyssä solusyklin. Tämä geeni tuottaa useita transkriptivariantissa jotka säätelevät G1-S siirtyminen solusyklin [44]. NSCLC, tämän geenin tuotteen on osoitettu olevan ei ole noin 32-70%: n syöpäsolujen [45], [46]. Kuitenkin mutaatiot
P
16INK4
geenistä vain todettu olevan 0-10% [25], joka osoittaa vähintään 22% -60% menetys ilmentyminen
P
16INK4
liittyy muita mekanismeja, mukaan lukien promoottorin hypermetylaatio.
NSCLC, promoottorin hypermetylaatiota
P
16INK4a
-geeni, joka koodaa sykliini-riippuvaisen kinaasin inhibiittori, on havaittu erilaisia tutkimuksia, joiden taajuus on 17% [26] 83% [23] tuumorikudokseen ja 6% [29] 80% [23] autologiseen kliinisistä näytteistä. Taajuus poikkeavan metylaation tämän geenin vaihteli 6% [17] 74% [18] seerumista tai plasmasta ja 10% [27] 80% [23] ja ysköksen tai BALF. Vaikka monet tutkimukset ovat raportoineet esiintyvyys
P
16INK4a
geenin metylaatio NSCLC, yhdistyksen välillä syöpä kudoksen ja autologisen kliinisissä näytteissä ei ollut lopulliseksi syitä pienten otoskoko. Siten meta-analyysi suoritettiin määrällisesti metylointi-tauti yhdistyksen, kokoamalla tietoja julkaistuista tutkimuksista, jotka voivat lisätä tilastollista voimaa.
Tässä tutkimuksessa olemme mukana yhteensä kolmekymmentä-neljä artikkelia että raportoitujen tietojen metylaation taajuus ei-pienisoluinen keuhkosyöpä kudosten ja autologisen näytteitä. Taajuus
P
16INK4A
promoottorin metylaation vaihteli 17%: sta 80% (mediaani 44%) on keuhkosyöpä kudosten ja 0-80% (mediaani 15%) on autologisen valvontaa, mikä osoittaa, hyvin erilaisia metylaation välinen kurssi tutkimukset. Yleensä yhdistetty riskisuhde metylaation oli 3,45 (95% CI: 2,63-4,54) kasvainkudoksessa verrattuna autologiseen näytteiden alle random-vaikutus menetelmällä, joka osoittaa
P
16INK4A
promoottorin metylaation tärkeä rooli kasvainten synnyssä on NSCLC.
alaryhmäanalyysissä havaittiin, että metylointi kertoimet kasvainkudoksessa vaihtelivat 1,49 (0,86-2,57) 5,49 (3,77-8,00), kun verrataan eri autologiseen näytejoukoille (ei-kasvain keuhkoissa kudos, plasma, yskös ja BALF). Metylointi kertoimet kasvainkudoksessa ei ollut merkittävä verrattaessa ysköksen (
P
= 0,151), mikä osoittaa ei ole tilastollista eri taajuudella
P
16INK4A
promoottori metylaatio havaittiin välillä yskös ja syöpäkudoksessa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä potilaita. Kuitenkin tulokset on tulkittava varovasti, sillä vain pieni aihe sisältyi ysköksen ohjaus alaryhmäanalyysissä. Muissa alaryhmissä metylointi kertoimet kasvainkudoksessa vaihtelivat 2,53 (1,85-3,44) ja 7,28 (3,89-13,62) mukaan kliinisiä tekijöitä kuten sukupuoli, kansallisuus, histologia, tupakoinnista ja vaiheissa. Ja korkein kerroin 7,28 (3,89-13,62) kasvainkudoksessa havaittiin tupakoitsijoilla, jotka osoittavat tupakointi voi olla tärkeä rooli metyloinnin
P
16INK4A
promoottorialueille, mikä oli sopusoinnussa aikaisempien tutkimusten [47]. Alin kertoimet 2,53 (1,85-3,44) kasvainkudoksessa on esitetty adenokarsinooma, mikä viittaa siihen, vaikutus
P
16INK4A
promoottorin metylaation pelkistettiin tällaista histologia tyyppiä.
yleensä vahva ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja autologisten näytteiden
P
16INK4A
promoottori metylaatio havaittiin kaikissa tutkimuksissa (Korrelaatiokerroin 0,71, 95% CI: 0,51-0,83,
P
0,0001), joka ehdotti korkeamman taajuuden metylaation autologiseen näytteessä todettiin, korkeampi esiintyvyys metylaatio voidaan havaita syöpäkudoksessa potilailla, joilla on NSCLC. Ja tämä osoitti, että havaitseminen metylaatiostatuksen oman veren näytteissä kuten plasma, yskös tai BALF voi olla mahdollinen menetelmä diagnosoimiseksi NSCLC ilman hyökkäystä. Ja mukaan Esteller [48], havaitseminen promoottorin hypermethylaiton vuonna tuumorisuppressorigeeneille oli tärkeä kliininen käyttö, kuten diagnostinen työkalu, biomarkkeri ennustetta, ennustaja hoitovasteita ja jne
kuitenkin useita rajoituksia tarvitaan vastike tämän tutkimuksen. Ensimmäinen rajoitus on heterogeenisyys. Tässä meta-analyysissä merkittävä heterogeenisyys oli välillä oli tutkimusten (I
2 = 69,8%, χ
2 = 135,7,
P
0,0001). Vaikka meta-regressio suoritettiin arvioida edelleen lähde heterogeenisyys kanssa Knapp-Hartung muutos menetelmä, täydelliset tiedot saadaan vain siinä alatyyppejä ohjaus tyypit, etnisyys, otoskoko ja metylaation analyysimenetelmiä. Tuloksissa meta-regressio, vain pieni osa heterogeenisuus voidaan selittää eri etnisyys, otoskoko ja metylaation havaitsemismenetelmiä, mikä osoittaa, että jokin muu lähde heterogeenisuus on olemassa joukossa tutkimuksia. Toiseksi, vaikka mitään selvää julkaisun bias havaittiin tässä tutkimuksessa Egger testi, pieni määrä tutkimuksia ja mahdollinen olemassaolo julkaisemattomia artikkeleita ovat väistämättömiä ja täysin sulje pois tätä mahdollisuutta kaikilla on vaikeaa [49]. Kolmas rajoitus on co-variate analyysi metylaation. Esitellään edellisen tutkimuksissa promoottori hypermetylaation liittyi monia kliinisiä, demografiset ja molekyylien ominaisuuksia, kuten sukupuoli, ikä, tupakointi ja etnisen [21], [23], [28]. Ja metylaatio itse tapahtumiin voidaan myös liittää ja olla vuorovaikutuksessa toistensa kanssa, mikä viittaa metyloituvuutta yhden geenin voi olla läheskään tarpeeksi [50]. Neljänneksi, kuten tunnettua, että promoottori metylaatio korreloi vähentää geenin ilmentymistä. Kuitenkin vain kolme artikkelia sisälly tähän meta-analyysiin edellyttäen, että
P
16
geenin ilmentymisen aseman avulla immunohistokemiallista analyysiä. Yksittäisen potilaan tiedot (IPD) välistä suhdetta metylaatiostatus ja tämän geenin ilmentyminen ei annettu alkuperäisessä artikkeleita. Sillä
P
16INK4A
mutaatio, jossa huolellisesti tarkastelu mukana tutkimuksissa, löysimme vain kahteen tutkimukseen [13], [25] ilmoitetaan
P
16INK4A
mutaatio eksoni 1, 2a ja 2b alueet. Ja yksikään mukana 34 artikkelit raportoitu mutaatio asema
P
16INK4A
in promoottorialueen.
Yhteenvetona tämän tutkimuksen tulokset osoittivat muita yleisemmin metylaation kasvainkudoksessa versus autologisten näytettä pienisoluista keuhkosyöpää, joka osoittaa promoottori metylointi on tärkeä rooli syövän synnyssä. Ja merkittävä korrelaatio kasvainkudoksen ja kliinisen valvonnan
P
16INK4A
geenin promoottori metylaatio osoitti lupaavia biomarkkeri NSCLC diagnoosia. Kuitenkin merkittäviä metodologisia ja tarkistusongelmia edelleen ratkaisematta antamaan tietoja, joiden avulla nämä tiedot voidaan pitää edelleen kliiniseen käyttöön [51].