Krooninen sairaus

tiivistelmä

Yksi tärkeimmistä ennustettaessa peräsuolen syöpä on imusolmuke etäpesäke. Muodostumista imusolmukemetastaaseja on riippuvainen olemassa premetastatic kapealla. Tärkeä tekijä edellisen etäpesäke ovat imusuonten jotka sijaitsevat imusolmuke. Siten esiintyminen solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä ajatellaan osoittavan etäpesäkkeiden ja huonompi ennuste. Arvioidaan merkitystä imusolmuke imusuonten, tutkittiin formaliinilla, parafiiniin adenokarsinoomien ja paikallisiin imusolmukkeisiin 203 peräsuolen syöpä potilailla, jotka saivat neoadjuvant radiochemotherapy ja peräkkäisen parantava kirurgia syövän leikkauskäsine marginaalit (R0). Alueellinen imusolmuke imusuonten havaittiin immunohistokemiaa podoplanin (D2-40). Tuloksemme osoittavat, että läsnäolo imusuonten alueellisiin imusolmukkeisiin merkittävästi vaikuttaa taudista vapaan eloonjäämisen yhden ja usean analyysejä. Sen sijaan ei ollut korrelaatiota peritumoraalista tai kasvaimensisäisenä imusolmukkeiden suonitiheys ja ennustetta. Todellakin, meidän tutkimus osoittaa, että on tärkeää imusuonten alueellisissa imusolmukkeissa jälkeen neoadjuvant radiochemotherapy ja peräkkäistä leikkausta itsenäisenä prognostinen markkeri. Värjäys solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä ja menetelmät Elintensisäistä kuvantaminen lymfangiogeneesiä ja imusuonten virtausta voi olla hyödyllinen strategia ennustaa pitkän aikavälin tulos peräsuolen syöpäpotilailla. Edelleen lisäys VEGF-salpaajien standardoituihin neoadjuvant Näitä järjestelmiä voidaan ilmoittaa pitkälle peräsuolen syöpä.

Citation: Jakob C, Aust DE, Liebscher B, Baretton GB, Datta K, Muders MH (2011) lymfangiogeneesiä alueellisten imusolmukkeiden on itsenäinen Prognostiset Marker in peräaukosta syöpäpotilaiden jälkeen Neoadjuvant hoito. PLoS ONE 6 (11): e27402. doi: 10,1371 /journal.pone.0027402

Editor: Soumitro Pal, lastensairaalassa Boston Harvard Medical School, Yhdysvallat

vastaanotettu: 20 syyskuu 2011; Hyväksytty 17. lokakuuta 2011; Julkaistu: 07 marraskuu 2011

Copyright: © 2011 Jakob et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: No current ulkopuolisista lähteistä rahoittavat tämän erityisen tutkimuksen. Yleensä työ tutkijat tukivat apurahoja MHM (Wilhelm Sander Stiftung turkista Krebsforschung) ja KD (R01-NIH, CA140432).

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Preoperatiivisen (neoadjuvant) radiochemotherapy seurasi parantava kirurgia on tullut tavallinen hoito paikallisesti edenneessä peräsuolen syöpä [1]. Histopatologisen kasvainregressio korrelaattina paikallisen hoidon tehokkuuden vaihtelee ei minimaalinen regressiivinen muutoksia täydellinen vaste [2], [3]. Imusolmuke tila jälkeen neoadjuvant radiochemotherapy kuitenkin edelleen tärkein riippumaton ennustetekijä taudista vapaan elinajan, kuten potilailla, joilla on post-terapeuttinen positiivisia imusolmukkeita (YPN +) on epäsuotuisa ennuste riippumatta regressio primaarikasvaimen [2], [3], [4], [5], [6]. Siten esto alueellisten imusolmukemetastaaseja voisi olla tehokas tulevaa avenue hoidettaessa peräsuolen syöpäpotilailla. Siksi on pyritty paljastamaan mekanismeja imusolmuke etäpesäke. On ehdotettu, että induktio imusuonten ensisijaisen kasvaimen ja imusolmukkeiden merkittävästi edistää kasvaimen etäpesäkkeiden [7], [8]. Tässä tutkimuksessa olemme validoitu lymfangiogeneesiä alueellisiin imusolmukkeisiin kuin ennustaja huono ennuste ja edistäjänä kaukainen etäpesäke kohortin neoadjuvant käsitellään kehittyneiden peräsuolen syöpäpotilailla. Se on parempi ennustaja kuin peri- ja kasvaimensisäisenä imusolmukkeiden alus tiheydet tai standardoituja kasvainregressio luokitukset tämän ryhmän peräsuolen syöpäpotilailla.

Tulokset

kliinis luonnehdinta arvioitiin kohortin

Kaikki potilaat kävivät peräsuolen resektoimalla yhteensä mesorectal leikkaaminen jälkeen neoadjuvant radiochemotherapy. Kaikilla potilailla paikallisesti parantava resektio saavutettiin (R0-tilanne). Patologinen lavastus on esitetty taulukossa 1. Täydellinen kasvaimen regressio [9] havaittiin 10 tapausta (5%). 57 potilaista todettiin kasvaimen regressio arvosana 3 (28%). 85 potilailla havaittiin kasvaimen regressio luokka 2 (42%) ja 48 potilaalla oli kasvaimen regressio grade 1 (23%). Ei kasvaimen regressiota havaittiin 3 potilaalla (1,5%). Tällä seuranta-ajan mediaani 223 viikkoa (95%: n luottamusväli +216,9-247,3viikko) 38 potilaalla oli tauti uusiutuu, 32 kehittänyt etäinen etäpesäke ja 6 paikallista uusiutumista. Etäispesäkkeitä havaittiin seuraavat elimet: maksan 15 (HEP), keuhkojen 6 (PUL), kaukainen ei-paikallisiin imusolmukkeisiin 3 (LYM), keuhkopussin 1 (PLE), iho 1 (IHO), vatsakalvon 1 (PER), luu 2 (OSS), maksan ja keuhkojen 2 (HEP ja PUL) ja muut 1 (OTH). Näissä tapauksissa tauti uusiutuu ja etäispesäkkeitä varmistettiin patologisen arvioinnin ja tarkastus. Kahdeksassa tapauksessa kliinisten tietojen (käsiksi dokumentaation avustaja) käytettiin havaitsemaan tauti uusiutuu.

havaitsemiseksi etäpesäkekasvainten soluja imusolmukkeiden käytimme standardin HE värjäystä sekä Pan-sytokeratiinivasta värjäys käyttämällä kaupallisesti saatavilla monoklonaalinen vasta-aine (Dako Inc.) vähintään kolmessa leikesarjojen imusolmuke. Mediaani 14 paikallisiin imusolmukkeisiin per tapaus tutkittiin. Läsnäolo Pancytokeratin positiivisia kasvainsoluja osoitti imusolmuke etäpesäke (Fig. 1A).

. Immunohistokemiaallisesti Pancytokeratin havaita imusolmuke mikrometastaaseja. B. Podoplanin värjäämällä D2-40 on imusolmuke, jossa etäpesäke. Punainen ruskeaan jättämät jäljet ​​imusuonten. C. Podoplanin värjäys D2-40 on imusolmuke ilman etäpesäke.

Association of regression primaarituumorin ja imusolmuke etäpesäke kanssa kliinis parametrit sekä varoituksia parametrit

Merkittävä korrelaatio oli välillä havaittu laadut kasvaimen regressio (Fig. 2) ja ilman taudin etenemistä, kun kahtia korkean ja matalan kasvaimen regressio (p = 0,0033 log-rank) (Fig. 3A) Kaplan Meier-analyysi. Monimuuttuja-analyysi paljasti tilastollisesti merkitsevä ero verrattaessa TRG 1 ja TRG 3 (taulukko 2). Kuten aiemmin julkaistu raporteissa [2], [3], [4], [5], [6], me myös osoittaneet, että imusolmuke etäpesäke on tärkeä itsenäinen ennustetekijä meidän kohortin (p = 0,0017 Log-Rank) ( kuva 3B).

. HE värjätään peräsuolen adenokarsinooma kasvaimen regressio arvosana 1 (40x). B. HE värjätään peräsuolen syövän kudosta kasvaimen regressio arvosana 1 (100x) C. Peräsuolen syöpä kasvaimen regressio luokka 2 (40x) D. Peräsuolen adenokarsinooman kasvaimen regressio luokka 2 (100x). E. Tuumoriregressio arvosana 3 (100x) in peräsuolen syövän solunulkoisen mukiinia kertymistä. F. Imuneste etäpesäke regressio luokka 2 (40x). G. Imuneste etäpesäke regressio arvosana 3 (40x). H. Alueellinen imusolmuke etäpesäke (400x) standardin HE-värjäys.

. Aika taudin etenemiseen viikkoina suhteessa todennäköisyys ilman taudin etenemistä ositettu varten kahtia kasvainregressio luokittelu (TRG 0/1/2 = ei taantumisen tai hallitseva syöpäkasvain selviä fibroosia tai mukiinia tai vallitsevasti fibroottisia tai mucinous muutoksia, joissa kasvainsolujen tai ryhmiä; TRG 3/4 = hyvin vähän kasvainsolujen fibroottisissa tai mucinous kudoksen tai kasvainsoluja ei vain fibroottisia tai mucinous massa /koko regressio, mukaan Dworak et ai., 1997). B. Aika taudin etenemiseen viikkoina suhteessa todennäköisyys ilman taudin etenemistä ositettu imusolmukkeen etäpesäke (ypN0 ja YPN +).

Association of peritumoraalista ja kasvaimensisäisenä imusolmukkeiden suonitiheys kanssa imusolmuke etäpesäke, UICC vaiheessa sekä varoituksia parametrit

seuraavassa vaiheessa arvioimme peritumoraalista ja kasvaimensisäisenä lymfangiogeneesiä (pLVD ja iLVD) ja sen suhteesta etäpesäkkeiden meidän kohortissa. Imusuonten arvioitiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa vasta-ainetta, joka tunnistaa podoplanin (D2-40, Dako) (Fig. 1B ja 1C). Värjäytyminen on spesifinen lymfaattiseen endoteeliin ja ei tahraa mitään verisuonten havaittavissa intraluminaaliset punasolujen. pLVD ei korreloi merkitsevästi imusolmukemetastaaseja (p = 0,08 χ

2). Ei ollut mitään merkittävää korrelaatiota pLVD ja ypUICC vaiheessa tai sairauden vapaa elinaika. Lisäksi iLVD ei korreloinut ennustetta, imusolmuke etäpesäke tai ypUICC vaiheessa.

Association of solmukkeensisäinen lymphangiogensis alueellisiin imusolmukkeisiin kanssa UICC vaiheessa, elinaika ilman taudin etenemistä, ja tyyppi uusiutumisen

table -1-captionIn rinnakkain, arvioimme solmukkeensisäinen imusuonten värjäämällä alueellisten mesorectal imusolmukkeiden D2-40 kuten aiemmin on kuvattu. Imusolmuke luokitellaan positiivinen solmukkeensisäinen imusuonten, kun vähintään yksi lymph astia voidaan havaita follikkelien ja /tai interfollicular alueen ainakin yhden mesorectal imusolmuke (nimetty NLV +). Pohjimmiltaan 102 potilasta kaikki imusolmukkeet olivat negatiivisia imusolmuke imusuonten, kun taas 43 potilasta vain yksi imusolmuke havaittavissa lymfangiogeneesiä näkyi. 58 potilaalla useampia kuin yksi alueellinen imusolmuke on havaittavissa imusuonten.

havainnut tilastollisesti merkittävä korrelaatio NLV + (imusuonten vähintään yhdellä mesorectal /alueellisen imusolmuke) ja kasvaimen uusiutumisen sekä ypUICC vaiheessa (taulukko 1 ). Kaplan Meier-analyysi paljasti merkittävän korrelaatio NLV + kanssa ilman taudin etenemistä (p = 0,0071 logrank) koko kohortin (Fig. 4A). Lisäksi NLV + oli itsenäinen ennustetekijä kuin tutkitaan Coxin suhteellisten riskien regressiomallia kanssa kovariaatit ypUICC-vaiheessa, ikä, sukupuoli, kasvaimen regressio, kasvaimeen imusolmukkeiden suonitiheys, peritumoraalista imusolmukkeiden suonitiheys, ja imusolmukkeesta imusolmukkeiden suonitiheys (taulukko 2 ). Niinpä Alaryhmäanalyysissa solmun-negatiivisten potilaiden esitteli merkittävä korrelaatio NLV + ja taudista vapaan eloonjäämisen (Fig. 4B) käyttäen Kaplan-Meier-analyysi. Verrattaessa taajuus maksan etäpesäkkeiden potilailla ja ilman mesorectal solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä (NLV +), löysimme lisää maksan etäpesäkkeiden potilailla, joilla solmukohtien lymfangiogeneesiä (13 maksan etäpesäke potilaalla on solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä vs. 2 maksan etäpesäkkeiden potilailla, joilla ei solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä). Olemme myös arvioineet määrä imusuonten (lymph suonitiheys, nLVD) havaitaan alueellisiin imusolmukkeisiin. Tässä maksimaalinen määrä imusuonten havaittu imusolmuke, jossa imusuonten korreloi merkittävästi solmun tila (ypN0 tai YPN +; p = 0,01 χ

2) (Fig. 5B). Sen sijaan ei ollut korrelaatiota maksimaalinen määrä imusuonten kaukaisiin etäpesäkkeitä. Kun dichotomizing mukaan mediaani maksimi imusolmuke lymph suonitiheys, emme voi havaita mitään merkittävää korrelaatiota aika taudin etenemiseen. Myös määrä imusolmukkeiden kanssa lymfangiogeneesiä ei korreloinut ypUICC vaiheessa tai kasvaimen uusiutumisen alaryhmässä potilaita, joilla NLV +. Yhteenvetona läsnäolo alueellisen imusolmuke imusuonten edustaa itsenäinen ennustetekijöiden parametri, vaikka solmukohtien lymph suonitiheys sekä määrän imusolmukkeiden kanssa havaittavissa solmukohtien lymfangiogeneesiä saattaa olla vähäinen merkitys yleisen ennustetta.

”With imusolmuke lymfangiogeneesiä” määritellään ainakin yhteen alueelliseen /mesorectal imusolmuke kanssa havaittavissa lymfangiogeneesiä munarakkula- tai interfollicular alueella. A. Aika taudin etenemiseen viikkoina suhteessa todennäköisyys taudista vapaan eloonjäämisen ositettu läsnäolo imusolmuke lymfangiogeneesiä kaikilla potilailla. B. Aika taudin etenemiseen viikkoina suhteessa todennäköisyys taudista vapaan eloonjäämisen ositettu läsnäolo imusolmuke lymfangiogeneesiä solmussa negatiivisilla potilailla.

. Rasiakuvaajien vertaamalla määrä imusuonten että peritumoraalista alueen läsnäolo tai puuttuminen imusolmuke etäpesäke. B. Rasiakuvaajat vertaamalla useita alueellisia imusolmuke imusuonten suhteessa läsnä ollessa tai poissa ollessa imusolmuke etäpesäke potilailla, joilla on havaittavissa imusuonten alueellisen imusolmukkeisiin.

Association of imusolmuke etäpesäke regressio luokittelu ja ennuste

meidän kohortissa ei ollut tilastollisesti merkitsevää korrelaatiota imusolmuke etäpesäke regressio luokittelua ja kasvaimen uusiutumisen /taudista vapaan eloonjäämisen Kaplan Meier mallin kaikilla potilailla ja alaryhmäanalyyseissa. Monimuuttuja analyysit ole tilastollisesti korrelaatiota löytyisi.

Keskustelu

Riippumatta kasvaimen koon ja laajuuden hyökkäyksen, alueellisen imusolmuke etäpesäke (YPN +) on tärkeä ennustetekijä hoidetuilla potilailla neoadjuvant radiochemotherapy [2], [3], [4], [5], [6]. Näin ollen, on tärkeää valaista imusolmuke etäpesäke sekä miten imusolmuke etäpesäke voisi vaikuttaa yleisen potilaan eloonjäämisen. Vaikka kiistanalainen, peritumoraalista lymphatics raportoidaan noin pelata rooli imusolmuke etäpesäke kolorektaalikarsinoomasta [10], [11], [12], [13] [12], [14], [15]. Käytimme D2-40-aineella (Podoplanin, solun pinnan sialoidun glykoproteiini) [16], [17] tahraa imusuonten perusterveydenhuollossa adenokarsinooman ja mesorectal imusolmukkeista 203 peräsuolen syöpäpotilailla. Näitä potilaita hoidettiin ennen leikkausta radiochemotherapy seurasi täydellinen kirurginen poisto kasvain (R0). Tuloksemme osoittavat merkittävää korrelaatiota peritumoraalista ja kasvaimensisäisenä lymfangiogeneesiä ja potilaan ennustetta. Mielenkiintoista, havaitsimme imusolmuke lymfangiogeneesiä oli tärkeä ennustetekijöiden parametri tämän potilasryhmän kohortissa. Kuten aikaisemmin ilmoitettiin, imusuoniston kasvutekijät, kuten VEGF-C ja VEGF-A voi kulkeutua paikallisiin imusolmukkeisiin primaarikasvaimista ja edistämään imusuonten [7], [18]. Voimme ennustaa samanlainen ilmiö peräsuolen syövän taso VEGF-C: n osoitettiin olevan koholla veressä potilaiden seerumissa, joilla peräsuolen syöpä [19]. On oletettu, että imusolmuke imusuonten voi toimia metastasoitunut kapealla syöpäsoluja [7], [8], [20], [21] ja helpottaa edelleen metastaattisen transformaation kasvainsoluja. Tämä saattaa johtaa hoidon kestävät metastaattisen syövän ja on siksi vastuussa huono potilaan ennustetta. Tutkimukset muiden syöpien osoittavat myös samanlainen ennustetekijöiden merkitys imusolmuke imusuonten. Kun B16-hiirimallissa osoitettiin, että imusolmuke imusuonten on varhainen vaste kasvaimen kasvun ja edeltää kasvaimen etäpesäkkeiden [22]. Merkitys Sentinel imusolmuke lymfangiogeneesiä metastaaseja rintasyövän ulkopuolisiin vartijaimusolmukkeista on osoitettu ihmispotilaille. [23]. Samanlaisia ​​tulokset osoittavat, että on tärkeää imusolmuke lymfangiogeneesiä raportoitu haimasyövän [8], squamous pään ja kaulan alueen syöpä [21], ja rinnan ulkopuolisessa Pagetin tauti [20].

Multimodal esikäsittely paikallisesti edenneen peräsuolen syöpä on osoittanut terapeuttisia hyötyjä potilaille [24]. Aikaisemmin on osoitettu, että imusuoniston kasvutekijät esim. VEGF-C: tä voimistuvan kasvainsolujen rasitustiloissa ja edistänyt niiden stressin kestokyvyn, [25] ,, [26]. Näin ollen, on mahdollista, että terapeuttista stressin aikana neoadjuvant hoitoon peräsuolen syöpä parantaa tason synteesin imusuoniston kasvutekijöiden ja lisää muodostumista imusuonten alueellisiin imusolmukkeisiin. Tämä johtaa lopulta kasvaimen uusiutumisen ja etäpesäke. Tukkiminen imusuoniston akselin aikana neoadjuvant hoidon pitäisi siis parantaa tulosten nykyisten hoitomuotojen varten pitkälle peräsuolen syöpä. Yhdistys imusolmuke lymfangiogeneesiä ja huonompi ennuste edelleen ehdottaa rutiini havaitseminen imusolmuke lymfangiogeneesiä tärkeä parametri ennustamiseen syövän uusiutumisen ja indikaattorina aggressiivisempi adjuvanttihoitoa.

Yhteenvetona tutkimuksessamme osoittaa, että läsnäolo solmukkeensisäinen lymfangiogeneesiä edustaa itsenäinen prognostinen markkeri liittyy lyhyempi elinaika ilman taudin etenemistä potilailla, joilla on paikallisesti edennyt peräsuolen syöpä, joita hoidetaan neoadjuvant radiochemotherapy. Siksi strategioita havaita imusolmuke lymfangiogeneesiä kliinisessä ympäristössä voisi auttaa tunnistamaan potilaita, jotka hyötyisivät enemmän aggressiivinen hoitovaihtoehtoja. Myös sisällyttäminen terapeuttinen lähestymistapa estää imusuonten olisi hyödyllistä neoadjuvantly käsitellään kehittyneitä peräsuolen syöpäpotilailla.

Materiaalit ja menetelmät

Patient materiaali

Materiaali käytetty tässä tutkimuksessa kuuluvat hyväksynnän eettisiä valiokunnan yliopistollisen sairaalan ”Carl Gustav Carus”, TUD-lääketieteellisen tiedekunnan käyttöön tutkimuksessa (EK59032007; ”Feingewebliche und molekularpathologische Untersuchung in langzeit-archiviertem Gewebsmaterial des Instituts für Pathologie des Universitaetsklinikum Dresden /Medizinische Fakultaet Carl Gustav Carus, TU Dresden ”puheenjohtaja: W. Kirch, MD). Päätöksestä eettisen valiokunnan nimenomaan hyväksynyt käytettävän kudoksen tähän vähän invasiivisia ja retrospektiivinen tutkimus, joka käyttää potilaan aineistoa, joka on säilytetty yli kolme vuotta. Kaikki potilaat suostumuksensa käytön kudoksen tutkimusta (kuten edellä tiedostot potilaista). Mukaan Ethic n komitea suullinen suostumus riittää tässä tapauksessa (tämä lupamenettely hyväksyy Ethic n komitea), koska materiaali täällä ei liity nimen potilaan ja koodataan. Kaksisataa ja kolmella potilaalla (uros: n = 152, naispuolinen: n = 51, mediaani-ikä = 70 vuotta), joilla on paikallisesti edennyt peräsuolen adenokarsinooma (UICC vaiheen II /III) vuosien 2001 ja 2008 olivat mukana tässä tutkimuksessa (kuvio 1). Kaikki potilaat kävivät ennen leikkausta (neoadjuvant) 5-fluorourasiili (5-FU), joka radiochemotherapy ja parantava R0 kirurgian analogisesti satunnaistettua faasin III Saksan peräsuolisyövän Trials CAO /ARO /AIO-94 [1]. Tiedot taudin pahenemisvaiheita (kaukainen etäpesäke tai paikallisten toistuminen) sekä muut asiaankuuluvat tiedot haettiin tietokannasta Institute of Pathology, University Hospital ”Carl Gustav Carus”, lääketieteellisen tiedekunnan yliopiston Dresden, Saksa.

patologinen tutkimus syövän näytteen jälkeen neoadjuvant hoidon

vähintään neljä otettiin ja arvioitiin ensisijaiselta peräsuolen syöpä. Kun kyseessä on okkultismin jäljellä syövän aikana brutto tutkimus, täydellinen entinen syöpä alue upotettu ja tutkittiin histologisesti. Siinä tapauksessa, että ei ole jäljellä syöpäsolujen HE-värjäys tärkeää epiteelisyöpäsolujen havaittiin sytokeratiini-värjäyksellä. Tällä menettelyllä varmistetaan, että hoito indusoi kudosfibroosi sekä ekstrasellulaarisen mukiinia kertymät ei pidetty jäljellä syöpäkudoksessa ja incuded kasvaimen regressio luokittelu. Mesorectal paikallisiin imusolmukkeisiin leikeltiin mukaan ”unioni internationale contre syöpä” (UICC). Mikäli tarkastelun alle kaksitoista alueellista mesorectal imusolmukkeisiin perirectal rasvakudokseen (vähintään kymmenen parafiiniblokit) on upotettu ja arvioitiin läsnäolon lisäksi imusolmukkeiden, jotka eivät olleet havaittavissa brutto tutkimus. Havaita jäljellä syöpäsoluja Pancytokeratin värjäys suoritettiin kuvatulla.

kasvain ja imusolmuke etäpesäke regressio arvosteluasteikko

Histopatologisten kasvaimen regressio (TRG) sisällä primaarikasvaimen luokiteltiin mukaan semikvantitatiivinen perustetun järjestelmän Dworak et ai. [9]: TRG 0 = ei regressiopolynomi TRG 1 = hallitseva syöpäkasvain selviä fibroosia tai musiini; TRG 2 = vallitsevana fibroottisia tai mucinous muutoksia, muutamia kasvainsolujen tai ryhmiä; TRG 3 = hyvin vähän kasvainsolujen fibrotic tai mucinous kudokseen; TRG 4 = ei kasvainsoluja, vain fibroottisia tai mucinous massa /koko regressio [2] (Fig. 2).

Näyttö kasvaimen vaste ennen leikkausta radiochemotherapy sisällä perirectal imusolmukkeiden määriteltiin läsnäolo solmukohtien fibroosi tai musiinigeenit altaat (tai ilman jäljellä kasvainsoluja), kuten aiemmin on kuvattu [27], [28]. Imusolmuke etäpesäke regressio (LRG) arvioitiin samat parametrit kuin primaarikasvaimen regressio huomioon kunkin metastaattinen imusolmuke: LRG 0 = ei regressiopolynomi LRG 1 = hallitseva syöpäkasvain selviä fibroosia tai musiini; LRG 2 = vallitsevana fibroottisia tai mucinous muutoksia, muutamia kasvainsolujen tai ryhmiä; LRG 3 = hyvin vähän kasvainsolujen fibrotic tai mucinous kudokseen; LRG 4 = ei kasvainsoluja, vain fibroottisia tai mucinous massa /koko regressio. Non-metastasoitunut imusolmukkeet olivat erotettava kokonaan metastaattinen regressio (LRG 4) mukaan puuttuminen fibroosi tai mukiinia (Fig. 2). Kun eri LRGs havaittiin yhdellä potilaalla, vain imusolmuke pahin regressio pidettiin.

immunohistokemia

Immunohistokemia suoritettiin 2 um: n leikkeitä parafiiniin upotettu lohkojen primaarikasvaimen ja alueellisiin imusolmukkeisiin. Parafiinit, nesteytys, ja antigeeni haku suoritettiin Höyrykypsennysastiat (98 ° C, 45 min) PT-moduuli (pH 8,0) (Thermo tieteelliset, Medac, Hampuri, Saksa). Kudokset pestiin Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS) (Thermo tieteelliset, Medac, Hampuri, Saksa) ja inkuboitiin monoklonaalisella hiiren anti ihmisen podoplanin havaitsemiseksi D2-40-vasta-ainetta (DAKO, Hampuri, Saksa, 1:400 laimennus) 30 min huoneenlämpötilassa. Sitten endogeeninen peroksidaasi aktiivisuus estyi inkuboimalla liukuu 3% H

2O

2 10 minuuttia. Pesun jälkeen TBS, Ultravision LP suuren määrän tunnistusjärjestelmä HRP Polymer (Thermo tieteellinen, Medac, Hampuri, Saksa) käytettiin mukaan valmistajan suositusta. Leikkeet värjättiin 0,5 mg /ml diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB) ja vasta-värjättiin hematoksyliinillä. Kaikissa kokeissa positiivinen ja negatiivinen kontrolli otettiin mukaan.

Arviointi Immunohistokemian

Imuneste suonitiheyttä arvioi ”hot-spot” menetelmä edellä kuvatulla ja myös nimitystä Chalkley kohta asteikkolevyssä menetelmä [29]. Lyhyesti, kaikki diat skannattiin pienellä suurennoksella (x40) ja alueet, joissa on tihein D2-40 positiivisia suonia havaittiin. Sitten määrä D2-40 positiivisten suonten laskettiin näillä alueilla viidessä korkean tehon kenttiä (HPF, X400) kaksi riippumatonta patologia (CJ ja MHM) ilman tietoa kliinis havainnoista, ja keskiarvo aluksen laskee olivat laskettu. Kasvaimensisäistä (imusuonten sisällä kasvain massa) ja peritumoraalista (imusuonten ulkopuolella kasvain, mutta enintään 2 mm: n kasvain hyökkäyksen edessä) LVD määritettiin erikseen. Alukset lähellä ulcerated alueita ei lasketa. LVD arvioitiin kaikilla leikellään mesorectal imusolmukkeet kuten solmukohtien etäpesäkkeitä, jäljellä imukudoksen metastaattisen imusolmukkeiden (jos olemassa oleva), ja kaikki ei-metastaattinen imusolmukkeiden. Ennestään solmukkeensisäinen alukset (väli sekä marginaalinen sinus) ei lasketa. Arvioitaessa korkea interobserver sopimus vahvistettiin käyttämällä Cohenin Kappa kerroin (κ = 0,8; p 0,001). Mikäli interobserver eroja, asia reevaluated samanaikaisella uudelleenarviointi näytteen.

Tilastollinen

Kaikki testit suoritetaan käyttämällä SAS JMP Version 9. Associations eri kategorisen muuttujien arvioitiin käyttäen χ

2 testiä. Jatkuvia muuttujia verrattiin käyttäen Mann-Whitneyn U-testiä tai ANOVA. Aika taudin etenemiseen hinnat verrattiin käyttämällä yhden muuttujan analyysin Kaplan-Meier, monimuuttuja-analyysi suoritettiin käyttäen Coxin suhteellisten riskien regressiomallia kanssa kovariaatit ypUICC-vaiheessa, ikä, sukupuoli, kasvaimen regressio, kasvaimeen imusolmukkeiden suonitiheys, peritumoraalista imusolmukkeiden suonitiheys, imusolmuke- lymph suonitiheys. P-arvot pienemmät kuin 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevästi.

Kiitokset

Tekijät Kiitokset Marissa J Stanton, University of Nebraska Medical Center, että kriittinen tarkastelu käsikirjoituksen.