Krooninen sairaus

tiivistelmä

Fos-liittyvä antigeeni 2 (FRA-2 /FOSL2) kuuluu AP-1-transkriptiotekijän perhe. Vaikka FOSL2 on osoitettu olevan mukana erilaisissa fysiologisissa ja patologisissa prosesseissa, hyvin vähän tiedetään signalointireittien jotka säätelevät FOSL2 ilmaisun ja mekanismeja FOSL2 toiminto. Tässä osoitamme, että FOSL2 ilmentymistä säätelee TGF-β1 ja että FOSL2 tarvitaan TGF-β1 muuttoliikkeelle. Osoitamme, että FOSL2 vuorovaikutuksessa Smad3

in vitro

ja

in vivo

ja siten ylös-säätelee TGF-β1 aiheuttama signalointi vasteita. Mekanistisesti FOSL2 edistää P300 sitoutumisen Smad3 ja asetylointi Smad3 mukaan P300. Lisäksi osoitamme, että ilmaus FOSL2 korreloi aktivoitu Smad3 ilmentymisen kliinisissä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) näytteitä. Yhteenvetona esillä oleva tutkimus osoittaa, että FOSL2 helpottaa TGF-β1 muuttoliikkeelle vuorovaikutuksella Smad3 NSCLC ja ehdottaa FOSL2 mahdollisena terapeuttisena kohteena NSCLC.

Citation: Wang J, Sun D, ​​Wang Y, Ren F, Pang S, Wang D, et al. (2014) FOSL2 säätelee positiivisesti TGF-β1 merkinanto in ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 9 (11): e112150. doi: 10,1371 /journal.pone.0112150

Editor: Jeremy J W. Chen, Institute of Biomedical Sciences, Taiwan

vastaanotettu: 4. kesäkuuta, 2014; Hyväksytty: 13 lokakuu 2014; Julkaistu: 06 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tätä työtä tuki National Natural Science Foundation of China (81172818, 81172215). Rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

TGF-β-reitin ohjaa erilaisten biologisten prosessien, kuten solujen lisääntymisen, erilaistumisen, apoptoosin, ja muuttoliike [1]. Sen jälkeen kun aktivaatio heteromeeristen tyypin II ja tyypin I seriini-treoniini-kinaasi-reseptori-kompleksien yhteydessä TGF-β ligandia sitova, solunsisäinen signalointi aloitetaan fosforylaatio reseptori aktivoituu Smad proteiineja (R-Smad: ien) [2]. Kuten transkriptiotekijöitä TGF-β-reitin, fosforyloitu Smad2 /3 muodostaa kompleksin Smad4 ja sitten siirtyy tumaan säädellä transkriptiota TGF-β-reitin kohdegeenien [3]. Soluvasteita TGF-β signalointia edelleen vaikuttaa vuorovaikutusta Smad proteiinien kofaktoreita (koaktivaattoreiden tai korepressoreiden) moduloimiseksi transkriptionaalista aktiivisuutta [4].

Fos-liittyvää antigeeniä 2 (FRA-2 /FOSL2) kuuluu AP-1-transkriptiotekijän perhe, joka sisältää erilaisia ​​isoformeja Fos ja Jun [5]. Eri FOS proteiinit avainrooleja selvä kehitykselliset, fysiologiset ja patologiset prosessit [6], mutta nämä yksittäiset roolit ja mekanismit eivät ole vielä selvillä. FOSL2 kohdistaa tiettyä toimintoa luun kehittymisessä [7] ja näyttää olevan selektiivinen fysiologisia ja patologisia roolit erilaisissa prosesseissa, kuten valoperiodisella asetus [8], syöpä [9], ja fibroosia [10]. Useat aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että FOSL2 avainasemassa säätelyssä TGF-β-reitin. Esimerkiksi, FOSL2 yliekspressoituu systeeminen skleroosi (SSC) ja toimii uutena alavirtaan välittäjänä profibroottisia sytokiinin TGF-β [11]. Sydämen fibroblastit, FOSL2 transkription sääntelijä voi aiheuttaa TGF-β ilmaisun [10]. Lisäksi FOSL2 tarvitaan TGF-β aiheuttama lysyyli oksidaasi kaltainen 4 (LOXL4) ilmaisuja sääntelyssä soluväliaineen (ECM) synteesi ja remontin [12]. On kuitenkin epävarmaa, FOSL2 säätelee TGF-β-reitin karsinogeneesissä.

Tässä tutkimuksessa käynnistettiin tutkia roolia FOSL2 TGF-β-muuttoliikkeelle. Ilmentyminen FOSL2 lisääntyi seuraavien TGF-β hoito ja vaadittiin TGF-β1 muuttoliikkeelle. FOSL2 osoitettiin myös sitoutuvan Smad3 moduloida TGF-β-indusoitu signaali vasteita.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Potilaan tiedot ja näytteet saatiin Kirjallinen suostumusta. Jokainen potilas tässä tutkimuksessa antoi kirjallisen tietoisen suostumuksen julkaista nämä runko-osat. Tutkimus hyväksyttiin eettinen komitea Harbinin Medical University Cancer sairaala.

Cell Lines, Cell Culture, ja transfektio

Ihmisen keuhkoadenokarsinooma A549 ja ihmisalkion munuais- 293T olivat hankittiin American Type Culture Collection (ATCC) ja pidettiin DMEM: ssä, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS) (Invitrogen), joka sisälsi 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 100 yksikköä /ml streptomysiiniä (Sigma) 37 ° C: ssa, 5% CO

2. Induktiolle EMT, A549-soluja viljeltiin 10% FBS: ää 24 tunnin ajan ja pidettiin sitten 72 tunnin ajan seerumivapaassa väliaineessa, kun läsnä on 2 ng /ml TGF-β1 (R anti-p300, anti-Smad3, ja anti-GST Santa Cruz; anti-asetyloitu-lysiiniä Cell Signaling Technology; anti-p-Smad3 maasta Abcam; Alexa Fluor 488 aasin anti-hiiri-IgG ja Alexa Fluor 546 aasin anti-kani-IgG: tä Invitrogen. siRNA: t ja FOSL2 ja negatiivisen kontrollin saatiin Dharmacon.

immunosaostus ja Western-blottaus-analyysi

24 tuntia transfektion jälkeen solulysaatit kerättiin käyttäen lyysipuskuria (50 mM Tris, pH 8,0, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM NaF, ja 0,1% NP-40) ja inkuboitiin proteiini A tai G Sepharose helmiä ja sopiva vasta-aineita, 2 h 4 ° C: ssa. Pesujen jälkeen, immunosaostetun proteiinit keitettiin proteiinin näytepuskurissa 5 minuutin ajan, ja sitten erotetaan SDS-PAGE: lla, siirrettiin PVDF-kalvoille (Millipore), ja havaitaan western blotting -analyysi.

GST pull-down -määritys

GST ja GST-Smad3-fuusioproteiineja ilmennettiin BL21-soluissa ja puhdistettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti (GE Healthcare Life Science). FLAG-merkitty FOSL2 konstrukteja ilmennettiin HEK 293T-soluissa. Koko-solu-proteiini lysaatit kerättiin talteen 48 tunnin kuluttua käyttäen soluhajotuspuskurin, esipuhdistettiin käyttäen glutationi-Sepharose-helmiä, ja sen jälkeen inkuboitiin joko GST-Smad3 tai ohjaus GST 2 tunnin ajan 4 ° C: ssa. Helmet pestiin viisi kertaa GST-sitomispuskurilla, eluoitiin 40 ui 2 x SDS-näytepuskuria, ja sitten havaittiin immunoblottauksella.

transkriptio Reporter Assay

Soluja käsiteltiin tai ei 2 ng /ml TGF-β1 20 tuntia transfektion jälkeen. Sitten solut kerättiin ja analysoitiin Dual Luciferase Reporter Assay (Promega). Kaikki määritykset suoritettiin kolmena kappaleena, ja kaikki arvot normalisoituivat transfektiotehokkuuden vastaan ​​

Renilla

lusiferaasiaktiivisuudet.

Reaaliaikainen RT-PCR (qRT-PCR) B

Yhteensä RNA: t saatiin käyttäen TRIzol reagenssia (Invitrogen). Käänteinen transkriptio RNA: ta suoritettiin käyttäen IMPROM-II käänteistranskriptio-järjestelmä (Promega) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kvantitatiivinen käänteistranskriptaasia (qRT) -PCR suoritettiin käyttäen ABI PRISM 7500 Sequence Detector System (Applied Biosystems), jossa geeni-spesifisiä alukkeita p21 ja PAI-1.

Immunofluoresenssi

A549-soluja viljellään 6-kuoppalevylle ja käsiteltiin TGF-β1 (2 ng /ml). Sitten solut kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä, permeabilised 0,1% Triton X-100, ja inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla vastaan ​​FOSL2 tai Smad3 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Sitten soluja inkuboitiin Alexa Fluor 488 tai Alexa Fluor 546-vasta-aineita 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Fluoresoivat kuvat otettiin käyttäen konfokaalisella laser-skannaus mikroskooppia.

immunohistokemia

Tissue näytteet upotettiin parafiiniin. Leikkeet deparaffinised ksyleeniin ja niihin lisätään etanoli kaltevuus. Sen jälkeen, kun antigeeni haku, leikkeet käsiteltiin 3% H

2O

2 10 minuuttia, jota seurasi 5% naudan seerumin albumiinia (BSA) 30 minuutin ajan. Sitten leikkeitä inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla. Visualisointi vasta-aineen sitoutuminen suoritettiin käyttäen DAB värjäystä. Tumat värjättiin hematoksyliinillä. Immunovärjäyksen Tulokset itsenäisesti arvioineet kaksi patologia.

Potilaat

Keuhkosyöpä näytteitä (n = 57) kerättiin potilailta NSCLC Harbin Medical University Cancer sairaalan vuodesta 2009 vuoteen 2012. kudoksiin säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti. Kaikki näytteet olivat peräisin potilaista, jotka eivät ole suorittaneet ennen leikkausta sädehoitoa tai kemoterapiaa. Patologinen lavastus 57 kasvainten suoritettiin kasvain-solmu-etäpesäke (TNM) pysähdyspaikan järjestelmä.

Cell Migration määritys

Migration määritykset suoritettiin 8 um suodattimia (BD Biosciences ). Jokainen hyvin kuormitettiin ~ 1 x 10

5 solua. Kun oli inkuboitu 16 tuntia, solut suodattimen läpi pohjaan kuopat kiinnitettiin formaliinissa ja värjättiin Crystal Violet. Solut 10 satunnaisesti valittua kenttää (200 x) kustakin kuopasta laskettiin.

TILASTOANALYYSI

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS17.0 ohjelmistoa. Muut tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen Studentin t-testi. Kaplan-Meier selviytymisen analyysin perusteella arvioidaan yleisen elinaika suoritettiin log-rank-testi. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD 3 itsenäisestä määrityksissä. Tilastollisesti merkittävä ero otettiin huomioon

P

0,05.

Tulokset

FOSL2 tarvitaan TGF-β1 muuttoliikkeelle

alkaa tutkia mahdollisuus, että FOSL2 ilmentymistä säätelee TGF-β1, käsittelimme A549-solujen TGF-β1 yli ajan tietenkin ulottuu 24 h 72 h ja suoritettiin western blot-analyysi. Tulokset osoittivat, että FOSL2 tasot kasvoivat huomattavasti vastauksena TGF-β1 käsittely tässä solulinjassa (kuvio 1A). Maksimaalinen FOSL2 ekspressiotasot 72 h oli noin 4 kertaa kuin torjunta-perustaso (kuvio 1A). Seuraavaksi testasimme FOSL2 osallistuu TGF-β1 muuttoliikkeelle. Tämän mahdollisuuden tutkimiseksi, me pudotti FOSL2 ilmentymistä A549-soluja, ja Western blot-analyysi osoitti, että FOSL2 tasot olivat merkittävästi vähentynyt verrattuna kontrollisoluihin (kuvio 1 B). Sitten tutkimme sääntelyn vaikutusta FOSL2 muuttavaa kyky A549-solut käyttämällä Transwell migraatiokokeessa. TGF-β1 hoidon dramaattisesti edistää muuttoa A549 soluja, kun taas kaatamalla FOSL2 lakkautetaan soluvaelluksen läsnäollessa TGF-β1 (kuvio 1 C). Lisäksi olemme myös tutkinut morfologiset muutokset A549-solut altistumisen jälkeen TGF-β1. Koska TGF-β1, solut pidettiin klassinen mukulakivi epiteelin morfologian ja kasvun malli, mutta solut omaksunut fibroblastien kaltainen morfologia ja vähentäneet solu-solu kosketuksiin jälkeen TGF-β1 stimulaatio; kuitenkin, tämä vaikutus estyi FOSL2 ehtyminen (kuvio 1 D).

(A) A549-soluja inkuboitiin TGF-β1 (2 ng /ml) ja osoitetut ajat, ja solut kerättiin western blot analyysi. GAPDH: ta käytettiin latauskontrollina. (B) FOSL2 tasot tutkittiin western blotting in FOSL2-siRNA ja sicontrol A549-soluja. GAPDH määritettiin myös latauskontrollina. (C) solumigraation mitattiin käyttämällä Transwell määrityksissä sicontrol ja siFOSL2 A549-soluja tai ilman TGF-β1 (2 ng /ml) käsittely. Solut siirryttäessä alapintaan Transwell suodattimet kuvattiin (ylhäällä) ja lasketaan (alhaalla). (D) siControl ja siFOSL2 A549-soluja inkuboitiin kanssa tai ilman 2 ng /ml TGF-β1: ssa 72 tuntia. Faasikontrastimikroskopiaan näyttää solun morfologiset muutokset.

FOSL2 vuorovaikutuksessa Smad3

Koska Smad2 /3 proteiinit ovat transkription efektoreita TGF-β1 signalointi, tutkimme onko estyminen TGF-β1 muuttoliikkeelle by FOSL2 ehtyminen sen välittämä vuorovaikutus näiden Smad: ien. Voit testata, onko vuorovaikutus FOSL2 ja Smad3 in vivo, käytimme solulysaatteja 293T-solut transfektoitu IImentämisplasmidien Flag-merkittyjen FOSL2 ja Myc-merkityn Smad3 ja havaitsi, että FOSL2 voitaisiin kerasaostuvat Smad3 (kuvio 2A) , kun taas vuorovaikutus FOSL2 ja Smad2 ei havaittu (tuloksia ei ole esitetty). Sitten määritetään, onko endogeeninen FOSL2 ja Smad3 myös vuorovaikutuksessa. Kuten on esitetty kuviossa 2B, endogeeninen FOSL2 liittyy Smad3 A549-soluissa, ja vuorovaikutus oli selvästi ilmi, kun läsnä on TGF-β1. Lisäksi FOSL2 colocalised kanssa Smad3: n läsnä TGF-β1 (kuvio 2C). Sen määrittämiseksi, ovatko FOSL2 suoraan vuorovaikutuksessa Smad3, suoritimme GST avattavan määrityksissä. Yhtä suuret määrät GST-Smad3 tai GST-proteiinia yksinään inkuboitiin Flag-merkittyjen FOSL2. FOSL2 suoraan vuorovaikutuksessa Smad3, mutta ei vuorovaikutus Smad3 oli ilmeinen GST-proteiinin (kuvio 2D).

(A) FOSL2 vuorovaikutuksessa Smad3 in vivo. FLAG-FOSL2 ja Myc-Smad3 oli transfektoida HEK293T-soluissa. Solulysaatit kerättiin ja IP suoritettiin anti-Myc-vasta-ainetta. FOSL2 ja Smad3 havaittiin immunosaos- Western blottauksella ilmaistuilla vasta-aineilla. (B) välinen yhteys endogeenisen FOSL2 ja Smad3 A549-solujen TGF-β1 (2 ng /ml) hoitoon. Immunosaostus suoritettiin käyttäen anti-IgG-vasta-ainetta tai anti-Smad3-vasta-ainetta. (C) Subsellulaariset colocalisation on FOSL2 ja Smad3 A549-soluissa, kun läsnä TGF-β1 (2 ng /ml). Tumat värjättiin DAPI. (D) Vastaava määrä GST-Smad3 tai GST yksin inkuboitiin solulysaateista HEK 293T-solut yli-ilmentävät Flag-FOSL2; 10%: n tulo ajettiin geelissä kontrollina. GST-Smad3 havaittiin värjäämällä geelit Coomassie Blue.

FOSL2 moduloi TGF-β1-indusoitu signaali vasteita

tutkimme seuraavaksi vaikutus FOSL2 ilmentymisen TGF-β1- riippuvainen transkription vasteita käyttäen 3TP-Lux toimittaja. Koekspressoimalla FOSL2 vähitellen johti säätely ylöspäin Smad3 aiheuttaman reportteriaktiivisuutta (kuvio 3A). Toisaalta, toimittaja aktiivisuus väheni A549-soluja, jotka on transfektoitu FOSL2 siRNA (siFOSL2) suhteessa kontrolliin transfektoitujen solujen salattu siRNA (kuvio 3B), joka vahvistaa, että endogeeninen FOSL2 säätelee Smad3 toimintaa.

(A) HEK 293T solut transfektoitiin reportteri p3TP-Lux plasmidi Smad3 puuttuessa ja läsnä FOSL2, kuten on osoitettu. Solut kerättiin 36 tuntia transfektion jälkeen ja lusiferaasiaktiivisuus. Tiedot ovat keskiarvo ± S.D. (B) A549-soluja transfektoitiin siFOSL2 ja ohjauksella salattu siRNA. 24 tunnin kuluttua solut transfektoitiin p3TP-Lux ja Smad3, kuten syytteeseen. Lusiferaasin aktiivisuus määritettiin sen jälkeen vielä 24 h. Tiedot ovat keskiarvoja ± S.D. (C) A549-soluja, jotka on transfektoitu siFOSL2 ja ohjaus salattu siRNA stimuloitiin 2 ng /ml TGF-β1: ssa 4 tuntia. Yhteensä mRNA: t analysoitiin qRT-PCR: llä käyttäen spesifisiä alukkeita p21 ja PAI-1. Tiedot ovat keskiarvoja ± S.D. (D) A549-soluja, jotka on transfektoitu siFOSL2 ja ohjaus salattu siRNA stimuloitiin 2 ng /ml TGF-β1: ssa 4 tuntia, ja sitten korjataan tuottamaan solulysaateista. Ilmentymistasojen ilmoitettu proteiinien tutkittiin western-blottauksella kanssa sopivia vasta-aineita, kuten on osoitettu.

arvioitiin sitten vaikutus FOSL2 pudotus on endogeeninen TGF-β1 /Smad3 kohdegeenien. A549-soluja, TGF-β1 indusoi nopean ilmentymistä p21 ja PAI-1 mRNA: t, ja pudotus on FOSL2 vaimensi merkittävästi näitä vaikutuksia (kuvio 3C). Johdonmukaisesti, TGF-β1-indusoitua p21 ja PAI-1: n ilmentymisen proteiinin tason estyi A549-soluissa FOSL2 väheneminen (kuvio 3D).

FOSL2 edistää P300 sitoutumisen Smad3 ja asetylointi Smad3, jonka P300

on hyvin tunnettua, että CBP /p300 toimii yhdessä Smad monimutkainen säädellä TGF-β kohdegeenin transkription, joka stabiloi transkriptionaalisen aktiivisuuden Smad monimutkainen ja lisää siten kesto TGF-β-signalointia. Tutkimaan edelleen mekanismin säätelyyn FOSL2 TGF-β signalointi, me tutki FOSL2 vaikuttaa TGF-β1 aiheuttama muodostumista Smad3 /p300 monimutkainen. Vuorovaikutusta Smad3 ja p300 indusoitiin TGF-β1 stimulaatio, ja tämä vuorovaikutus on syvästi kasvoi ektooppinen ilmentyminen FOSL2 (kuvio 4A). Sen sijaan Smad3 ja p300 vuorovaikutusta vaimennetaan knockdovvn FOSL2 (kuvio 4B). Koska Smad3 asetylaatio by p300 positiivisesti säätelee transkriptioaktiviteettia, me siis tutki FOSL2 on mukana tässä prosessissa. Tämän mahdollisuuden testaamiseksi, 293T-solut transfektoitiin Myc-Smad3 yksin tai yhdessä p300 tai FOSL2. Kuten on esitetty kuviossa 4C, p300 indusoi asetylointi Smad3, ja FOSL2 yli-ilmentyminen merkittävästi parantunut tämän asetylaatio. Lisäksi endogeeninen FOSL2 ehtyminen tukahdutti asetylaatio Smad3 mukaan p300 A549-soluissa (kuvio 4D).

(A) HEK293T solut kotransfektoitiin IImentämisplasmidien HA-p300 ja FLAG-FOSL2 yhdessä Myc-Smad3 , kuten, tai ilman TGF-β1 (2 ng /ml) hoitoon. Smad3-sitoutunut p300 immunosaostettiin anti-Myc-vasta-aineen ja havainnoitiin Western-blottauksella anti-HA-vasta-aine. (B) A549-soluja transfektoitiin siFOSL2. 24 tunnin kuluttua soluja käsiteltiin, kuten on esitetty, TGF-β1 (2 ng /ml) käsittely. (C) HEK293T-solut transfektoitiin ohimenevästi ilmoitetuilla plasmideilla. Soluja inkuboitiin, kun läsnä oli TSA (5 uM) 20 tuntia. Solulysaatit immunosaostettiin (IP), jossa on anti-Myc-vasta-ainetta, ja asetyloidut Smad3 (Ac-Smad3) havaittiin Western-blottauksella anti-asetyloitu lysiini-vasta-ainetta. (D) A549-soluja transfektoitiin ohimenevästi ilmoitetuilla plasmideilla. Kokeet suoritettiin, kuten on kuvattu kuviossa. 4C.

Korrelaatio FOSL2 ja aktivoitua Smad3 ilmaisun NSCLC kasvaimissa

Jotta voitaisiin edelleen tutkia kliininen suhde FOSL2 ja TGF-β1 signalointi, ilmaus FOSL2 ja p-Smad3 in 57 NSCLC näytteet tutkittiin immunohistokemiallisella menetelmillä, ja korrelaatiot proteiinien arvioitiin. Out of 57 tapausta, 35 oli patologinen Stage I, ja 22 olivat pStage III. Niistä 35 tapausten pStage I, 31 (88,6%) oli pienempi ilmaus FOSL2 ja p-Smad3 proteiinit; kuitenkin 18 22 tapauksessa (81,8%) vuonna pStage III oli suurempi ilmauksia sekä proteiineista (kuvio 5A). Lisäksi FOSL2 ilmentyminen korreloi positiivisesti p-Smad3 värjäytymistä (P 0,001) (kuvio 5B). Kaplan-Meier selviytymisen käyrät osoittivat, että potilailla, joilla FOSL2 korkeampi ilme oli oli merkittävästi suurempi riski aikaisemman kuoleman kuin ne, joilla FOSL2 alempi ilme (P = 0,0059) (kuvio 5C). Näin ollen, nämä tulokset osoittivat, että FOSL2 ilmentyminen keuhkosyöpä kudoksen korreloi leikkauksen jälkeen uusiutumisen ja eloonjäämisen keuhkosyöpäpotilaiden.

(A) immunohistokemiallinen analyysi FOSL2 ja p-Smad3 57 NSCLC näytteissä. (B) FOSL2 ilmentyminen korreloi positiivisesti p-Smad3 ilmaisun NSCLC näytteissä. Semikvantitatiivinen pisteytys suoritettiin (Pearson korrelaatio koe; r = 0,858, p 0,001). Huomaa, että jotkin pisteitä kaaviot edustavat yli näyte (jotkut tulokset päällekkäin). (C) Kaplan-Meier eloonjäämiskäyriä NSCLC potilaalla on FOSL2 suurempi tai pienempi ilme. Ero postoperatiivisesti eloonjäämisen välillä NSCLC potilaalla on FOSL2 korkeampi ilme ja FOSL2 alemman ilme oli huomattavasti merkitsevä (

P

= 0,0059 log-rank-testi).

Keskustelu

Tuloksemme osoittavat, että FOSL2 ylössäätöä tarvitaan TGF-β1 muuttoliikkeelle. Estyminen FOSL2 ilmaisun esti TGF-β1 aiheuttaman muuttoliikkeen ja siihen liittyvien morfologisia muutoksia. Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että FOSL2 on tärkeä osa sääntelyn verkon TGF-β1 muuttoliikkeelle.

Smad3 on keskeinen signaali anturin TGF-β1 aiheuttama signalointireitteihin [13]. Kun pyritään edelleen selventää suhdetta FOSL2 ja Smad3 tunnistimme FOSL2 toisena tekijä Smad3. Miten FOSL2 toiminnot soluissa ei ole selvitetty tähän mennessä [14]. Ensin validoitu fyysisen vuorovaikutukset FOSL2 kanssa Smad3. Tumassa, Smad oligomeerit rekrytoida transkription co-aktivaattorit P300 /CBP [15] – [17], jotka ovat rakenteellisesti sukua proteiinien histoni liasetyylitransferaasi (HAT) aktiivisuus. Asetylointi on translaation jälkeisen modifikaation proteiinien, kanssa histonien on tunnetuin esimerkki [18]. Smad3 on suora kohde transkription co-aktivaattorit p300 /CBP ja tämä asetylointi stimuloivat TGF-β [19]. Kuitenkin, ei ole selvää, onko olemassa muita proteiineja, jotka helpottavat tätä prosessia. Tässä raportissa, osoitamme, että FOSL2 edistää P300 sitoutumalla Smad3 ja Smad3 asetyloinnin P300, mikä viittaa siihen, että FOSL2 myönteinen rooli säätelyssä TGF-β signalointi.

Etäpesäke on erittäin monimutkainen prosessi, johon paeta kasvainsolut primaarikasvaimen massa, muuttoliike ja hyökkäyksen kautta perus kalvot ja sidekudokset, tuloa verisuoni tai imunestejärjestelmän, selviytyminen liikkeessä, ekstravasaatio eri elinkohdissa (mukaan lukien kiinnityksen endoteelisoluihin ja diapaedesis poikki endoteelin), ja leviämisen muodostaa kaukainen etäpesäke [20] – [22]. Edelliset tulokset ovat osoittaneet, että FOSL2 yli-ilmentyminen johtaa lisääntyneeseen invasiivista potentiaalia rintasyövän soluissa, mutta mekanismia ei ole selvitetty toistaiseksi [23]. Koska TGF-β1 voi käyttää erilaisia ​​ohjelmia, joilla edistetään syövän etäpesäkkeiden kautta sen vaikutukset kasvaimen microenvironment, parannettu invasiivisia ominaisuuksia, ja esto immuunijärjestelmän solujen toimintaa, meidän havainnot paljastavat myös, että FOSL2 saattaa lisätä invasiivisia potentiaalia TGF-β-reitin. Lisäksi meidän kliiniset tulokset korrelaatio FOSL2 ja aktivoitu Smad3 ilmaisun NSCLC kasvaimissa edelleen vahvistaa tämän päätelmän. Nämä havainnot korostavat panosta FOSL2 ei-pienisoluisen keuhkosyövän tuumorigeneesiä ja esiin mahdollisuuden estävä FOSL2 NSCLC terapiassa.

Yhteenvetona tarjoamme ensimmäiset todisteet että FOSL2 helpottaa TGF-β1 muuttoliikkeelle NSCLC solujen vuorovaikutus Smad3 ja siten edistää P300 sitoutumista Smad3 ja Smad3 asetyloinnin P300, tapahtumat, jotka voivat edistää NSCLC ja ehdottaa FOSL2 mahdollisena terapeuttisena kohteena NSCLC.

Kiitokset

Tätä työtä tukivat National Natural Science Foundation of China (81172818, 81172215).