Krooninen sairaus

tiivistelmä

Kasvaimen invaasio ja etäpesäkkeiden edustavat monimutkaisen molekyyli tapahtumia, jotka ennakoi huono ennuste. Panos tulehduksellinen polkuja välittävien tämä prosessi ei ole täysin ymmärretty. Nod kaltaiset reseptorit (NLRs) luontaisen immuniteetin toimivat solunsisäisen anturit taudinaiheuttajien motiiveja ja vaara molekyylejä. Ehdotamme roolia NLRs kasvaimen valvontaa ja ohjelmoinnin kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL). Tässä tutkimuksessa tutkimme loppupään seriini /treoniini ja tyrosiini kinaasi Rip2 hiirimallissa virtsarakon syöpään. In Rip2 puutteesta C57BL6-hiiriä, suurempi ortotooppisten MB49 kasvaimia kehitetty suurempi ja suurempi esiintyvyys etäpesäkkeitä verrattuna villityypin kontrolleihin. Sellaisenaan lisääntynyt kasvaimen CD11b

+ Gr1

hi myelooinen johdettujen vaimennin soluja (MDSCs) samanaikaisesti väheneminen T-solujen ja NK-solujen havaittiin Rip2 puutteesta kasvainsolujen, joissa eläimiä käyttäen ortotooppinen ja ihonalainen kasvain malleja. Rip2 puutteesta kasvaimia osoitti parannettu epiteelin-to-mesenkymaalitransitioon, jossa kohonnut ilmentyminen

zeb1

,

zeb2

,

twist

, ja

etana

vuonna kasvain microenvironment. Huomasimme, että puuttuminen Rip2 näyttelee luontainen rooli kehityksen edistämiseksi granulosyyttistä MDSCs jonka autokriini ja parakriininen vaikutus granulosyyttistä stimuloiva tekijä (G-CSF) ilmaisua. Tulosten perusteella näyttää, että NLR reitit voivat olla uusi toimintatavat ohjelmoida TIL ja vaikutus kasvainten etäpesäkkeitä.

Citation: Zhang H, Chin AI (2014) Rooli Rip2 in Development of Tumor-infiltroivien MDSCs ja virtsarakon syövän Metastasis. PLoS ONE 9 (4): e94793. doi: 10,1371 /journal.pone.0094793

Editor: Rajeev Samant, University of Alabama at Birmingham, Yhdysvallat

vastaanotettu: 19 marraskuu 2013; Hyväksytty: 20 maaliskuu 2014; Julkaistu: 14 huhtikuu 2014

Copyright: © 2014 Zhang, Chin. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: American Association Cancer Research Urakehitys Award 10.20.14, Broad Stem Cell Research Center tutkijat Translational Medicine Program, STOP Cancer Research Urakehitys Award, Becton Dickinson Biosciences Research Grant (AI Chin) Perkins Foundation. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

yhteydessä immuunijärjestelmän kasvain microenvironment voi ennustaa kasvaimen vaiheesta, syöpä-erityisiä säilymiseen sekä vastauksena kemoterapiaa [1] – [3]. Tietyissä maligniteetit, läsnäolo tunkeutumisatmosfääri CD8

+ T-lymfosyytit korreloi parannetun tuloksia, kun taas infiltroituvat B-solut, CD4

+ T-lymfosyytit, ja negatiivisiin säätelijöihin lukien myelooista johdettujen vaimennus solut (MDSCs) ja säätelijä-T-solujen ( Tregs) negatiivisesti korreloivat selviytymisen [4]. Nämä havainnot korostettaisiin määriteltäessä väyliä välttämätöntä ohjelmointi koostumusta kasvaimen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL), kuten selektiivinen modulaatio immuunivasteen kasvaimen mikroympäris- edustaa syntymässä hoitomuoto.

Pattern recognition reseptoreita, kuten prototyyppinä Toll- kuten reseptori (TLR) perheen ja solunsisäiset nukleotidin sitova oligomerointi domain (NOD) kaltaista reseptoria (NLR) perhe tunnistamaan konservoituneita motiiveja taudinaiheuttajien sekä endogeeniset molekyylit vapautuu vaurioituneita soluja [5]. Aktivointi näistä signalointipolkujen aloittaa synnynnäisen ja adaptiivisen immuunivasteen, ja voivat edistää kudosten korjaamiseen ja elvyttämiseen. Olemme aiemmin liitetty TLR3 hiirimallissa eturauhassyövän kasvaimen valvonta kriittinen ohjelmoinnissa tunkeutumisen T-lymfosyyttien ja NK-solujen, ja samalla pienentää Treg laajennus [6]. Virtsarakon syöpä, tehoa immuunimodulaatioaktiivisuuksia on korostettu käyttämällä rakkoon Bacillus Calmette Guerin, joka edistää virtaa makrofagien ja neutrofiilien sisällä kasvain microenvironment välittämä osittain TLR2 ja 4 [7], [8].

Reseptori-vuorovaikutuksessa proteiini 2 (Rip2), seriini-treoniini ja tyrosiinikinaasi alavirtaan ja yhteisiä Nod1 ja NOD2, aktivoi transkriptiotekijöitä kuten NF-KB: n ja MAP-kinaasien kautta kinaasiaktiivisuuden kautta sekä rekrytointi E3 ubikitiinipromoottori ligaasia [9] – [14]. Rip2 riippuva reittien ovat nousseet kriittinen tunnistava monipuolinen taudinaiheuttajia vaihtelevat

Listeria monocytogenes

,

Staphylococcus aureus

, ja

Legionella pneumophilia

osoitteeseen

Escherichia coli

sekä välittämisessä tulehdussairauksiin, kuten aivo [15] – [17]. Lisäksi, polymorfismit NOD2 on yhdistetty alttiuteen Crohnin tauti, kun taas polymorfismit Rip2 on yhdistetty, joilla on systeeminen lupus erythematosus [18], [19]. Kyky NLRs toimia välittäjänä kasvain valvonta ei ole tutkittu tähän mennessä. Täällä olettaa, että Rip2 saattaa välittää virtsarakon syövän valvontaa ja tutkia sen roolia käyttäen hiirten potilaalle tehdä ja ihonalaisen virtsarakon syöpä malli. Osoitamme, että kasvain laakeri Rip2-hiirillä harhat myelooinen erilaistumista kohti MDSC linjaa ja sillä on luontainen rooli kehittämisessä CD11

+ Ly6G

+ Ly6C

lo granulosyyttistä MDSC väestöstä. Meidän havainnot ovat ensimmäinen syyttämään Rip2 ja NLRs kasvaimen valvontaa ja niiden merkitys ohjelmoinnissa immuuni kasvain microenvironment. NLR reitti voi edustaa terapeuttista mahdollisuus moduloinnissa syövän immuniteetti estää kasvaimen eteneminen ja metastaasit.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Kaikki eläin työ on tehty mukaisesti kanssa Public Health Service valiokunnalle Human Care ja laboratorioeläinten käyttöä ja USDA Animal Welfare Act asetusten kautta hyväksytyn UCLA Institutional Animal Care ja käyttö komitea protokollan # 2010-023-11C.

Hiiret

Rip2-hiirillä takaisinristeytettiin C57BL /6 pohjalla 10 sukupolvea genotyypitettiin kuten aikaisemmin on kuvattu [10]. Samanikäisiin C57BL /6-hiiriä (Jackson Laboratories) käytettiin kontrolleina. Kuudesta 8-wk vuotias nainen hiiriä käytettiin kokeissa. Hiiriä pidettiin patogeenivapaissa olosuhteissa mukaan UCLA Animal tutkimuskomitea protokollia.

Soluviljely

MB49 solulinjoja (lahja Tim Ratliff) olivat peräisin karsinogeeni aiheuttama urothelial solukarsinoomat in C57BL6 hiirillä ja pidettiin 37 ° C: ssa 5% CO

2 DMEM (Cellgro), johon oli lisätty 10% FBS (Omega Scientific) ja 1% penisilliiniä ja streptomysiiniä [20].

kasvainmuodoista

rakkoon kasvaimen istutuksen, naispuolinen hiiret nukutettiin, katetroitiin 24 gaugen katetrilla (BD Biosciences), ja tiputettiin 10 ug poly-L-lysiiniä (Sigma) 100 ul: ssa 30 minuuttia ennen kuivatus ja tiputtamisen 2 x 10

6 MB49 solua 100 ul: ssa 60 minuuttia [21], [22]. Hiiret tapettiin 12 päivää kasvaimen istuttamisen, ja virtsarakon ja sisäelimet tutkittiin. Virtsarakon, keuhkot, ja munuaiset kiinnitettiin formaliinilla tai upotettu OCT värjäävyyden H iNOS, 5′-GCTGGAAGCCACTGACACTTCG, 3′-CGAGATGGTCAGGGTCCCCT; IL-4, 5′-GTCATCCTGCTCTTCTTTC, 3’ATGGCGTCCCTTCTCCTGT; IL-10, 5′-GCTCTTACTGACTGGCATGAG, 3′-CGCAGCTCTAGGAGCATGTG; IL-12: n p40, 5’TGGTTTGCCATCGTTTTGCTG, 3’ACAGGTGAGGTTCACTGTTT; IFNy, 5’GGATGCATTCATGAGTATTGC, 3’CCTTTTCCGCTTCCTGAGG; M-CSF, 5′- AGGACCTGTTGGAGTTCCCTC, 3’TTTCGCCCTCACACTTGATGA; G-CSF: n, 5′- CTCAACTTTCTGCCCAGAGG, 3’AGCTGGCTTAGGCACTGTGT; GM-CSF, 5′- GCCATCAAAGAAGCCCTGAA, 3’GCGGGTCTGCACACATGTTA; Zeb1, 5′-AACGGAGATTTGTCTCCCAGT, 3′-CTGTCCAGCTTGCATCTTTTC; Zeb2, 5′-TAGCCGGTCCAGAAGAAATG, 3′-GGCCATCTCTTTCCTCCAGT; Snail, 5′-GCGGAAGATCTTCAACTGCAAATATTGTAAC, 3′-GCAGTGGGAGCAGGAGAATGGCTTCTCAC; Twist, 5′-CGGGTCATGGCTAACGTG, 3′-CAGCTTGCCATCTTGGAGTC; ja GAPDH, 5′-GACCCCTTCATTGACCTCAAC, 3′-CTTCTCCATGGTGGTGAAGA.

Tulokset

roolin tutkimiseksi Rip2 kasvaimen valvontaa, me haastoi villityypin ja Rip2-hiirissä syngeenisellä MB49-solujen käytettäessä potilaalle tehdä virtsarakon syöpä malli. Havaitsimme lähes kaksinkertaiseksi kasvaimen painon ilman Rip2 (kuvio 1A). Kasvaimet, korjattu hiirillä sekä genotyyppien osoittanut todisteita invaasion tyhjentäjälihaksen lihaksen H baareja, SEM. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

Olemme aiemmin sekaantuneet Rip2 kehitteillä Th1-ja NK-solujen [10], kun taas toiset raportoitu rooli dendriittisolujen tunkeutumisen [17]. Tutkia roolia Rip2 yhteydessä tuumorigeneesiprosessin virtsarakkokasvain TIL tutkittiin immunofluoresenssilla ja immunohistokemiallisesti. Tämä osoitti, väheni tunkeutumisen CD8

+ T-lymfosyytit, CD4

+ T-lymfosyyttien, NK-solujen puuttuessa Rip2, kuten on ennustettu. Tutkiminen Foxp3

+ soluja edustavan säätelijä-T-solujen, oli kasvava suuntaus Rip2-hiirissä verrattuna villityypin hiirillä, vaikka se ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Mielenkiintoista, kasvaimet kohonneen CD11b

+ ydinsoluissa in Rip2 puutosta verrattuna villin tyypin hiiriin, kun taas Lisäkarakterisoiminen tämän myelooisen väestö osoitti odotetun kasvun makrofagimarkkeri F4 /80 ja Gr-1-alatyyppiä Ly6G, mutta ei alatyypin Ly6C tuumoreiden Rip2-hiirillä (kuvio 2).

soluttautuminen CD8, CD4, NK, CD11, F4 /80, Ly6G, ja Ly6C ilmentävät solut kuten, tutkittiin immunofluoresenssimenetelmällä, ja Foxp3 immunohistokemiallisesti virtsarakon kasvaimia Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä rakonsisäisenä istutettiin MB49-solujen ja lopetettiin 12 päivää. Vasen paneeli näyttää erityisiä vasta-värjäytymistä, keskimmäinen paneeli näyttää DAPI värjäystä, oikea paneeli näyttää yhdistäminen vasta-aineen ja DAPI tahroja. Edustavia esimerkkejä kustakin ryhmästä neljästä kuuteen hiiriin 4 itsenäisestä kokeesta on esitetty x40 suurennuksella. Pylväsdiagrammit luetella solujen keskimääräinen lukumäärä per x40 alalla 3 edustajan osien ryhmistä neljä hiirtä; baareja, SD. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

tarkastella lähemmin toimintaa kasvain soluttautuminen populaatiot, me ihon alle istutettiin MB49 solut tuottamaan suurempia kasvaimia helpottaa myöhempää lajittelua soluja. Samoin kuin ortotooppisten kasvaimia, ihonalainen kasvaimia kehittyi Rip2-hiirissä olivat koon kasvu verrattuna villityypin vastineet (kuvio 3A). Liukenevat kasvaimet lajiteltu CD45

+ NK1.1

+ NK-solut osoittivat laski numeroita Rip2 puutosta verrattuna villin tyypin hiiriin odotetusti (kuvio 3B). Tunkeutumisatmosfäärin määrä CD4- ja CD8-solut olivat liian pieniä kvantitoimiseksi virtaussytometrialla (tietoja ei esitetty). Yhdenmukainen aiempien potilaalle tehdä kasvaimia Dissosioidut ihonalainen kasvaimet lajiteltu pintamerkkiaineita CD11

+ ja Gr1

+ osoitti rikastettu numerot CD11

+ Gr1

hi soluja Rip2 puutosta verrattuna villin tyypin hiiriin (kuvio 3C). Tutkia edelleen toiminnalliset ominaisuudet CD11

+ Gr1

hi soluja, tutkimme paneeli geenejä, jotka edustavat allekirjoitus MDSCs ja myelooisen -alapopulaatioiksi. Arginase-1: n ja iNOS välittävät T tukahduttava vaikutus MDSCs [25]. IFNy tukee erilaistumista kohti M1 soluja, erottaa puolestaan ​​erityksen IL-12. IL-4 polarizes myeloidiesiasteista kohti M2 fenotyyppiä, joka liittyy voimakkaasti kasvaimiin liittyviä MDSCs ja ilmaista IL-10 sovitella niiden immunosuppressivisia vaikutukset [26]. Osoitamme, että Rip2 puutosta CD11

+ Gr1

hi solut ilmensivät korkeampia tasoja arginase-1 verrattuna soluja villityypin hiirillä, joilla on samanlainen suuntaus iNOS ilmaisun (kuvio 3D). Johdonmukaisesti, lisääntynyt IL-10 ilmentyminen Rip2 puutosta CD11

+ Gr1

hi soluja verrattuna soluja villityypin valvonta havaittu, kun taas ei nähty merkittäviä eroja ilmentymisessä IFNy ja IL-12, joka osoittaa M2 polarisaatio (kuvio 3D). Tasot IL-4 oli havaittavissa, että CD11

+ Gr1

hi-soluja (tietoja ei esitetty).

Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirillä ihon alle implantoidaan kanssa MB49-solujen 14 päivää arvioitiin (A) kasvaimen paino, ja lajitellaan virtaussytometrialla tutkia (B) CD45

+ NK1.1

+ soluja, ja (C) CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi ja CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo soluja. Sarake, keskiarvo neljästä hiirestä; baareja SD. Tiedot edustavat kahden riippumattoman kokeen. D, Lajittele CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi ja CD45

+ CD11b

+ Gr1

lo solujen Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiiret tutkittiin ilmentymisen arginase-1 ja iNOS by qPCR, kun taas CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi solujen Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiiret olivat tutkittiin ekspressiota IL10: n, IL-12, ja IFNy jonka qPCR. Sarake, keskiarvo kaksi hiirtä; baareja SD. Tiedot edustavat kolmen erillisen kokeen. Edustavia esimerkkejä esitetään. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

tarkastella Rip-2- riippuvaisia ​​systeemisiä vihjeitä, jotka voivat vaikuttaa kehitykseen kasvaimen mikroympäristössä, sytokiinien tasot mitattiin käyttämällä tulehduksellinen sytokiini array vertaamalla seerumin villityypin ja Rip2-hiirissä istutettiin ortotooppisten MB49 virtsarakon kasvaimia. Tasot seitsemän sytokiinien paneelista, joka käsittää 40 sytokiinien todettiin kohonnut ilman Rip2. Suurin osa liittyi myelooinen erilaistumista ja kemotaksista, mukaan lukien G-CSF, M-CSF, IL-16, MCP-1, TREM-1, TIMP-1 ja IL-1α, jossa suhteelliset tasot esitetään kaavamaisesti [27] – [33 ] (kuvio 4A). Pernasolut syöpäkasvaimia sisältävistä hiiristä analysoitiin arvioida vaikutusta näiden sytokiinien muutoksia, paljastaen ole merkittäviä eroja numerot CD4

+ ja CD8

+ T-lymfosyytit, B220

+ B-lymfosyyttien, ja NK1.1

+ soluja, mutta kasvoi kehittäminen CD11

+ Ly6G

hi soluja Rip2 puutosta verrattuna villityypin hiiriä, jotka edustavat granulosyyttistä MDSC väestöstä (kuvio 4B). Tutkia edelleen virtsarakon kasvain microenvironment, tutkimme paneeli sytokiinien, jotka vaikuttavat toiminnallinen polarisaatio makrofagien sekä erilaistuminen MDSCs vuonna rakonsisäistä rakkokasvaimista [34]. Kohonnut IL-4, G-CSF, ja GM-CSF havaittiin virtsarakon kasvaimia Rip2 puutteesta verrattuna villityypin hiirissä, kun taas mitään eroja ei havaittu IFNy ja M-CSF: n ilmentymisen, sopusoinnussa kasvaimen mikroympäris- edistää kehitys kasvaimeen liittyvien MDSCs (kuvio 4C). Erotella sytokiinien tuotantoa kasvain ja ympäröivä strooman että myeloidinen väestön tutkimme G-CSF ilmentymisen CD45

– väestö muodostaa kasvain ja stroomasolujen, ja CD11

+ Gr1

hi väestö muodostaa ydinsoluissa ja osoittivat lisääntynyttä G-CSF Rip2 puutosta verrattuna villityypin CD11

+ Gr1

hi soluihin, mikä viittaa autokriini ja parakriininen sääntely MDSCs puuttuessa Rip2 (kuvio 4D).

A, tulehduksellinen sytokiiniekspressiota seerumissa Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä rakonsisäisenä istutettiin MB49-solujen 12 päivää arvioitiin sytokiinien erilaisia ​​analyysi. Sytokiinit kasvoi Rip2

– /- hiiret on kuvattu kaavamaisen kuvan mukaisesti. (+) 2-5x, (++) 5-10X, (+++) 10x perustuu kvantitointiin ImageJ. Tulokset ovat kaksoiskappaleita ja edustavat kahta toisistaan ​​riippumatonta koetta. B, pernasoluja Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä tutkittiin ekspressiota CD4, CD8, B220, NK1.1, kun taas CD11

+ soluja tutkittiin ekspressiota Ly6G ja Ly6C virtaussytometrillä kuten on osoitettu. Sarake, keskiarvo neljästä hiirestä; baareja SD. Tiedot edustavat kahden riippumattoman kokeen. C, yhteensä kasvaimen Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä, intravesikaalisesti istutettiin MB49-solujen ja tapettiin 12 päivää tutkittiin ilmentymisen IL4, IFNy, M-CSF, G-CSF, ja GM -CSF by qPCR. Sarake, keskiarvo kolmesta hiirestä; baareja SD. D, Kasvaimet alkaen Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirillä ihon alle istutettiin MB49-solujen 14 päivän fraktoitiin on CD45

– ja CD45

+ CD11b

+ Gr1

hi soluja ja tutkitaan G-CSF ilmentyminen qPCR. Sarake, keskiarvo kolmesta hiirestä; baareja SD. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

MDSC väestö koostuu epäkypsä myeloidisoluissa ja myeloidisolun esisolut, jotka voivat erilaistua kypsiksi makrofagien, granulosyyttien, ja dendriittisolut. Niille on ominaista T-lymfosyyttien ehkäisevästä kyky ja ilmentyminen arginase-1: n ja iNOS [25]. Hiiressä, ne voivat jakaa edelleen granulosyyttistä MDSCs ilmentämällä pintamerkkiaineita CD11

+ Gr1

hi tai CD11

+ Ly6G

+ Ly6C

lo ja monosyyttistä MDSCs ilmentämällä markkereita CD11

+ Gr1

lo tai CD11

+ Ly6G

loLy6C

hi [35]. Voit testata luontainen rooli Rip2 myelooisten kehittämiseen, naiivi luuydin villityypin ja Rip2-hiirissä sovellettiin

in vitro

erilaistumista käyttämällä M-CSF, G-CSF, GM-CSF, tai G -CSF ja GM-CSF: 4 päivää, ja tutkittiin ekspressiota CD11b, Ly6G, ja Ly6C. Läsnäollessa G-CSF, GM-CSF ja G-CSF plus GM-CSF, puuttuminen Rip2 johti bias kohti CD11

+ Ly6G

+ Ly6C

lo granulosyyttistä MDSC väestöstä ( kuvio 5A). BM-johdettu MDSCs derivoiduksi G-CSF: n tai G-CSF: n ja GM-CSF: n, lisääntynyt arginase-1: n ja iNOS ilmentyminen oli tasaisesti havaittiin Rip2 puutteesta verrattuna villityypin soluihin, sopusoinnussa lisääntynyt kehittämiseen MDSCs (kuvio 5B ).

, luuytimestä naiiveja Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiiret eriytetty M-CSF, G-CSF, GM-CSF ja G-CSF plus GM-CSF kuten neljä päivää ennen virtaussytometriaa ekspression tutkimiseksi Ly6G ja Ly6C in CD11

+ -soluja (vaihteluväli 70-90%, ei ole esitetty). CD11

+ LYG

+ Ly6C

lo ja CD11

+ LYG

loLy6C

hi populaatioiden kullekin ryhmälle esitetään yhteensä solumäärät kohti 10

5 alkaa BM-soluissa. B, Expression arginase-1 ja iNOS mukaan qPCR G-CSF ja G-CSF plus GM-CSF eriytetty luuydintä naiiveja Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä. Sarake, keskiarvo kolmesta hiirestä; baareja SD. Tiedot edustavat kahden riippumattoman kokeen. Edustavia esimerkkejä esitetään. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

MDSCs ovat sekaantuneet edistämisessä EMT , prosessi kriittinen helpottamisessa kasvaimen invaasio ja myöhemmät tuumorietäpesäkkeet [36]. Tunnusmerkki EMT on kytkin pintatarttuvuuden merkkiaineiden kanssa menetys E-kadheriinin ja ilmentyminen N-kadheriinin [37]. Tutkia vaikutuksen Rip2 kehittämisessä EMT, tutkimme adheesiomolekyylien merkkiaineiden rakkoon kasvaimia ja havaittiin vähentynyt E-kadheriinin ilmentymisen koko kasvain samanaikaisessa lisääntynyt N-kadheriinin ilmentymisen reuna kasvaimen in Rip2 puutosta suhteessa villin tyyppinen hiiret (kuvio 6A). NF-KB: n aktivaation on liitetty edistämisessä EMT ja siten tarkastelimme sen aktivoinnin puuttuessa Rip2 [38]. Yhdenmukainen aiemman kirjallisuuden, havaitsimme vähentynyt kanoninen NF-KB: n aktivoitumisen näytteillä laski p-IKB ilmentymisen Rip2 puutosta kasvaimet (kuvio 6B), mikä viittaa NF-KB riippumattomia mekanismeja osuus EMT [39]. Tutkia muita mekanismeja edistävät EMT, paneeli transkription tekijöitä EMT lukien

zeb-1

,

zeb-2

,

etana

, ja

kierre

tutkittiin kasvaimen ja strooman soluja dissosioitunut ihon alle kasvaimien tyhjentynyt CD45, ilmentymisen kanssa

zeb-1

,

zeb-2

, ja

etana

löytynyt kasvoi Rip2 puutteesta verrattuna villityypin kasvain kantavissa hiirissä, ja lisääntynyt ilmentyminen

kierre

lähestyy tilastollinen merkitsevyys (kuvio 6C). Tutkimme myös ilmaisuaan EMT asiakkuutta geenit keuhkot sisältävä etäpesäkkeiden Rip2 villityypin ja vajausta hiirillä, havaittiin olevan samankaltainen trendi tilastollista merkitystä lisääntynyt

kierre

ilmentymisen puuttuessa Rip2 (kuvio 6D).

, Rip2

+ /+ ja Rip2

– /- hiirissä rakonsisäisenä istutettiin MB49-solujen 12 päivää arvioitiin E-kadheriinin ja N-kadheriiniekspressiota immunofluoresenssilla. Suurennus x40. Tiedot edustavat kahden riippumattoman kokeen. B, Pylväsdiagrammit alla luetella tarkoittaa solujen määrä per x40 alalla 3 edustajan osien ryhmistä neljä hiirtä; baareja, SD. C, Expression of

zeb-1

,

zeb-2

,

etana

, ja

kierre

tutkittiin välillä CD45

– erottaa yhteensä kasvain kudosta qPCR. Sarake, keskiarvo neljästä hiirestä; baareja SD. Tiedot edustavat kahden riippumattoman kokeen. D, Expression of

zeb-1

,

zeb-2

,

etana

, ja

kierre

tutkittiin dissosioituneista keuhkoista sisältävän metastaaseja qPCR. Sarake, keskiarvo neljästä hiirestä; baareja SD. Kaikki

p

arvot määritettiin kaksisuuntaisella Studentin

t

testi, jossa tilastollisesti merkitys määriteltiin p 0,05.

Keskustelu

immuuni koostumus kasvain microenvironment voi ennustaa taudista vapaan ja kokonaiselossaolo. Tämä on osoitettu yhteydessä CD4

+ T-lymfosyyttien ja CD1α dendriittisolujen kainalon imusolmukkeisiin korreloi tautivapaan elinajan syöpäpotilaista [40], kasvaimeen infiltroituneen CD3

+ solujen ja CD8

+ T-lymfosyyttien paksusuolessa [1] ja virtsarakon syövän vastaavasti [2]. Tasapaino TIL voi tarkentaa ennakoivan kykyä immuunijärjestelmän microenvironment, kuten CD4

l ° CD48

l ° CD8

hi potilailla ilmeni parantuneita uusiutumista elinaika, kun taas suhde CD8

+ T-solut että CD68

+ kasvaimeen liittyvät makrofagit ennusti eloonjäämiseen ja vastaus neoadjuvanttikemoterapian syöpäpotilaista [3]. Anti-kasvain immuniteettia voidaan vahvistaa kohdentamalla alipaineensäätöventtiileillä T-solujen Kostimulaation osoituksena kehittämällä anti-CTLA4 ja anti-PD1 terapeuttiset, ja voidaan laajentaa kohdistamista Tregs ja MDSCs [41]. Lausunto ehdottaa, että aktiivinen ohjelmointi kasvaimen immuunijärjestelmän microenvironment voi olla kannattava strategia hyödyntää ja bias immuniteetti kohti kasvaimen vastaisen vasteen.

Olemme arveltu, että kyky PRRS aistia asiayhteyteen signaaleja taudinaiheuttajia aloittaa immuunivaste korostaa lisäksi kyky vaimentaa vapauttaa soluvauriot kasvaimessa ympäristössä muovata kasvainimmuniteetin. NLRs lukien Nod1 ja NOD2 ovat sekaantuneet tunnistava eri taudinaiheuttajia sekä solujen korostaa [42]. Rooli sytosolin PRRS: n, kuten NLR perheen kasvaimen valvonta on epäselvä. Äskettäin menetys Rip2 on liitetty kehittämiseen suurempi peräsuolen syöpien hiirimallissa [43]. Tässä käsikirjoitus, osoitamme, että NLRs läpi Rip2 signalointi voi muovata kasvain microenvironment kohti kasvainta infiltroituneen CD8

+ T-lymfosyyttien, NK-soluissa, ja tukahduttamista MDSCs. Samoin puuttuessa Rip2, suurempien potilaalle tehdä rakkokasvaimista kehittyi sekä lisääntynyt kasvainten etäpesäkkeitä sekä keuhkoissa ja munuaisissa.

Rip2 alun perin kuvataan perustuen sekvenssihomologia sen C-päätteen CARD domain [44] . Kehitimme Rip2 puutteesta eläimiä ja kuvattu rooli luontaisen immuniteetin syytetään Rip2 alavirtaan Nod1, ja mukautuva immuniteetti välittävä IFNy vasteita Th1 ja NK kehittämiseen [10]. Sittemmin tärkeyttä Rip2 vuonna NLR signalointi ja makrofagien toiminta on validoitu ja osoitettu olevan keskeinen rooli synnynnäisen immuniteetin signaalitransduktioon Nod1 ja NOD2 reseptorit [45]. Koska kasvaimen kasvua, löysimme ole merkittäviä eroja kehittämiseen kaikkien splenocytic suvusta tutkitut lukien CD11

+ Gr1

+ solujen Rip2 puutosta verrattuna villin tyypin hiiriin. Kuitenkin, kun läsnä on kasvaimen kasvun havaitsimme kasvoi splenocytic CD11

+ Ly6G

+ solut edustavat granulosyyttien MDSCs puuttuessa Rip2 [35].

tutkittiin systeeminen macroenvironment sekä paikalliset microenvironment sytokiinitasot, jotka muutettiin puuttuminen Rip2 ilmentymisen. Mielenkiintoista on, että seerumin sytokiinien tärkeä myelooisen erilaistumista havaittiin Rip2 puutteesta kasvain omaavilla eläimillä, kohonneeseen G-CSF: n ja M-CSF: n, samoin kuin MCP-1 ja TREM-1. MCP-1 on liitetty korkeampi uusiutumisen ja huonompi virtsarakon syövän ennuste välittämällä kasvain invaasio, kun taas TREM-1 on liitetty aktivaation Kuffner solujen maksasolukarsinoomassa [27], [30].