Krooninen sairaus

tiivistelmä

mikroverisuonitiheys (MVD) kuin angiogeneesin ennustaja on tehotonta sinänsä syövän ennustetta. Arvioimme prognostisia arvot yhdistyvät kasvaimensisäisenä alfa-sileän lihaksen aktiini (α-SMA) -positiivinen stroomasolulinja tiheys ja MVD jälkeen parantava resektio vuonna hypervascular maksasolusyövän (HCC) ja hypovascular haimasyöpä (PC). Kudossiruina rakennettiin kasvaimista 305 HCC ja 57 PC potilasta joille tehtiin parantava resektio ja analysoitiin α-SMA ja CD34 ilmaisun immunovärjäyksellä. Prognostic arvot näiden kahden proteiinien ja muiden kliinis tutkittiin. Sekä alhaisen α-SMA tiheys ja korkea MVD-CD34 liittyi vuonna HCC läsnäolon kanssa maksansisäisen etäpesäke ja mikrovaskulaarista invaasio, ja ne liittyivät imusolmukemetastaaseja ja mikrovaskulaarisen hyökkäyksen PC (

p

0,05) . Vaikka CD34 yksin, mutta ei α-SMA, oli itsenäinen ennustetekijä yleisen eloonjäämisen ja uusiutumista elinaika, yhdistelmä alhaisen α-SMA ja korkea CD34 oli ennustaja pahin ennuste molempiin kasvaimia ja oli parempi teho ennustaa potilaan kuolemaan ja varhainen uusiutuminen (

p

0,01). Lisäksi tulokset osoittavat, että jakautumisen useimmat α-SMA-positiivisten solujen ja verisuonten endoteelisolujen päällekkäisiä, mikä osoittaa suurta rinnakkaispaikantumisen verisuonten seinämiin. Huono pienten suonten eheys, kuten korkea MVD, yhdessä alhaisen verisuonia α-SMA-positiivisten solujen kattavuus liittyy varhainen uusiutuminen, epäsuotuisa etäpesäke, ja lyhyen selviytymisen jälkeen kasvaimen resektiota. Tämä havainto korostaa merkitys verisuonten laadun syövän etenemiseen, joka tarjoaa optimoidun täydentää verisuonten määrää ennusteen postoperatiivisten potilaiden.

Citation: Wang WQ, Liu L, Xu HX, Luo GP, Chen T, Wu CT, et ai. (2013) kasvaimensisäisenä α-SMA Parantaa Prognostic Potency CD34 Associated kanssa säilyttäminen pienten suonten Integrity maksasolukarsinoomassa ja Haimasyöpä. PLoS ONE 8 (8): e71189. doi: 10,1371 /journal.pone.0071189

Editor: Johannes Haybaeck, Medical University Graz, Itävalta

vastaanotettu 26. tammikuuta 2013 Hyväksytty: Kesäkuu 27 2013. Julkaistu: 05 elokuu 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: tukemana National Natural Science Foundation of China (81172005 ja 81172276), National Natural Science Foundation of Shanghai (11ZR1407000), Ph.D. Ohjelmat Säätiö Opetusministeriön Kiina (20110071120096), ja Chinesisch-Deutsches Forschungsprojekt (GZ 857). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

säätelyhäiriön angiogeneesin on välttämätön kasvaimen etäpesäke, ja se on yksi tunnusmerkkejä syövän [1]. Uudissuonittumista tarvikkeita ei vain happea ja ravinteita proliferatiivinen kasvainsoluihin vaan toimii myös kanavan maahanmuuton [2]. Mikroverisuonitiheys (MVD) on tunnetuin indikaattori arvioida angiogeneesin kiinteiden kasvainten. Immunovärjäys verisuonen endoteelisolujen (EY) markkeri, kuten CD34, jota käytetään merkitsemään MVD [3] – [6]. On raportoitu, että MVD on haitallista ennustaja useissa syövissä [7], [8], mukaan lukien maksasolusyövän (HCC) [3], [4] ja haimasyöpä (PC) [9]. Kuitenkin paradoksaalinen tuloksia on myös huomattava [10], [11].

Kasvain mikroympäristölle on keskeinen rooli kasvaimen kehittymisen ja etenemisen. Sen lisäksi verisuonten EY, karsinooma liittyvä fibroblasti (CAF) on tärkeä solun komponenttia tässä miljöössä [12], [13]. Se on edelleen kiistanalainen onko stromasoluja jotka ovat immunopositiivisia alfa-sileän lihaksen aktiini (α-SMA) edustavat aktivoitu CAF sisäisessä /peritumoraalista kudosten [14], [15]. Vaikka olemme aiemmin raportoitu, että peritumoraalista α-SMA-positiivisten solujen korreloi huonon lopputuloksen sairastavien potilaiden HCC [16], ennustetyöväline teho kasvaimensisäisenä α-SMA on avoin kysymys. Olemme hiljattain havaittu rinnakkaispaikantumisen of α-SMA- ja CD34-positiivista värjäytymistä sekä intra- ja peritumoraalista kudos, ja uskomme merkitys toteamus kannattaa etsintään.

Viime aikoina jotkut kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että menestys antiangiogeenisten ei yksinään yleensä unimpressive, alhainen objektiivisen hoitovasteen ja ei-mielekästä eloonjäämisen hyödyt [17] – [19]. Muut prekliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että angiogeneesiä torjuvina kasvaimen kasvu estyy, mutta kiihtyy etäpesäke [20], [21]. Nämä havainnot olivat todennäköisesti liittyvät keskittyä aluksen määrä yksin, toisaalta jättää laatu verisuoniston, nimittäin pienten suonten eheys (MVI). Toisin sanoen, angiogeneesiä torjuvina saattaa vähentää MVD mutta heikentää MVI, mikä johtaa etäpesäkkeiden [22]. Itse asiassa, kasvaimen verisuonen seinämään muodostuu jatkumo solutyyppejä, jotka vaihtelevat EY, verisuonten sileän lihaksen soluissa, ja perisyyteissä [23], joista kaksi viimeksi mainittua ovat luokiteltu verisuonia soluja (PVC) [19]. Koska MVD on markkeri vain EY, se ei voi edustaa kiinteä verisuonistoon. Vielä tärkeämpää on, olemme löytäneet rinnakkaispaikantumisen malli α-SMA ja CD34, sekä muita EY markkereita kuvannut muiden ryhmien [19], [24] – [26]. Tämän perusteella me arveltu, että yhdenmukaistetut funktio perivaskulaaristen α-SMA-positiivisten solujen ja ECS verisuonen seinämään on vakauttaa tuumoriverisuoniin ja lohko kasvainsolun muuttoliike kautta intra /ekstravasaatio. Siksi yhdistelmä α-SMA ja CD34 ennustaviksi merkkiaineita (CD34

+ /α-SMA

+) voisi olla hyödyllistä arvioida MVI. Suuri osa kertyy todisteita MVI syövän tulee prekliinisissä tutkimuksissa. Sen merkitys klinikalla on kuitenkin tuntematon.

Kaksi yleistä ja tappava maligniteettien, joka kontrastin suhteen intra /peritumoraalista verisuoniston, ovat HCC ja PC. Kudokset HCC ovat erittäin vascularized pienemmillä strooman sisältö [3], kun taas PC ovat huonosti vascularized mutta runsasta strooman [13]. Tässä tutkimuksessa, suoritimme verisuonten eheyden analyysi näiden kahden kasvaintyypeille, joilla on huomattava edustus. Olemme tutkineet ennustetekijöiden arvo α-SMA erikseen ja combinatorially kanssa MVD jälkeen parantava resektio primaarikasvaimen aluksi HCC ja sitten tietokoneeseen. Tulokset PC vahvistaa ne löytyvät HCC.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat, näytteet, Follow-Up, ja Leikkauksen jälkeinen hoito

Kaikkiaan 305 potilasta (kohortti 1, Taulukko S1 in File S1), joille parantava maksaresektio patologian todistettu HCC klo maksa Cancer Institute of Zhongshan sairaala, Fudanin yliopiston, tutkittiin. Yksikään heistä ei saanut ennen leikkausta syöpähoidon. Nämä potilaat havaittu lokakuussa 2004 ja marraskuussa 2010 yhteensä seuranta-ajan 72 kuukautta. Kriteerit resectability, kokoelma yksilöitä, määrittäminen kasvaimen vaiheen ja erilaistumista ja seurantamenettelyjen on kuvattu muualla [27] – [29]. Kokonaiselinaika (OS) ja toistuminen-elinaika (RFS) määriteltiin väli päivämäärät leikkauksen ja kuoleman välillä päivämäärät kirurgian ja uusiutumisen, vastaavasti. Jos toistuminen epäiltiin, tietokonetomografia skannaus tai magneettikuvaus tehtiin välittömästi; jos toistuminen ei ole diagnosoitu, potilaita seurattiin kunnes kuolema tai Viimeisessä seurannassa. Viimeisessä seuranta Tutkimuksen 132 potilasta oli uusiutunut, ja 108 todettiin kuolleen. 1-, 3- ja 5-vuoden OS hinnat olivat 88%, 65%, ja 64%, tässä järjestyksessä; uusiutumisen hinnat näinä samoilla aikaväleillä olivat 25%, 42%, ja 43%, vastaavasti.

tammikuun 2010 ja kesäkuun 2011 179 peräkkäistä potilasta patologian todistettu PC koki parantava resektio meidän instituutissa, jossa leikkaus suoritettiin samalla joukkue [30]. Kokoisen kriteerit täyttyvät National Kattava Cancer Network (NCCN) Clinical Practice suuntaviivat Oncology-Haimasyöpä Guideline 2010 (https://www.nccn.org). PC potilaista, 57 tapauksessa (kohortti 2, taulukko S2 File S1) satunnaisesti noutaa takautuvasti kerättyjen tietokannan yhteydessä todettiin olevan mitään mikroskoopilla havaittavia jäljellä kasvain (R0). Yksikään heistä ei saanut ennen leikkausta syöpähoidon. Koko kasvaimet kerättiin. Kasvaimet lavastettu mukaan kasvain-solmu-etäpesäke (TNM) luokitusjärjestelmä [31]. Kasvaimen erilaistuminen luokiteltiin jonka NCCN Guideline. Imusolmuke osallistuminen määritettiin postoperatiivista patologinen diagnoosi. Kaikki potilaat olivat seurattiin vasta heinäkuussa 2012 mediaani seuranta-aika 15,5 kuukautta. Hoitomuotoja uusiutunut annettiin myös mukaan NCCN suuntaviivojen. Määrien OS ja RFS määriteltiin edellä. Viimeisessä seurantaa, 33 potilaalla oli uusiutunut, ja 22 oli kuollut. 0.5-, 1- ja 2-vuoden OS hinnat olivat 98%, 86%, ja 61%, vastaavasti; ja 0.5-, 1- ja 2-vuoden uusiutuminen samana aikavälein olivat 21%, 42%, ja 58%, vastaavasti. Toinen riippumaton koe kohortissa 3, mukaan lukien 52 PC potilasta hoidettiin meidän instituutti, kerättiin myös tutkimusta varten (taulukko S3 File S1).

Tutkimus hyväksyi tutkimuksen eettisten komiteoiden Zhongshan sairaalan ja Fudanin University Shanghai Cancer Center. Kirjallisen suostumus saatiin kunkin potilaan ennen osallistuvan tähän tutkimukseen mukaan kahden komitean sääntöjä.

Tissue Microarray Construction, immunohistokemia, ja arviointi

Tissue mikrosiru (TMA) rakentaminen oli on kuvattu [28]. Lyhyesti, kaksi ydintä varten kohortin 1 ja kolme ydintä varten ikäluokkien 2 ja 3, porattu kunkin edustavan formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kasvain kudosta, käytettiin tekemään TMA dioja (Shanghai Biochip Company Ltd, Shanghai, Kiina). Kaksi tai kolme sylinteriä eri alueilta kasvain näytteet saatiin; vastaavasti, yhteensä neljä TMA siruja kohortin 1 ja kaksi pelimerkkejä ikäluokkien 2 ja 3 valmistettiin.

merkki käytetty PVC oli α-SMA [13], [19], ja CD34 käytettiin merkkiaine EY [3], [4]. Hypoksia indusoituvat tekijä 1α (HIF-1α) ja hiilihappoanhydraasi IX (CA IX) valittiin kasvaimen hypoksia biomarkkereiden [24], [32], [33]. Immunohistokemiallinen (IHC) analyysi näistä markkereista TMA kohdissa (4-pm paksu) tehtiin kaksivaiheisella menetelmällä, kuten on kuvattu [29]. Ensisijainen kanin monoklonaalista anti-ihmis-α-SMA-vasta-ainetta (1:100; Abcam, Cambridge, MA), hiiren monoklonaalinen anti-ihmisen CD34 (1:100, Abcam), kanin monoklonaalista anti-ihmisen CA IX (1:150; Abcam ), ja hiiren monoklonaalinen anti-ihmisen HIF-1α (1:100; Sigma, St. Louis, MO) käytettiin. Inkuboinnin primaarisilla vasta-aineilla suoritettiin yön yli 4 ° C: ssa kosteassa kammiossa. Envision-plus tunnistusjärjestelmä anti-kani /hiiri polymeeri (EnVision + /HRP /Mo, Dako, Glostrup, Tanska) käytettiin. Reaktiotuotteet visualisoitiin inkuboimalla 3,3′-diaminobentsidiiniä. Negatiiviset kontrollit käsiteltiin identtisesti mutta poisjättäminen ensisijaisen vasta-aineen.

tiheys positiivista värjäytymistä kokonaan mielestä mitattiin käyttämällä tietokonepohjaista kuva järjestelmä, johon kuuluu Leica CCD-kenno kamera, DFC500, yhdistetty Leica DM IRE2 mikroskooppi (Leica, Cambridge, UK). Kuvia viiden edustavan kenttien × 200 suurennus oli vangiksi Leica QWin Plus v3 ohjelmisto. Identtinen asetusta käytettiin kaikissa kuvissa. Arviointiin verisuonitiheydessä, verisuonten eheyden, ja hypoksia intensiteetti, alue ja integroitu optinen tiheys (IOD) immunovärjäyksen kussakin kuvassa mitattiin Image-Pro Plus v6.2 ohjelmisto [28]. Tulokset määrällisesti kuin α-SMA- tai CD34-positiivinen alue /kokonaispinta-ala, ja HIF-1α tai CA IX IOD /kokonaispinta-ala.

immunohistokemiallinen värjäys leikesarjojen

Viisitoista paria (yhteensä kolmekymmentä) ja tumorous ja Hyväksytty peritumoraalista näytteet (kudoksen vieressä kasvain etäisyydellä 10 mm) potilailta, joilla HCC ja PC kerättiin ja valmistuksessa käytettävien sarja parafinoidut ja jäädytettyä kudosta dioja. Parafiini osassa dioja käytettiin IHC of α-SMA ja CD34. Kahdeksan poikkileikkaukset kustakin näytteestä tehtiin laadullisesti. IHC menettely on selostettu aikaisemmin [29]. Under × 200 suurennus, kuvia edustavia kentät ovat samassa sijainnin pariksi leikesarjojen positiivista α-SMA ja CD34 värjäys otettiin käyttäen tietokonepohjaista kuva järjestelmä.

Immunofluoresoivat Kaksoisvärjäys varten α-SMA ja CD34

Jäädytetyt leikkeitä käytettiin immunofluoresenssivärjäyksessä kaksinkertainen värjäys α-SMA ja CD34. Protokolla oli edellä kuvatulla [29]. Sen jälkeen kun reaktio primaaristen vasta-aineiden (1:80) ja sen jälkeen huuhtelu, leikkeitä inkuboitiin sekä Cy3-konjugoitu vuohen anti-kani ja fluoreskeiini-isotiosyanaatti-konjugoitujen vuohen anti-hiiri-vasta-aineiden (sekä 1:100; Jackson, West Grove, PA) ja vastavärjättiin 4 ’, 6-diamidine-2’-fenyyli-dihydrokloridi (DAPI) tahra ytimeksi. Kuvat ovat hankittiin laserilla konfokaalimikroskopialla.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS 16.0 ohjelmistolla. Pearson chi-neliö tai Fisherin testiä käytettiin vertaamaan laadullisia muuttujia, ja määrälliset muuttujat analysoitiin

t-

testin tai Spearman testi. Cutoff pisteen α-SMA tai CD34 tiheyttä määritelmä alaryhmien oli mediaanin (kuva. S1 File S1). Kliinis-verrattiin kahden riskiryhmiin käyttäen Mann-Whitneyn testi. Hengissä analyysi, Kaplan-Meier -käyrät piirrettiin, ja erot käyrät laskettiin Log-rank-testi. Riippumaton prognostisia merkitys riskitekijät tunnistetaan yhden muuttujan analyysiä laskema Coxin suhteellisten riskien mallia. Vastaanotin toimii (ROC) käyrä analyysiä käytettiin ennustearvon määrittämiseksi parametrien välillä. Arvo

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Patterns perivaskulaaristen α-SMA-positiivisia stroomassoluihin ja hankittua Distribution

kaikissa kasvaimet kerätään, HCC aina osoitti hyvin alhainen strooman sisältöä, kun taas PC sisälsi runsaasti stroman (Fig. 1). Edustavia korkean ja matalan α-SMA /CD34-värjäys voidaan nähdä tässä kuviossa. Keskimääräinen α-SMA-positiivisia solutiheys HCC oli 0,0540 ± 0,0611 (mediaani 0,0389; alue, ,000320-+0,563), ja se oli 0,232 ± 0,111 PC (mediaani, 0,202, alue, +0,0494-+0,474) (Fig. S1A ja 1C File S1). Erityiset värjäys kapillaarimaisen alusten anti-CD34 havaittiin HCC (keskiarvo MVD-CD34 on 0,116 ± 0,106, mediaani, 0,0877, alue, 0,00102-,545) ja PC (keskiarvo MVD, 0,0217 ± 0,0212, mediaani, 0,0112; alue , +0,00103-,0928) (Fig. S1B ja 1D File S1). Runsas pitoisuus pienten verisuonten löytyi HCC, kun taas pitoisuus pienten verisuonten PC oli huono (Fig. 1). Verrattuna homogeeninen alus kuvio peritumoraalista normaalissa maksassa tai haiman kudoksen, Kasvaimensisäinen verisuonten morfologia oli heterogeeninen (Fig. 1, Fig. S2 File S1). Leikesarjojen immunohistokemialla paljasti rinnakkaispaikantumisen on α-SMA ja CD34-värjäys jakaumat (Fig. 2A ja 2B, 2C ja 2D), ja samanlainen ulkonäkö todettiin myös peritumoraalista kudoksessa (Fig. S3 File S1). Ilmiö vahvistettiin immunofluoresoivalla kaksinkertainen värjäys α-SMA ja CD34, jossa α-SMA-positiivisten solujen nähtiin kietoa EY verisuonten seinämien (Fig. S4 File S1).

Case 85 (HCC ) ja PC kotelo 36 osoitti korkea α-SMA tiheys (A, G) ja MVD-CD34 (D, J); katsoo, HCC tapauksessa 226 ja PC kotelo 19 oli pieni α-SMA tiheys (B, H) ja MVD (E, K) (x 200). (C, F, I, L) Keskimääräinen α-SMA tiheys ja MVD korkean ja matalan riskin ryhmiä HCC ja PC.

* Independent näytteitä

t

testi osoitti tilastollista eroa ryhmien välillä.

(Pariksi A ja B, C ja D) immunohistokemiallinen värjäys leikesarjojen osoitti -parin kuvio α-SMA ja CD34 (x 200).

väliset korrelaatiot Kasvain α-SMA-positiivisten solujen tiheys tai MVD ja kliinis-

Kun mediaani oli asetettu sulku pisteen α-SMA ja CD34 tiheydet, potilaat jaettiin alaryhmiin korkean ja matalan riskin (Fig. 1, Fig. S1 File S1). Kuten taulukosta 1 (yksityiskohtaisesti taulukoissa S4 ja S5 File S1), vuonna HCC, potilailla, joilla on alhainen α-SMA tiheys olivat alttiita saamaan läsnäolo maksansisäisten etäpesäke ja mikrovaskulaarista invaasio, ja alhainen kasvaimen erilaistumista; korkea MVD liittyi suuri kasvaimen kokoa, korkea seerumin α fetoproteiinigeenin pitoisuus, läsnäolo maksansisäisen etäpesäke ja mikrovaskulaarista invaasio, ja korkea TNM vaiheessa. PC, alhainen α-SMA liittyi korkea solmukohtien osallistuminen, mikrovaskulaarinen invaasio, alhainen kasvain eriyttäminen, ja korkea TNM; korkea MVD korreloi suuri kasvaimen kokoa, korkea imusolmukkeiden solmukohtien osallistuminen korko, ja läsnäolo microvascular hyökkäystä. HCC Kirroosipotilailla (vaihe 4;

n

= 72) oli merkittävästi pienempi α-SMA-arvot kuin potilailla, joilla ei kirroosi (vaiheet 1-3,

n

= 233; 18.30 % vs. 28,95%;

p

= 0,029); MVD jakautuiravintoaineiden kahden alaryhmiin (22,88% vs. 24,34%;

p

= 0,763).

Prognostic vaikutus kasvain α-SMA-positiivisia solutiheyden tai MVD päällä postoperatiivinen Survival ja uusiutuminen

yhden muuttujan analyysin HCC, kasvaimen koko, kasvain eriyttäminen, läsnäolo mikrovaskulaaristen invaasion ja maksansisäiset etäpesäke, ja TNM liittyi sekä OS ja RFS; positiivinen hepatiitti B e antigeeni liittyy myös RFS. PC läsnäolo mikrovaskulaaristen invaasio liittyi sekä OS ja RFS; kasvain eriyttäminen liittyi myös OS; ja solmukohtien osallistuminen oli mahdollinen vaikutuskertoimella RFS (taulukko 2). Α-SMA-arvot sekä HCC ja PC ei ole liittynyt OS tai RFS (HCC:

p

= 0,071 ja

p

= 0,079, Fig. 3A ja 3B, PC:

p

= 0,072 ja

p

= 0,107, Fig. 3I ja 3J). Mediaani OS ja RFS kertaa potilaille, joilla on korkea MVD olivat 26,5 ja 16,0 kuukautta HCC, ja 15,0 ja 9,7 kuukautta PC, vastaavasti. Nämä kaudet olivat merkittävästi lyhyempiä kuin potilailla, joilla on alhainen MVD (HCC: 57.4 ja 33,1 kuukautta, sekä

p

0,001, Fig. 3C ja 3D, PC: 20,0 ja 17,8 kuukautta,

p

= 0,046 ja

p

= 0,008, Kuva. 3K ja 3L).

(A, B, I, J) lentokoneen α-SMA tiheys liittyi kumpikaan käyttöjärjestelmä eikä RFS. (C, D, K, L) Low MVD korreloi pitkäaikainen OS ja RFS. (E, F, M, N) Potilaat kussakin kohortissa luokiteltiin neljään ryhmään niiden kasvaimensisäisenä α-SMA tiheys ja MVD. (G, H, O, P) Ennakoiva arvot markkeriyhdistelmä ja muut riskitekijät tunnistetaan monimuuttujamenetelmin tutkittiin vastaanotin toimii ominaisuus analyysi (katso tulokset lisätietoja). UICC, International Union syöpää vastaan.

riskitekijät tunnistetaan yhden muuttujan analyysin yhdistettiin osaksi monimuuttuja Coxin suhteellisen vaarat analyysi (taulukko 2; myös yksityiskohtaisesti taulukoissa S6 ja S7 File S1). Tulokset osoittavat, että kummassakin kasvaintyypeissä, α-SMA ei ole itsenäinen riskitekijä OS tai RFS. Korkea MVD oli itsenäinen riskitekijä OS (HCC: riskisuhde [HR] = 4,236,

p

0,001, PC: HR = 3.578,

p

= 0,018) ja RFS (HCC: HR = 2,585,

p

0,001, PC: HR = 2.230,

p

= 0,034).

Kun otetaan huomioon toistumisen ominaisuudet HCC [34], otimme 24 kuukautta kuin kynnysarvon erottaa aikaisin verrattuna myöhään alaryhmiä kasvaimen uusiutumisen. Valitettavasti mitään eroa välillä havaittiin potilailla, joilla on korkea ja matala α-SMA joko aikaisin toistuminen (66 153 vs. 89 152 potilasta,

p

= 0,528; Kuva. S5a File S1) tai myöhään toistumisen (87 153 vs. 63 152 potilasta,

p

= 0,665). Muita potilaita, joilla on korkea MVD (verrattuna potilaisiin, joilla on alhainen MVD) oli varhainen uusiutuminen (110 153 vs. 45 152 potilasta,

p

= 0,001; Kuva. S5B File S1) eikä myöhään toistumisen (43 153 vs. 107 152 potilasta,

p

= 0,429). PC, 6 ja 12 kuukautta asetettiin raja-arvot erottaa varhaisen vs. myöhään toistumisen [35], tässä järjestyksessä; näissä olosuhteissa ei havaittu merkittävää eroa varten α-SMA ja MVD välillä alaryhmien.

poistamiseksi vaikutuksen kasvaimen koon potilaan lopputulokseen, me tutki tarkemmin ennustetekijöiden pienessä-kasvain HCC alaryhmä (maksimi halkaisija ≤5 cm,

n

= 179); PC, kasvaimen koon ei korreloinut OS tai RFS. MVD arvot liittyivät OS ja RFS (

p

0,001 ja

p

= 0,001, vastaavasti) tässä alaryhmässä; katsoo, α-SMA liittyi kumpikaan OS eikä RFS (

p

= 0,520 ja

p

= 0,153, tässä järjestyksessä; Fig. S6A 6D File S1). Yksityiskohtainen korrelaatiot muiden tekijöiden kanssa potilaan lopputulokseen pienten kasvainten HCC alaryhmä on koottu taulukkoon S8 File S1.

Prognostic arvo Yhdistelmä α-SMA-positiivisten solujen tiheys ja MVD ja ROC Analysis

tutkimus potilasta jaettiin neljään ryhmään niiden kasvaimensisäisenä α-SMA tiheyden ja MVD arvot: ryhmä I (HCC /PC:

n

= 68/14), matala α-SMA ja alhainen MVD; ryhmä II (HCC /PC:

n

= 84/15), korkea α-SMA ja alhainen MVD; ryhmä III (HCC /PC:

n

= 86/13), matala α-SMA ja korkea MVD; ja ryhmä IV (HCC /PC:

n

= 67/15), korkea α-SMA ja korkea MVD (katso taulukko S9 Tiedosto S1, yksityiskohtaiset kliinis-potilaiden eri alaryhmiä α-SMA ja MVD). Prognostiset analyysi osoitti merkittäviä eroja OS hinnat (

p

0,001 ja

p

= 0,026 HCC ja PC, vastaavasti) ja RFS hinnat (

p

0,001 sekä) yksi neljästä monimuotoiset ryhmään (taulukko 2). HCC Kohortti 1, 5 vuoden OS ja RFS hinnat olivat 88,1% ja 70,2%, tässä järjestyksessä, ryhmän II; mutta vain 38,4% ja 44,2%, tässä järjestyksessä, ryhmä III (Fig. 3E ja 3F). PC Kohortti 2, 2 vuoden OS ja RFS hinnat olivat 100% ja 86,7%, tässä järjestyksessä, ryhmän II; mutta ne olivat vain 40,0% ja 15,4%, tässä järjestyksessä, ryhmä III (Fig. 3M ja 3N). Tulokset monimuuttuja-analyysi osoitti, että yhdistelmä α-SMA tiheys ja MVD oli itsenäinen ennustetekijä OS ja RFS (taulukko 2 ja taulukot S6 ja S7 File S1). Samanlainen tulos havaittiin alussa toistumisen HCC (Fig. S5c File S1) ja pienen kasvaimen HCC alaryhmiin (Fig. S6E ja 6F, ja taulukko S8 File S1), ja se vahvistettiin riippumattoman testissä PC Cohort 3 ( kuva 4).

riskitekijät tunnistetaan monimuuttuja-analyysissä ja yhdistelmä α-SMA ja MVD hyväksyttiin, ja niiden ennustava arvot määritettiin ROC-analyysi (taulukko 3; yksityiskohtaisesti taulukoissa S10 ja S11 File S1). Kasvain MVD ennusti kuolemaa ja toistuminen (

p

0,05). Vaikka α-SMA ennustaa kuolema eikä uusiutumisen, yhdistelmä α-SMA ja MVD tarkasti ennusti kuolemaa ja varhainen uusiutuminen (

p

0,01 kaikille). Paitsi TNM ja uusiutumisen HCC, ja kasvaimen erilaistumista ja kuolema PC, ennustearvo yhdistelmä α-SMA ja MVD oli suurempi kuin muut tekijät. Kun raja-arvo asetettiin ryhmä III (alhainen α-SMA ja korkea MVD) verrattuna muihin kolmosta ryhmiä, negatiivinen ennustearvo, positiivinen ennustearvo, herkkyys, ja spesifisyys HCC kohortin 1 oli 0,749, 0,616, 0,491, 0,832 OS ja 0,616, 0,558, 0,364, 0,780 RFS, ja PC kohortin 2 olivat 0,690, 0,600, 0,409, 0,829 OS ja 0,476, 0,733, 0,333, 0,833 RFS, vastaavasti. Alueet käyrän alla tämän yhdistelmän olivat 0,743 /0,758 (HCC /PC) kuolemalle (

p

0,001 ja

p

= 0,001, vastaavasti) ja 0,615 /0,790 (HCC /PC) uusiutumisen (

p

= 0,001 ja

p

0,001, tässä järjestyksessä) (Fig. 3G, 3H, 3O, ja 3P).

intensiteetti HIF-1α ja CA IX ilmentäminen alaryhmiä Eri MVI

Arvot HIF-1α ja CA IX käytettiin indikaattorin kasvaimen hypoksia, ja niiden voimakkuudet jaettiin neljään ryhmään sen mukaan yhdistelmän a-SMA ja MVD. Keskimääräinen HIF-1α tai CA IX tiheys oli suurin yhdistettyihin I ja pienin ryhmä IV HCC Colson 1 ja PC Cohort 2 (yksisuuntainen varianssianalyysi,

p

0,001 ja

p

= 0,008 varten HIF-1α, ja

p

= 0,012 ja

p

0,001 CA IX, tässä järjestyksessä; Fig. 5). Verrattuna ryhmä I, HIF-1α tai CA IX ryhmä II oli huomattavasti pienempi; verrattuna III, HIF-1α tai CA IX ryhmässä IV oli alempi (molemmat

p

0,05).

indikaattori kasvaimen hypoksia olivat HIF-1α ja CA IX ja niiden intensiteetti jaettiin neljään ryhmään, kuten on kuvattu. HIF-1α tai CA IX tiheys oli suurin ryhmässä I ja pienin ryhmä IV sekä (A) maksasolusyövän (HCC) kohortti 1, ja (B) haimasyöpä (PC) kohortti 2; (

p

0,001 ja

p

= 0,008 varten HIF-1α, ja

p

= 0,012 ja

p

0,001 CA IX , vastaavasti).

* Verrattuna ryhmä I, ja

** verrattuna III; molemmat

p

0,05. IOD, integroitu optinen tiheys.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa, olemme havainneet, että alhaisen kasvaimensisäisenä α-SMA-positiivisten solujen tiheys, yhdessä korkean MVD-CD34-arvot, liittyy merkittävästi esiintyy paljon suonensisäisen kasvain veritulppa ja huono selviytymisen jälkeen resektion HCC. Näistä kaksi markkereita, vain MVD on itsenäinen ennustetekijä; Kuitenkin näiden kahden yhdistelmä on enemmän valtaa ennustaa potilaan kuolemaan ja varhainen uusiutuminen. Lisäksi työmme paljastaa, että lokalisointi useimpien verisuonia α-SMA-positiivisten solujen ja hankittua päällekkäisyydet verisuonten seinämien, ja siellä on yli 80% rinnakkaispaikantumisen kasvaimen interstitium. Tämä havainto havaittiin myös PC ja riippumaton testi PC kohortissa. Siksi ehdotamme, että yhdistelmä α-SMA ja MVD voivat osittain olla hyvä indikaattori MVI (CD34

+ /α-SMA

+); että MVI on kriittisempi kuin MVD yksin kehittämisessä microvascular invaasio; ja että MVI on kriittinen edelleen ymmärrystä mahdollisia taustalla mekanismeja angiogeneesiä torjuvina kuin kiihdytin tuumorimetastaasin.

tunnustettu ihmisen EC merkki on CD34. On raportoitu hiirimallissa että a-SMA ja CD31 EY: n markkeri voi koekspressoimaan verisuonten seinämien [24], [26]; Tämä on kuitenkin epäselvä ihmisen. Työmme vahvistaa tämän α-SMA ja CD34 -parin kuvio (katso kaavamainen kaavio kuvion. S7 File S1). Ne perivaskulaarinen α-SMA-positiivisten solujen, jotka kietoa hankittua tunnistettiin PVC ja PVC tiheyttä käytettiin indikaattorina MVI. Ennen tätä tutkimusta, suuri haaste oli valita sopiva molekyyli- merkkiaine PVC. Expression erilaisten merkkiaineiden on raportoitu PVC; so NG2, verihiutaleiden kasvutekijän reseptori-beta (PDGFRβ), α-SMA, desmiini, ja RGS5 [23], ja niiden ilmentyminen saattaa olla kudosspesifisiä. Vaikka joitakin PVC merkkiaineita HCC ja PC jotka on tunnistettu eläinkokeissa [25], [26], [36], [37], tutkimus niiden ilmentymisen ihmisen koepaloja on ollut pitkälti tutkimaton. Tuloksemme viittaavat siihen, että α-SMA on sopiva merkkiaine MVI, koska sen positiivisen-värjäys korko ja colocalized ilmaisutapoja CD34. Siksi meidän havainnot vahvistaa, että se on merkkiaine PVC. Tämä on sopusoinnussa Feig et al. [13], joka katsoi, että α-SMA-positiivisten strooman fibroblastit voisivat todennäköisesti edustavat PVC. Sillä vaikka NG2 voitaisiin värjäytyi positiivisesti hiiren yksilöt [38], tutkimus sen ja muiden ennustaja molekyylit epäonnistui ihmisen kudosnäytteiden meidän instituutti (kts. S8 File S1).

Tuloksemme osoittavat myös että potilailla, joilla on korkea kasvain MVD, kunhan niiden MVI on myös korkea, metastaattisen todennäköisyys voisi olla alhainen, ja tässä tapauksessa, ennuste olisi sakko. Sen sijaan ennuste voi olla huono potilaille, joilla on alhainen MVD ja myös alhaiset MVI. Huono eheys alusten tarjoaa lukuisia keinoja kasvainsolun sisäisten /Ekstravasaation päässä vuotavat verisuonten arkkitehtuuriin, ja nämä solut voisivat elinsiirron osaksi kohde-elimiä, jolloin etäpesäkkeitä. Mikä tekee pahemmaksi se, että alueilla verisuonten romahtaa, jotka johtuvat huonosta PVC kattavuus dramaattisesti vähensi kasvainten veriperfuusio voisi johtaa ja tuottaa alueellisia hypoksia [19]. Tuloksena hypoksia omistetun kasvainsolujen olisi vaeltavia ja invasiivisia ominaisuuksien avulla HIF-1α aiheuttama epiteelin-mesenkymaalitransitioon [22], [32], [39]. Tämä tilanne loisi vihamielinen kasvain miljöö, jossa nämä solut voisivat helposti hyökätä kautta epänormaali alusten ja muodostavat kasvaimen trombin. Tätä hypoteesia tukee erinomainen tutkimus osoittaa, että ehtyminen perisyyteissä aiheuttaa kasvaimen hypoksia ja etäpesäkkeiden [22], ja meidän aiemmat tutkimukset, joissa osoitetaan, että tehostaminen MVI lievittää hypoksia ja estää etäpesäkkeiden [38]. Nämä havainnot ovat yhdenmukaisia ​​meidän kliiniset havainnot. Tässä työssä tarkastellaan myös hypoksia biomarkkerit HIF-1α ja CA IX intensiteetin mukaan kombinatorisista merkki ryhmiä eri MVI, ja löysimme heidän todellakin esittelee kaltevuus jakeluun. Molemmissa alhainen MVD ryhmien I ja II, ja molemmissa korkea MVD III ja IV, korkeamman MVI korreloi alemman HIF-1α ja CA IX. Miten MVI säädellään on epäselvä. Mazzone et ai. raportoitu, että hypoksia ja HIF-1α /-2α liittyvä PHD2 proteiini voi vahingoittaa MVI [24], ja on todettu, että geeni kohdentamisessa

Phd2

tulokset tiiviimpään MVI ja parantaa kasvaimen vaste kemoterapialle [40 ]. Jälkimmäinen havainto viittaa siihen, että MVI voitaisiin säädellä hypoksia /HIF-1α kautta palautetta polku. Kuitenkin, meillä ei ole itsenäistä ennusteen arvioinnissa for PVC merkitty α-SMA, joka eroaa havainnoista Cooke ja työtovereiden [22]. Mahdollisia syitä ristiriitaan voi olla heterogeenisyys eri kasvaimia, tai mahdollinen puute spesifisyyden α-SMA. Tuloksemme tarkoita, että tutkittaessa PVC yksin riitä; avainkysymys pikemminkin piilee yhdistys PVC kanssa hankittua.

Viime syntymässä tiedot, molemmat ryhmämme ja muiden on paljastanut, että endoteelikasvutekijä tai verisuonten endoteelin kasvutekijän reseptori (VEGFR) salpauksesta sorafenibi tai sunitinibin johtaa tehostetun etäpesäkkeiden [20], [21], [41]. On joitakin oivalluksia mekanismia tämän ilmiön, mutta se ei ole vielä täysin ymmärretty. Me spekuloida, että se on luultavasti koska angiogeneesiä torjuvina tavoitteet sekä EY ja PVC, koska sunitinibi voi estää VEGFR2 ja PDGFRs [42].