Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tulehdus on tärkeä ominaisuus syövän synnyn. Kasvaimeen liittyvä makrofagit (TAM) voi liittyä joko huono tai parannetun ennusteen, riippuen niiden ominaisuuksista ja polarisaatio. Nykyinen tietämys ennustetekijöiden merkityksestä TAMeja virtsarakon syöpä on rajallinen ja tutkittiin tässä tutkimuksessa. Analysoimme 184 urothelial virtsarakon syöpäpotilailla höyläysleikkaus virtsarakon kasvain tai radikaali cystectomy. CD68 (pan-makrofagimarkkeri), MAC387 (polarisoitunut kohti tyypin 1 makrofageja), ja CLEVER-1 /Stabilin-1 (tyypin 2 makrofagit ja imusuonten /verisuonet) havaittiin immunohistokemiallisesti. Mediaani seuranta-aika oli 6,0 vuotta. Korkea makrofagi laskee liittyy suurempi pT luokan ja laadun. Niistä potilaista, joille höyläysleikkaus, kaikissa tutkituissa markkereita lukuun ottamatta CLEVER-1 /Stabilin-1 liittyi suurentunut etenemisen ja huonompi tautikohtaista ja yleisen eloonjäämisen univariate analyyseissä. Korkea kaksi makrofagimarkkereiden (CD68 /MAC387

+ /+ tai CD68 /CLEVER-1

+ /+ ryhmissä) oli itsenäinen ennustetekijöiden rooli transuretraalisen poiston jälkeen monimuuttuja analyysit. Vuonna cystectomy kohortin MAC387, yksin ja yhdessä CD68, liittyi huonompi hengissä univariate analyysejä, mutta mikään merkkiaineet olivat riippumattomia ennustajia tulos monimuuttuja analyysit. Kaiken kaikkiaan tämä tutkimus osoittaa, että makrofagi fenotyypit tarjoavat merkittäviä riippumatonta varoituksia syntymässä olevista, erityisesti virtsarakon syöpien meneillään höyläysleikkaus.

Citation: Boström MM, Irjala H, Mirtti T, Taimen P, Kauko T, Ålgars A, et al. (2015) Tumor-Associated Makrofageilla tarjota merkittävää Prognostiset Information in urothelial virtsarakon syövän. PLoS ONE 10 (7): e0133552. doi: 10,1371 /journal.pone.0133552

Toimittaja: Hari K. Koul, Louisiana State University Health Sciences Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 14 helmikuu 2015; Hyväksytty: 29 Kesäkuu 2015; Julkaistu: 21 heinäkuu 2015

Copyright: © 2015 Boström et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoittajat: Peter J. Boström saanut tukea Juseliuksen säätiö (https://www.sigridjuselius.fi/foundation) ja Suomen Syöpäyhdistys (http: //www.cancer.fi/en/). Sirpa Jalkanen sai tukea Suomen Lääketieteen Säätiö (https://www.laaketieteensaatio.fi/fin/in_english/), Kirsti ja Tor Johanssons Sydän ja Cancer Foundation. Minna M. Boström saanut tukea Orion-Farmos (https://www.orion.fi/en/rd/) ja Instrumentariumin tiedesäätiö (https://www.instrufoundation.fi). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

välinen yhteys syövän synnyn ja tulehduksen on yleisesti hyväksytty, ja kasvaimen edistävä tulehdus on yksi tunnusmerkkejä syövän [1]. Tulehdussolujen, kemokiinit, ja sytokiinien ovat läsnä kasvaimia alkuvaiheista ja ovat välttämättömiä osallistujia neoplastiset prosessissa [2, 3]. Kasvaimeen liittyvä makrofagit (TAM) peräisin perifeerisen veren monosyyteistä ja palvelukseen kemokiinit ovat merkittävä osa leukosyyttien infiltraatiota kasvaimissa. Plastisuus ja monimuotoisuus ovat yleismaailmallisia piirteitä mononukleaaristen fagosyyttien, joka voi olla joko suojaava tai kasvaimen edistävää roolia, riippuen microenvironmental signaalit [4]. TAM ovat yleensä suunnattu edistämään kasvaimen kasvua ja angiogeneesiä, tukahduttaa immuniteetin, ja niillä on tärkeä rooli kasvainten solujen vaeltamiseen, invaasiota ja etäpesäkkeiden. Kuitenkin makrofagit voivat myös eliminoida kasvainsoluja ja siksi joskus liittynyt paremman tautien ennusteen [2, 5]. Edistyksestä huolimatta ymmärtämään vuorovaikutusta tulehdus ja syöpään, tärkeät kysymykset jäävät vaille vastausta. Syöpään liittyvien tulehdus eroaa kesken kasvaintyyppeihin ja on tärkeää määritellä, mitkä osat ovat ominaisia ​​tietyille kudoksiin ja kasvaimiin. On tärkeää löytää optimaalinen ärsykkeiden muuttamaan kasvaimen edistävä mikroympäristön kasvaimeen estävä yksi, ja ymmärtää signalointi mekanismeista.

Virtsarakon syöpä (BC) on heterogeeninen sairaus. Ei-invasiivisia, hyvin erilaistunut kasvaimet ovat suhteellisen veltto luonnon historiasta, mutta huonosti eriytetty kasvaimet ovat alttiita hyökätä ja etäispesäkkeitä. Länsimaissa BC on neljänneksi yleisin syöpä miehillä [6]. Höyläysleikkaus virtsarakon kasvain (TUR-BT) käytetään diagnosoida ja lavastaa kaikki kasvaimet. Vaikka ei-lihas-invasiivisia tasapainotusliivit (NMIBC) ei saa vaatia lisäkäsittelyä, radikaali cystectomy (RC) kanssa tai ilman leikkaussalin kemoterapiaa pidetään kultakantaan hoidossa invasiivisen BC ja NMIBC ei ole rakkoon hoito.

vain vähän tietoja saatavilla ennustetekijöiden arvosta TAMeja tai niiden fenotyyppi BC, ja useimmat tutkimukset ovat keskittyneet tutkimiseen TAMeja vastauksena Bacillus Calmette-Guerin (BCG) immunoterapia. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia suhdetta TAMeja ja kliinis muuttujia koko kirjon BC ja tutkia ennustetekijöiden roolia TAMeja BC jälkeen TUR-BT ja RC käyttäen immunohistokemiallisia menetelmiä.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

tutkimusprotokolla hyväksyi tutkimuseettiseltä sairaanhoitopiirin Varsinais-Suomen (1.8.2006 /301). Kirjallinen suostumus saatiin osallistujille. Peräkkäiset BC potilailla, joille tehdään TUR-BT (2000-2004) tai RC (in 1985-2005) Turun yliopistollisessa sairaalassa olivat mukana tutkimuksessa. Sen jälkeen syrjäytyminen, 184 potilasta oli mukana tutkimuksessa. Poissulkemisperusteita olivat seuraavat: 1) ei-urothelial BC, 2) mitä tahansa rakkoon tiputtamista (BCG tai kemoterapiaa) tai systeemistä kemoterapiaa ennen tutkimusta osallisuutta, ja 3) riittävästi kudoksen käytettävissä histologista uudelleentarkistusta ja immunohistokemia.

TUR-BT suoritettiin käyttäen vakiintuneita tekniikoita, ja välittömästi yhden kemoterapiaa tiputettiin 22% (20/92) potilaista. BCG tai rakkoon kemoterapiaa instillations annettiin T1 kasvaimet ja kasvaimet usein toistuminen. Erityisesti, rakkoon hoito annettiin 39%: lla potilaista (36/92). RC suoritettiin T1 kasvaimia ei reagoi BCG ja kaikki ≥T2 kasvaimia jos sopiva leikkaus. RC mukana poisto virtsarakon, eturauhasen, ja rakkularauhanen miehillä ja kohtu, munasarjat, ja aikaisemmat emättimen seinämän naisilla. Imusolmukkeiden ei tasaisesti suoritettu, mutta makroskooppisesti epäilyttäviä imusolmukkeet poistettiin koko tutkimuksen ajan ja rajoitettu lantion imusolmuke leikkelyn toteutettiin vuodesta 1995 lähtien. Adjuvanttihoidon ei annettu jälkeen RC ja systeemistä kemoterapiaa tarjottiin vasta ajankohtana metastasointiin seurannan aikana. Sen jälkeen RC, potilaita seurattiin 3 kuukauden välein ensimmäisen vuoden ja puolivuosittain sen jälkeen.

Yksityiskohtainen kliinis tietokanta koottiin takautuvasti, mukaan lukien tiedot potilaan ja kasvainten ominaisuuksiin, sekä yksityiskohtaiset ohjeet siitä ja seurannasta up. Histologinen näytteet uudelleen tarkistetaan histologia, erilaistumiseen laatu, ja vaihe asiantuntijan uropathologist. Kasvaimet olivat porrastettu sekä Maailman terveysjärjestön (WHO) 1973 WHO /International Society of Virtsan patologi (ISUP) 2004 luokitusten ja järjestetään mukaan 2010 TNM lavastus [7, 8].

Immunohistokemia ja pisteytys

kunkin tapauksessa edustavin formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudosnäytekappaleessa valittiin analysoitavaksi. Osiot (5 pm paksu) poistettiin parafiini ksyleenillä ja nesteytyksestä asteittaisella alkoholi sarjassa. Ensisijainen käytetyt vasta-aineet olivat hiiren monoklonaalinen IgG

1 anti-CD68 (KP1) (pitoisuus 1: 5; ab845, Abcam, UK) ja hiiren monoklonaalinen IgG

1 anti-MAC387 (pitoisuus 1: 500; ab22506, Abcam , UK), joka havaitsee myelomonocytic L1 molekyylin kalprotektiinin. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ (yleinen imusuonten ja vaskulaariendoteeli reseptori-1, joka tunnetaan myös STAB1 ja tuntea-1) tyypin 2 makrofageja ja alusta havaittiin rotan IgG 2-7 vasta-ainetta (pitoisuus 1: 5) [9, 10]. Vasta-aineet 3G6 (hiiren IgG

1 vasta-aine kanan T-solut) [11] ja MEL-14 [rotan IgG

2 a vasta-ainetta hiiren L-selektiini (CD62L)] (Exbio, Tsekin tasavalta) käytettiin negatiivisena valvontaa. Ensisijainen immunoreaktiotuotteet suoritettiin käyttäen hiiri /rotta Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories). Osastossa anti-CD68-ja MAC387 värjäykset lämpöä esikäsitellä sitraattihappoa (0,01 M, pH 6,0) kanssa 97 ° C: ssa vesihauteessa 20 minuuttia. Antigeenin haku ja CLEVER-1 /Stabilin-1-värjätyt leikkeet suoritettiin proteinaasi K: n (DAKO) (10 min 37 ° C: ssa) ja levyjä pestiin kolme kertaa PBS: llä, sen jälkeen, kun esikäsittelyä. Endogeeninen peroksidaasi estettiin 0,1% H

2O

2 30 min. Epäspesifisiä tukittiin hevonen (CD68 ja MAC387) tai kanin (Clever-1 /Stabilin-1) normaali seerumin huoneenlämmössä 20 minuutin ajan. Leikkeitä inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla yli yön 4 ° C: ssa ja käsiteltiin sitten biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen mukainen ratkaisu valmistajan ohjeiden mukaisesti. PBS-pesun jälkeen, Vectastain Elite ABC-reagenssia lisättiin (30 min huoneenlämpötilassa), levyt pestiin, ja immunoreaktiot havaittiin käyttäen 3,3′-diaminobentsidiiniä substraattina. Objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä, kuivattu uudelleen kiinteä ksyleenissä, asennettu distyrene pehmitintä ksyleenillä (DPX).

Koko kasvain ja ympäröivän peritumoraalista alueen seulottiin valomikroskoopilla. Lukumäärät CD68

+ makrofagien MAC387

+ makrofagien ja CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien ja alusten pisteytettiin kolmelta kuormittajat (alueista parhaiten makrofagien silmämääräisesti) kasvaimen ja peritumorally kanssa 0,0625 mm

2 grid käyttäen 40 × suurennuksella kun pisteytys makrofagien ja 20 × kun pisteytys imusuonten /verisuonia. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ ei ole normaalisti läsnä tasaiselle seinät venules, mutta se on poikkeuksellisesti indusoi kasvaimen verisuonistossa [12]. Pisteytys suoritettiin itsenäisesti kaksi tarkkailijaa (MB ja HI) sokkona kliiniset tiedot. Tapauksissa riittämätön laatu immunohistokemiallisella värjäyksellä tai kasvaimen morfologiaan jätettiin edelleen tilastollisten analyysien. Keskimääräinen määrä makrofagien ja alusten kolme kuormittajat laskettiin yhden suurtehokaiuttimissa kenttään. Kun kyseessä on ristiriita, leikkeet yhdessä tarkistettava päästä yksimielisyyteen. MAC387

+ kasvainsoluja luokiteltiin puolittain määrällisesti neljään ryhmään, from-(negatiivinen) ja +++ (runsaasti). Positiivisten makrofagien kutakin vasta-ainetta myös arvostellaan semi-kvantitatiivisesti neljään ryhmään, mistä mihin +++. Koska semikvantitatiivista pisteytys ja määrällinen yhteen laskettu analyysi liittyy merkittävästi kaikilla immunoanalyses (p 0,001), yksityiskohtaisia ​​tilastotietoja ja, kuten yhdistysten välillä immunosignals ja selviytymisen, suoritettiin käyttäen saatuja arvoja määrällisistä pisteytysjärjestelmä. Potilasalaryhmissä luotiin yhdistämällä kaksi makrofagimarkkereiden. Makrofagi markkereita testattu jaettiin joko alhainen (-) tai korkea (+) ryhmät mukaan keskiarvon väestöstä. Seuraavat alaryhmää luotu: 1) alhainen sekä makrofagin alatyyppejä (

– /-), 2) korkea joko makrofagien alatyypin, alhainen muiden makrofagin alatyyppi (

+/-) ja 3 ) korkea molempien makrofagin alatyyppejä (

+ /+).

Tilastolliset analyysit

assosiaatioita CD68, MAC387, ja CLEVER-1 /Stabilin-1 ilmentymisen ja kliinis muuttujat olivat arvioidaan muun U-testi ja Kruskal-Wallisin testiä. Potilaiden ominaisuudet ja testien tulokset normaaliuden jatkuvien muuttujien kokonaismäärän tutkimuskohortissa esitetään S1 taulukossa. Kaplan-Meier menetelmä, log-rank testaus, ja Coxin suhteellisen vaarat regressiomalleja käytettiin analysoimaan assosiaatioita immunosignals ja lopputulos. Kaplan-Meier-analyysit, keskimääräinen makrofagien ja aluksen lukumäärät kahtia mukaan keskimääräinen lukumäärä. Vuonna Coxin suhteellisen vaarat regressiomalleja, markkereita arvioitiin jatkuvia muuttujia. Tulos toimenpiteitä olivat tautikohtaisia ​​ja kokonaiseloonjääminen (DSS ja OS) RC väestön ja DSS, OS, toistuminen, ja ilman taudin etenemistä (PFS) on TUR-BT väestöstä. Elinaika laskettiin alkaen leikkausta viimeisestä seurannan tai kuoleman. Jokainen kuolema johtuu BC tai metastasoitunutta BC määriteltiin syövän aiheuttamaa kuolleisuutta. Toistuminen määriteltiin TUR-BT väestön histologisesti vahvistettu uusi kasvain jälkeen kasvain jakson aikana, ja eteneminen määriteltiin kun toistuminen oli korkeampi arvosana tai kehittyneempi pT luokkaan kuin primaarikasvaimen tai jos potilas koki RC uusiutumisen. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia ja p-arvot ≤0.05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä. Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS 20 (IBM) ja SAS System for Windows, versio 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).

Tulokset

kliinis ominaisuudet Tutkimuksen väestön

perustason kliinis potilaan ominaisuuksista kohortin on esitetty taulukossa 1. Suurin osa potilaista oli NMIBC (PTA, pTcis tai pT1) (88% TUR-BT väestö ja 36%: n RC väestöstä). Kasvainten määrä kirjattiin TUR-BT väestö ja ne potilaat, 63%: lla oli yksi kasvain. Lopussa seurannan aikana 36% potilaista TUR-BT väestö ja 28% potilaista RC väestöstä oli elossa. Mediaani seuranta-aika oli 6,9 ja 4,2 vuotta TUR-BT ja RC populaatiot, vastaavasti.

TUR-BT kasvaimet ovat pienemmät TAM laskee kuin kasvaimia RC

Table 2a esitetään TUR-BT ja RC potilaat kahtia mukaan keskimääräinen lukumäärä makrofagien ja alusten, ja edustavia esimerkkejä värjäyskuvioiden eri markkereita on esitetty kuvassa 1.

TUR-BT näytteet värjätään negatiivisen kontrollin vasta-aine (a); kasvaimensisäistä CD68

+ makrofageja (b), MAC387

+ makrofageja (c), ja CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien ja alusta (d). Täytetty nuolet osoittavat positiivisesti värjättyä makrofageja, ja avoimet nuolet osoittavat CLEVER-1 /Stabilin-1

+ aluksia. Suurennus 40 ×, asteikko bar 100 mikrometriä.

Data edustaa keskiarvoa positiivisten solujen määrän kolmesta kuormittajat (yksi suuritehoinen kenttä per hotspot). Laskennat edustettuina ryhmiä kahtia mukaan keskimääräinen makrofagien määrä. a, makrofagi ja alus laskee. b, solu laskee ilmaisun mukaisesti kahden markkereita. Täällä, CLEVER-1 värjäystä viittaa ilmentymistä makrofageissa, ei aluksia.

keskimääräinen lukumäärä kasvaimensisäisenä CD68

+ makrofagien oli 18 per kenttä TUR-BT väestöstä [keskihajonta (SD ) ± 16] ja 30 RC väestöstä (SD ± 26). Sillä MAC387 keskimääräinen makrofagi laskee olivat 19 (SD ± 24) ja 34 (SD ± 38) on TUR-BT ja RC populaatiot, vastaavasti. Korkeimmat CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien määrä oli 73 vuonna TUR-BT ryhmä ja 41 RC ryhmässä, ja keskimääräinen luvut olivat 26 (SD ± 13) ja 11 (SD ± 10), tässä järjestyksessä . CLEVER-1 /Stabilin

+ imusuonten /verisuonitiheyttä vaihtelivat 0-22 positiivista solua kentän keskiarvon 8. TUR-BT väestö (SD ± 5) ja 1 RC väestöstä (SD ± 1 ). Markkeri laskee vuonna TUR-BT ja RC kohortteja esitetään S1 kuviossa solumäärien mukaan ilmaus kaksi makrofagimarkkereiden on esitetty taulukossa 2b.

korkea CD68

+, korkea MAC387

+, ja matalan CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien määrä liittyy tavanomaisiin piirteitä korkean riskin BC

Associations välillä kasvaimen ja pT luokka ja ilmentymistä CD68, MAC387, ja CLEVER -1 /Stabilin-1, on esitetty kuviossa 2 (kaikki p-arvot 0,05). Suuri määrä CD68

+ makrofagien ja MAC387

+ makrofaagit liittyy suurempi pT luokka ja kasvaimen. Sen sijaan alemman CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagi /alus lukumäärät liittyy suurempi pT luokan ja laadun. Naaraat oli korkeampi määrä CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien (p = 0,003, U-testi, jota ei ole esitetty). Ei ollut merkittäviä assosiaatioita solumäärät ja tupakoinnista tai iästä.

U-testi käytettiin pareittain vertailut analyyseissä kasvaimen ja Kruskal-Wallisin rank-sum testaus (KW) oli vertailussa käytetty kaikkien neljän pT luokkia. Pohja ja yläreunat laatikon osoittavat sisäisten neljännekseen alue (IQR), linja laatikon sisällä ilmaisee mediaanin arvo, viikset, jotka ulottuvat kunkin laatikon osoittavat erilaisia ​​arvoja, jotka ovat ulkopuolella sisäisen neljännekseen alueella mutta lähempänä kuin tai yhtä suuri kuin 1,5 kertaa IQR, ja kaikki kohdat, jotka ovat etäisyydellä yli 1,5 kertaa IQR laatikosta pidetään harha [ympyrät ilmaisevat lievä harha (yli 1,5 kertaa IQR), ja tähdellä äärimmäinen harha (yli 3 kertaa IQR)].

TAM laskee ennustaa etenemisen riskiä jälkeen TUR-BT

TUR-BT väestöstä.

Kaplan -Meier arvioiden arvioida suhteita eri makrofagien populaatioiden ja PFS että TUR-BT väestö on esitetty kuvassa 3. korkea lukumäärät CD68

+ makrofagien ja MAC387

+ makrofagien liittyivät merkittävällä tavalla etenemisen riskiä (kuvio 3a ja 3b) (p-arvot 0,007 ja 0,008, vastaavasti). Nerokas-1 /Stabilin-1

+ makrofagien määrä ei vaikuttanut PFS (p = 0,69) (kuvio 3c). Suuntaus (p = 0,056) kohti korkeampia etenemisen riski havaittiin pienemmällä CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alus count (Kuva 3d). Liitot yhdistelmien välillä makrofagimarkkereiden ja PFS että TUR-BT väestö on esitetty kuviossa 3e ja 3g. Kaikki potilasryhmät suurella makrofagien määrä määritetään kahdella eri makrofagimarkkereiden (eli kaksinkertainen korkea, CD68 /MAC387

+ /+, CD68 /CLEVER-1

+ /+ ja MAC387 /CLEVER-1

+ /+), oli lyhyempi PFS verrattuna muihin ryhmiin. Kun CD68 ja MAC387 analysoitiin yhdessä, potilaita, joilla on alhainen makrofagien oli pisin PFS. Kun CLEVER-1 /Stabilin-1 positiivisuus analysoitiin yhdessä CD68 tai MAC387, ei ollut eroa PFS välillä potilaille, joiden kasvaimet olivat alhaiset molemmille markkereita verrattuna potilaisiin, joissa jompikumpi merkkiaineiden oli korkea. Kaplan-Meier-estimaatteja DSS ja OS että TUR-BT väestö osoitti samanlaisia ​​tuloksia kuin PFS paitsi CLEVER-1, jossa on suurempi alus määrä liittyi elinajan (S2 ja S3 kuviot). Sitä vastoin ei ollut yhdistysten havaittu toistumisen riskiä ja testattu markkereita yksin tai yhdessä (S4 kuvio).

vaikutus CD68

+ makrofagien MAC387

+ makrofageja, ja CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagit /alukset progression TUR-BT väestö (ad). Potilaat jaettiin ryhmiin ilmaisun mukaisesti kahden makrofagimarkkereiden, ja yhdistyksille etenemiseen määritettiin (ef).

yhden ja usean Coxin suhteellisen vaarat regressiomalleja vaikuttavista tekijöistä OS vuonna TUR-BT väestön on esitetty taulukossa 3. yhden muuttujan analyysin, kotipaikka riskitekijöitä (korkea kasvaimen, kehittyneet pT luokka, korkeampi ikä, ja suuri määrä kasvaimet) merkitsevästi yhteydessä lyhyempi OS. Numerot CD68

+ makrofagien [riskisuhde (HR) 1,031 ja 95%: n luottamusväli (CI) 1,016-1,046; p 0,001] ja MAC387

+ makrofageja (HR 1.016 ja 95%: n luottamusväli 1,006-1,027; p = 0,002) merkitsevästi yhteydessä OS on muuttujan Coxin regressiomallin; kuitenkin, nämä yhdistykset eivät jäädä merkittäviä monimuuttuja analyysit. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagi /alus laskee ei ennustanut selviytymistä. Kun tietoja kahdesta makrofagimarkkereiden yhdistettiin, kaikilla potilailla, joilla oli korkea ilmentyminen sekä merkkiaineiden oli korkeampi kuolleisuus yhden muuttujan analyysiin, kuin muissa ryhmissä. CD68 /MAC387

+ /+ ja CD68 /CLEVER-1

+ /+ ryhmiä jäi merkittäviä assosiaatioita hengissä monimuuttuja analyysit (CD68 /MAC387

+ /+: HR 3,5 ja 95%: n luottamusväli 1,1-11; p = 0,036, ja CD68 /CLEVER-1

+ /+: HR 3,8 ja 95%: n luottamusväli 1,4-10, p = 0,008).

yhden ja usean Coxin suhteellisen vaarat regressiomallit vaikuttavien tekijöiden DSS, PFS ja uusiutumisen TUR-BT väestö on esitetty S2-S4 taulukot. Numerot CD68

+ ja MAC387

+ makrofagien ja CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alukset liittyy DSS Yksiulotteisissa analyyseissä mutta ei edelleen merkittäviä monimuuttuja analyysit. Kaksinkertainen korkea ryhmä ja CD68 /MAC387

+/- ryhmä myös merkittävästi liittyvän DSS Yksiulotteisissa analyyseissä mutta ei monimuuttuja analyyseja (S2 taulukko). Yksittäiset markkereita ja kahden ryhmissä merkkiaineita, jotka liittyvät samalla tavoin PFS (S4 taulukko).

RC väestöstä.

Kaplan-Meier-estimaatteja OS RC väestöstä on esitetty kuvassa 4. korkea MAC387

+ makrofagien määrä liittyy suurempi kuoleman riski (p = 0,021). Muita markkereita ei liittävät OS. Kun merkki tiedot yhdistettiin, kasvaimia, jotka oli korkeita CD68

+ makrofagien ja MAC387

+ tai CLEVER-1

+ makrofagit oli lyhyempi OS (CD68 /MAC387

+ /+ p = 0,032 ja CD68 /CLEVER-1

+ /p = 0,049). Kun DSS analysoitiin, ryhmät yhdistämällä kaksi makrofagimarkkereiden ennustaa selviytymisen, kuten OS (S5 kuvio).

vaikutus CD68

+ makrofagien MAC387

+ makrofagien ja CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagit /alukset OS radikaali cystectomy väestöstä (ad). Yhdistyksen välillä OS ja ilmaisu kahden makrofagimarkkereiden (ef).

yhden ja usean Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysisarjoissa vaikuttavat tekijät OS RC väestön ja yhdistetty ilmaus kaksi makrofagimarkkereiden näkyvät taulukossa 4. Kasvain laatu ja pT luokka liittyy merkittävästi OS. Mikään makrofagimarkkereiden liittyy merkittävästi OS yksi- tai monimuuttuja analyysit. CD68 /MAC387

+ /+ kaksinkertainen korkea ryhmä liittyy merkittävästi OS yhden muuttujan analyysiin, (HR 2,9 ja 95%: n luottamusväli 1,2-7,2; p = 0,020). Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysisarjoissa vaikuttavat tekijät DSS esitetään S4 taulukossa. MAC387 lauseke (HR 1.008 ja 95%: n luottamusväli 1,001-1,016; p = 0,032) ja CD68 /MAC387

+ /+ dual lauseke (HR 3,5 ja 95%: n luottamusväli 1,1-11; p = 0,029), joka liittyy merkittävästi DSS univariate analyysi, mutta yksikään markkereita, yksin tai yhdistelmänä, merkittävästi ennustettu tulos monimuuttuja analyysit.

keskustelu

Tässä tutkimuksessa osoitamme, että kasvaimensisäisenä makrofagi tiheys (CD68

+ ja MAC387

+ makrofageissa) on merkitsevästi liittyy perinteisiin korkean riskin ominaisuuksia, kuten korkea laatu ja kehittyneen T luokka BC. Lisäksi suuri makrofagi määrä oli merkitsevästi yhteydessä etenemisen riskiä, ​​että TUR-BT kohortti ja eloonjäämisen cystectomy kohortin mukaan yksiulotteista analyysejä. Vaikka yksittäinen makrofagimarkkereiden eivät olleet merkittäviä ennustajia monimuuttuja analyyseja, yhdistelmiä kahdesta markkereita (CD68 kanssa MAC387 tai CLEVER-1) tarjotaan riippumatonta varoituksia syntymässä olevista monimuuttuja mallien TUR-BT kohortti kun vaikuttavia tekijöitä selviytymistä analysoitiin. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagit eivät liittyneet BC kuolleisuutta, mutta korkea CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alus määrä sitä vastoin liittyi parantunut selviytymistä Yksiulotteisissa mallien TUR -BT kohortti.

korkea TAM tiheys on raportoitu olevan yhteydessä huonoon ennusteeseen oli erilaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia, kuten rintasyöpää, melanoomaa, peräsuolen syöpä, ja eturauhassyövän [13]. Hanada ja työtoverit osoittivat pienemmässä tutkimuksessa (23 MIBC ja 40 NMIBC tapauksissa) invasiivisia kasvain, joka oli korkeampi CD68

+ makrofagien laskee ja korkeamman TAM lukemat olivat yhteydessä korkeampia cystectomy, etäispesäkkeitä, verisuonten invaasio, ja köyhempi selviytyminen [14]. Äskettäin Sjödahl ja työtoverit tutkittu TAM on merkitystä MIBC käyttämällä kudosta mikrosirulla (TMA) kohdat on värjätty anti-CD3 T-solujen, anti-CD8 sytotoksisia T-soluja, anti-FOXP3 varten säätelijä-T-solujen (Tregs), ja kaksi makrofagi erityisiä markkereita, CD68 ja CD163. He totesivat, että kliinisessä vaiheessa yhdistettynä kasvain CD68 /CD3-suhde voisi olla mahdollinen väline ennustus [15]. Olemme kuitenkin huomanneet, että makrofagit esiintyvät klustereita kasvaimiin, ja siten käytetään kokonaisia ​​sijasta TMA on todennäköisesti tarkempi, koska TMA ytimet edustavat vain pieniä osia koko näytteen. Lisäksi jotkut potilaat tutkimuksessa olivat saaneet BCG tiputtamista tai neoadjuvanttikemoterapian, jotka ovat voineet vaikuttaa tuloksiin.

NMIBC kasvainten korkea TAM määrä on myös osoitettu olevan huonompi tulos ja vähemmän reagoivien BCG hoito [16-18]. Tulehduksellisten prosessien virtsarakon vastauksena BCG bakteerit ovat käytössä destruct kasvainkudoksen. Solut uroteelin reagoi hoitoon, joihin liittyy inflammatorinen Cascade ja vapauttaa sytokiinit, esimerkiksi interleukiini (IL) -8, ja tuumorinekroositekijä (TNF), ja neutrofiilejä tuhota pahanlaatuisia soluja [19]. Tutkimuksessamme potilailla, jotka saivat rakkoon laitteistot (BCG tai kemoterapiaa) suljettiin pois johtuen siitä, että nämä hoidot muuttaa tulehduksellinen microenvironment kasvainten ja näin voisi muuttaa tuloksia.

On olemassa useita haasteita BC hoidon . Toistumisen määrä NMIBC on korkea, ja usein menettelyt ja intensiivistä seurannan tulokset in BC on yksi kalleimmista syövät hoitoon [20]. Hoitovaihtoehtoja kehittynyt sairauksia ovat rajalliset ja uusia hoitoja tarvitaan, mukaan lukien uudet biomarkkerit diagnosoida aggressiivinen tapauksiin, jotka vaativat intensiivistä hoitoa. CD68, MAC387, ja CLEVER-1 /Stabilin-1, erityisesti kun niitä käytetään yhdessä, voitaisiin mahdollisesti käyttää tunnistamaan aggressiivinen tapauksissa joukossa BC potilailla. Nämä makrofagit voivat myös olla tavoitteita uusien hoitojen kehittyneen BC. Äskettäin PD-L1-inhibiittorit ovat osoittaneet potentiaalista tehoa metastaattisen BC, ja lisää tutkimusta BC immunologian tarvitaan [21].

käytetty vasta-aine useimmiten havaitsemiseksi TAM on yleiseurooppalainen makrofagimarkkeri CD68 ja se on osoitettu liittyvän huono selviytyminen BC [14]. Tässä tutkimuksessa käytettiin myös MAC387 havaita eri makrofagien populaatioissa. Yhdistyksen välillä korkea MAC387

+ makrofagien määrä ja huono tulos on raportoitu erilaisten kasvainten, kuten rintasyövän ja kolangiokarsinooma [22-24]. Parhaan tietomme, MAC387 on tutkittu vasta markkerina squamous erilaistumisen BC [25, 26], ja työmme on ensimmäinen havaita suhde MAC387

+ makrofagien tiheyden ja huono tulos BC potilailla. Molemmat MAC387

+ makrofagien ja kasvainsolujen arvioitiin, mutta määrä MAC387-positiivisia kasvainsoluja ei yhdistää eloonjäämistä (tuloksia ei ole esitetty). MAC387 tunnistaa myelo-liittyvä proteiini (MRP) 14 ja vähäisemmässä määrin MRP8 /MRP14 heterocomplex (kalprotektiinin). MRP14 on tulehdusta molekyyliä ilmaisi akuutin tulehduksen aikana viime aikoina soluttautua monosyytit /makrofagit, kun taas MRP8 ilmentyy makrofageissa aikana krooninen tulehdus. Kudosmakrofagien on osoitettu ilmaista MRP8 /MRP14 monimutkainen joissakin olosuhteissa: esimerkiksi paikoissa, kroonisen tulehduksen nivelreuma, sarkoidoosi, ja tuberkuloosi, mutta ei normaalissa kudoksessa ilman tulehdusta [27, 28]. Soulas ja työtoverit ovat pitäneet MAC387

+ solujen olevan tulehdusta edistävä ja kasvaimia torjuvaa M1-polarisoitu makrofagien [27]. Tämä ei kuitenkaan ole varmaa, ja on edelleen puute lopullisen pinnan merkkiaine tulehdusta tyypin 1 makrofageissa.

Lisäksi CD68 ja MAC387, käytimme CLEVER-1 /Stabilin-1 havaitsemiseksi tyypin 2 aktivoitu makrofagit. CLEVER-1 /Stabilin-1 on suuri scavenger reseptorin osajoukko immunosuppressiivista ja protumoral tyypin 2 makrofagien useita toimintoja [29, 30]. CLEVER-1 /Stabilin-1 ilmentyy myös tuovissa ja vievissä imusuonten ja sinimuotoista endoteelisolujen [10]. CLEVER-1 /Stabilin-1

+ makrofagien numerot eivät liittyneet elossaololuku BC, toisin kuin aiemmat tutkimukset peräsuolen syöpä [12]. Kiinnostavaa oli selkeä suhde matalan CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alus count ja kasvava kasvain vaiheessa ja korkeamman asteen. Lisäksi suurten CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alus count liittyi parempi eloonjääminen jälkeen RC BC potilailla. Syy CLEVER-1 /Stabilin-1

+ alukset toimivat suojaava muoti on epäselvä ja lisätutkimukset ovat perusteltuja. Parhaan tietomme, MAC387

+ makrofagien ja CLEVER-1 /Stabilin-1 ei ole tutkittu BC ennen.

Lisäksi mahdollinen ennustetekijöiden rooli makrofagimarkkereiden yksin, olemme tutkineet makrofagi väestön edelleen yhdistämällä kaksi markkereita. CD68 /MAC387

+ /+, CD68 /CLEVER-1

+ /+ ja MAC387 /CLEVER-1

+ /+ ryhmillä oli parempi OS vuonna TUR-BT väestö, ja CD68 /MAC387

+ /+ ja CD68 /CLEVER-1

+ /+ ryhmät olivat riippumattomia ennustavat tekijät. Koska markkereita havaita eri populaatioiden TAM (CD68 havaitsee makrofagit yleisesti, kun taas MAC387 tunnistaa tyypin 1 polarisoitunut makrofageja ja CLEVER-1 /Stabilin-1 havaitsee tyypin 2 makrofagit), käyttäen näitä markkereita yhdistelmänä voivat paremmin tunnistaa kasvaimia, jotka oli vinossa joko kohti M1 fenotyyppi (CD68

+ /MAC387

+ ja MAC387

+ /CLEVER-1

-) tai M2 tyyppi (CD68

+ /CLEVER-1

+ ja MAC387

– /CLEVER-1

+). Kuitenkin Tutkimuksessamme yleinen makrofagi laskennassa oli tärkein rooli ennustetta BC, ja yllättäen, näin oli riippumatta siitä makrofaagit pääasiassa tyypin 1 tai tyypin 2

Tämä tutkimus on tunnettuja rajoituksia takautuvasti kohorttitutkimuksissa. Oli pitkä seuranta-aika RC väestöstä ja joissakin kliinisissä käytännöt ovat saattaneet muuttua tänä aikana. Tänä aikana luokitusjärjestelmä BC muutettiin ja 2004 WHO /ISUP luokittelu määriteltiin vuoden 1973 WHO: n luokituksen.