Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

Koska matriksimetalloproteinaasi-2 (MMP-2) on tärkeä merkki kasvaimen pahanlaatuisuuden kehitimme alkuperäinen huumeiden muotoilustrategian, MMP-2 aktiivisuus riippuu ankkurointi antureista (MDAP), käytettäväksi MMP-2 aktiivisuus kuvantaminen, ja arvioi hyödyllisyyttä koetin

in vitro

ja

in vivo

kokeita.

Methods

suunniteltiin ja syntetisoitiin MDAP

1000, MDAP

3000, ja MDAP

5000, jotka koostuvat 4 itsenäistä osista: RI yksikkö (

111In hydrofiilisiä kelaatti), MMP-2 alustan yksikkö ( lyhyt peptidi), ankkurointiin yksikkö (alkyyliketju), ja ankkurointiin esto yksikkö (polyetyleeniglykoli (PEGn; jossa n likimääräinen molekyylipaino, n = 1000, 3000, ja 5000). Probe pilkkominen arvioitiin kromatografisesti jälkeen MMP-2 hoitoa . sisäänotto soluihin koettimien mitattiin sitten. radioaktiivisuus kertymistä tuumoriksenografteja arvioitiin suonensisäisen injektion jälkeen koettimet, ja koetin lohkaisu arvioitiin kasvaimen homogenaateissa.

tulokset

MDAP

1000, MDAP

3000, ja MDAP

5000 lohkaistiin MMP-2 pitoisuutena riippuvaisella tavalla. MDAP

3000 esikäsitelty MMP-2 osoittivat korkeampia kerääntymistä kasvainsoluissa, ja oli täysin estetty lisäkäsittelyä MMP-estäjä. MDAP

3000 näytteillä nopeasti verestä ja suuri kasvain kertymistä laskimonsisäisen injektion jyrsijämallilla. Lisäksi farmakokineettinen analyysi osoitti, että MDAP

3000 näytteillä huomattavasti hidas huuhtoutumista korko kasvaimia verta. Tietty osa pilkkoa MDAP

3000 olemassa tuumoriksenografteja

in vivo

.

Johtopäätökset

Tulokset osoittavat mahdollisen hyödyllisyyden meidän MDAP strategian kasvainten kuvantamiseen.

Citation: Temma T, Hanaoka H, ​​Yonezawa A, Kondo N, Sano K, Sakamoto T, et al. (2014) Investigation of MMP-2 Activity-Dependent ankkurointi Probe for Nuclear Imaging of Cancer. PLoS ONE 9 (7): e102180. doi: 10,1371 /journal.pone.0102180

Editor: Dominique Heymann, Faculté de médecine de Nantes, France

vastaanotettu: 21 helmikuu 2014; Hyväksytty: 16 Kesäkuu 2014; Julkaistu: 10. heinäkuuta 2014

Copyright: © 2014 Temma et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain JSPS KAKENHI Grant lukumäärä 22791189. osa tutkimuksen tukivat New Energy ja Industrial Technology Development Organization (NEDO), Japani. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kasvaimen etäpesäkkeiden tapahtuu, kun alaryhmä kasvainsolujen hankkii kyky murtaa tyvikalvon ja tunkeutua läpi tiheän verkostojen interstitiaalinen soluväliaineen (ECM) proteiineja [1]. Matrix (MMP) ovat suurin perheen entsyymien vastuussa hajottavien näiden eri ECM komponentteja. Koska MMP-2 on tällä hetkellä tunnustettu alatyyppi, joka on paras vakiintunut yhdessä kasvaimen pahanlaatuisuuden [2],

in vivo

kuvantamiseen sen toiminnan pitäisi olla hyödyllisiä kasvainten diagnosointiin. Niinpä tavoitteena oli kehittää uusi isotooppikuvantamisen anturi kykenee arvioimaan

in vivo

MMP-2 aktiivisuutta yksifotoniemissioto- (SPECT).

perin kehitetty uusi koetin muotoilustrategian joka käyttää MMP-2 aktiivisuus riippuu ankkurointi koetin (MDAP) (Fig. 1) havaitsemiseksi MMP-2: n aktiivisuuden tehokkaasti. Tämän MDAP: lla strategia, koetin oli tarkoitus lohkaista MMP-2 entsyymiaktiivisuus läheisyydessä kasvain, ja tehokkaasti loukkuun proksimaalisten kasvainsoluissa. Siten radioaktiivisuus taso havaitsema SPECT voitaisiin korreloida MMP-2 aktiivisuus kasvaimissa. Tässä tutkimuksessa olemme nimenomaan suunniteltu ja syntetisoitu MDAP

1000, MDAP

3000, ja MDAP

5000, joka koostuu RI yksikön (

111In DTPA), MMP-2 alustan yksikkö (lyhyt peptidi ) [3], ankkurointi yksikkö (alkyyli ketjut) [4], ja ankkurointi inhibition yksikkö (polyetyleeniglykoli (PEGn; jossa n ilmaisee likimääräinen painokeskimääräinen moolimassa, n = 1000, 3000, ja 5000) (taulukko 1). MDAP

CV, josta puuttuu PEG-osa, toimi verrokkina. Arvioimme toteutettavuus tämän lääkkeen muotoilustrategian ja hyödyllisyyttä koettimien

in vitro

ja

in vivo

.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

eläinkokeet suoritettiin vakiintuneiden ohjeiden mukaisesti ja hyväksytty Kyoto University animal Care Committee (Luvan numero : 2012-49, 2013-33). kaikki leikkaus suoritettiin isofluraanianestesiassa, ja kaikki pyrittiin minimoida kärsimyksen.

Yleiset

aminohappojohdannaiset ostettiin Watanabe Chemical Industries ( Hiroshima, Japani) ja Iris Biotech GmbH (Marktredwitz, Saksa). Matrix laserdesorptio /ionisaation massaspektrometrian (MALDI-MS) suoritettiin jossa AXIMA-CFR Plus laite (Shimadzu Corporation, Kioto, Japani). Käänteisfaasi-korkean suorituskyvyn nestekromatografia (RP-HPLC) suoritettiin käyttäen Shimadzu-HPLC-gradientti-järjestelmä (LC-20AD, Shimadzu Corporation) on varustettu Cosmosil 5C18-AR-II-pylvääseen (10 x 250 mm, yhtiön Nacalai Tesque, Inc. , Kyoto, Japani). Tuotteet eluoitiin lineaarisella gradientilla aloittaen 50% liuotinta B, joka nousi 80%: 15 min (liuotin A: 0,1% trifluorietikkahappo vedessä [v /v]; liuotin B: 0,1% trifluorietikkahappoa asetonitriilissä [v /v ]) virtausnopeudella 4,0 ml /min. Kasvaimen metaboliitin analyysi, tuotteet eluoitiin lineaarisella gradientilla aloittaen 50% liuotinta B, joka nousi 80% 30 minuutin aikana virtausnopeudella 2,0 ml /min.

valmistus koettimet (taulukko 1)

Fmoc-Dap (Boc) -10-ADC-Gly-Pro-Leu-Gly-wang-hartsi (Dap: 2,3-diaminopropionihappo, 10-ADC: 10-amino-dekaanihappo) oli syntetisoitiin Fmoc-kiinteän faasin peptidisynteesin menettelyä käyttäen peptidisyntetisaattoria (PSSM-8, Shimadzu Corporation), jossa

N

,

N ’

-diisopropylcarbodiimide (1,2 ekv),

N

,

N

-di-isopropyylietyyliamiinia (1,0 ekv), ja 1-hydroxylbenzotriazole (1,0 ekv) reagensseina [5]. Sen jälkeen kun Fmoc-ryhmän poisto 20% piperidiinillä

N

,

N

dimetyyliformamidissa, palmitiinihappo saatettiin reagoimaan samalla tavalla edellä, jolloin saadaan palmitoyyli-Dap (Boc) -10-ADC-Gly -Pro-Leu-Gly-wang-hartsi. Palmitoyyli-Dap (Boc) -10-ADC-Gly-Pro-Leu-Gly-Val-Arg (PBF) -Gly-Lys (ivDde) ​​-PEG

n-amidihartsia (n = 1000, 3000, tai 5000 ) toimitti Scrum Inc. (Tokio, Japani). Peptidin suojauksen poisto ja lohkaisu hartsista lisättiin samanaikaisesti suoritettiin käyttämällä trifluorietikkahappoa /etaaniditiolia /vesi /tri-isopropyylisilaania (95 /2,5 /2,5 /1, v /v). Raakapeptidit puhdistettiin RP-HPLC: llä, jota seurasi lyofilisointi. Puhdistettu yhdiste reagoimaan

p

-SCN-Bn-DTPA (2 ekv)

N

,

N

dimetyyliformamidissa (1 ml) ja

N

,

N

-di-isopropyylietyyliamiinia (20-100 pl) pH: n säätämiseksi liuoksen (pH 6), ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa yön yli. Radioleimattu esiasteet puhdistettiin RP-HPLC: llä ja karakterisoitiin massaspektrometrialla. [

111In] sis

3 (5,55 MBq 100 pl HCl-liuosta, Nihon Medi-Physics Co., Ltd., Japani) lisättiin kuhunkin puhdistettua esiaste (2 nmol) 0,1 M asetaattipuskurissa (pH 6,0, 50 ui) ja seosta inkuboitiin huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajan. Radiokemiallinen puhtaus arvioitiin RP-HPLC varustettu radioaktiivisuusdetektori.

mittaus jakaantumiskertoimia

Kokeellinen määritys koetin jakaantumiskertoimet (log P-arvot) suoritettiin 1-oktanoliin ja 0,02 M fosfaattipuskurissa, pH 7,4, jossa nämä kaksi vaihetta ovat esikyllästetty toistensa kanssa. 1-oktanoli (200 ui) ja fosfaattipuskuria (200 ui) pipetoitiin LoBind Eppendorf-putkiin, jotka sisältävät 0,37 MBq koettimien. Putkea vorteksoitiin 10 sekunnin ajan, ja sentrifugoitiin (5 min, 4000 x

g

). Alikvootit (50 pl) päässä 1-oktanoli ja puskuri faasit siirrettiin kahteen koeputkeen radioaktiivisuus laskenta kanssa Nal hyvin tyypin tuikelaskimella (1470 WIZARD, Perkin Elmer, Kanagawa, Japani). Erottumiskerroin laskettiin käyttämällä yhtälöä P = (pulssia /ul 1-oktanoli) /(pulssia /ul puskuriin).

lohkaisu määritys

Ihmisen yhdistelmä-MMP-2-proteiinia ( 902-MP-010, R 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

valmistaminen antureista

MDAP

1000, MDAP

3000, MDAP

5000 ja MDAP

CV saatiin yli 95%, 97%, 95%, ja 98% radiokemiallinen puhtaus, vastaavasti (Fig. 2). Spesifinen radioaktiivisuus koettimien arvioitiin olevan 2,8 MBq /nmol, joka oli riippuvainen radioaktiivisuudesta [

111In] sis

3 käytetään radioleimaukseen menettelyyn. Log P arvot MDAP

1000, MDAP

3000, MDAP

5000 ja MDAP

CV oli -0,56 ± 0,13, -0,95 ± 0,12, -1,04 ± 0,16 ja 0,29 ± 0,07, tässä järjestyksessä.

RI kaavioita (a) MDAP

1000, (b) MDAP

3000, (c) MDAP

5000, ja (d) MDAP

CV näkyvät UV kaavioita vastaavien ei-radioaktiivista yhdistettä.

in vitro -tutkimus

Kuten kuviossa. 3a, MDAP

1000 osoitti korkean radioaktiivisuuden kertyminen kasvainsoluissa ja tasoja, jotka olivat samanlaisia ​​MDAP

CV, kun taas MDAP

3000 ja MDAP

5000 osoitti huomattavasti pienempi radioaktiivisuutta. MMP-2 lohkaista MDAP

1000, MDAP

3000 ja MDAP

5000 pitoisuudesta riippuvaisella tavalla (Kuva. 3b). MDAP

3000 esikäsitelty MMP-2 kertynyt soluissa korkeammille tasoille, kun taas lisähoitoa kanssa MMP-estäjä esti täysin tämän suosia (Fig. 3c).

(a) Cellular kertyminen MDAP

1000, MDAP

3000, MDAP

5000 ja MDAP

CV arvioidaan radioak-. (B) Pilkkominen (%) on MDAP

1000, MDAP

3000, ja MDAP

5000 johtuvat MMP-2 hoitoa. -Arvot arvioitiin käänteisfaasi-HPLC: llä. (C) Cellular kertyminen MDAP

3000 tai ilman MMP-2-proteiinin ja MMP-estäjä (GM6001).

In vivo -tutkimus

Radioaktiivisuus jakelu profiilit laskimoon annetun MDAP

1000, MDAP

3000 ja MDAP

CV on esitetty taulukoissa 2, 3 ja 4, vastaavasti. Vertailla koetin farmakokinetiikkaa, muutokset radioaktiivisuuden veren ja kasvaimen piirretään ajan funktiona annon jälkeen (Fig. 4a, b), ja kasvaimen: veri-suhteet (Fig. 4c). MDAP

3000 näytteillä nopeasti verestä (Fig. 4a) ja korkea kasvaimen kertymistä (Fig. 4b). Siten joukossa koettimet MDAP

3000 saavutetaan huomattavasti korkeampi kasvaimen veri-suhteet (2,74 ± 0,89 24 h, taulukko 3 ja kuvio. 4c). MDAP

1000 oli myös nopea verestä (Fig. 4a), mutta oli pieni kasvain kertymistä (Fig. 4b). Samaan aikaan MDAP

CV osoitti hitaasti verestä (Fig. 4a) ja alin kasvain: veri-suhteet yli koejakson (0,30 ± 0,02 24 h, taulukko 4 ja kuvio. 4c). Farmakokineettiset analyysejä koko kehon (taulukko 5) ja kasvaimia (taulukko 6) paljasti edellä mainitut seikat osoittavat biojakaantumi- data selvemmin. Kuten taulukossa 5, MDAP

3000 ja MDAP

CV näkyy samankaltainen jakelun suuruisia MDAP

CV osoitti hitaampaa kokonaispuhdistumien sekä pidemmät puoliintumisajat ja keskimääräinen viipymäaika kuin MDAP

3000. Taulukossa 6 esitetään noin seitsemän kertaa hitaampi huuhtoutumisen nopeudella MDAP

3000 kasvain (k2 = 1,2 × 10

-3 min

-1) verrattuna MDAP

CV (k2 = 8,6 × 10

-3 min

-1). Lisäksi, HPLC-analyysi tuumorit leikattiin 3, 6 ja 24 tuntia suonensisäisen injektion jälkeen MDAP

3000 osoitti tietty osa MDAP

CV olemassa kasvain (Fig. 5, valkoinen nuoli). Ehjä muoto MDAP

3000 merkitty mustalla nuolella katosi ajan, kuten on esitetty HPLC kaaviossa. Tietty osa MDAP

CV oli myös läsnä sisällä kasvain jälkeen kasvaimensisäistä injektion MDAP

3000, joka voitaisiin estää estäjähoidon (Fig. 6). Muut huiput havaittiin noin 5-10 min voisi edustaa edelleen aineenvaihduntatuotteita, jotka tuotetaan solujen sisällä. MMP-2 entsyymiaktiivisuus kasvaimen homogenaattia vahvistettiin tsymografialla (Fig. 7). Efektiivinen annos MDAP

3000 arvioitiin biojakaantumi- tiedot olivat 5,08 x 10

-2 mSv /MBq.

(a) Aika radioaktiivisuus käyriä veressä. (B) aika radioaktiivisuus käyrien kasvaimia. (C) Kasvaimen veri radioaktiivisuuden suhde.

musta ja valkoinen nuolet osoittavat ehjä ja pilkotun huiput, tässä järjestyksessä.

keskustelu

tässä tutkimuksessa testasimme toteutettavuutta ja hyödyllisyyttä meidän uusi lääkekehityksessä strategiaa, jossa MMP-2 aktiivisuus riippuvaisen ankkurointia koetin MDAP käytetään MMP-2 aktiivisuus kuvantaminen syövässä. Molemmat

in vitro

ja

in vivo

kokeet osoittivat, että MDAP

3000 näkyy solukalvon ankkurointiominaisuudet seuraavat alustan lohkaisu MMP-2 kasvaimissa, mikä johti hieman hitaammin huuhtoutuminen radioaktiivisuuden kasvaimista. Sinänsä olemme menestyksekkäästi osoittanut mahdollisesta soveltamisesta meidän MDAP strategian kasvainten kuvantamiseen.

aikana alkuvaiheessa sondirakenne, valitsimme kaksinkertainen alkyyliketju kuin ankkurointi laite perustuu aikaisemmin käy ilmi, että kaksinkertainen alkyyli ketjut olivat parempia kuin yhden alkyyliketjuja solukalvon ankkurointia. Pituus kaksinkertainen alkyyliketjun (palmitoyyliryhmä ja 10-amino-dekaanihappo in koetin rakenteet) valittiin perustui tuloksiin alustavan solun sitova kokeilu. Sitten yhdistetty muihin osiin täyttämään vaatimukset MDAP. Erityisesti

111In valittiin radioleimaukseen koska sen yksinkertainen ja nopea radiosynthesis hydrofiilisellä kelatoivaa ainetta (DTPA) konjugoidun esiaste miedoissa olosuhteissa [9]. Niistä aiemmin raportoitu MMP-2 substraatin peptidit, Pro-Leu-Gly-Val-Arg-Gly oli valittu siten, että aminopään tähdettä (Pro-Leu-Gly) säilyttäisivät radioaktiivisuuden katkaisun jälkeen ja ei estä ankkurointi ominaisuus kaksinkertaisen alkyyliketju, [10]. PEG on valittu sillä perusteella, hydrofiilisyyden ja steerisen esteen, että se voisi toimia inhibiittorina MDAP koettimien ja kolme PEG-molekyyli tyyppiä (MW: 1000, 3000, ja 5000) testattiin määrittää optimaalisen molekyylipainon olipa kyse inhibitive kapasiteettia ankkurointia ja kestävyys MMP-2 pilkkominen. Tämän seurauksena olemme onnistuneesti saatu radioaktiivisesti MDAP antureista suurella radiokemiallinen saanto ja puhtaus, joka mahdollisti niiden käyttöä

in vitro

ja

in vivo

kokeissa ilman lisäpuhdistusta.

PEG käytetään usein muokata molekyylinäytteitä muuttamaan hydrofiilisyyden ja farmakokinetiikkaa [11], [12]. Näin ollen, odotimme sekä hydrofiilisyyttä ja steerisen esteen PEG ominaisuuksien muuttamiseksi MDAP. Cellular kertymistä tulokset selkeästi jaettu koettimet osaksi korkean kertyminen ryhmä (MDAP

1000 ja MDAP

CV) ja alhainen kertymisen ryhmä (MDAP

3000 ja MDAP

5000), jossa koetin hydrofiilisyyden vähitellen kasvaa, molekyylipaino PEG, kuten on esitetty saadut log P -arvot. Sellaisenaan steerisen esteen sijasta hydrofiilisyyden opetetaan PEG toimi inhibiittorina ankkurointia koettimen osan. Vaikka MDAP

1000, MDAP

3000, ja MDAP

5000 lohkaistiin MMP-2 odotetusti hajoavuuden on MDAP

5000 oli melko alhainen, mikä osoitti, että PEG puolilla koetin haittasi vuorovaikutuksia muiden molekyylien kanssa, mukaan lukien MMP-2-proteiinin. Siten

in vitro

kokeet osoittivat, että MDAP

3000 tunnustettiin mahdollinen sopiva koetin edelleen

in vivo

arvioinnissa.

in vivo

biojakaantumi- tutkimus osoitti nopeasti verestä ja korkea kasvain otto MDAP

3000 suonensisäisen, kun taas MDAP

CV osoitti korkean radioaktiivisuuden sekä veren ja kasvaimia. Siten huomattavasti suurempi kasvain veren radioaktiivisuuden suhde (T /B-suhde), kuvantamisen indeksi [9], saatiin varten MDAP

3000 ryhmä, joka osoittaa ylivoimainen ominaisuudet MDAP

3000 kuvantamisaineena

in vivo

. Efektiivinen annos MDAP

3000 arviointiin biojakaantumi- data oli hyväksyttävää käytöstä MDAP

3000 kuvantamisaineena [13]. Toisaalta, MDAP

CV osoitti korkea radioaktiivisuus jäljellä veressä, mikä hiljaista spesifinen sitoutuminen seerumin kanssa proteiineihin ja /tai verisolut. Tämä tulos viittaa siihen, että suonensisäisesti annettujen MDAP

CV voi sitoutua seerumin proteiineihin ja esiintyy välitilaan kasvainten monimutkainen muoto. Tätä mahdollisuutta osoitti myös MDAP: lla

CV on alhaisin T /B-suhteet (alle 0,3) yli koeajan. MDAP

CV biojakaantumi- tulokset osoittivat, että MDAP

CV syntyy muissa kudoksissa, kun systeemisen MDAP annon olisi harvemmin uudelleen kasvaimiin. Siten kasvain kertyminen MDAP

3000 ei ollut peräisin uudelleenjako pilkkoa MDAP

CV koska MDAP

3000 osoitti nopea verestä ja kasvu T /B-suhde ajan kuluttua laskimoon. Tästä huolimatta oli mitattavissa prosenttiosuus MDAP

CV nykyiset kasvaimissa jälkeen laskimoon ja kasvaimensisäisenä injektioita MDAP

3000, ja MDAP

CV johtuvat kasvaimensisäistä injektion MDAP

3000 oli jonkin verran vähentynyt MMP estäjä. MDAP

CV voidaan tuottaa kasvaimen seurauksena MDAP

3000 lohkaisu MMP-2. HPLC-analyysit leikattiin kasvaimiin osoittavat myös keskittymisen ja säilyttäminen MDAP

3000 seurasi vähittäinen hajoaminen hydrofiilisiin metaboliiteiksi kasvaimia. Se on varsin kohtuullinen päässä MDAP strategia, farmakokineettinen analyysi tuotti huomattavasti hitaampi huuhtoutumiskauden nopeudella (k2 arvo) MDAP

3000 verrattuna MDAP

CV, koska hitaampi huuhtoutumista korko MDAP

3000 ilmaisee MDAP

3000 radioaktiivisuus talteenotto kasvaimissa. Koskevat rajoitukset tässä tutkimuksessa, suoraa näyttöä, että MDAP

3000 on ankkuroitu solukalvoon jälkeen MMP-2-aktivaation tuumorikudoksissa ei saatu. Sen arvioimiseksi, onko MDAP anturi on ankkuroitu solukalvon jälkeen MMP-2 aktivointi täsmällisemmin, lisätutkimuksia, kuten HPLC-analyysi kalvofraktiot kasvainsolut yksinään tai konfokaalimikroskopia lähestyy käyttämällä sopivaa fluoroforin tuodaan MDAP

3000 ovat tarvittu. Kuitenkin

in vitro

ja

in vivo

tutkimuksissa saatiin näyttöä MMP-2 riippuvainen koetin pilkkominen, radioaktiivisuuden retentio kasvainkudoksissa ja hidas huuhtoutumista tuumorikudoksia, joka osoittaa mahdollista soveltamista MDAP strategia.

Vaikka fluoresenssin aktivoituva antureista on raportoitu MMP kuvantamiseen [14] – [17], ydin- lääketieteellisen kuvantamisen on hyvät mahdollisuudet

in vivo

sovelluksissa, koska se voi kvantitatiivisesti havaita signaaleja kudoksista syvällä elin, mutta myös voidaan soveltaa käytettäväksi syövän hoitomuotoja, joissa α, β, tai kaira elektroni aiheuttajia [18], [19]. Koska MDAP

3000 voisi mahdollistaa selektiivisen lukemisen aktivoitua MMP-2 subpopulaatio johtuen signaalin vahvistus verrattuna MMP sitova antureista, MDAP

3000 voisi olla mahdollinen lyijy yhdiste käytettäväksi tulevissa sovelluksissa. Lisätutkimukset vertailla MDAP

3000 muiden radioleimattujen MMP kuvantamisen koettimet perusteltavissa [20], [21].