Krooninen sairaus

tiivistelmä

syöpään liittyvän fibroblasteja (CAF) on ratkaiseva rooli säätelyssä syövän etenemiseen, mutta molekyyli tekijä joka hallitsee kasvain säätelevän roolin CAF edelleen tuntematon. Hiiren melanooma malli, jossa eksogeeninen melanooma-soluja ei siirretty iholla kaksi riviä hiiriä, joissa geneettinen aktivointia tai inaktivaatio Notch1 signaloinnin erityisesti esiintyy luonnollisessa isännässä strooman fibroblastit, olemme osoittaneet, että Notch1 signalointia voitaisiin määrittää kasvaimen edistäviä tai kasvain-tukahduttaa fenotyypin CAF. CAF kirjanpitoarvoja kohonnut Notch1 toimintaa merkittävästi esti melanooma kasvua ja invaasiota, kun taas ne, joilla on nolla Notch1 edistänyt melanooma hyökkäystä. Nämä havainnot tunnistaa Notch1 reitin kuin molekyyli tekijä, joka ohjaa säätelevän roolin CAF melanooman ihon kasvua ja invaasiota, paljastus Notch1 signalointi mahdollisena terapeuttisena kohteena melanooman ja mahdollisesti muita kiinteitä kasvaimia.

Citation: Shao H , Kong R, Ferrari ML, Radtke F, Capobianco AJ, Liu ZJ (2015) Notch1 Pathway Activity Määrittää Regulatory Role of Cancer-Associated fibroblastien Melanooma kasvu ja Invasion. PLoS ONE 10 (11): e0142815. doi: 10,1371 /journal.pone.0142815

Editor: Claudia Daniela Andl, Vanderbilt University, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 18 elokuu 2015; Hyväksytty: 27 lokakuu 2015; Julkaistu: 12 marraskuu 2015

Copyright: © 2015 Shao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Bankhead-Coley Cancer Research Program (Award # 09BN-11), Naisten Cancer Association ja sisäisiä varoja Miamin yliopiston Z . Liu.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

CAF ovat strooman fibroblastit alueella asuville ja läheisyydessä kasvaimen massan. Ne ovat pääosin aktivoitu paikallisten lepotilassa fibroblastien ja palvelukseen kiertävä luuytimen mesenkymaaliset kantasolut (MSC) [1,2]. CAF ovat mukana säännellä kasvainprogression tuomalla esiin liukoisen tekijät, soluväliaineen (ECM) [3] ja eksosomeiksi [4]. Niiden panos ensisijaisen ja toissijaisen maligniteettien [5,6] sekä osallistuu lääkeresistenssin ja kasvaimen uusiutumisen [7,8] tehdä CAF potentiaalisia hoitotoimenpiteiden kasvaimen microenvironment (TME). Huolimatta laajasta todisteita ratkaiseva kasvain säätelevä rooli CAF, miten asema määräytyy edelleen mysteeri. Me ja muut aiemmin havaittu, että Notch1 reitin aktiivisuus korreloi käänteisesti että fibroblasteissa. Notch polku on matala lisääntyvissä fibroblasteissa, kun taas korkea lepotilassa fibroblasteissa [9]. Menetys

Notch1

hiiren alkion fibroblasteissa (MEF) johti nopeammin solujen kasvua ja liikkuvuus tasolla, kun taas Notch1 aktivointi hidastunut solujen kasvua ja liikkuvuuteen ihmisen fibroblastien [9]. Johdonmukaisesti, Notch aktivointi indusoi solusyklin pysähtymisen ja apoptoosin MEF [10]. Vuonna -tuumoriksenografti hiiri malleja, co-istutettu kokeellinen ihmisen ihon fibroblasteista kuljettavat korkea Notch1 aktiivisuus estyy melanooman kasvun ja angiogeneesin [11], mikä osoittaa, että Notch1 aktivointi antaa kasvaimeen tukahduttava fenotyyppi kokeellisista CAF. Nämä tulokset viittaavat keskeinen rooli Notch signalointia säätelevät funktiona fibroblasteissa. Kuitenkin fibroblastien tutkittu näissä aiemmissa tutkimuksissa eivät ole todellisia tai luonnollista CAF. Täällä käytettiin hiiren uuden malleja tutkia roolia Notch1 signalointi määritettäessä säätelevän roolin luonnon isännän CAF melanooman kasvun ja invaasion.

Materiaalit ja menetelmät

Hiiret

Notch1

loxP /loxP

hiiriä kuvattu [12].

ROSA

LSL-N1IC + /+

(# 008159) ja

Fsp1

.

Cre

+/-

(# 012641) hiiret hankittiin The Jackson Lab (Bar Harbor, ME). Kaikki nämä hiiret ovat C57BL6 tausta. Gain-Of-toiminto Notch1 (GOF

Notch1:

Fsp1

.

Cre

+/-

;

ROSA

LSL-N1IC + /+

) ja Loss-Of-toiminto Notch1 (LOF

Notch1:

Fsp1

.

Cre

+ /-

;

Notch1

LoxP /LoxP + /+) linjat luotiin risteyttämällä

ROSA

LSL-N1IC + /+

ja

Notch1

loxP /loxP + /+

kanssa

Fsp1

.

Cre

+/-

hiiriä, ja myöhemmin rajan

Fsp1

.

Cre

+/-

;

ROSA

LSL-N1IC +/-

jossa

ROSA

LSL-N1IC + /+

hiirillä ja

Fsp1

.

Cre

+/-

;

Notch1

loxP /loxP +/- kanssa

Notch1

loxP /loxP + /+

hiirille. GOF

ctrl (

FSP1

.

Cre

– /-

; ROSA

LSL-N1IC + /+) ja LOF

ctrl (

FSP1

.

Cre

– /-

; Notch1

LoxP /LoxP + /+ ) hiiriä käytettiin kontrollina. Hiiriä pidettiin DVR eläinyksikön standardiolosuhteissa. Hiiret nukutettiin kaikkien kirurgisten mukaan ketamiini /ksylatsiinin seosta (100/10 mg /kg, IP), ja kuvantaminen menettelyjä hengittämisestä 3% isofluraania kaasua, ja uhrattiin CO2 kammiossa. Institutionaaliset eläinten hoidon ja käytön komitea yliopistossa Miamin hyväksyi kaikki eläimen menettelyjä.

Hiiri Ihomallissa melanooman

Hiiren melanoomasoluja, B16-F10 (ATCC

®, CRL-67345

TM), stabiilisti transdusoitu Luciferase 2 (Luc2) /lentivirus viljeltiin täysin DMEM. Kasvaimen siirteen kokeita, 5 x 10

5 Luc2

+ /B16-F10-solut suspendoitiin 0,1 ml: aan suolaliuosta ympättiin (

s

.

c

.

)

on selkä ihoon 6 viikkoa vanha GOF

Notch1 vs. GOF

ctrl ja 8 viikon ikäisille LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. B-16-F10 ovat peräisin C57BL6 hiiri ja voi olla ksenosiirrettyjä on luotu GOF, LOF ja valvonta hiirillä, joilla on C57BL6 tausta. Hiiret tapettiin viikko 3 kuluttua siirtämisestä. Resektoitiin kasvaimet punnittiin. Melanooma kasvu arvioitiin perustuen kasvaimen painon ja positiivisuus Ki67 soluproliferaation markkeri mitattuna immunofluoresenssilla kasvainsoluissa, kun taas melanooman paikallinen invaasio arvioitiin histologinen arviointi kudosleikkeiden of resekoituun melanooma.

Histologia, Immunofluoresenssitesti (IF) Western blot

H 0,05.

Tulokset

Notch1 aktivaatio CAF tukahduttaa melanooman kasvun

Expression of fibroblasti-spesifistä proteiinia -1 (FSP1, jota kutsutaan myös S100A4) on yleensä vain fibroblasteissa [14,15].

FSP1

.

Cre

hiiriä menestyksellisesti käytetty luomaan null alleelien fibroblasteissa varten TGFli tyypin II reseptoreita [16], EP4-reseptoreihin [17], ja PTEN [18]. Loimme 1

st pari GOF

Notch1 vs. GOF

ctrl hiirillä. GOF

Notch1 hiiret olivat elinkelpoisia kunnes työssä melanooman ihonsiirto kokeissa kahden kuukauden kuluessa. Kehonsa ulkonäkö ja ihokudosta histologia, mukaan lukien dermis jossa iho fibroblastit ensisijaisesti asuvat, näyttivät normaaleilta (S1A kuvio).

Jotta voidaan tutkia roolia CAF korkea Notch1 aktiivisuus säätelyssä melanooman kasvuun, 5 x 10

5 Luc2 + /B16-F10-solut ympättiin iholle GOF

Notch1 vs. GOF

ctrl hiirillä. Tässä mallissa, solukomponenteista koko kasvaimen strooman, mukaan lukien CAF, jotka koostuvat luonnon isäntäsoluissa. Kasvaimen etäpesäkkeiden seurattiin koko kehon IVIS skannaus viikko 3 kasvainten rokotukset. Ihokasvainten resekoitiin painotettuna ja alistettiin immunohistokemiallista analyysiä jälkeen IVIS skannauksen.

IF värjäys iholeikkeiden kuvasi ahtaissa ja kohonnut ilmentyminen N1

IC ytimet FSP1

+ fibroblasteissa GOF

Notch1 hiirillä verrattuna GOF

ctrl hiiriä (kuvio 1A), mutta ei viereisen ihon lihaksen soluissa (erityisesti lihassolut esitetään autofluorisaatiota vielä ole ydin- signaalit olivat havaittavissa). Samoin Hey1 ekspressio lisääntyi ytimet FSP1

+ ihon fibroblasteissa GOF

Notch1 hiiriä suhteessa GOF

ctrl hiiriä (S1B kuvio). Lisäksi ilmaisu siirtogeenin koodaaman mutantti N1

IC-proteiinia (muN1

IC: PEST domain-katkaistu N1

IC, 59 Kd, (

ROSA

LSL -N1IC + /+

, The Jackson Lab: # 008159)) in ihon GOF

Notch1 hiiriä vahvistettiin Western-blottauksella (kuvio 1 B). Nämä tulokset osoittivat tehokasta Cre-välitteisen erityinen ilmaisu N1

IC ja Notch polku aktivoinnin ihon fibroblasteissa.

. Edustavia kuvat osoittavat ilmentymistä N1

IC ytimet (nuolenpäitä huomautti) on FSP1

+ ihon fibroblasteissa GOF

Notch1 vs. GOF

ctrl hiirillä. B. Expression siirtogeenin koodaaman muN1

IC (59 Kd), ihon ja GOF

Notch1 hiirillä havaittiin Western-blottauksella. p-aktiini käytettiin latauskontrollina. C. Melanooma kasvu hidastuu vuonna GOF

Notch1 hiiriä (n = 8 /ryhmä). Viisi edustavat kuvat resektoitiin kasvainten /ryhmä näytetään. D. Oleellisesti vähemmän Ki67

+ kasvainsoluja (Luc2

+) kohti HPF melanooman välillä GOF

Notch1 kuin GOF

ctrl hiirillä. E. lisäkasvuaktiivisuus melanoomasolujen (Ki67

+) on erityisen alhainen alueella (merkitty) vieressä CAF (FSP1

+) in GOF

Notch1 hiirillä. Kvantitatiivinen ovat laskee 5 HPF per jakso ja 5 jakso /kasvain. Aineisto analysoitiin tilastollisesti käyttämällä kaksisuuntaisella Studentin

t

-testin ja ilmaistiin keskiarvona ± SD.

Melanooma kasvu GOF

Notch1 hiirillä hidastui merkittävästi verrattuna sen, että GOF

ctrl hiiriä (kuvio 1 C). Tasaisen oli huomattavasti vähemmän Ki67

+ kasvainsoluja (Luc2

+) melanooman kudoksissa GOF

Notch1 niinkään GOF

ctrl hiiriä (kuvio 1 D). Proliferatiivinen aktiivisuus (Ki67 positiivisuus) melanoomasolujen oli erityisen heikompi, kun vieressä CAF (kuvio 1 E), mikä viittaa siihen, että CAF kuljettavat korkea Notch1 aktiivisuus GOF

Notch1 hiirissä voisi vapauttaa tuumoria tukahduttavan tekijä (t). Nämä tulokset osoittivat, että Notch1 aktivointi antaa kasvaimeen tukahduttava fenotyypin CAF.

Notch1 aktivaatio CAF tukahduttaa melanooman invaasio

Koska leviämisen melanoomasoluja on vuorovaikutuksessa fibroblastien sijaitsevat ihon dermis (ja läheisyydessä Siirto tehty melanooma), fibroblasteissa voi olla merkittävä vaikutus melanooman levittämiseen. Olemme edelleen tutki vaikutusta CAF melanooman invaasio ja etäpesäkkeiden GOF

Notch1 hiirillä. Melanooma paikallinen invaasio arvioitiin histologinen arviointi kudosleikkeiden of resekoitu melanooma. H 2C). Nämä tiedot osoittavat, että CAF in GOF

Notch1 hiiret ovat heikentyneet melanoomaan hyökkäystä.

.

Vasen

: vähentynyt kasvain maihinnousu GOF

Notch1 verrattuna GOF

ctrl hiirillä.

Oikea

: kaksi edustavaa H & E-kuvia tuumorisektioiden (n = 8 /ryhmä). Katkoviivat osoittavat kasvaimen rajoja. Nuolet osoittavat tunkeutuvat syöpäsoluja. Prosenttiosuus invaasio perustuu tuloksiin H & E-värjäystä pienitehoisia kenttiä (LPF) kunkin kasvaimen osassa. B. fibroblastien melanooman kapselissa on alhaisempi proliferatiivinen aktiivisuus (vähemmän Ki67

+ /FSP1

+ solut) GOF

Notch1 kuin GOF

ctrl hiirillä. C. kvantitointi Ki67

+ fibroblastit /HPF vuonna melanooman kapselin GOF

Notch1 (musta palkki) vs. GOF

ctrl (valkoinen palkki) hiirillä. Tulokset ovat laskee 5 HPF per jakso ja 5 jakso /kasvain. Aineisto analysoitiin kaksisuuntaisella Studentin

t

-testin ja ilmaistiin keskiarvona ± SD.

Null

Notch1

valuuttalisien ei vaikuta melanooman kasvuun

roolin tutkimiseksi CAF null Notch1 säätelyssä melanooman kasvun ja invaasio, loimme 2

toinen pari LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. LOF

Notch1 hiiret olivat myös kannattavia koko melanoomaa ihonsiirto kokeiluja ja kehonsa ulkonäköön ja ihon kudosten histologia näyttivät normaaleilta (S2A kuvio).

N1

IC ja Hes1 oli havaitsematon FSP1

+ iho fibroblasteissa LOF

Notch1 hiiret taas hieman havaittavissa ihon LOF

ctrl hiiriä (kuvio 3A, S2B kuvassa). N1

IC oli myös havaittavissa fibroblasteissa klo melanooman kapseli LOF

Notch1 hiiriä (melanooma-solut ilmentävät korkeita N1

IC kuten aiemmin raportoitu [13], joka toimii sisäisenä kontrollina N1

IC lauseke), mutta niukasti havaittavissa LOF

ctrl hiiriä (kuvio 3B). Nämä tulokset osoittavat, inaktivoidun tilan Notch1 signalointi aiheuttaman

Notch1

poisto fibroblasteissa Löf

Notch1 hiirillä vs. perustason tilan Notch1 signaloinnin fibroblasteissa LOF

ctrl hiirillä. Lisäksi Western blotting-analyysi validoitu onnistunut poistaminen Notch1 ihon fibroblasteissa LOF

Notch1 hiirillä. Expression täyspitkän of Notch1 (271Kd) oli havaitsematon LOF

Notch1 hiirillä, vaikka oli vähäistä läsnäoloa N1

IC (120 kD) (kuvio 3C). Marginaalinen tasot N1

IC ihon LOF

ctrl hiiret syyttää läsnäolon N1

IC ei-fibroblastien ihokudosta.

. Huomaamaton vs. marginaalisesti havaittavissa N1

IC ilmaisun ihon fibroblasteissa LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. Arrowheads viittaavat tumavärjäystä N1

IC fibroblasteissa. B. havaitaan paikallistamattomasti vs. havaittavissa N1

IC todennut nuolenpäin fibroblasteissa klo melanooman kapseli LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. C. havaitaan paikallistamattomasti koko pituudeltaan Notch1 proteiinia (271Kd) ja vähäinen määrä N1

IC (120 Kd, joka oli todennäköisesti esitetään pitkäaikaisissa fibroblastien) ihon kudoksessa LOF

Notch1 hiirillä oli näytteillä Western blotting-analyysi . p-aktiini käytettiin latauskontrollina. D. Melanooma kasvu on verrattavissa LOF

Notch1 ja LOF

ctrl hiiriä (n = 8 /ryhmä). Viisi edustavat kuvat kasvainten /ryhmän osoitti. E. numerot Ki67

+ kasvainsoluja vertailukelpoisia LOF

Notch1 (musta palkki) ja LOF

ctrl (valkoinen palkki) hiirillä. Kvantitatiivinen ovat laskee 5 HPF per jakso ja 5 jakso /kasvain. Aineisto analysoitiin tilastollisesti käyttämällä kaksisuuntaisella Studentin

t

-testin ja ilmaistiin keskiarvona ± SD.

roolin tutkimiseksi CAF vähän tai ei yhtään Notch1 toiminnan säätelyssä melanooma etenemiseen, 5 x 10

5 Luc2

+ /B16-F10-solut ympättiin (

s

.

c

.) on selkä ihoon 8 viikon vanha LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. Melanooma ihonsiirto ja mittaus kasvaimen kasvua, invaasio ja metastaasi suoritettiin samalla tavoin kuin edellä on kuvattu. Koot kasvain köynnöksen resektoitiin alkaen LOF

Notch1 ovat verrattavissa peräisin LOF

ctrl hiiriä (kuvio 3D). Johdonmukaisesti, ei ollut merkitsevää eroa määrä Ki67

+ kasvainsoluja (Luc2

+) puitteissa melanooma kudoksissa (kuvio 3E) Löf

Notch1 vs. LOF

ctrl hiirillä. Nämä tulokset osoittivat, että CAF Löf

Notch1 hiirillä on vain vähän vaikutusta melanoomaihosyöpien kasvuun.

CAF edistää melanooma hyökkäyksen LOF

Notch1 hiiret

Sen sijaan Siirto tehty melanooma oli lisääntynyt paikallinen invaasio hinnat LOF

Notch1 (75%) hiirillä kuin LOF

ctrl (30%) hiirillä (kuvio 4A) arvioituna histologinen arviointi kudosleikkeiden of resektoidun kasvain, mikä osoittaa, että CAF edistävät melanooma invaasio Löf

Notch1 hiirillä. Johdonmukaisesti, fibroblastit ympäröivä kasvain LOF

Notch1 hiiret osoittivat vahvempaa aktiivisuutta (lisää Ki67

+ /FSP1

+ solut), kuin että LOF

ctrl hiiriä (kuvio 4B), mikä viittaa siihen, että CAF ovat aktiivinen ja voi suosia melanooma hyökkäyksen LOF

Notch1 hiirillä. Ei ole yllättävää, ei etäpesäkkeiden oli havaittavissa kummassakin hiirten (tietoja ei ole esitetty), koska esiintyvyys spontaaneissa etä- oksastetun B16-solujen on hyvin pieni syngeenisessä hiiren melanooma malli. Se tyypillisesti tarvitsee resektio primaarikasvaimen jotta muodostumiseen etäispesäkkeitä esiintyvän [19]. Vaihtoehtoisesti se voi olla riittämätön täyden aikana etäpesäkkeiden valmistuvan ajassa (3-viikkoa) meidän kokeet. Kaiken kaikkiaan tuloksemme osoittavat, että poistaminen

Notch1

valuuttalisien parantaa niiden sääntelyn vaikutusta melanoomaan hyökkäystä.

.

Vasen

: Lisääntynyt melanooma hyökkäyksen ihon LOF

Notch1 vs. LOF

ctrl hiiriä (n = 8 /ryhmä).

Oikea

: kaksi edustavaa H & E-kuvia tuumorisektioiden per ryhmä näytetään. Katkoviivat osoittavat kasvaimen rajoja. Nuolet osoittavat tunkeutuvat syöpäsoluja. Prosenttiosuus invaasio perustuu tuloksiin H & E-värjäystä LPF kunkin kasvaimen osassa. B. Null Notch1 CAF jotka ympäröivät kasvaimia esiintyy enemmän proliferatiivista aktiivisuutta enemmän Ki67

+ /FSP1

+ solut ovat havaittavissa LOF

Notch1 kuin LOF

ctrl hiirillä. C. kvantitointi Ki67

+ fibroblastit /HPF melanooman kapselin LOF

Notch1 (musta palkki) vs. LOF

ctrl (valkoinen palkki) hiirillä. Kvantitatiivinen ovat laskee 5 HPF per jakso ja 5 jakso /kasvain. Aineisto analysoitiin tilastollisesti käyttämällä kaksisuuntaisella Studentin

t

-testin ja ilmaistiin keskiarvona ± SD.

Keskustelu

Kynsien B16-F10-solujen iholle of GOF

Notch1 ja LOF

Notch1 hiiret ainutlaatuiset syngeneeisissä hiiren melanooma malleja salauksen purkamiseen rooli Notch1 signaloinnin säätelevät kasvainten säätelevä funktio CAF TME jossa koko solukomponenttien kasvaimen strooman koostuvat luonnon isäntäsolujen . Tuloksemme määritelty Notch1 signalointi kuin molekyyli kytkin ohjataan kasvaimen säätelevä funktio CAF. Kun tämä molekyyli kytkin päälle ja pois päältä voi käänteisesti antaa kasvaimeen ehkäisevästä ja kasvaimen edistäviä ominaisuuksia CAF. Siten Notch signalointi voidaan manipuloida toteuttaa Notch signalointi-suunnatun hoidon melanooman, ja mahdollisesti muita kiinteitä kasvaimia. Näin ollen avaa uusi väylä kohdistaa TME joko uudelleen ohjelmointi ja muuntaa CAF osoitteesta ”kasvainjouduttimet” muotoon ”tuumorisuppressoreilla ’kautta terapeuttista aktivaation Notch1 kautta tai suoraan hyödyntämiseen Notch myötävirtaan sovittelija (t), eli WISP1 [11]. Vaikka on olemassa lukuisia vaihtoehtoja aktivointia Notch1 väylän CAF, kuten käyttämällä geeniterapian lähestymistapa tai uusien genomin muokkausta menetelmä, CRISPR /Cas9 tai CRISPR /Cpf1, esitellä

N1

IC

, tai soveltamalla Notch polku aktivoivaa yhdistettä, joka voidaan erottaa samanlaisen suuren läpimenon seulontamenetelmä [20], aktivoimalla Notch1 signalointi erityisesti CAF, mutta ei samalla lisätä Notch aktiivisuutta melanoomasoluissa aiheuta terapeuttinen haaste, koska biologisen toiminnan Notch signalointi on solu kontekstisidonnaisia ​​[21], ja korkea Notch aktiivisuus on onkogeeninen melanoomaan [13]. On epäselvää, miten Notch signalointi säädellään eri tavalla valuuttalisien ja melanoomasolujen yhdessä mikroympäristön. Se myös epäselvää Notch /ligandit osallistuvat solu-solu viestintä fibroblastit-melanoomasoluja. Koska merkittävä osa CAF tuumorikudoksessa ovat peräisin mesenkymaaliset kantasolut (MSC), joka on vaihtoehtoinen strategia on kehittää solu- hoitomuodot kohdennetulla toimituksen terapeuttisia soluja, eli autologisia MSC-peräisen fibroblastit esisuunniteltuja ”

ex vivo

”joko kuljettaa korkea Notch1 aktiivisuus käyttäen yllä kuvattuja menetelmiä tai yli-ilmentää WISP1, osaksi kasvain kudosta. Fibroblastit ekspressoivat korkea Notch aktiivisuus yleensä läpi solusyklin pysähtymiseen [9,10]. Tämä luonne tekee MSCD-SF kuljettavat korkea Notch aktiivisuus houkuttelevampi kuin terapeuttiset solut, koska ne eivät laajene vastustamatonta jälkeen ohjautumista kasvainkudoksen ja lopulta tyhjentää immuunisolujen. Siksi niitä voidaan toistuvasti soveltaa potilaille parantaa terapeuttista tehoa.

poiketen estäviä vaikutuksia CAF in GOF

Notch1 hiiret molemmissa melanooma kasvuun ja invaasio, CAF Löf

Notch1 hiirillä edistää paikallisia invaasio, mutta ei ihon kasvua melanooma. Mekanismi tällaista erillisiä vaikutuksia CAF in GOF

Notch1 hiirillä vs. LOF

Notch1 hiirillä jää epäselväksi. Mahdollisesti kasvu ja hyökkäys ominaisuudet melanooman säätelevät eri liukoinen tekijät ja microenvironmental vihjeiden luoma CAF. Poistaminen

Notch1

valuuttalisien voi johtaa muutokseen joukko liukoisen tekijät ja microenvironmental vihjeet, joka ensisijaisesti tai riittävän vaikuttaa melanooman hyökkäyksen, mutta ei kasvua omaisuutta. Toisaalta, liukoisen tekijät ja microenvironmental vihjeiden luoma CAF, joka määrittää melanooma kasvu omaisuutta, ei saa täsmälleen käänteinen välillä GOF

Notch1 ja LOF

Notch1 hiirillä. Notch1 reitti on hyper-aktivoitua ekspression kautta N1

IC-mutantin CAF on GOF

Notch1 hiirillä, joka on erilainen kuin kanoninen, ligandin indusoiman Notch1 aktivaation, jossa poistetaan Notch1 voi käänteisesti peili. Tämä voisi selittää, miksi CAF in GOF

Notch1 hiiret jälkeenjäänyt melanooma kasvua, kun taas CAF Löf

Notch1 hiiret eivät edistä melanooman kasvua. Vaihtoehtoisesti muut Notch isoformit voivat kompensoida Notch1 menetyksen CAF Löf

Notch1 hiirillä. Tulevaisuuden tutkimukset ovat perusteltuja tutkimaan täydellinen profiileja liukoisen tekijät ja microenvironmental vihjeiden määritettiin eri CAF (CAF maasta GOF

Notch1 hiiriä vs. CAF alkaen GOF

Ctrl hiiriä ja CAF alkaen LOF

Notch1 hiiriä vs. CAF alkaen LOF

Ctrl hiiret).

Toinen mielenkiintoinen, mutta selittämätön havainto on selvä spontaani hyökkäyksen määriä B16-F10-solut vartettava GOF

Ctrl (83,3%) vs. LOF

Ctrl ( 30%) hiirillä, mahdollisesti johtuen eri geneettisen taustat kaksi riviä hiirillä. MSC-johdettu fibroblasteista näitä kahta ohjaus hiirillä osoittavat myös erilaisia ​​kasvaimeen säätelevä fenotyypit

in vitro

. Fibroblasteista GOF

Ctrl hiiret aiheuttama melanoomasolujen pallosten muodostamiseksi samalla kun niillä, LOF

Ctrl hiiret eivät (julkaisematon havainto).

Yhteenvetona paljastaa Notch1 reitin kuin molekyyli tekijä, että valvonta sääntelyn rooli CAF melanooman kasvun ja hyökkäystä. Tutkimuksemme korostetaan Notch1 koulutusjakson mahdollisena terapeuttinen tavoite voidaan manipuloida ohjelmoida ja muuntaa CAF toimimaan tuumorisuppressoreilla. Nämä havainnot takaa tulevaa tutkimuksen valaista molekyylitason mekanismit Notch1 määrätyn kasvain säätelevä rooli CAF.

tukeminen Information

S1 Kuva.

A, edustaja ulkonäkö kuvia GOFNotch1 ja GOFCtrl. Ihokudoksen histologia näyttää normaalilta tutkittuna H & E-viikolla 6. B Kohonnut ekspressio Hey1 ihon fibroblasteissa GOFNotch1 hiirillä verrattuna GOFCtrl hiirillä. Arrowheads viittaavat ydin–lokalisoitu Hey1 fibroblasteissa. Vasta-aine tunnistaa Hey-1 hankittiin GeneTex (GTX42614).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0142815.s001

(PDF)

S2 Kuva.

A, edustaja ulkonäkö kuvia LOFNotch1 ja LOFCtrl. Ihokudoksen histologia näyttää normaalilta tutkittuna H & E-viikolla 6. B, Hes1 ilme on huomaamaton fibroblasteissa sijaitsee kapseli melanooman LOFNotch1 hiirissä mutta hieman havaittavissa kapseli melanoomaan LOFCtrl hiirillä. Arrowheads viittaavat ydin–lokalisoitu Hes1 fibroblasteissa. Vasta-aine tunnistaa Hes1 ostettiin Abcam (ab71559).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0142815.s002

(PDF) B

Kiitokset

Kiitämme tohtori Omaida C . Velazquez (Miamin yliopisto) ja hyödyllistä yhteistyötä, kuulemista ja keskustelua.