Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Olemme aiemmin kuvanneet RAF onkogeeni ajettu siirtogeenisiä hiirimallissa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC). Täällä tutkia kasvaimen aloittamista ja kasvua vaatii kantasolujen itseuudistumisen tekijä Bmi1.

Keskeiset havainnot

Jotta voitaisiin arvioida Bmi1 toiminnon NSCLC kaksi kantaisälinjasta jotka eroavat esiintyvyys ja latenssin kasvaimen muodostumisen verrattiin. Ablaatio Bmi1 ilmaisun molemmat linjat oli dramaattisesti vähentynyt kasvaimen kasvua. Koska linja lyhyempi latenssi Hyväksytty elinikää Bmi1 tyrmätä hiirillä, nämä hiiret valittiin jatkotutkimuksiin. Koska Bmi1 ei lukumäärän vähentämiseksi kasvaimen aloittamista näissä hiirissä, koska vain koko ja määrä ei kasvainten väheni. Pieneneminen kasvaimen kasvu johtui kasvusta solukuoleman ja lasku solusyklin etenemisen jotka vastasivat säätely ylöspäin p16

INK4a ja P19

ARF.

merkitys

tiedot tunnistaa Bmi1 tärkeänä tekijänä laajenemisen muttei aloittamista RAF ajettu NSCLC.

Citation: Becker M, Korn C, Sienerth AR, Voswinckel R, Luetkenhaus K, Ceteci F, et ai. (2009) Polycomb- Ryhmä Protein Bmi1 tarvitaan kasvu RAF Driven Non-Small-Cell Lung Cancer. PLoS ONE 4 (1): E4230. doi: 10,1371 /journal.pone.0004230

Editor: Mauricio Rojas, Emory University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 05 elokuu 2008; Hyväksytty: 05 joulukuu 2008; Julkaistu: 19 tammikuu 2009

Copyright: © 2009 Becker et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: MB ja CK tukivat SFB TR 17 DFG, ARS ja KL tukivat DFG jatko college 1141 Wuerzburg-Nizza. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on johtava syy syövän kuolema länsimaissa. Perustuu histologia kaksi erilaista keuhkosyöpä, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) ja pienisoluinen keuhkosyöpä (SCLC) on määritelty. Kaiken kaikkiaan 50% kaikista adenokarsinoomat, yleisin muoto NSCLC, satama mutaatiot ainesosia solusignaalivälitysteitä cascade eli EGFR, K-Ras ja B-RAF [1]. Mutaatiot C-RAF löytyy myös NSCLC kuitenkin harvemmin.

Useat järjestelmät malli keuhkosyöpää hiirillä on raportoitu. Strategiat luoda nämä mallit ovat pohjimmiltaan seurasi kaksi eri polkuja. 1) induktio onkogeenin ilmentymisen ja poistamista tuumorisuppressorigeeneille kautta adenoviruksen suunnattu ilmentymistä Cre-rekombinaasin [2] – [5]. Tämä lähestymistapa jäljittelee esiintyminen somaattisten mutaatioiden aikuisen kudoksissa. 2) konstitutiivinen onkogeenin ilmentyminen kohdesoluissa käyttämällä solutyypin promoottorit [6], [7]. Jälkimmäinen malleissa voi olla tarkoituksenmukaista gestationally hankittu mutaatioita. Vaikka viruksen indusoiman mallit osoittavat jonkin verran määrittelemätöntä kohdesolun taajuuksien siirtogeenisen lähestymistapa on potentiaalia suunnattu kaikille muutosta herkät solut, jotka osoittavat ilmentymisen tietyssä solutyypissä promoottori.

aiemmin on kuvattu siirtogeenisten linjojen ilmentävät onkogeenisesti aktivoidun versio C-raf-kinaasin (C-RAF BXB) valvonnassa ihmisen alveolaarisen tyypin kaksi (AT2) solujen tietty pinta-aktiivinen proteiini C (SP-C) promoottori [7]. Kaksi kantaisälinjasta, edelleen kutsutaan BXB11 ja BXB23, osoittaa keuhkojen kohdennettu adenooma kehityksen korkea penetrance, esiintyy paljon ja lyhyt latenssi. Kasvaimet ovat fenotyypiltään melko vakaana ei ydin- atypia tai etäpesäkkeiden nähtiin C57BL /6 taustalla. Kuutiomainen solutyyppi pääasiassa muodostaa adenoomia. Ei keuhkoputken epiteelin liikakasvu jatkuva cuboidal kasvaimia kuvatulla onkogeeniselle K-Ras mallit [4] on havaittu. BXB23 perustaja linja on käytetty laajasti geneettisissä tutkimuksissa analysoida kasvaimen etenemistä vaikuttavia tekijöitä [7] – [12]. Vaikka ilmentymistä pääasiallisena kohteena ovat kaikki AT2 solut vain osa niistä vastasi ilmentymisen C-RAF BXB kanssa kasvainten muodostumisen [7]. Yksi selitys tähän havaintoon, että keuhkojen kantaisä lokero vastaa mitogeenisesta Cascade signalointi kanssa laajentamiseen. Vaihtoehtoisesti suljettiin siirtogeenin ilmentymisen useimmissa AT2 soluja voi esiintyä. Suosimme ensimmäinen mahdollisuus ja olettaa, että tämä kantaisä osasto on Bmi1 positiivinen ja riippuu mitogeenistä cascade signalointi itseuudistumisen koska käsittelemällä MEK estäjän johti valikoivasti vähentämällä osa Bmi1 positiivisia kasvainsoluja ja dramaattinen väheneminen kasvaimen massan [ ,,,0],12]. Yhdenmukaisesti näiden havaintojen solujen primitiivinen endodermissä joka aiheuttaa keuhkojen esisolujen osoittavat riippuvuutta solusignaalivälitysteitä varten itseuudistumisen sijaan eriyttäminen [13]. Aikaisemmin on osoitettu, että Polycomb ryhmä proteiini Bmi1 on ratkaiseva tekijä itseuudistumisen aikuisten kantasoluja /kasvain kantasolujen kautta estämällä INK4a /ARF lokuksen koodaus p16

INK4a /p19

ARF ([ ,,,0],14], tarkistetaan [15]). Bmi1 on myös hiljattain todettu ennustetyövälineenä merkkiaineena NSCLC [16], [17] ja kuuluu joukko tekijöitä, jotka on todettu kuoleman-from-syövän allekirjoitus ihmisen maligniteettien [18].

tässä tutkimuksessa esitetyt arvioida Bmi1 toiminnon RAF aiheuttama adenooma muodostumista. Koska rajoitettu elinikä Bmi1 geenin ablatoitu hiirillä [19] otimme etuna korkeampi esiintyvyys ja lyhyempi latenssi BXB11 perustaja linjaa tutkia Bmi1 riippuvuutta adenooma kasvun edenneessä taudissa.

Bmi1 ablaatiota kautta ylittäessään Bmi1 – /- taustan osaksi BXB23 ja BXB11 perustaja linja kävi ilmi, että Bmi1 ei tarvita kasvaimen aloittamista vaan laajentamiseen aloitettiin solujen.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Kaikki eläinkokeet hyväksyttiin Baijerin viranomaisten eläinkokeiden.

Eläimet

BXB23 ja BXB11 hiiriä rutiininomaisesti kasvatettu C57BL /6 taustalla. Sillä sukupolvi Bmi1 – /- BXB23 ja Bmi1 – /- BXB11 hiirillä SP-C C-RAF BXB hiiriä risteytettiin Bmi1 +/- hiiriä, jotka oli lisättyjen on FVB /N tausta. Tuloksena Bmi1 heterotsygoottista yhdiste hiiret takaisinristeytettiin kanssa FVB /N /Bmi1 +/- hiiret tuottamaan Bmi1 – /- SP-C C-RAF BXB yhdiste hiirillä.

reagenssit ja vasta

Käytetyt vasta immunohistokemiaan /immunofluoresenssimenetelmällä: Pro SP-C kanin polyklonaalista vasta-ainetta (Chemicon kansainvälinen), CC10 vuohen polyklonaalinen vasta-aine (Santa Cruz Biotechnology), yleiseurooppalainen sytokeratiinivasta kanin polyklonaalista vasta-ainetta (DAKO), Ki-67 hiiren monoklonaalinen vasta-aine (Novocastra), C-RAF hiiren monoklonaalinen vasta-aine (Santa Cruz Biotechnology), Bmi1 hiiren monoklonaalinen vasta-aine (Upstate), p19

ARF kanin polyklonaalista vasta-ainetta (Abcam), c-MYC kanin polyklonaalista vasta-ainetta (Santa Cruz Biotechnology), p16

INK4a kanin polyklonaalista vasta-ainetta ( Santa Cruz Biotechnology), kani monoklonaalinen fosfo-p44 /p42 MAPK Thr 202 /Tyr204 (fosfo-ERK) vasta-aine (Cell Signaling).

Mikroskopia

Fluoresenssimikroskopia suoritettiin käyttäen Openlab ohjelmistoa ( Improvision, Coventry, Iso-Britannia) määräysvallassa DMIRBE mikroskooppi (Leica, Wetzlar, Saksa), jossa on 40 x Leica immersioöljyobjektiivilinssillä. Kaikki kuvat otettiin kiinni ja tallentaa Openlab LIF-tiedostoja. Kuvat otettiin myöhemmin käsitellään käyttäen Power Point ja Adobe Illustrator-ohjelmisto.

histopatologia ja immunohistokemia /immunofluoresenssi

Eläimet lopetettiin ja keuhkot fiksoitiin alle 25 cm veden paine 4% PBS formaliiniin. Histologia tehtiin formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut keuhkojen näyte. 6 pm-leikkauksesta poistettiin parafiini, niihin lisätään lajitellut alkoholeja ja hematoksyliinivärjäystä-eosiinilla (H GCTGGTGAAAAGGACCTCT; p19

ARF: GCGCTCTGGCTTTCGTGAAC; CGTGTCCAGGAAGCCTTCCC; p16

INK4a: CGTGAGGGCACTGCTGGAAG; ACCAGCGTGTCCAGGAAGCC; p15

INK4b: CCAGGAAGCCTTCCCGAGCT; GGGGGCAAGTGGAGACGGTG; Cbx7: CGGCCCATTGGTCAGGTCTG; GACCCTCGCCTTGTCATGGC.

Tulokset

kehittäminen NSCLC vuonna BXB23 ja BXB11 hiiret

Lung adenooma muodostumista verrattiin välillä BXB23 ja BXB11 RAF siirtogeenisiä kantaisälinjasta. Arvioituna H 0,05) on esitetty. C) Kaplan-Meier kuvaaja selviytymiselle BXB11 ja BXB23 hiirillä. P-arvo laskettiin käyttäen logrank testiä.

Bmi1 edistää kasvaimen kasvua, mutta ei kasvaimen aloittamista sekä BXB11 ja BXB23 hiiret

Perustuen havaintoon, että Bmi1 ilmaistaan ​​BXB11 aiheuttamaa kasvaimia ja edellä kuvattu merkitys Bmi1 kasvaimen kantasolujen itseuudistumista [14], [22], [23], päätimme edelleen roolin tutkimiseksi Bmi1 kehittämiseksi C-RAF BXB adenoomien (kuvio 2A). Meillä syntyy yhdiste hiiriä, jotka ilmentävät SP-C C-RAF BXB siirtogeenin annetun Bmi1 tyrmätä tausta. Koska genominen deleetio Bmi1 ei ollut vaikutusta keuhkojen kehittämiseen ja rakenteeseen aikuisten keuhkojen (kuva S2) ja kaikki muutokset kasvaimen kasvun voidaan katsoa johtuvan Bmi1. Analyysi Bmi1 – /- SP-C C-RAF BXB hiiret hankaloittaa lyhyt elinkaari näiden hiirten, jonka aiheuttaa poiston Bmi1 [24] ja harvoin annettiin seurantaa kasvaimen kehityksen yli kolme kuukautta.

A) Parafiini upotettu keuhkoleikkeissä päässä BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 keuhkot värjättiin Bmi1 (vihreä) ja DAPI (sininen). Pisteviiva valkoisia viivoja hahmotella kasvaimia. Mittakaava = 30 pm. B) H & E-värjäystä keuhkoleikkeissä peräisin BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 hiirillä iässä kahden viikon ja kolmeksi kuukaudeksi osoittaa alentunut kasvaimen Burdonin in Bmi1 – /- BXB11 keuhkoihin. Asteikko bar = 200 pm. C ja D) analyysi kasvaimen esiintymistiheys ja kasvua keuhkoissa BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 hiirillä. Tiedot esitetään Box-ja-Whiskers tontteja, yksityiskohdat dataesityksen katso kuva legenda kuvion 1 (n≥4 eläimet per genotyyppi ja ikä, lisätietoja katso kokeellinen materiaalit). Huomaa, että kasvaimen esiintymistiheys on kasvanut tekijällä kaksi, kun verrataan kuviossa 1A), koska FVB /N geneettinen tausta ujutetaan pariutumisen kanssa Bmi1 – /- hiirissä. n.d. = Ei määritetty, koska kasvaimia yhtenäisiksi. p-arvot laskettiin käyttäen Studentin t-testiä vain p-arvot osoittavat merkitys on esitetty.

siis ensin analysoitava vaikutus Bmi1 ablaation keuhkon kasvain perehdyttää BXB11 taustalla eliniän näiden hiirten Hyväksytty että Bmi1 tyrmätä hiirillä. Toisin kuin BXB23, BXB11 keuhkot osoittivat erittäin suuri osa keuhkojen käytössä kasvainkudoksen kolmen kuukauden iässä. Kasvaimen kasvu vähenee voimakkaasti sisällä keuhkoihin Bmi1 – /- BXB11 hiirissä (kuvio 2B) kahdella tavalla, ensin oli noin kaksi kertainen pieneneminen kasvaimen numeroiden välillä kaksi viikkoa kolmen kuukauden iässä (kuvio 2C) ja toisen määrän elossa kasvaimet pienenivät (kuva 2D). Samankaltaisia ​​tuloksia saatiin Bmi1 – /- BXB23 yhdiste hiirillä (kuva S3). Vaikka pienennetty kasvaimet Bmi1 – /- BXB11 keuhkot osoittivat ominaisuuksia SP-C C-RAFBXB indusoimaa adenoomia arvioituna analyysi solujen morfologia ja värjäys kaksi kasvainmerkkiaineet (pan-sytokeratiini ja pro SP-C, kuvio S4) . Myös sulkemisen transgeeniekspression seurauksena Bmi1 ablaatio voidaan sulkea pois syynä vähensi kasvainten kasvua, koska Bmi1 – /- BXB11 kasvaimet värjätään positiivinen C-RAF-aineella (kuvio S4). Johdonmukaisesti taso ydin- fosfo-ERK säilyi BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 kahdesta viikosta kolmeen kuukauden ikäiset osoittavat, että lopettaminen kasvu ei aiheuttanut vähenemistä signalointi kautta mitogeenisesta Cascade (kuva S5).

Yhteenvetona ablaatio Bmi1 vuonna BXB11 hiirillä johtaa voimakkaasti alentunut kasvaimen kasvua. Alkuperäinen määrä kasvaimia BXB11 versus Bmi1 – /- BXB11 ei kuitenkaan näytä merkittävä väheneminen Bmi1 – /- BXB11 keuhkot, mikä osoittaa, että määrittely kasvaimen aloittamista solujen ei riipu Bmi1.

Lisääntynyt solukuoleman ja vähentää osa solujen syklin Bmi1 – /- BXB11 eläimet

voimakkaasti alentunut kasvaimen kasvua ja menetys kasvainten ajan molemmissa kantaisälinjasta kanssa kumottu Bmi1 ilme on joko seurausta lohkon solusyklin etenemisen tai lisääntynyt solukuolema tai molempien yhdistelmä. Bmi1 on aikaisemmin liitetty edistämisessä kasvainsolun eloonjäämistä, ja solusyklin etenemisen kudosviljelyinkubaattorissa malli järjestelmä [25], [26]. TUNEL värjäys osoitti merkittävää kasvua apoptoottisten solujen suhde adenoomien kolme kuukautta vanha Bmi1 – /- BXB11 hiirillä (kuvio 3A ja 3C). Tämä osoittaa, että apoptoosi on myöhässä tapahtuma Bmi1 – /- BXB11 adenoomia. Seuraavaksi tutkimme kasvuvauhtia. Suoritimme Ki-67 /pro SP-C co-värjäytymisen keuhkot valmistettu kahdesta viikosta ja kolmen kuukauden ikäisiä Bmi1 – /- BXB11 ja BXB11 eläimiä. Osa solujen syklin vähenee voimakkaasti, kun Bmi1 ablaatio. Lisäksi kuten käy ilmi BXB11 ohjaus iässä kolmen kuukauden kasvuvauhti näistä kasvaimista on laskenut mikä viittaa joko rajoitetun Replikoitumattoman elinikä BXB11 transformoitujen AT2 solujen tai muiden tasojen kasvun säätelyn (kuvio 3B ja 3D).

A) TUNEL värjäys parafiiniin keuhkoleikkeissä alkaen Bmi1 – /- BXB11 ja BXB11 hiirillä. DNaasi I käsitelty keuhkojen leikkeitä käytettiin positiivisena kontrollina. Osiot hoitaa ilman terminaalista deoksinukleotidyylitransferaasilla toimi negatiivisena kontrollina. Pisteviiva valkoisia viivoja hahmotella kasvaimia. Genotyypit ja iät kuten. Nuolet osoittavat apoptoottinen (vihreä) soluja. Mittakaava = 30 pm. B) Ki67 (punainen) /pro SP-C (vihreä) yhteistyössä immunofluoresenssivärjäyksen keuhkojen jaostojen BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 hiirillä. Nuolet osoittavat pyöräily syöpäsoluja. ”*” Osoittaa värjäytymistä artefakti. Mittakaava = 30 pm. C) kvantifiointi TUNEL positiivisten solujen keuhkokasvaimia kahden viikon ja kolmen kuukauden ikäisiä BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 hiiriä (n = 4 eläintä per genotyyppi), katso tarkemmin materiaaleja ja menetelmiä. Tiedot esitetään Box-ja-Whiskers tontti yksityiskohtia dataesityksen katso kuva legenda Kuva 1. D) kvantifiointi Ki-67 /pro SP-C kaksinkertainen positiivisia soluja. Ainakin viisi kasvaimia viidestä eri eläimistä analysoitiin. p-arvot laskettiin käyttäen Studentin t-testiä, vain p-arvot osoittavat merkitys on esitetty.

Yhteenvetona molemmissa kasvainsolun eloonjäämistä ja solujen lisääntymistä vaikutetaan BXB11 hiirten Bmi1 poistamisen ja voi selittää havaittuun vähensi kasvainten kasvua.

Bmi1 riippuvainen ilmentymä p16

INK4a ja P19

ARF

Bmi1 on sekaantunut cdki sääntelyä. Näkyvimmin p16

INK4a, p19

ARF on osoitettu olevan säätelee negatiivisesti Bmi1 [27]. Siksi muuttunut p16

INK4a /p19

ARF ekspressiotasoja voisi selittää vähäisen lukumäärän eloonjääneiden ja pyöräily soluja Bmi1 – /- BXB11 kasvaimia. Ensin analysoidaan mRNA: n tasoja p16

INK4a semi-kvantitatiivinen RTPCR keuhkoissa kaksi viikkoa BXB11 ja Bmi1 – /- BXB11 hiirissä (kuvio 4A). Ekspressiotasot p16

INK4a oli merkittävästi lisääntynyt Bmi1 – /- BXB11 keuhkoihin. Western blot-analyysi Koko keuhkojen lysaatit vahvisti tämän tuloksen proteiinin taso (kuvio S6A).

A-D) Semikvantitatiivinen reaaliaikainen PCR-analyysi RNA: n koko keuhkoista kahden viikon ikäisiä hiiriä, genotyypit kuten osoitettu. BXB11 tasot asetettiin yhteen. Tiedot edustavat kahden itsenäisen sarjaa analyysi. Tiedot osoittavat, keskihajonnat kolmena kappaleena arvoista. p-arvot laskettiin käyttäen Studentin t-testiä, vain p-arvot osoittavat merkitys on esitetty. A) kvantifiointi p16

INK4a ekspressiotasot B) kvantifiointi p19

ARF RNA ekspressiotasoja. C) kvantifiointi p15

INK4b ekspressiotasoja. D) kvantifiointi Cbx7 ekspressiotasoja.

Seuraavaksi analysoimme mRNA ekspressiotasot p19

ARF. Kuten p16

INK4a, p19

ARF ja p15

INK4b ilmentymistasot säädellään ylöspäin keuhkoissa Bmi1 – /- BXB11 verrattuna BXB11 (kuvio 4B ja 4C). Toisin kuin p16

INK4a, jota ei ole muutettu välillä villityypin ja BXB11 hiiret, löydettiin kohonneet p19

ARF RNA ilmentymisen myös BXB11 keuhkoissa (tuloksia ei ole esitetty). Toinen epigeneettiset säädin on INK4a lokuksen, Cbx7 ei muuttunut merkittävästi ilmentymisessä upon Bmi1 ablaatio BXB11 hiirissä (kuvio 4D). Immunofluoresenssivärjäyksen of Bmi1 – /- BXB11 ja BXB11 keuhkot osoittivat, että p19

ARF ilmaistaan ​​keuhkokasvaimia eläinten molempien genotyyppien. Erot subnuclear jakelu p19

ARF on kuitenkin ilmeistä, kun Bmi1 – /- BXB11 ja BXB11 kasvaimia verrataan. Vaikka ablaatio Bmi1 liittyy multifokaalinen tumavärjäystä rakenteessa p19

ARF lähes kaikissa tuumorisoluissa se on useimmiten rajoittuu yhteen lokukseen sisällä ytimet kasvainten läsnäollessa Bmi1 (Kuva S7).

Yhteenvetona löydämme pienentää leviämisen myöhäisessä vaiheessa p19

ARF positiivinen BXB11 kasvaimia, jotka voitaisiin tulkita osana vanhenemista fenotyypin. Mahdollinen selitys tälle on lievä vaikutus voi olla c-MYC lauseke löydämme BXB11 kasvainsoluissa (kuvio S6b) ja joka on hiljattain kuvattu peruuttamassa sensescence fenotyypin B-RAF muuttaneet ihosyövän [28]. Puuttuessa Bmi1 kuitenkin ilmentyminen INK4a /Arf oli selvempi, vaikka c-MYC ekspressio säilyi (kuvio S6b) lopulta johtaa lakkaamiseen leviämisen. Niinpä näissä olosuhteissa c-MYC pelastus ei toimi enää.

Merkkejä bronchio-keuhkorakkuloiden-kantasoluja (BASCs) in keuhkokasvaimia riippumattomia Bmi1

vieressä osoitettu osuus BASC solujen SP-C C-RAF BXB kasvainten muodostumista. Tätä varten suoritimme pro SP-C /CC10 kaksinkertainen värjäys ja analysoitiin BXB11 kasvainten läsnäolon kaksinkertaisen positiivisia soluja. Tätä analyysiä kuva hankinta asetukset valittiin jotka mahdollistivat tunnistaminen BASCs klo BADJs. Kuten esitetään kuviossa 5, ei ole kaksinkertaista positiivisten solujen voitiin havaita kasvaimia.

Paraffiiniin upotetut keuhkojen osastoja BXB11 hiiriä värjättiin pro SP-C (punainen) ja CC10 (vihreä) havaitsemiseksi kaksinkertainen positiivinen bronchio alveolaarinen kantasolut (BASCs). Edustava BASC solu, joka on sijoitettu bronchio alveolaarinen kanavan risteykseen (BADJ) on merkitty valkoisella nuolella. Asteikko bar = 30 pm.

Yhteenvetona nämä tiedot osoittavat, että allas Bmi1 riippumattomien syöpäsolujen oletettavasti edustaa kasvaimen aloittamista soluja ei edusta BASCs.

Keskustelu

nykyisessä tutkimuksessa käytimme kaksi siirtogeenistä kantaisälinjasta keuhko kohdennettua ilmentymisen C-RAF BXB varten riippuvuutta adenooman aloittamista ja kasvua kantasolujen itseuudistumisen tekijä Bmi1. Osoitamme, että BXB11 on neljä kertaa suurempi esiintyvyys ja lyhyempi latenssi adenoomien mahdollistaa tutkimisen edenneen taudin puuttuessa Bmi1. Köyhtyminen Bmi1 sekä BXB23 ja BXB11 tausta johti lausutaan lasku kasvaimen kasvu ja kasvu solukuoleman sisällä adenoomia. Sen sijaan ei ole merkittävä väheneminen kasvaimen alkutapahtumat voitiin havaita molemmissa kantaisälinjasta vaatineet, että Bmi1 on tärkeä tekijä kasvaimen laajentamiseen vaan sitten aloittamista.

Sen havainnon perusteella, että Bmi1 ilmaistaan ​​C- RAF BXB aloitettu keuhkojen adenoomien ja että Bmi1 on tavoite RAF signaloinnin [19] päätimme tutkia adenooma muodostumista ilman Bmi1. Kumota Bmi1 ilmaisun BXB23 ja BXB11 tausta ei tuottanut merkittävästi vähentää kasvaimen aloittamista tapahtumissa kuten on määritelty useissa kasvaimia, jotka oli muodostettu eri geneettisen yhdistelmät kahden viikon iässä. Analyysi keuhkojen adenooma solujen puuttuessa tai läsnä Bmi1 ei paljastanut eroja morfologiset ja solumarkkerille ekspressiotason. Näin ollen ei ole Bmi1 ei vaikuta prosessin kasvaimen aloittamista. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​aikaisemmin julkaistu raportti osoittaa Bmi1 riippumattoman gliooma aloittamista vaikkakin ilman INK4a [29]. Puuttuminen Bmi1 ei vaikuttanut identiteettiä tuloksena kasvainsolujen suhteen morfologia ja ilmaus rajoitettu joukko markkereita. Nämä tulokset osoittavat myös, että Bmi1 ei tarvita eritelmän kasvain aloittamista solun sisällä keuhkojen. Fosfo-ERK tasot voivat kompensoida Bmi1 tappio lyhyellä aikavälillä, mutta ei pitkällä aikavälillä itse uusiminen osastojen aloitti soluja havaitsimme merkittävää kasvaimen kasvua Bmi1 – /- BXB11 osoittaa korkeamman ydin- fosfo-ERK seurasi lopettaminen solunjakautumisen myöhään ajankohtina ( kolmen kuukauden iässä), kun ydin- fosfori-ERK oli vielä läsnä. Vuoden tutkimustemme myös ei havainnut muutoksiin keuhkon morfologia Bmi1 – /- hiirillä osoittaa, että Bmi1 ei ole ratkaiseva tekijä asianmukaisen keuhkojen kehitystä. Löysimme vahva lisäävä säätely p19

ARF, p16

INK4a ja p15

INK4b kokonaan keuhkojen RNA valmisteet Bmi1 – /- eläimet verrattuna villin tyypin littermates. Ilmaisu on p19

ARF ei yksinomaan johdu keuhkojen soluttautua solujen hematopoieettisen järjestelmän koska emme näe korostunut p19

ARF ilmentymistä AT2 soluissa ja epiteelisoluihin keuhkoputkien in Bmi1 – /- eläimet (tietoja ei esitetä ). On selvää, ilmaus cdkis ei heikennä normaalia keuhkojen solujen toimintaa. Tämä havainto on kiinnostava koskevat armottoman vaikutuksia mahdollisten tulevien hoitostrategioita kohdistaminen Bmi1 keuhkosyövässä.

Cdkis koodattu INK4a lokuksessa kietoutuvat eston solusyklin etenemisen ja solujen elinajan säätelyssä [30] – [ ,,,0],32]. Tämän mukaisesti me näemme vähensi kasvainten solusyklin etenemisen Bmi1 – /- BXB11 kasvaimia ja kasvu apoptoosin alaisten solujen vaikkakin pienellä viiveellä. Nämä havainnot ovat yhdenmukaisia ​​aiempien tulosten julkaisemien Liu ja työtovereiden [25] osoittaa

in vitro

erityinen vaikutus Bmi1 kasvainsolun eloonjäämistä.

suostumuksella aikaisempien raporttien osoittavat p19

ARF ylössäätöä vastauksena kasvaimia hyperproliferatiivisia signaalit [33] – [35], ilmentyminen p19

ARF ei rajoitu Bmi1 – /- taustalla, mutta voidaan myös havaita vähäisemmässä määrin BXB11 adenoomia. Totesimme, että p19

ARF lokalisoitu vain yhdestä kahteen erilliseen ydin- polttopistettä sisällä BXB11 adenoomia.