Krooninen sairaus

tiivistelmä

Kehittyvät näyttö viittaa siihen, että DNAM-1 (CD226) on tärkeä rooli siinä, että tunnustetaan kasvainsolujen ja niiden hajoamiseen sytotoksiset T-lymfosyytit (CTL) ja NK-soluja. Vaikka DNAM-1-ligandin CD155 ilmentyy kaikkialla erilaisissa kudoksissa, monet ihmisen kasvaimissa merkittävästi upregulate ilmaus CD155; DNAM-1 CTL ja NK-solujen voi olla osallisena kasvaimen immuniteetin. Kuitenkin toisin kuin hiirillä, ihmisen kudoksissa myös ilmaista liukeneva isoformia CD155 (sCD155) että puuttuu läpäisevä alue. Tässä osoitamme, että sCD155 tasot olivat merkittävästi korkeammat seerumeista 262 potilaalla on keuhko-, maha, rinta, ja gynekologiset syövät kuin seerumista terveiltä luovuttajilta. Lisäksi sCD155 tasot olivat merkittävästi suurempi potilailla, joilla varhaisessa vaiheessa (vaiheissa 1 ja 2) mahasyöpä kuin terveillä luovuttajien, ja olivat merkittävästi suuremmat potilailla, joilla oli pitkälle edennyt (vaiheet 3 ja 4) tautien kuin potilailla, joilla on varhainen vaiheessa tauti ja terveillä luovuttajilla. Lisäksi sCD155 tasot olivat laskeneet merkittävästi kirurgisen resektion jälkeen syöpiä. Niinpä sCD155 taso seerumin voi olla hyötyä biomarkkerina syövän kehittymistä ja etenemistä.

Citation: Iguchi-Manaka A, Okumura G, Kojima H, Cho Y, Hirochika R, Bando H, et al. (2016) Lisääntynyt Liukoinen CD155 seerumissa syöpäpotilaita. PLoS ONE 11 (4): e0152982. doi: 10,1371 /journal.pone.0152982

Editor: Hiroshi Shiku, Mie University Graduate School of Medicine, JAPAN

vastaanotettu: 24 elokuu 2015; Hyväksytty: 22 maaliskuu 2016; Julkaistu: 06 huhtikuu 2016

Copyright: © 2016 Iguchi-Manaka et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukee osittain apurahoja tarjoamia opetus-, kulttuuri-, urheilu-, Science and Technology of Japan (Grant numero 26861038, 24249021 ja 25114701 AI-M, AS, ja KS). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Immuunijärjestelmän valvonta kasvainten estää syövän kehittymisen isännän suojaamiseksi. Keskeisiä toimijoita soluvälitteisen immuniteetin kasvaimia, sytotoksiset T-lymfosyytit (CTL) ja NK-soluissa [1, 2], välittää kasvaimen tunnustamista ja aktivointi kautta antigeenireseptoreita ja erilaisia ​​tarttuvuus ja apustimulaatiomolekyylejä [2, 3]. Vuorovaikutukset solun pinnan reseptorien kanssa, niiden ligandit ilmentyvät kasvaimen solut indusoivat sytotoksisen aktiivisuuden CTL ja NK-solujen kasvaimia vastaan ​​[4].

DNAM-1 (CD226) on jäsen immunoglobuliinien superperheen ja ekspressoidaan NK solut, T-solut, monosyytit, makrofagit, ja verihiutaleiden [5, 6]. Sen ligandit ihmisillä ja hiirillä ovat poliovirusreseptori CD155 ja sen perheenjäsen CD112 (PPR-2 [PVR liittyvien perhe 2], jota kutsutaan myös nectin-2) [7-9]. Ihmisen CD155 ja CD112 on laajalti epiteeli- ja endoteelisolujen monissa kudoksissa [10, 11]; erityisesti ne yli-ilmentynyt erilaisten kasvainten, mukaan lukien peräsuolen [12, 13], mahan [12], ja munasarjojen syöpien [14]; neuroblastooma [15]; myeloidileukemiat [16]; multippelimyelooma [17]; ja melanooma [18]. Vuorovaikutukset CD155 ja CD112 tuumorisoluissa ja DNAM-1 NK ja T-solujen lisätä soluvälitteinen sytotoksisuus ja sytokiinien tuotantoa [7, 8]; DNAM-1 on todennäköisesti osallisena immuniteetin CD155- ja CD112-ekspressoivat pahanlaatuiset kasvaimet. Itse asiassa malli kemiallisesti tuotettuja tuumoreita DNAM-1-hiirillä, DNAM-1 on tärkeä immuunijärjestelmän valvonnan vastaan ​​CD155-ilmentäviä kasvaimia [19]. Näin ollen, CD155 kasvaimia on ratkaiseva DNAM-1-välitteisen kasvainimmuniteetin.

Kuitenkin, lisäksi kalvoon sitoutunut CD155 (mCD155, CD155α), ihmisen kudoksista (toisin kuin hiirissä) esittää liukoisen CD155 (sCD155 ) (CD155β ja CD155γ) koodaama silmukoinnin isoformia

CD155

että puuttuu transmembraanialueessa [20, 21]. Täällä, tutkimme seerumin sCD155 262 potilailla, joilla on vaihteleva syöpiä ja osoittavat, että sCD155 voivat olla hyödyllisiä biomarkkerina syövän kehittymistä ja etenemistä.

Materiaalit ja menetelmät

Solulinjat

Käytimme seuraavia ihmisen solulinjat saatiin ATCC: stä: HeLa (kohdunkaulan karsinooma), HOS (osteosarkooma), RD (rabdomyosarkooma), U87MG (gliooma), Jurkat (T-solu leukemia), ja Colo 205 (kolorektaalisyöpää) . Metha (metyylikolantreinikäsittelys- aiheuttamaa sarkooma BALB /c hiiri) saatiin tohtori Eiichi Nakayama (Okayama University).

Näytteitä

otettiin kudosnäytteet alkutuotannosta syöpäpotilailla, joille tehtiin kirurginen resektio at University of Tsukuba sairaala, Japani. Seeruminäytteet saatiin ensisijainen syöpäpotilaiden yliopiston Tsukuba sairaalan ja Ibaraki Prefectural keskussairaalan, Japani, ja terveillä vapaaehtoisilla. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ja terveillä vapaaehtoisilla. Tutkimus hyväksyi eettinen komitea yliopiston Tsukuba ja Ibaraki Prefectural keskussairaalan (Hyväksyntänumero 531-5 ja 307). Tauti vaihe luokitellaan Unionin kansainvälisen Cancer valvonta (UICC) TNM luokittelu pahanlaatuiset kasvaimet.

Hiiret

BALB /c-hiiriä ostettiin Charles River (Yokohama, Japani). Kaikki hiiret majoitettu ja kasvatettu erityisissä taudinaiheuttajista vapaissa olosuhteissa klo Animal Resource Center yliopiston Tsukuba. Kokeellinen hiiriä käytettiin 7-10 viikon iässä. Kaikki kokeet hiirillä oli hyväksynyt eläinkoe ​​komitean yliopiston Tsukuba (Hyväksyntänumero 09-390 ja 10-237) ja suoritettiin ohjeiden eläinkokeen komitean yliopiston Tsukuba.

PCR

Kokonais-RNA uutettiin solulinjoista ja kudoksista, joissa Isogen reagenssilla (Nippon Gene). RT-PCR, käytimme High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems). PCR-analyysi

CD155

silmukointivariantit suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [21].

Quantitative real-time PCR

Kokonais-RNA uutettiin kudoksista käyttäen Isogen reagenssia ( Nippon Gene). qRT-PCR-analyysi

CD155

silmukointivariantit suoritettiin TaqMan Gene Expression Analyysit (Applied Biosystems) ja Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System. Käytimme seuraavia TaqMan Gene Expression Kokeet: Hs1050633_m1 (

CD155α

), Hs1050636_m1 (

CD155γ

), ja Hs99999903_m1 (

ACTB

). Sillä

CD155β

, käytimme mukautetun TaqMan Gene Expression Assays seuraavilla alukkeilla ja toimittaja: forward-aluketta 5′-AAAGAGGGACCTCCCAGTGA-3 ’, käänteinen aluke 5′-GAATAGGAGACATGCCCATTAGCT-3′, ja reportteri 5’-CACTCAGGTACAGAGCATG- 3 ’. Käyttämällä Agilent 2100 Bioanalyzer, olemme analysoineet laatua koko RNA qRT-PCR RNA eheyden numero 7. Kaikki arvot määritettiin kolmena kappaleena.

ELISA ihmisen liukoisen CD155

sCD155 tasot seerumeissa mitattiin sandwich-ELISA: lla käyttäen hiiren anti-ihmisen CD155-mAb (TX24) ja kanin anti-humaani- CD155 polyklonaalista Ab (pAb) kuin talteenotto ja tunnistus Abs, vastaavasti, jonka jälkeen HRP-kytkettyä anti-kani-IgG (GE Healthcare) ja QuantaBlu fluorogeenisen peroksidaasisubstraattiliuosta (Pierce Biotechnology). Musta 96-kuoppaisille levyille (Greiner Bio-One) päällystettiin hiiren anti-ihmis-CD155-mAb (TX24, 2 ug /ml estopuskuria, 100 ul /kuoppa) kaapata yön yli 4 ° C: ssa, blokattiin blokkauspuskurilla (10% FBS, 200 ul /kuoppa) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, ja pestiin kolme kertaa pesupuskurilla (0,05% Tween 20). Ihmisen CD155-Fc-fuusioproteiinia (standardit) ja seeruminäytteet maljattiin 100 ui /kuoppa, inkuboitiin 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja pestiin pesupuskurilla. Inkuboinnin jälkeen samoissa olosuhteissa 100 ui kanin anti-humaani-CD155 pAb (5 ug /ml estopuskuria), pestyjä levyjä inkuboitiin samoissa olosuhteissa 100 ui anti-kani-lgG-HRP: tä (1: 2000 pesu puskuri), pestiin, ja annettiin reagoida 100 ul: QuantaBlu Työliuos (Pierce Biotechnology) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Pysähdyimme reaktiot 100 ui QuantaBlu Stop Liuos (Pierce Biotechnology) ja mitataan suhteellista fluoresenssin yksikkö (RFU) jokaisen hyvin aallonpituuksilla 320 nm eksitaatio ja 420 nm emissio käyttäen Spectra Max M2e lukija (Molecular Devices). Kaikki arvot määritettiin kolmena kappaleena. Hiiren anti-ihmisen CD155-mAb (TX24) ja ihmisen CD155-Fc-fuusioproteiinia tuotettiin laboratoriossamme, kuten aikaisemmin on kuvattu [8]. Kanin anti-ihmis-CD155 pAb tuotettiin laboratoriossamme standardimenetelmillä.

perustaminen Metha transfektantin ilmentävien hiiren sCD155

koodaava cDNA ekstrasellulaarinen alue hiiren CD155 subkloonattiin p3 × FLAG -CMV-13 ekspressiovektoriin (Sigma-Aldrich), ja transdusoida Metha soluihin tuottaa transfektantti, jotka ilmentävät pysyvästi Flag-merkityn sCD155 käyttäen DMRIE-C-transfektioreagenssia (Invitrogen). Transfektantti valittiin G418: aa (Sigma-Aldrich), ja siirrostettiin vatsaonteloon hiirien.

ELISA hiiren CD155-3 × FLAG-fuusioproteiinin

Flag-merkityn sCD155 hiiren askites ja seerumin mitattiin sandwich-ELISA: lla käyttämällä rotan anti-hiiri-CD155-mAb (TX56) ja hiiren anti-FLAG BioM2 mAb (Sigma-Aldrich), kuten talteenotto ja tunnistus mAb: t, vastaavasti, ja sen jälkeen streptavidiini-HRP-konjugaattia (GE Healthcare) ja QuantaBlu fluorogeenisen peroksidaasisubstraattia (PIERCE). Musta 96-kuoppaisille levyille (Greiner Bio-One) päällystettiin rotan anti-hiiri-CD155 mAb (TX56, 2 ug /ml estopuskurissa (10% FBS PBS: ssä), 100 ul /kuoppa) yön yli 4 ° C: ssa, käsiteltiin kanssa salpauspuskurilla (200 ul /kuoppa) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, ja pestiin kolme kertaa pesupuskurilla (0,05% Tween 20). Näytteet maljattiin 100 ui /kuoppa, inkuboitiin 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja pestiin pesupuskurilla. Inkuboinnin jälkeen samoissa olosuhteissa 100 ui anti-FLAG BioM2 (Sigma-Aldrich, 1 ug /ml estopuskuria), maljoja inkuboitiin samoissa olosuhteissa 100 ui streptavidiini-HRP: tä (GE Healthcare, 1: 2000 pesupuskuria ), pestiin, ja annettiin reagoida 100 ul: QuantaBlu Työliuos (Pierce Biotechnology) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Lopettamisen jälkeen reaktiot 100 ui QuantaBlu Stop Liuos (Pierce Biotechnology), mittasimme suhteellinen fluoresenssi yksikköä kunkin kuopan aallonpituuksilla 320 nm eksitaatio ja 420 nm emissio käyttäen Spectra Max M2e (Molecular Devices). Kaikki arvot määritettiin kolmena kappaleena. Rotan anti-hiiri CD155 mAb (TX56) tuotettiin laboratoriossamme aikaisemmin kuvatulla [8].

Kasvaimen kasvu määrityksessä

Hiiret rokotettiin ihonalaisesti selkään 8 x 10

4 sCD155-Metha soluja. Hiiriä seurattiin kasvaimen kokoa (pitkä (L) ja lyhyt (S) mitat) käyttäen jarrusatulat kerran viikossa, ja kasvain tilavuudet laskettiin yhtälöllä: tilavuus = (L x S

2) /2, kuten aiemmin on kuvattu [22]. Hiiret lopetettiin CO 2 tai anestesian jälkeen kokeen loppuun.

Tilastot

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen kaksi-tailed Mann-Whitney U-testi ja kaksisuuntaisia ​​Student t-testi .

tulokset

ilmentäminen CD155α ja CD155β kasvainkudoksissa oli korkeampi kuin ei-tuumorikudoksissa

Vaikka sCD155 ilmenee vahvasti kolorektaalisyövissä [12], sen mentymisprofiili muissa syövissä on epäselvä. RT-PCR, olemme analysoineet ilmentymisen

CD155

mRNA useissa kasvainsolulinjoissa ja ensisijainen kohdunkaulan, munasarjojen ja kohdun limakalvon syövät; kaikki solulinjat ja syöpien ilmaistaan ​​sekä kalvoon sitoutuneena (

CD155α

) ja liukoinen (

CD155β

ja

CD155γ

)

CD155

mRNA: ta (kuvio 1). Sitten kvantitatiivisella reaaliaikaisella PCR: llä (qRT-PCR), vertasimme ilmentymisen

CD155

isoformit joukossa peräsuolen, mahan, ja rintasyöpiä ja niiden vieressä ei-kasvainkudoksia; ilmaukset

CD155α

ja

CD155β

, mutta ei

CD155γ

, olivat merkittävästi korkeammat syöpien kuin ei-tuumorikudoksissa (P 0,05) (kuvio 2).

PCR suoritettiin käyttäen alukesarjoja kummallakin puolella eri liitoskohdat. Kolme bändejä ennustetun kokoisia (α: 273 bp, β: 138 bp, γ: 114 emäsparia) havaitaan PCR-tuotteita. mRNA kalvoon sitoutuneita (α) ja liukoisen

CD155

(β,

γ

) ilmennettiin eri ihmisen syöpäsolulinjoissa (A) ja kohdunkaulan, munasarjojen ja kohdun limakalvon syöpä kudoksissa (B ).

kasvaimen ja viereisen ei-kasvaimen kudokset otettiin kirurginen resektio yksilöt peräsuolen (adenokarsinooma, n = 9), mahalaukun (adenokarsinooma, n = 4), ja rintasyövän (invasiivinen duktaalinen karsinooma, n = 3) syöpiä. qRT-PCR

CD155

Silmukointi variantit tehtiin ja kertainen muutos suhteellisen ilmentymisen kasvainkudoksen verrattuna viereisen ei-kasvainkudoksessa laskettiin. Ilmaisu membraaniin sitoutuneiden (α) ja liukoisen (β)

CD155

RNA kasvainkudoksessa oli merkittävästi korkeampi kuin ei-tuumorikudoksissa (P 0,05).

sCD155 tasot olivat korkeampia seerumista syöpäpotilaiden kuin niissä terveiden luovuttajien

Koska ilmaus

sCD155

syövän kudoksissa voimistunut perustimme sandwich-ELISA mittaamiseen sCD155 (S1 kuvio) ja määrällisesti sCD155 seerumeista 262 eri syöpiä sairastavien potilaiden, kuten keuhko-, ruokatorven, mahalaukun, paksusuolen ja peräsuolen, sappi-kanava, haima-, rinta-, munasarja-, kohdun limakalvon ja kohdunkaulan syövät (taulukko 1). Verrattuna terveiltä luovuttajilta (n = 60), seerumeista syöpäpotilaiden oli merkittävästi korkeammat sCD155 tasoilla (keskiarvo = 15,6 ng /ml ja 28,3 ng /ml, vastaavasti, P 0,0001) (taulukko 1, kuvio 3A), jotka olivat ei vaikuta potilaan iän tai sukupuolen (tuloksia ei ole esitetty). Vastaanotin toimii ominaiskäyrä kuvaa voiman sCD155 tason kohdella eri syöpäpotilaiden ja terveillä luovuttajilla; arvo alueella käyrän alla oli 0,718 (kuvio 3B).

(A) Liukoinen CD155 tasot seerumeissa terveiden luovuttajien (n = 60), ja syöpäpotilailla (n = 262), analysoitiin kerros-ELISA . Verrattuna terveiden luovuttajien, seerumeista syöpäpotilaiden oli merkittävästi korkeammat sCD155 tasoa (P 0,0001). Red bar: keskiarvo, musta palkki: SD. (B) Vastaanotin ominaiskäyrän-käyrä, joka kuvaa voimaa liukoisen CD155 tasolla syrjiä terveiden luovuttajien ja syöpäpotilailla.

Verrattuna terveisiin Vertailunäytteissä sCD155 tasot seerumista potilaille, joilla on kunkin syöpä paitsi kohdunkaulan syövän olivat huomattavasti korkeampia (keuhko: P 0,05, ruokatorven: P 0,001, mahalaukun: P 0,0001, peräsuolen: P 0,001, sappi-kanava: P 0,0001, haiman: P 0,0001, rintojen: P 0,05, munasarja-: P 0,01, kohdun limakalvon: P 0,01) (taulukko 1, kuvio 4A). Erityisesti verrattuna terveiden luovuttajien, varhaisvaiheen potilaiden (vaiheet 1 ja 2) mahasyöpä oli merkittävästi korkeammat sCD155 tasoa (P 0,01). Lisäksi sCD155 tasot olivat merkittävästi suurempi potilailla, joilla on edennyt vaiheeseen (vaiheet 3 ja 4) mahasyöpä kuin potilailla alkuvaiheessa (P 0,05) ja terveillä verrokeilla (P 0,001) (kuvio 4B). Vaikka sCD155 tasot eivät muuttuneet tai jopa lisääntynyt tietyillä potilailla kirurgisen resektion jälkeen syöpien ja tämä voi olla riippuvainen kunkin potilaan eri syövän, tilastollista analyysiä koko väestöstä osoitti, että sCD155 tasot olivat merkittävästi vähentynyt (P 0,05) (kuvio 4C ).

(A) Liukoinen CD155 tasot seerumista mukaan eri syöpätyyppejä (keuhko: n = 52, ruokatorven: n = 8, mahalaukun: n = 49, peräsuolen: n = 12, sappi-kanava : n = 25, haiman: n = 18, rintojen: n = 32, munasarjasyöpä: n = 23, kohdun limakalvon: n = 16, kohdunkaulan: n = 15) analysoitiin kerros-ELISA. Red bar: keskiarvo, musta palkki: SD. (B) Liukoinen CD155 tasot seerumeissa mahasyöpäpotilaista ositettu taudin vaiheessa. Vaiheet 1 2: n = 24, vaiheet 3 4: n = 25. (C) Liukenee CD155 tasot seerumeissa syöpäpotilailla, joille tehtiin leikkaus (n = 73) analysoitiin syövän ennen ja jälkeen. Liukoinen CD155 tasolla merkittävästi vähentynyt leikkauksen jälkeen. Red juoni: keskiarvo, preoperatiivinen keskiarvo: 26,529 ng /ml, leikkauksen jälkeinen keskimääräinen: 22,390 ng /ml, P 0,05. Leikkauksen jälkeiset päivät: 69.30 ± 61.95.

sCD155 tasot seerumeissa olivat riippuvaisia ​​tuumoritaakka hiirimallissa

Tulosten perusteella edellä kuvatun, me arveltu, että sCD155 tasot seerumeissa syöpäpotilaiden liittää kasvaintaakkaa. Käsitellä tätä hypoteesia, transfektoimme meta fibrosarkoomasolulinjoilla, joka ilmaistaan ​​vain Endogeenisen mCD155, jossa retrovirus vektori, joka sisältää joko koodaavan cDNA: n solunulkoisen osan hiiren CD155 tai mock kontrollivektorilla. Olemme siirrostettiin transfektantit (sCD155-meta tai Mock-meta) vatsaonteloon hiirien ja 10 päivää myöhemmin, kerätään askites. Määrällisesti sCD155 tasolla, loimme ELISA järjestelmä. Vaikka sCD155 tuskin havaittiin askites hiirten, jotka oli inokuloitu Mock-Metha ELISA Havaitsimme merkittävän määrän sCD155 ascites hiirten, jotka oli inokuloitu sCD155-Metha (kuvio 5A). Nämä tulokset osoittivat, että sCD155-Metha tuotettu sCD155

in vivo

. Sitten ihonalaisesti ympätty hiirten sCD155-Metha ja mitataan sekä seerumin sCD155 tasoilla ja kasvaimen kokoa. Havaitsimme, että sCD155 tasot seerumit korreloi sCD155-Metha kasvaimen kokoa (kuvio 5B). Nämä tulokset viittaavat siihen, että seerumin sCD155 tasot liittävät kasvaintaakka.

(A) meta transfektantissa erittävä sCD155 (sCD155-meta) tai kontrolli proteiini (Mock-meta) ympättiin vatsaonteloon ja sitten askites kerättiin. sCD155 tasot Askites hiiriä, jotka oli rokotettu näiden transfectantss mitattiin ELISA: lla. (B) BALB /c-hiiriin istutettiin ihonalaisesti sCD155-Metha transfektanttia. Kasvaimen koon ja sCD155 seerumissa mitattiin ja korrelaatiokerroin laskettiin.

Keskustelu

Vaikka sCD155 tunnistettiin 25 vuotta sitten [20], vähän tiedetään sen ilmaisun ja toiminto. Täällä osoitti, että ilmentyminen sCD155 (

CD155β

) sekä mCD155 (CD155

) mRNA kasvainkudoksissa oli merkittävästi suurempi kuin ei-tuumorikudoksissa. Lisäksi potilailla, joilla on erilaisia ​​syöpiä osoitti merkittävästi korkeampi seerumin sCD155, verrattuna terveisiin kontrollinäytteisiin. Lisäksi sCD155 tasot seerumissa korreloivat sairauden etenemisen mahalaukun syövän potilaiden ja tuumorin koko hiirissä. Tuloksemme viittaavat siihen, että sCD155 tasot seerumeissa syöpäpotilaiden ovat mahdollisesti riippuvaisia ​​kasvaintaakkaa. Edellinen raportti osoitti, että säätely ylöspäin hiiren CD155 välittyy Raf-MEK-ERK-AP-1-signalointireitin [23], mikä viittaa siihen, että geenien molempien mCD155 ja sCD155 on säädelty läpi tämän reitin myös ihmisen, vaikka edelleen tutkimuksia tarvitaan määrittää, kuinka sCD155 ylössäädellään syövissä. Siitä huolimatta, tulokset viittaavat siihen, että seerumin sCD155 taso on potentiaalisesti käyttökelpoinen biomarkkerina syövän etenemisen.

Vaikka mCD155 ilmentyy kasvaimia on ajateltu olevan mukana DNAM-1-välitteisen kasvainimmuniteetin, ristiriitaisia ​​tuloksia on raportoitu . Esimerkiksi yliekspressio mCD155, määritettynä immunohistokemiallisella tutkimuksessa käyttämällä anti-CD155-vasta-aineen, keuhkojen adenokarsinooma ja melanooma korreloi huonon ennusteen [24, 25]. Nämä tutkimukset eivät erottele mCD155 ja sCD155. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että geenien molempien mCD155 (

CD155α

) ja sCD155 (

CD155β

) on yläreguloituja syöpiä, kuten peräsuolen, maha- ja rintasyöpiä, verrattuna ei-syöpä kudoksiin. Vaikka johtuen rajallinen määrä kunkin syöpä, emme voineet arvioida korrelaatio ekspressiotasot sCD155 (

CD155β

) mRNA syövän kudoksissa tai seerumissa CD155 tasoja ja taudin etenemisen ja ennusteen, korkeampaa sCD155 seerumeista liittyi pitkälle mahasyövän ja kasvaimen koon hiirissä.

Aiemmat raportit osoittivat roolin liukoisen muodon kalvon reseptoreihin kasvain kiertämistä. Kalvoon sitoutuneiden molekyylien, kuten NKG2D ligandeja MHC-luokan I-sukuinen molekyyli (MIC) ja UL16-sitovat proteiinit (ULBPs) ja Fas, jotka ovat mukana NK-solut ja CTL-välitteisen sytotoksisuuden kasvaimia, on osoitettu vapautetaan liukeneva lomakkeet seerumeista eri syöpäpotilaiden [26-30]. Toisin kuin CD155, liukoinen MIC ja ULBPs syntyvät tuumorit proteolyyttisellä irtoaminen [26, 31, 32]. Kasvaimet voivat kiertää päässä NKG2D välittämää immuunivalvonnan useilla mekanismeilla; yksi niistä on se, että liukoinen MIC downregulates NKG2D ilmaisu [31, 33]. Edellinen raportti osoitti, että korkeita liukoisen ULBP2 seerumista liittyi huono taudin ennusteeseen melanoomapotilailla [27], mikä viittaa siihen, että liukoinen ULBP2 on mukana kasvain immuuni kiertämisen.

Toisin NKG2D ligandeja, toiminnallinen merkitys of sCD155 kasvaimen immuniteetti on jäänyt epäselväksi. Viimeaikaiset tutkimukset paljastivat, että DNAM-1 osakkeita ligandi CD155 kanssa T-solujen immunoreseptorin kanssa Ig ja ITIM verkkotunnuksia (TIGIT) tai CD96 [34, 35]. Ristisidoksia CD96 levyyn sitoutuneen CD155-Fc-fuusioproteiini esti IFN

γ

NK-solujen [36]. Lisäksi CD96-hiirillä osoittivat laski kokeellisen kasvaimen etäpesäke [36], mikä viittaa siihen, että CD96 ja DNAM-1 vastustavat toisiaan kasvain immuniteetin. Samoin TIGIT on päinvastainen vaikutus DNAM-1 kasvainimmuniteetin [37, 38]. Selventää toiminnallista merkitystä sCD155 kasvaimen immuniteetin, lisätutkimuksia tarvitaan, miten vuorovaikutus sCD155 sen aktivoiva (DNAM-1) ja estävä (CD96 ja TIGIT) reseptorit ja niiden signaloinnin kautta nämä aktivoivat ja estävä reseptorit ovat säänneltyjä.

tukeminen Information

S1 Kuva. Perustaminen sandwich-ELISA sCD155.

(A) Vakiokuvaajan ihmisen CD155-Fc-fuusioproteiini. (B) Kun 12-kuoppalevylle, 1 x 10

6 HeLa viljeltiin per 1 ml väliainetta; kulttuuri supernatantit kerättiin 24 ja 48 h liukoisen CD155-proteiinin havaitsemiseen.

doi: 10,1371 /journal.pone.0152982.s001

(EPS) B

Kiitokset

Kiitos Tochihara S ja Nomura Y sihteerityövoima.