Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli korreloivan tiettyyn rasvahappoprofiilit viskeraalisen valkoinen rasvakudos (WAT), joilla on tulehduksellinen allekirjoitukset liittyy mahdollisesti peräsuolen syöpä (CRC).

Methods

Ihmisen rasvasolut eristettiin koepaloja sisäelinten WAT 24 aiheista jaettu neljään ryhmään: normaalipainoisilla (BMI 22,0-24,9 kg /m

2) ja yli-paino /lihavia (BMI 26,0-40,0 kg /m

2), vaikuttaa tai ei CRC. Määrittää, liikalihavuuden ja /tai CRC vaikuttaa tulehduksellinen tila WAT, aktivoinnin proinflammatoristen STAT3 ja anti-inflammatorisen PPARy transkriptiotekijöiden sekä ilmentymisen adiponectin analysoitiin immunoblottaamalla adiposyyttien eristetty kustakin ryhmästä aiheita . Lisäksi voidaan arvioida, onko eroja tulehduksellinen WAT ympäristössä korreloivat tietyn rasvahapon profiilit, kaasukromatografista analyysiä suoritettiin WAT kerätään kaikilta aiheluokkia. Lopuksi vaikutus ω3 dokosaheksaeenihapon hoito tasapainoon pro- ja tulehdusta tekijät rasvasolut arvioitiin myös.

Tulokset

Tarjoamme ensimmäinen todiste olemassaolon proinflammatoristen ympäristön WAT CRC potilaiden arvioituna ylös-säätely STAT3, ja samanaikainen väheneminen PPARy ja adiponektiini suhteessa terveisiin henkilöihin. WAT tulehduksellinen tila oli riippumaton lihavuuden aste mutta korreloi vähentynyt ω3- /ω6-monityydyttymättömien rasvahappojen suhde. Nämä havainnot viittaavat siihen, että laadullisia muutoksia, muut kuin määrällinen niitä, vuonna WAT ​​rasvahappo voi vaikuttaa kudoksen häiriöiden mahdollisesti liittyy tulehdustiloja. Tätä olettamusta tukee lisäksi havainto, että adiposyytin käsittely dokosaheksaeenihappoa palautti tasapainon STST3 ja PPARy.

Johtopäätös

Tuloksemme viittaavat siihen, että adiposyytin toimintahäiriöitä esiintyy CRC potilailla luomaan tulehdusta ympäristö, jotka saattavat vaikuttaa syövän kehittymisen. Lisäksi suojaava potentiaali dokosaheksaeenihapon in uudelleen käyttöön tasapaino pro- ja tulehdusta tekijät voivat edustaa hyödyllinen työkalu ennaltaehkäiseviä ja terapeuttisia strategioita.

Citation: D’Archivio M, Scazzocchio B, Giammarioli S, Fiani ML, vari R, Santangelo C, et al. (2013) ω3-PUFA käyttää tulehduskipulääkkeitä Aktiivisuus Sisäelinten adiposyyttien peräsuolen syövän Potilaat. PLoS ONE 8 (10): e77432. doi: 10,1371 /journal.pone.0077432

Editor: Wolf-Hagen SCHUNCK, Max Delbrueck Center for Molecular Medicine, Saksa

vastaanotettu: 5. kesäkuuta, 2013 Hyväksytty: 03 syyskuu 2013; Julkaistu: 07 lokakuu 2013

Copyright: © 2013 D’Archivio et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

lihavuuden on kasvanut olennaisesti kehittyneissä maissa saavuttaa epidemian mittasuhteet [1,2]. Tämä on suuri haaste globaaliin terveyteen liikalihavuus edustaa tärkein riskitekijä useita kroonisia rappeuttavia sairauksia. Sen lisäksi sydän- ja verisuonitauteja ja diabetesta, epidemiologiset tutkimukset sekä eläinmallit ovat antaneet vahvaa näyttöä siitä, liikalihavuus voi lisätä niiden esiintymistä moniin syöpiin kuten peräsuolen syöpä (CRC), leukemia, ja hepatooma [3-5].

maailmanlaajuisesti CRC on kolmanneksi yleisin syöpä osuus oli noin 1,2 miljoonaa uutta tapausta ja 608000 kuolemantapausta vuodessa [6]. Rooli kehon lihavuutta kuin riskitekijä CRC on dokumentoitu; Erityisesti se on äskettäin osoitettu, että liikalihavuus näyttää olevan vahva positiivinen korrelaatio riski sairastua paksusuolen syöpään sijaan peräsuolen syöpä [7-9]. Kuitenkin mahdollisten mekanismien taustalla suhteen ovat suurelta osin tuntemattomia. Kriittinen esteeksi kenttään edustaa vielä heikko tietämys siitä, miten rasvakudos aineenvaihdunta voi vaikuttaa syövän kehitystä.

valkoinen rasvakudos (WAT) tunnustetaan yhä monimutkainen immunokompetenteille elin, joka koostuu eri solun tyypit joista rasvasolut ja asukas immuunisolujen näytteille olennainen eritys- ja sääntelyn toimintaa [10]. Lihavuus häiritsee dynaaminen rooli näiden solujen energian ja immuuni homeostaasiin muuttamalla adipokine signalointi ja johtaa krooninen tulehduksellinen tila ominaista lisääntynyt plasman tasot inflammatoristen sytokiinien, kuten IL-6: n ja TNFa: [11,12] Nämä tekijät voivat toimia synergisesti edelleen lisätä omaa pitoisuuksia aktivoimalla useita signalointireittien kuten STST3 [13]. Tämä transkriptiotekijä, tunnistettiin alun perin DNA-sitovan proteiinin, aktivoituu monien sytokiinien ja kasvutekijöiden ja on keskeinen osa niiden signalointireitillä [14]. Konstitutiivisen aktivaation STAT3 havaittu monissa kasvaimissa mukaan lukien paksusuolen syöpä [15] myötävaikuttaa onkogeneesiin moduloimalla ilmaisuja erilaisia ​​osallistuvien geenien leviämisen, invaasio, etäpesäke, ja angiogeneesi [16,17]. Sopusoinnussa näiden havaintojen, suuri määrä todisteita osoittaa, että estämällä STST3 tapahtuma vähentää kasvainsolujen kasvua ja indusoi tuumorisolun apoptoosia [18]. Huolimatta avainrooli STAT3 kasvaimen synnyssä, hyvin harvoissa tutkimuksissa on tutkittu aktivoinnin tilan STST3 ihmisen rasvakudoksessa, joka tarjoaa kiistelty tulokset [19,20].

Jos haluat säilyttää homeostaasiin kudosten, STAT3 aktiivisuus on todennäköisesti tasapainottavat muita transkription sääntelyviranomaisten kanssa vastakkaiseen käyttäytymiseen. Niistä, peroksisomiproliferaattoreilla aktivoituvan reseptorin γ (PPARy) on ligandi-aktivoitujen nukleaarihormonireseptorit reseptorin anti-inflammatorisen roolin, joka ohjaa glukoosi ja rasva-aineenvaihduntaan. Lisäksi PPARy on tärkein säätelijä adiponectin ilmaisua. Adiponektiini, joka on adipocytokine selektiivisesti erittyy WAT, on osoitettu estävän IL-6 eritystä ja STAT3 aktivaation koolonkarsinoomasoluissa [21] siten lieventävät niiden leviäminen [22]. Erityisesti adiponectin pitoisuus pienenee lihavuus [21-23].

On olemassa todisteita siitä, että ruokavalion osat voivat vaikuttaa tulehduksellinen prosessi ja riski sairastua CRC. Rasvahapot (FA) ovat keskeinen WAT ja niiden kudoksen profiili vastaa tarkasti saanti ravinnosta ja /tai luontaisen aineenvaihdunnan eroja. Luonne muuttuu rasvan kulutetaan voivat muuttaa koostumusta WAT ​​ja syvällisesti vaikuttaa FA käytettävissä kehon. Mielenkiintoista, mahdollinen yhteys FA koostumuksen WAT ja lihavuus on korostettu [24]. Koska niiden edeltäjä asema signalointi lipidivälittäjäaineita, FA ovat tärkeimpiä tekijöitä tulehduksessa. Vastauksen tyyppi että FA aiheuttaa voimakkaasti riippuvainen niiden biokemialliset ominaisuudet, kuten lukumäärä ja sijainti kaksoissidosten. Tässä suhteessa eri FA perheiden olemassa, nimittäin tyydyttyneitä FA, monotyydyttymättömien FA, ja ω3 ja ω6 monityydyttymättömiä FA (PUFA). PUFAita käyttää pro- tai anti-inflammatorisia vaikutuksia riippuen niiden kemiallisesta rakenteesta. Vastakkaista käyttäytymistä ω3- (anti-inflammatorinen) ja ω6- (pro-inflammatorinen) PUFA-moduloinnissa useita rasva- ja immuunijärjestelmän solujen toiminnot on osoitettu [25]. Erityisesti dokosaheksaeenihappoa (DHA) on osoitettu saavan aikaan voimakas anti-inflammatorinen aktiivisuus [26].

Tavoite Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tunnistaa muutoksia tulehdus- tilan ja tietyn FA profiilit WAT liittyy mahdollisesti CRC kehittäminen. Työhypoteesi oli, että WAT edustaa alkuperäistä missä ruokavalion FA voi vaikuttaa tulehdusta. FA voisi osaltaan säilyttämään oikea tasapaino keskeisten transkription sääntelyviranomaisten, näin rajoittaa tulehdusreaktio ihmisen rasvasolut. Määritellä roolin laadullisia kuin määrällisiä muutoksia WAT ​​FA profiilit kudoksen tulehdus, mahdollisesti vaikuttamalla syövän kehitystä, vertasimme sisällön ω3- ja ω6-FA: ita ja tulehduksellinen tila adiposyyttien eristetyn sisäelinten WATS of normaalipainoisilla ja ylipaino /lihavia yksilöitä vaikuttaa tai ei CRC.

Annoimme näyttöä tulehdusta ympäristön WAT CRC potilaiden arvioituna ylös-säätely STAT3, ja samanaikainen väheneminen PPARy ja adiponektiini suhteen terveisiin henkilöihin. Tämä epätasapaino oli riippumaton lihavuuden aste ja korreloi vähentynyt ω3- /ω6-PUFA suhde. Mielenkiintoista, DHA hoito torjua muuttuneen aktivoinnin STAT3 sekä stimuloi PPARy ja adiponektiini ilme.

Yhteenvetona tulokset viittaavat siihen, että adiposyytin toimintahäiriöitä esiintyy CRC potilailla, luoden proinflammatoristen ympäristö, joka saattaa suosia syövän kehittymisen. Lisäksi suojaava potentiaali DHA uudelleen käyttöön tasapaino pro- ja tulehdusta tekijät voivat edustaa hyödyllinen työkalu ennaltaehkäiseviä ja terapeuttisia strategioita.

Oppiaineet ja menetelmät

Ethics Statement

tutkimus protokolla on hyväksynyt eettinen komitea Istituto Superiore di Sanità. Kaikki aiheet antoivat tietoisen suostumuksensa mukaan Italian lain asiaa (asetus Italian terveysministeriön 25. tammikuuta 2001 julkaistu virallisessa lehdessä 3. huhtikuuta 2001). Osallistujat jos niiden kirjallinen suostumus osallistua tähän tutkimukseen.

eristäminen ihmisen sisäelinten rasvasolut

Ihmisen sisäelinten rasvasolut kerättiin nukutetuista yksilöitä, joille tehdään vatsaleikkaus tai laparoskopia CRC tai lieviä sairauksia. Tätä tarkoitusta varten 22 potilaasta vaikuttaa CRC seulottiin määritellä kelpoisuuden tutkimuksen perusteella seuraavat kriteerit: histologisesti osoittautunut ensisijainen paksusuolen adenokarsinooma, vaiheessa Duke A, B, C /vaiheen I-II-III, mitään T, mitään n, M0.

Kahdeksantoista aiheista tehtiin abdominaalinen leikkaus sappirakon sairaus ikterus, napatyrä, ja kohdun fibromatoosi seulottiin on ilmoittautunut verrokkien.

poissulkeminen kriteerit kaikkien koehenkilöiden: sädehoito, kemoterapia, steroidisia ja steroideihin tulehdusta hoitoja, hormonaalista korvaava tai ehkäisymenetelmän terapiaa, hormonihoidon mistään kilpirauhasen toimintahäiriöitä, huumeiden tai alkoholin väärinkäyttö, diabetes, krooninen munuaisten vajaatoiminta, muita syöpätauteja patologioita, raskaus, henkinen vamma. Siten kaksitoista CRC aiheista (8 narttua ja 4 urosta, ikä 45-67), ja 12 verrokeilla (8 narttua ja 4 urosta, ikä 48-72) otettiin ja jakaa neljään ryhmään: normaalipainoisilla ilman CRC (NW; n = 5); ylipainoisia /lihavia ilman CRC (Ob; n = 7); normaali paino CRC (NWCC; n = 5); ylipainoisia /lihavia kanssa CRC (ObCC; n = 7). Vuonna NW ja NWCC ryhmiä, painoindeksi (BMI) vaihteluväli oli 22,0-24,9 kg /m

2. Vuonna Ob ja ObCC ryhmien BMI vaihteluväli oli 26,0-40,0 kg /m

2, vyötärönympärys 95 cm miehille ja 80 cm naisille. WAT näytteitä suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [27].

Kymmenen kaksikymmentä grammaa WAT ​​koepalat microdissected, huuhdeltiin useita kertoja 0,9% NaCl, ja hajotettiin 5 ml: lla Krebs-Ringer-liuosta (0,12 M NaCl , 4,7 KCI, 2,5 mM CaCI

2, 1,2 mM MgSO

4, 1,2 mM KH

2PO

4), joka sisältää 20 mM HEPES pH 7,4, 3,5% BSA rasvahappo-vapaata, 200 nM adenosiini, 2 mM glukoosi ja kollagenaasia (tyyppi 1) 1 tunnin ajan (1 mg /g rasvakudos) 37 ° C: ssa ravistellen vesihauteessa [28]. Kollageenidigestoinnin jälkeen rasvasolut eristettiin kuten aiemmin on kuvattu [27].

hoito adiposyyttien DHA

adiposyyttien käsiteltiin 10 uM DHA (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) . DHA liuotettiin typen alla edellytyksellä, 100% etanolilla, jotta 10 mM kantaliuokset, joita säilytettiin -20 ° C: ssa. Kantaliuokset laimennettiin elatusaineissa ennen solujen käsittelyä. Etanolin lopullista pitoisuutta käsitellyissä soluissa oli alle 0,1%. Jos haluat määrittää pienin tehokas pitoisuus DHA, suoritimme alustavia kokeita, inkuboimalla eristetty rasvasolut eri pitoisuuden DHA (1-50μM) eri ajanjaksoilta (6-24h). Perusteella saatujen tietojen (ei esitetty), kokeet suoritettiin inkuboimalla rasvasolut 10 uM DHA: ta, 18 tuntia.

Rasvahapot analyysi

Yhteensä lipidejä WAT näytteet uutettiin kloroformilla metanoli 2: 1 (v /v) mukainen Folch et al. [29]. FA metyyliestereitä valmistettiin 2% metanolisella HCl: lla 100 ° C: ssa 2 tuntia, ja uutettiin heksaanilla lisäyksen jälkeen 2% natriumbikarbonaattia. Kaikki reagenssit lisättiin butyloitua hydroksitolueenia (BHT) on lopullinen pitoisuus 25 mg /l, jotta vältetään itsehapetuksen PUFA [30].

Rasvahappometyyliesterit analysoitiin käyttämällä PerkinElmer Clarus 500 kaasukromatografi, joka on varustettu kanssa 60 mx 0,25 mm ID Kvartsilasinen kapillaarikolonnia (RTX 2330, Restek, Bellefonte, PA, USA). Helium on käyttää kantaja-kaasua 0,8 ml /min. Uunin lämpötila oli alun perin asetettu 150 ° C.After 2 min, se nostettiin 220 ° C: ssa, nopeudella 3 ° C /min, ja sitten 240 ° C: seen 2 ° C /min. Pylvään lämpötila pidettiin 240 ° C: ssa 5 min. Injektorin ja detektorin (FID) asetettiin 250 ° C: ssa. Piikit tunnistettiin vertaamalla niiden retentioaikojen kanssa FA metyyliesterin standardien (Supelco 37 Komponentit FAME Mix, Sigma-Aldrich) ja kvantitoitiin käyttäen triheptadecanoin (Sigma-Aldrich) sisäisenä standardina (IS).

Proteiinimääritys Western blot-analyysi

Koko solu-uutteet valmistettiin adiposyyteistä, kuten aikaisemmin on kuvattu [31]. Tumaproteiiniuutteet valmistettiin Nuclear /sytosoliin fraktiointi Kit (Medical Biological Laboratories, Watertown, LA, USA) mukaan valmistajan ohjeiden. Immunoblottaus analyysit tehtiin käyttäen spesifisiä vasta-aineita STAT3 The tyrosiinifosforyloituu muodossa STAT3 (pSTAT3) (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), ydin- PPARy, ja adiponektiini (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Blotteja käsiteltiin sopivan sekundäärisen vasta konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin (Santa Cruz Biotechnology), jota seurasi ECL havaitseminen (Amersham Bio-tieteet, Buckinghamshire, UK). Equal lastaus Proteiinien todennettiin immunoblottauksella vuohen anti-GAPDH ja vuohen anti-Lamin B-vasta-aineita (Santa Cruz Biotechnology) kokonaisille solujen ja tumaekstraktien, vastaavasti. Densitometrinen analyysi suoritettiin käyttäen molekyyli- Imager FX (Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

Evaluation of IL-6 eritystä

vapautuminen IL-6 arvioitiin viljelmän media Elisan kit (R 2 ryhmää verrattiin. Eroja pidettiin merkittävinä, kun P 0,05. Lineaarinen regressioanalyysi suoritettiin sen määrittämiseksi, yksinkertainen korrelaatio kahden muuttujan. P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

aktivoituminen asemaa STST3 ja PPARy adiposyyttien on eri liittyy BMI ja syövän kunnossa

lisääntynyt riski CRC yhteydessä lihavuuteen voisi luottaa paikalliseen poikkeava aktivaatio tulehdus- polkuja perustaa krooninen matala-asteista tulehdustila, mikä voi altistaa syövän kehittymisen. Sen arvioimiseksi, lihavuuden ja /tai CRC vaikuttaa ilmaus /transkriptiotekijöiden kriittisesti mukana säätelyyn tulehduksen, ilmaus pSTAT3 ja ydinvoiman PPARy arvioitiin sisäelinten rasvasolut eristettiin neljä ryhmää aiheista. Kuten kuviossa 1 on esitetty, konstitutiivisesti aktivoitua STAT3 havaittiin adiposyyttien riippumatta aihealueen. Kuitenkin korkeampi pSTAT3 havaittu adiposyyttien peräisin CRC potilailla suhteessa kontrolleihin. Aktivoidut STAT3 lisääntyi merkittävästi sekä NWCC ja ObCC verrattuna BMI toisiaan verrokeilla (+ 80% ja + 151%, vastaavasti; P 0,001). Verrokeilla (NW ja Ob) pSTAT3 tasot eivät korreloineet BMI taas CRC potilaille liikalihavuuteen merkittävästi sääteli pSTAT3 lausekkeen suhteessa NWCC (3,47 + 0,40 OD ja 2,15 + 0,26 OD, vastaavasti; P 0,01) (kuvio 1A ).

Ihmisen sisäelinten rasvasolut, kerätään neljää aiheista, pidettiin seerumin puutteessa 18 tuntia. Koko solu-uutteita ja ydin- proteiinin uutteet erotettiin SDS-PAGE: lla ja analysoitiin käyttäen anti-pSTAT3 (A), anti-PPARy (B) ja anti-adiponektiini (C) vasta-aineita. Tulokset normalisoitiin STAT3, Lamin B ja GAPDH proteiinipitoisuus vastaavasti.

NW: normaalipainoisilla koehenkilöillä (n = 5); Ob: ylipainoinen /lihavilla henkilöillä (n = 5); NWCC: normaali paino peräsuolen syöpä (n = 7); ObCC: ylipainoisia /lihavia kanssa peräsuolen syöpä (n = 7). Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. *, P 0,05 verrattuna NW; **, P 0,05 verrattuna NW ja Ob; ***, P 0,05 verrattuna NW, Ob, ja NWCC. Edustavia blotit näkyvät.

Immunoblottausmääritys analyysi ydinvoiman PPARy päällikön säätelijä kypsä adiposyytti geenejä, osoitti, että sen ilmentyminen vaikutti merkittävästi molempien ylipainoisia ja syöpä. Erityisesti rasvasolut peräisin ylipainon /lihavilla henkilöillä, ilman tai CRC (1,10 + 0,15 OD ja 1,26 + 0,19 OD, vastaavasti), sekä niillä, NWCC aiheista (1,73 + 0,40 OD), osoitti huomattavasti vähemmän PPARy verrattuna NW yksilöitä (3,11 + 0,23 OD; P 0,01) (kuvio 1 B). Kuitenkin NWCC henkilöillä PPARy pitoisuudet olivat yli 40% suurempi suhteessa kaikkiin lihavilla henkilöillä, vaikka tilastollista merkitsevyyttä ei saavutettu.

Noudattaen Näiden tulosten ilmaus adiponectin, tärkein PPARy tavoite geeni tunnettu anti-inflammatorinen toiminto, tiiviisti näkyy ilmentymisen PPARy on vähentynyt Ob, NWCC ja ObCC yksilöiden suhteen valvontaa NW ryhmä. Erityisesti, adiponektiini ilmentyminen oli merkittävästi vähentynyt adiposyyttien lihavilla henkilöillä, joilla on tai ei ole syöpää (0,26 + 0,06 OD ja 0,20 + 0,06 OD, vastaavasti), verrattuna NW (1,12 + 0,31; P 0,01) (kuvio 1C).

suhde ω3- ja ω6-PUFA in WAT laskee CRC aiheista riippumatta BMI

Sen arvioimiseksi, onko laadullisia muutoksia, muut kuin määrällinen niitä, FA tallennettu sisäelinten WAT liittyy mahdollisesti CRC esiintyminen sisältöä ω3- ja ω6- PUFA arvioitiin sisäelinten wATS eristetty normaalipainoisilla ja ylipainoisilla /lihavilla vaikuttaa tai ei CRC.

Kuten taulukosta 1, kaasu-analyysin suorittamiseksi eivät osoittaneet mitään merkittävää eroa prosentteina ω3-PUFA joukossa neljä ryhmää aiheista. Sitä vastoin osuus ω6-PUFA kasvoi sekä lihavia ryhmiä, ja saavutti tilastollista merkittävyyttä ObCC, suhteen sekä normaali paino ryhmät (P 0,05). Huomattavaa on, että löysimme merkittävä lasku ω3- /ω6-PUFA suhde paitsi lihavia ryhmissä mutta myös NWCC suhteessa NW henkilöillä (P 0,05).

NW

Ob

NWCC

ObCC

Kylläinen FA (%) 30 + 332 + 431 + 330 + 3Monounsaturated FA (%) 59 + 454 + 558 + 355 + 6ω3-PUFA (%) 0,8 + 0.10.7 + 0,20 0,7 + 0.20.9 + 0.2ω6-PUFA: (%) 10,6 + 1.112.8 + 1.410.6 + 0.214.0 + 1,2 *

# ω3- /ω6-PUFA ratio0.08 + 0.0090.056 + 0,008 * 0,065 + 0,006 * 0,059 + 0,006 * Taulukko 1. Kaasu-kromatografia-analyysi WAT rasvahappojen pitoisuus neljään ryhmään aiheista.

prosenttiosuudet tyydyttyneitä ja kertatyydyttymättömiä rasvahappoja (FA) ja ω3- ja ω6-monityydyttymättömien rasvahappojen (PUFA) arvioitiin sisäelinten rasvasolut eristetty normaalipainoisilla (NW); ylipainoisia /lihavia (Ob); normaali paino peräsuolen syöpä (NWCC), ja ylipainoisia /lihavia kanssa peräsuolen syöpä (ObCC) aiheita. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. * P 0,05 verrattuna NW;

# P 0,05 verrattuna NWCC. CSV Lataa CSV

Lineaarinen regressioanalyysi pyritään arvioimaan välisestä yhteydestä liikalihavuuden aste ja ω3- /ω6-PUFA suhde osoitti käänteinen korrelaatio BMI ja ω3- /ω6-PUFA-suhde (R = -0,44) (kuvio 2A) . Kuitenkin, kun ohjaus ja CRC aiheita tarkasteltiin erikseen, vahva ja merkittävää korrelaatiota ei havaittu henkilöillä ilman CRC (R = -0,74; P 0,05) (kuvio 2B), mutta ei kärsivien CRC (kuvio 2C).

V: kaikissa aineissa; B: aineet ilman peräsuolen syövän; C: aiheista vaikuttaa peräsuolen syövän.

DHA vaimentaa STAT3 aktivointi ja IL-6 eritystä sisäelinten rasvasolut

Koska PUFA koostumus viskeraalisen adiposyyttien saattaa olla pääasiallinen rooli epätasapainossa pro- ja tulehdusta tekijät esiintyvät CRC, tutkimme onko altistuminen adiposyyttien w3-PUFA voisi palauttaa solun homeostaasin. Tämän tavoitteen, arvioimme vaikutus DHA ilmentymisen pSTAT3, ydin- PPARy, ja adiponektiini adiposyyttien eristetyn eri aiheista.

Kuten kuviossa 3A on esitetty, DHA merkittävästi (P ​​ 0,001) alassäädetty pSTAT3 että rasvasolut eristetty Ob (-62%), NWCC (-56%), ja ObCC (-59%) henkilöillä suhteessa käsittelemättömän pariksi aiheista. Sitä vastoin DHA ei aiheuttanut mitään vaikutusta rasvasolut eristettiin NW ryhmä kohteita.

V: Ihmisen sisäelinten rasvasolut, kerätään neljää aiheista, pidettiin seerumin puutteessa 18 tuntia. Koko solu-uutteet eroteltiin SDS-PAGE: lla ja analysoitiin käyttäen anti-pSTAT3 vasta-aine. Tulokset normalisoitiin STST3 valkuaispitoisuus. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. Edustavia blotit näytetään. B: IL-6 vapautuminen arvioitiin elatusaineet Elisan kuvatulla Materiaalit ja menetelmät.

Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. *, P 0,05 suhteessa käsittelemättömiin pariksi soluja. NW: normaalipainoisilla koehenkilöillä (n = 5); Ob: ylipainoinen /lihavilla henkilöillä (n = 5); NWCC: normaali paino peräsuolen syöpä (n = 7); ObCC: ylipainoisia /lihavia kanssa peräsuolen syöpä (n = 7).

Koska STST3 on keskeinen osa signalointipolkujen johtaa eritystä proinflammatoristen sytokiinien kuten IL-6 [32,33] , arvioimme, onko DHA aiheuttama modulaatio pSTAT3 rinnalleen samanaikaista alas-säätely IL-6. Kuten kuviossa 3B, eritystä tämän sytokiinin merkittävästi vähentynyt DHA käsitellään adiposyyttien kulttuureissa kaikissa ryhmissä yksilöiden (NW, -30%, NWCC, -41%, Ob, -44%, ObCC, -50%) ja suhteessa käsittelemättömien pariksi soluihin.

korrelaatio analyysit välillä ω3- /ω6-PUFA suhde, BMI, ja pSTAT3 alas-modulaatio

sen arvioimiseksi, onko suhde välillä ω3- /ω6 -PUFA suhde, BMI, ja laajuus pSTAT3 lasku jälkeen DHA hoidon, korrelaatiokertoimet ja taustatekijät näistä muuttujista arvioitiin.

Olemme löytäneet merkittävän käänteinen korrelaatio ω3- /ω6-PUFA suhde ja prosenttiosuus pSTAT3 lasku sekä kontrolli- (R = -0,86; p = 0,014) ja CRC-potilailla (R = -0,89; p = 0,0005) (kuvio 4A ja B). Havainto, että DHA hoito oli tehokkaampi rasvasolut yksityishenkilöiltä osoittaa alhainen ω3- /ω6-PUFA suhde WAT, ehdotti, että DHA voi ratkaisunsa ”normalisoi jäljempänä ω3- /ω6-PUFA suhde kontrolliarvoihin.

Korrelaatio ω3- /ω6-PUFA suhde ja prosenttiosuus pSTAT3 lasku jälkeen DHA hoidon verrokeilla (n = 10) (A) ja syöpä (n = 14) (B). Korrelaatio BMI ja prosenttiosuus pSTAT3 lasku jälkeen DHA hoidon verrokeilla (C) ja syöpäpotilailla (D).

Koska huomioon välisen suhteen painoindeksin aste ja laajuus vaste DHA hoito, löysimme merkittävä positiivinen korrelaatio BMI ja pSTAT3 vähennys (R = 0,77; p = 0,017) valvonta (kuvio 4C), mutta ei syöpäpotilailla (kuvio 4D).

DHA edistää PPARy aktiivisuutta ja adiponektiini ilmaisu

tutkimiseksi, DHA aiheuttama säätely alaspäin pSTAT3 seurasi muutokset PPAR aktiivisuuden ja adiponektiini sisällön, immunoblottaus analyysi suoritettiin. Kuten kuvassa 5, DHA hoito merkitsevästi säädelty sekä ydin- PPARy ja adiponektiini adiposyyttien eristetty kaikista ryhmistä aiheita nähden pariksi aiheita ei saa hoitoa (kuvio 5A, B).

Human sisäelinten rasvasolut, kerätään neljää aiheista, pidettiin seerumin puutteessa 18 tuntia ja inkuboitiin 10 pM DHA, kuten on esitetty materiaalit ja menetelmät. Tumaproteiiniuutteet ja kokosolu-uutteet eroteltiin SDS-PAGE: lla ja analysoitiin käyttäen anti-PPARy (A) ja anti-adiponektiini (B) vasta-aineita. Tulokset normalisoitiin Lamin B ja GAPDH valkuaispitoisuus, vastaavasti. NW: normaalipainoisilla koehenkilöillä (n = 5); Ob: ylipainoinen /lihavilla henkilöillä (n = 5); NWCC: normaali paino peräsuolen syöpä (n = 7); ObCC: ylipainoisia /lihavia kanssa peräsuolen syöpä (n = 7). Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SEM. *, P 0,05; **, P 0,01; ***, P 0,01 verrattuna niihin pariksi soluihin. Edustavia blotit näkyvät.

Keskustelu

WAT, nimittäin sisäelinten WAT, on tärkein lähde proinflammatoristen tekijöiden, kuten adipocytokines (esim IL-6 ja TNFa) ja pro- tulehduksellinen kemokiinien (esim CCL2: n, CXCL8). Lihavilla henkilöillä, WAT on soluttautunut makrofageja, jotka osallistuvat aktivointiin paikallisten tulehduksellisten polkuja. Tämän seurauksena, liikalihavuus luo krooninen matala-asteinen tulehdus, joka vaikuttaa metabolisen homeostaasin ajan. Yhdistys lihavuuden lisääntynyt riski, kehityksen ja etenemisen CRC on todettu [34]. Epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että ylipainon ja lihavuuden osuus 14% kaikista syöpään liittyvien kuolemien miehillä ja 20% naisilla [3,35]. Jokaista 2,4 yksikön kasvua BMI, CRC riski kasvaa 7% [36]. Siten nousussa lihavuuden maailmanlaajuisesti ovat todennäköisimmin vaikuttaa merkittävästi lihavuuteen liittyviä CRC tulevina vuosikymmeninä. Luultavasti johtuen anatomisista läheisyys sisäelinten WAT suoleen vatsaonteloon, kuivatus sen mahdollisesti haitallisia proinflammatoristen tuotteita portaalin kautta liikkeeseen kasvaa elimessä haavoittuvuutta.

Tässä tutkimuksessa tarjoamme ensimmäinen todiste varten ”tulehtunut” sisäelinten WAT potilailla vaikuttaa CRC.

Koska huomioon STAT3 aktivointi, lihavuus aiheuttanut erilainen vaikutus riippuen läsnäolo tai ei syövän. Verrokeilla lisääntynyt liikalihavuus ei liittynyt mitään kasvua pSTAT3 tasoilla. Päinvastoin potilailla vaikuttaa CRC läsnäolo lisääntynyt rasvan massan näytti pahentaa sopimatonta aktivoinnin STAT3 liittyvät CRC.

On vakiintunut, että STAT3 keskeinen rooli indusoimisessa ja ylläpitää pro -carcinogenic tulehduksellinen microenvironment sekä aloitettaessa pahanlaatuisen muutoksen aikana syövän kehityksen [37]. STAT3 kiinnostavuus useita puoli aktiivisuutta moduloimalla geenien merkitystä leviämisen ja selviytymistä sekä osallistuvien angiogeneesiin ja immunosuppressio [38]. STAT3 säätelee myös ilmaus metalloproteinaasien että muuttoliikkeitä ja etäpesäkkeiden muodostumisen [39].

Hyvin harvat tutkimukset ovat läsnä pSTAT3 ihmisen WAT upon adiposyytin stimulaation eri aineilla [19,20,40]. Tuloksemme lisää lisätodisteita läsnäolo pSTAT3 vuonna WAT, mikä osoittaa selvästi, että STST3 konstitutiivisesti aktivoitu ihmisen rasvasolut ilman mitään ulkoisia stimulaatiota. Erityisesti, kun taas kasvu pSTAT3 liittyi läheisesti syövän läsnäolon sijasta lihavuus, lasku aktivoitu PPARy ja adiponektiini voimakkaasti määritettiin BMI, sopusoinnussa alhainen näiden tulehdusta tekijät jopa lihavilla henkilöillä ei vaikuta CRC. Tältä osin merkittävä lisääntyminen pSTAT3 tasojen löytyy ObCC potilaiden osalta NWCC aiheita saattaisi käyttää lihavuuden liittyviä muutoksia PPAR ja adiponektiini tasolla perustamalla proinflammatoristen ympäristö, joka edistää STAT3 aktivointia. PPARy säätelee ilmentymistä erilaisten geenien mukana tulehdus, immuniteetti, ja aineenvaihduntaa [41], edistävät sekä aineenvaihdunnan ja immuunijärjestelmän homeostaasin. Huomattavaa on, että PPARy ilmentyy monissa syövissä [42-44], ja PPARy-agonistit on kuvattu rajoittamaan kasvuun ja aiheuttaa apoptoottista solukuolemaa monissa ihmisen kasvaimissa, mukaan lukien CRC [45,46]. Kuitenkin tarkka rooli PPAR syövän ei ole selkeästi selvitetty. Vähentynyt selvästi aktivoida PPAR on korostettu paksusuolessa haavaista koliittia sairastavia potilaita, mikä viittaa siihen, että PPARy saattavat edistää lisääntynyt alttius CRC havaittu tässä potilasryhmässä [47]. On oletettu, että syövän vaikutusta PPARy voi luottaa sen kyky inhiboida tulehdusta edistävä signaaleja joko suoraan tai modulaatio adipocytokines kuten adiponectin [48,49]. Käänteinen assosiaatio adiponektiini ja syövän, erityisesti CRC on ehdotettu. Adiponectin kykenee sen toimintaa suoraan estämällä syöpäsolujen kasvua [50], tai indusoimalla niiden apoptoosin [51], sekä välillisesti väyliä liittyvät glukoosin aineenvaihduntaa, insuliiniresistenssiä ja tulehdus [52,53].

tulosten perusteella perustamaan tulehdusta ympäristön WAT CRC aiheita ja vahvistaa olettamusta, että tulehtuneet WAT saattavat vaikuttaa CRC kehitystä. Noudattaen havaintojemme se on raportoitu, että adiponectin kohdistaen vakiintunut tulehdusta rooli [54], inhiboi IL-6 eritystä ja STAT3 aktivointi [22], ja vaimentaa leviämisen [21] CRC soluissa

.

merkittävä lasku ω3- /ω6-PUFA suhde löytyvät sekä lihavilla ryhmien suhteen NW aiheita yhdessä havainnon, että BMI korreloi negatiivisesti ω3- /ω6- PUFA suhde, vahvisti yhteys lihavuuden ja erikoinen FA koostumus viskeraalisen rasvan todennäköisimmin altistava tulehdus [24]. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen osoitus laadulliset muutokset FA koostumuksessa WAT ​​CRC aiheista riippumatta BMI, mikä osoittaa, että muuttuneen WAT koostumus liittyy epätasapainossa pro- ja tulehdusta tekijät voivat tapahtua syöpäpotilailla . Erityisesti aivan äskettäin on raportoitu, että FA jakauma peräsuolen kudos on merkittävästi erilainen syöpäpotilailla suhteessa terveisiin kontrolleihin [55].

kriittinen rooli FA koostumuksen ajo tulehduksellisten prosessien WAT tuki vielä