Krooninen sairaus

tiivistelmä

loisteputki-vasta-kohdentamista metastaattinen on osoitettu laboratoriossamme jotta kasvain visualisointi ja tehokas fluoresenssilla ohjatun kirurgian. Tavoite Esillä olevan tutkimuksen tarkoituksena oli määrittää, insuliinin kaltainen kasvutekijä-1-reseptorin (IGF-1 R) vasta-aineita, jotka on konjugoitu kirkas fluoroforit, voisi mahdollistaa visualisoinnin metastaattisen paksusuolisyövän ortotooppinen nude hiirimalleissa. IGF-1 R vasta-aine (klooni 24-31) konjugoitiin 550 nm, 650 nm tai PEGyloidun 650 nm fluoroforeista. Ihon alle, ortotooppisille, ja maksa etäpesäke malleja paksusuolensyöpä nude-hiirissä oli suunnattu kanssa loisteputki IGF-1 R-vasta-aineita. Western blotting vahvisti ilmentymisen IGF-1 R: HT-29 ja ihmisen HCT 116 koolonsyöpäsolulinjoissa, sekä ilmentävät vihreää fluoresoivaa proteiinia (GFP). Leimausta fluoroforileimattuja konjugoidun IGF-1 R-vasta osoitti fluoresoivia kalvolle paksusuolen syöpäsoluissa. Subcutaneously- ja ortotooppisesti-siirrettyjen HT-29-GFP ja HCT 116-GFP kasvaimia kirkkaasti fluoresoi aallonpituudella pidemmällä aallonpituuksilla suonensisäisen loisteputki IGF-1 R-vasta-aineita. Ortotooppisesti-istutetut HCT 116-GFP kasvaimia kirkkaasti leimattu fluoresoivalla IGF-1 R vasta-aineita, siten, että niitä voidaan kuvata ei-invasiivisesti on pidemmillä aallonpituuksilla. Kokeellisessa maksa etäpesäke malli, IGF-1 R-vasta-aineita konjugoituna PEGyloidun 650 nm fluoroforeista valikoivasti korosti maksametastaaseista, joka voisi olla ei-invasiivisesti kuvaamisen. IGF-1 R fluoresoivalla vasta-aineella leimattuja metastaaseja oli hyvin kirkas verrattuna normaaliin maksan ja fluoresoiva-vasta-aineen etiketti, joka sijaitsee yhdessä vihreää fluoresoivaa proteiinia (GFP) ilmentymä paksusuolen syöpäsoluja. Esillä oleva tutkimus osoittaa siten, että fluorofori-konjugoidut IGF-1 R-vasta-aineita valikoivasti visualisoida metastaattinen paksusuolen syöpä ja olla kliinistä potentiaalia parantaa diagnoosia ja fluoresenssilla ohjatun kirurgian.

Citation: Park JY, Murakami T, Lee JY, Zhang Y , Hoffman RM, Bouvet M (2016) loisteputki-vasta-Targeting insuliinin kaltaisen kasvutekijä-1 -reseptorin visualisoi Metastaattinen Human Colon Cancer in Orthotopic Mouse Models. PLoS ONE 11 (1): e0146504. doi: 10,1371 /journal.pone.0146504

Toimittaja: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Yhdysvallat |

vastaanotettu: toukokuu 26, 2015; Hyväksytty: 17 joulukuu 2015; Julkaistu: 05 tammikuu 2016

Copyright: © 2016 Park et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustusta National Cancer Institute CA142669 ja CA132971, MB ja AntiCancer, Inc., ja avustusta Korean Research Foundation alla perustutkimuksen edistämiseen rahasto n opetus- ja terveys- Resources Development Korean 2010-0022990 ja JYP. National Cancer Institute tukivat muodossa palkkojen tekijän MB, mutta ei ollut mitään ylimääräistä roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Erityinen roolit tämän kirjoittajan on nivelletty ”kirjoittaja maksujen osiossa.

Kilpailevat edut: JYP, TM, ja RMH ovat nonsalaried tytäryhtiöiden AntiCancer, Inc. YZ on työntekijä AntiCancer, Inc. AntiCancer, Inc., markkinoi syövän eläinmalleissa. Ei ole muita kilpailevia intressejä. Ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

peräsuolen syöpä on toiseksi suurin syy syöpään liittyvien kuolemien länsimaissa [1 ]. Kehittäminen kolonoskopia mahdollistaa varhaisen havaitsemisen ja poistamisen syöpää edeltävien adenomatoottisten polyyppien [2,3]. Täydellinen kirurginen resektio voi korjata hyvin valitun maksan etäpesäke [4,5]. Parannettu kuvantaminen Metastasoituneen paksusuolensyöpä pitäisi lisätä selviytymisen tekemällä kolonoskopia ja kirurgia tehokkaampaa. Olemme aiemmin osoittaneet, että kohdistaminen potilaalle tehdä metastaattinen paksusuolen syövän, mukaan lukien potilaasta peräisin potilaalle tehdä ksenografteissa (PDOX) malleja, joissa fluoresoiva anti-carcinoembyronic antigeeni (CEA) vasta käyttöön parannetun kasvain visualisointi ja tehokas fluoresenssilla ohjatun kirurgian (FGS) [6]. Kohdistaminen epidermaalisen kasvutekijän reseptorin fluoresoivilla vasta-aineilla parantaa kolonoskopia [7].

Tyyppi I insuliinin kaltainen kasvutekijä-reseptori (IGF-1 R) on transmembraaninen tyrosiinikinaasireseptori, joka käsittää kaksi α ja kaksi β-ketjujen ja on suuret reseptori IGF-I ja IGF-II. IGF-1 R on ilmaistu 51 ~ 100%: n koolonsyöpien tutkimuksesta riippuen [8-10]. Korkean taajuuden ilmaisun paksusuolensyöpä ja kalvo subcellular sijainti tekevät IGF-1 R potentiaalisimmaksi fluoresoivien vasta-aineiden avulla syövän visualisointi, diagnoosi, ja FGS [11]. Käyttämällä IGF-1 R on myös muita kliinisiä potentiaalia, koska yli-ilmentymisen IGF-1 R korreloi lyhyempi mediaanielossaolosta paksusuolisyövän potilailla, joille tehdään leikkaus ja adjuvanttihoitoa [10].

Tämä raportti osoittaa, voidaanko IGF- 1R kohdennettuja fluorofori-konjugoiduilla vasta-aineilla visualisoida metastaattinen paksusuolisyöpä sopivassa hiirimalleissa.

Materiaalit ja menetelmät

Colon syöpäsolulinjoissa

ihmisen paksusuolen syövän solulinjat HT-29 [12], ja HCT 116 [13] pidettiin RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (Hyclone, Logan, UT), penisilliiniä /streptomysiiniä (Gibco-BRL, Carlsbad, CA), natriumpyruvaattia (Gibco-BRL) , natriumbikarbonaattia (Cellgro, Manassas, VA), L-glutamiinia (Gibco-BRL), ja minimaalinen essential medium ei-välttämättömiä aminohappoja (Gibco-BRL). Kaikki solut viljeltiin 37 ° C: ssa, 5% CO

2-inkubaattorissa.

rakentaminen GFP-proteiinia ekspressoivien koolonisyöpäsolulinja

rakentaminen vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) ilmentävät HCT 116 on aiemmin kuvattu [14-16]. GFP-geenin transduktio, 20% konfluentteja HCT 116-soluja [17] inkuboitiin 1: 1-seosta retroviruksen supernatantit PT67 pakkaus solut ja RPMI 1640 (Gibco-BRL, Life Technologies, Inc.) 72 tuntia. Solut kerättiin trypsiinillä /EDTA: lla 72 h inkubaation jälkeen GFP retroviruksen supernatantit, ja niitä siirrostetaan suhteessa 01:15 huomioon selektiivisellä alustalla, joka sisälsi 200 ug /ml G418: aa. Taso G418 nostettiin 800 ug /ml portaittain. Ilmentävien kloonien GFP eristettiin kloonaukseen sylinterit (Bel-Art Products, Pequannock, NJ) trypsiinillä /EDTA ja monistettiin ja siirrettiin tavanomaisilla viljelymenetelmiä. Korkea GFP: n ilmentymisen kloonit eristettiin sitten ilman G418 10 siirrostusta valita stabiilia ekspressiota varten GFP [14-16].

Hiiret

Kateenkorvattomia nu /nu nude-hiiriä (AntiCancer Inc., San Diego, CA), 4-6 viikkoa vanhoja , käytettiin tässä tutkimuksessa. Hiiret pidettiin este laitokseen alle HEPA-suodatus. Hiiriä ruokittiin Autoklavoitu laboratorio jyrsijöiden ruokavaliota. Kaikki hiiren kirurgisia toimenpiteitä ja kuvantamisen suoritettiin eläimet nukutettiin injektoimalla lihakseen 50% ketamiini, 38% ksylatsiinia, ja 12% asepromatsiinin maleaatti (0,02 ml). Eläimet saivat buprenorfiinia (0,10 mg /kg ip) välittömästi ennen leikkausta ja kerran päivässä seuraavien 3 päivää lievittävät kipua. Kunto eläinten seurattiin päivittäin. Kasvaimet mitattiin mittaharpilla joka toinen päivä. Kun kasvaimet tuli suurempi kuin 2 cm tai syvä haava oli muodostunut, eutanasia tehtiin. Eläimet olivat kaikki tapettiin 2-3 viikkoa leikkauksen jälkeen. CO

2 hengitysteitse käytettiin eutanasian. Varmistaakseen kuolemaa seuraavan CO

2 tukehtumisen, kaula sijoiltaan suoritettiin. Kaikki eläinkokeet hyväksyttiin AntiCancer, Inc. Institutional Animal Care ja Käytä komitea (IACUC) mukaisesti päämiestensä ja menettelyt hahmoteltu National Institute of Health Guide for Care ja eläinten käyttöä alle Assurance Number A3873-1.

vasta-väriaine konjugaatio

hiiren monoklonaalisia vasta-aineita IGF-1 R (klooni 24-31, Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) konjugoitiin DyLight 650, Dylight 550 tai PEGyloidun Dylight 650 väriaineet (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) kohti valmistajan tiedot, varmistaen vähintään vähintään 4: 1 väriaine: proteiinisuhde [18]. Proteiini: väriaine pitoisuudet vahvistettiin käyttäen NanoDrop Spektrofotometri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts) [18].

Western blotting

Solulysaatit uutettiin lyysipuskurissa, joka sisälsi 70 mM β-glyserofosfaatti , 0,6 mM natriumortovanadaattia, 2 mM MgCI

2, 1 mM etyleeniglykoli tetraetikkahappo, 1 mM DTT: tä (Invitrogen, Grand Island, NY, USA), 0,5% Triton-X100, 0,2 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia ja 1% proteaasia inhibiittoriseoksen (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Lysaatit erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja siirrettiin polyvinylideenifluoridi kalvoja (Millipore, Bedford, MA, USA). Kalvot blokattiin 5% (w /v) rasvatonta maitoa ja tutkittiin anti-IGF-1Rα (SC-712, Santa Cruz, Dallas, TX, USA). Immunoreaktiivisia proteiinit tehtiin näkyviksi käyttäen SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substraatti (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA).

Labeling elävien solujen in vitro käyttäen fluoresoivia IGF-1 R vasta-aineiden

HT-29 ja HCT 116-soluja (2 x 10

5) viljeltiin yön yli. IGF-1 R vasta-ainetta (klooni 24-31), joka on konjugoitu DyLight 550 väriaine laimennettiin 4 ug /ml fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS, Corning Cellgro, Manassas, VA). Viljelyväliaine aspiroitiin soluista ja laimennetun vasta-ainetta lisättiin elävät solut. Soluja inkuboitiin vasta-aineella 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Solut pestiin varovasti 2 kertaa PBS: llä, sen jälkeen kun vasta-aine imettiin pois. Solut havaittiin alle FV1000 -konfokaalimikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani), jossa valkoinen valo ja 559 nm laser [19].

immunohistokemia

Anti-IGF-1 R (klooni 24-31 ) konjugoitu DyLight 650 käytettiin värjäystä tuumorisektioiden diat. Objektilasit inkuboitiin 10% normaalin aasi seerumissa 1 tunti huoneenlämpötilassa, ja inkuboitiin konjugoitu vasta-aine huoneen lämpötilassa 1 tunnin ajan laimennoksella 1: 100. Kudokset kuivattiin ja havaittu IV-100 skannaus laser mikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani), jossa on 633 nm laser [20]. Alternate dioja samasta jäädytetty kasvainkudoksen värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla ja havaittu valomikroskoopilla.

ihonalainen ja potilaalle tehdä kasvain hiiri malleja

HT-29-GFP ja HCT 116-GFP ihmisen paksusuolen syöpäsolut (2 x 10

6) injektoitiin subkutaanisesti paljaiden hiirien kylkiin. Kun ihon alle kasvaimien kasvoivat välillä 10 ja 20 mm halkaisijaltaan, ne kerättiin ja hajallaan pieniksi paloiksi. Kasvain fragmentit istutettiin ortotooppisesti paksusuolen nude-hiirten, kuten aiemmin on kuvattu [6,21,22]. Lyhyesti, yksi 3-mm

3 kasvainpala, joka sopii ompeluun ja aiheutti myös toistettavissa kasvaimen kasvua, oli liitetty suoliliepeen rajalle umpisuolen seinään 8-0 nylon kirurgisia ompeleita (Ethilon ™; Ethicon Inc ., Somerville, NJ). Päätyttyä, umpisuoli palautettiin vatsan, ja viilto suljettiin yhteen kerrokseen käyttäen 6-0 nylon kirurgisia ompeleita (Ethilon).

Maksa etäpesäke malli

HCT116-GFP paksusuolen syöpä -soluja (2 x 10

6), jossa matrigeeliä, injektoitiin pernan nude-hiirten kuten aikaisemmin on kuvattu [17]. Metastaaseja ilmestyi aikana 2-3 viikkoa.

Imaging

sekä ihonalainen ja ortotooppisten kasvaimen malleja, hiiriin injektoitiin IGF-1 R vasta-ainetta, joka oli konjugoitu fluorofori hännän vein, ja sitten koko kehon noninvasiivinen kuvantaminen suoritettiin käyttäen OV100 pieneläinlääketieteen Imaging System (Olympus, Tokio, Japani), kuten edellä on kuvattu [23]. Optimaalinen annos on fluorofori-konjugoidun IGF-1 R vasta-aine määritettiin annos, joka on tuotettu kuvia, joilla on parhaat kasvaimen tausta-suhde ihonalaisen kasvaimen mallia suoraan visualisoitiin OV100. Sen jälkeen kun koko kehon non-invasiiviset että potilaalle tehdä kasvain malli, ex vivo kuvantaminen kasvaimen OV-100 suoritetaan kokeen loppuun. Maksassa ortotooppisten-siirremallissa, kun läsnäolon varmistamiseksi metastaaseja ei-invasiivisia koko kehon kuvantamisen kanssa OV100, hiiret injektoitiin Anti-IGF-1 R: n (klooni 24-31) konjugoituna PEGyloidun DyLight 650. hiiret tapettiin 24 tunnin kuluttua ja ventraali pystysuora viilto rintalastan alavatsan tehtiin ja sitten maksa kuvattiin käyttäen OV-100. Koko maksassa etäpesäkkeitä otettiin pois ja ex vivo kuvantaminen OV-100 toistettiin. Taustalla signaali natiivi maksan väheni valinta herätesuotimet. GFP viritetään 460-490 nm suodatin ja fluoresoivat vasta-aine oli innoissaan 595-635 nm suodatin.

Kuva-analyysi

kuvankäsittely tehtiin Adobe Photoshop CS3 (Adobe Systems Inc ., San Jose, Kalifornia).

tulokset

Expression of IGF-1 R koolonkarsinoomasoluissa in vitro

sekä HT-29-GFP ja HCT 116-GFP paksusuolen syöpä solulinjat ilmensivät pro-IGF-1 R ja IGF-1 R, määritettynä Western blotting. HT-29-GFP ilmaistu IGF-1 R voimakkaammin kuin HCT-116-GFP (kuvio 1A). Western-blottaus toistettiin kolme kertaa, ja havaitsimme samat tulokset joka kerta. Inkubaation jälkeen fluoresoivaa konjugoitua IGF-1 R vasta-ainetta, ilman läpäisyn, useita fluoresoivia tehtiin näkyviksi HT-29 ja HCT 116 solujen yksikerrosviljelmässä, kuten tarkasteltiin fluoresenssimikroskoopilla (Kuva 1 B). Ero häiriöitä sijaan mikroskopia vahvisti, että konjugoitu vasta-aine saatetaan reagoimaan IGF-1 R pinnalla syöpäsolujen (kuvio 1 B).

(A) Western blot -analyysi osoittaa, pro-IGF-1 R: n ja IGF-1Rα ilmentymisen 200 ja 130 kDa koolonsyöpäsolulinjoissa, vastaavasti (HT-29 ja HCT 116). (B) leimaaminen elävien HCT 116 ja HT-29-solujen kanssa 550 nm fluoroforileimattuja konjugoiduilla vasta-aineilla on esitetty useita fluoresoivia pinnalla. Edustavia fluoresenssi yhdistettyjen kuvien vastaava DIC (ero häiriöitä kontrasti) kuvien (x60 vesiupotukseen tavoitteen kanssa FV1000 käyttäen 559 nm laser).

kohdistaminen ihonalainen koolontuumoreissa nude-hiirissä loisteputki IGF-1 R vasta-aineet

Kun HT-29-GFP tai HCT 116-GFP ihonalainen kasvaimet olivat saavuttaneet noin 10 mm halkaisijaltaan, eläimet kussakin annettiin yksi 10, 30, ja 50 ug annosta DyLight 650-konjugoitua anti-IGF -1R (klooni 24-31) 150 ui PBS: ää häntälaskimoon. Ihonalainen kasvain kuvantaminen tehtiin, kun kasvaimen läpimitta oli noin 10 mm. Hiiriä kuvattiin sekä kirkkaan kentän ja fluoresenssivalaistusta käyttäen OV100 48 tunnin kuluttua. 30 ug annoksella konjugoitua anti-IGF-1 R, joka tuotti parhaiten vastakkain kuvia, sekä HT-29 ja HCT 116 ihonalainen kasvaimia oli voimakkaampi fluoresenssi verrattuna taustan (kuvio 2A). Fluoresenssi immunovärjäys suoritettiin jäädytetyn kasvaimen näytteet HCT 116 kasvaimia ja varmisti IGF-1 R on syöpä solukalvojen (kuvio 2B).

(A) Hiiren että kuvaamisen mukaisesti sekä valkoisen valon ja fluoresenssin valaistus. Intensiteetti fluoresenssin HCT 116 ja HT-29-ihonalainen kasvaimia on paljon suurempi kuin tausta. (B) hematoksyliinillä eosiini värjäystä (X200, vasen). Fluoresenssi immunovärjäyty- IGF-1 R (x20 säännöllinen tavoite, IV-100 skannaus laser mikroskoopilla (Olympus), jossa on 633 nm: n laser, oikealla) jäädytettyä HCT 116 kasvainnäytteet esittää fluoresenssin kalvo syöpäsolut.

kohdistaminen ortotooppisten koolontuumoreissa nude-hiirissä, joilla fluoresoiva IGF-1 R vasta-aineiden

hiiret kasvaimia ortotooppisesti-implantoitu hiiren umpisuoli injektoitiin DyLight 650-konjugoitua anti-IGF-1 R: n (klooni 24-31) vasta-aine, jossa on yksi 30 ug annos häntälaskimoon 14 päivää kasvaimen istutuksen jälkeen. Kuvaus suoritettiin ennen ja jälkeen vatsan avaaminen hiirten. Tuumorin koko oli noin 10 mm. OV100 havaittu kasvain fluoresenssin ei-invasiivisesti, jonka Elintensisäistä avoin kuvantaminen sekä ex-vivo (kuvio 3). Fluoresenssi havaittiin ihon, virtsarakon, ja suolen sisällöstä, mutta matalan intensiteetin.

fluoresenssin päässä ortotooppisesti siirrettyjen paksusuolen kasvaimia umpisuoli havaittiin ennen ja jälkeen vatsan laparotomy. Myös fluoresenssi resektoitua kasvain havaittiin. Heikko fluoresenssi havaittiin myös iholta ja, virtsarakon ja suolen sisältö, mutta paljon pienempi intensiteetti kuin kasvain. Valkoinen nuolet osoittavat paksusuolen kasvain.

Targeting paksusuolen syövän maksan etäpesäke nude-hiirissä loisteputki IGF-1 R-vasta

Kolmen viikon kuluttua suonensisäisten HCT 116-GFP solut ruiskutetaan hiiren perna, läsnäolo metastaaseja havaittiin ei-invasiivisia koko kehon kuvantamisen. Hiiriä käsiteltiin sitten PEGyloitu DyLight 650-konjugoitua anti-IGF-1 R: n (klooni 24-31), jossa on yksi 90 ug annos häntälaskimoon ja tapettiin 24 tunnin kuluttua vasta-aineen injektion jälkeen. Teimme kuvantaminen 24 tunnin kuluessa maksassa etäpesäkkeitä malli, koska aiempien kokemusten mukaan konjugoitu vasta-aine irrottaa kasvain nopeammin maksassa etäpesäkkeitä mallia verrattuna ihonalaisen ja potilaalle tehdä kasvainmuodoista [24]. Ventraalinen vatsan laparotomia hiirillä osoitettu olevan useita etäpesäkkeitä maksaan. GFP ja 650 nm fluoresenssin peräisin etäpesäkkeitä, joilla oli normaali maksan vain osoittaa hyvin heikko signaali (kuvio 4A). Vaikka ei ollut mahdollista laskea kaikki hyvin pieniä kasvaimia, ex vivo kuvantaminen osoitti myös, että 650 nm signaali yhteistyössä paikallistaa GFP ja rajatut laajuus kasvain paremmin kuin kirkkaan valon kuvantamisen. Hematoksyliinillä eosiini-värjäys kudosnäytteiden ilmentävät fluoresenssia varmisti etäispesäkekasval- hiiren maksassa (kuvio 4B).

Anti-IGF-1 R konjugoitu PEGyloidun 650 nm väriaine selektiivisesti merkitty HCT 116-GFP etäpesäkkeitä. Sekä in vivo (A) ja ex vivo (B) kuvantaminen osoittavat, että 650 nm fluoroforileimattuja konjugoitua IGF-1 R-vasta-aineiden yhteistyössä paikallistaa HCT 116-GFP fluoresenssi ja tarkemmin demarked kasvain verrattuna kirkkaan valon kuvantamisen (valkoinen nuolenpäät). H E värjäys kudosnäyte (x200) ilmentävät fluoresenssia vahvistaa läsnäoloa etäpesäkekasvainten hiiren maksassa.

Keskustelu

Targeting IGF-1 R sarkooma radioaktiivisesti vasta-aineella ja rintasyövän fluorofori-konjugoitu vasta-aine on kuvattu [11,25]. Esillä olevassa tutkimuksessa, vasta-aine on kohdistettu alfa-alayksikön IGF-1 R on käytetty. In vitro kuvantamisen vahvisti, että konjugoitu vasta-aine sitoutuu IGF-1 R on ulkokalvon paksusuolen syöpäsoluja. Fluoresoivasti konjugoidun anti-IGF-1 R vasta-aineet tehdään kasvaimen enemmän fluoresoivaa kuin tausta, helposti erottaa kasvaimen ympäröivän normaalin elimiä. Tässä raportissa ehdotetaan, että fluoresenssin kuvantamisen kanssa fluoroforileimattuja konjugoidun IGF-1 R-vasta voitaisiin yhdistää tähystys ja FGS parempaan diagnosointiin ja hoitoon paksusuolen syöpä.

IGF-1 R kohdistettuja kuvantaminen saattaa pystyä havaitsemaan suuren riskin polyypit ehdottivat tuloksemme ja aiemmissa raporteissa, että IGF-1 R ekspressiota havaittiin paksusuolessa adenoomien ja tuli vahvempi aste syövän edetessä. Ei-neoplastisia hyperplastiset polyypit eivät ilmaisseet IGF-1 R [26]. Hoitojen aiheuttaman syöpäriskin premaligni polyyppien loisteputki IGF-1 R vasta-aineet voivat mahdollistaa yksilöllisen hoidon paksusuolen polyypit, jopa ilman kudos näytteenottoa ja voi auttaa välttämään tarpeetonta invasiivisia toimenpiteitä tai toistuvaa hoitoa.

IGF-1 R täsmähoitoihin kehitetään ja testattu kliinisissä kokeissa [27]. Ilmentymisen määrittämiseksi IGF-1 R kasvaimissa fluoresenssikuvantamisella ennen hoitoa tai hoidon aikana saattaa pystyä ohjaamaan hoitoon tai ennustaa hoitovastetta. Fluoresenssikuvantamiseen on etuja, koska se ei vaadi invasiivisia kasvaimen näytteenotto- ja voidaan toistaa helposti [28].

Olemme aiemmin osoittaneet tehokkaita FGS paksusuolen syövän hiirimalleissa fluoresoivalla anti-CEA-vasta-aineita [6,29, 30]. Fluoresenssikuvantamiseen on osoitettu havaita pieniä maksametastaaseihin ja poistaa ne myöhemmin leikkauksen potilaille [31]. Varsinkin paksusuolensyöpä, havaitaan maksan etäpesäke kanssa fluoresenssikuvantamisella on tärkeä, koska se voi lisätä täydellinen resektio. Tulokset osoittavat, että IGF-1 R vasta-aine, joka on konjugoitu PEGyloidun fluorofori, etäpesäkkeet tuli paljon fluoresoivaa verrattuna normaaliin maksan tausta, ja tuli havaita tarkasti [24]. Osoitimme aikaisemmin, että PEGyloitu väriaineet konjugoitu kasvain-spesifisten vasta-aineiden vähennetään ei-spesifinen otto normaalissa maksassa [24]. Tavoitteena olevan käsikirjoitus oli osoittaa, että fluoresoiva vasta-aine IGF-1 R voisi tunnistaa laajuus maksan etäpesäkkeiden potilaalle tehdä malleja paksusuolisyövän parempi kuin tavallinen kirkas valo visualisointi, ja saavutimme tämän tavoitteen. Fluoresenssikuvantamiseen käyttäen fluorofori-konjugoitua IGF-1 R vasta-ainetta maksan etäpesäkkeiden olisi tehokas FGS.

Yhteenvetona, olemme osoittaneet, että fluorofori-konjugoitu IGF-1 R vasta-aine on erittäin tehokas merkintöjen paksusuolen syövän hiirimalleissa. Muodollinen bio–analyysillä ja edelleen tutkimuksia paksusuolensyöpä PDOX malleja tarvitaan sen varmistamiseksi, että IGF-1 R suunnattu kuvantamisen voidaan käyttää kliinisissä. Aikaisemmat tutkimukset käyttäen fluorofori konjugoitu vasta-CEA, CA 19-9, Kit, ja MUC-1 ovat osoittaneet kykyä kirkkaasti merkintöjen ruoansulatuskanavan kasvaimet in vivo [6,24,30,32-40]. Tulostuva biomarkkerit on merkittäviä kliinisiä mahdollisuuksia diagnosointiin ja hoitomuotoja, kuten FGS.