Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Haiman neuriitin on histopatologinen merkki haiman neuropatian ja korreloi vatsan neuropaattista kipua tunne haiman adenokarsinooma (PCA) ja krooninen haimatulehdus (CP). Kuitenkin tulehduksellinen solualatyyppien jotka muodostavat haiman tulehdus ja niiden vastaavuus on neuropaattista kipua oireyhtymä PCA ja CP ei vielä tunneta.

Methods

Tulehdussolut haiman tulehdus vaurioita potilaiden PCA (n = 20) ja CP (n = 20) olivat immunomerkatut ja kolorimetrisesti määrällisesti kanssa yleiseurooppalaisen leukosyyttien merkki CD45, jossa CD68 (makrofagit), CD8 (sytotoksiset T-lymfosyytit), CD4 (T-auttajasolujen), CD20 (B-lymfosyytit ), NCL-PC (plasma-solut), neutrofiilielastaasi, PRG2 (eosinofiilien), anti-syöttösolu (MC) tryptaasi- ja korreloi kivun tunne. Hermoa syöttösolujen alatyyppiä analysoitiin kaksinkertainen immunoleimaus MC kymaasia. Expression ja hermo immunologista par-reseptori tyypin 1 (PAR-1) ja tyypin 2 (PAR-2) analysoitiin PCA ja CP ja korreloi kiputilanne potilaista.

Tulokset

PCa ja CP, hermot pääasiassa tunkeutunut sytotoksiset T-lymfosyytit (PCa: 35% kaikista hermoa tulehdussolujen, CP: 33%), makrofagien (PCa: 39%, CP: 33%) ja MC (PCa: 21%, CP: 27%). Molemmissa yhteisöt, neuropaattista kipua tunne liittyi tiettyyn lisäys hermoa MC (PCA kivuttomasti: 14% vs. PCa ilmeisen: 31%; CP kivuttomasti: 19% vs. CP ilmeisen: 34%), jotka eivät vaikuta taajuus muiden tulehdussolujen alatyyppejä. Valtaosa näistä MC sisälsivät MC kymaasia. PAR-1 ja PAR-2 ​​ilmaisua ei korreloi kivun tunne Eturauhassyövän ja CP potilailla.

Johtopäätös

Haiman neuriitti PC ja CP koostuu sytotoksisten T-lymfosyyttien, makrofagien ja MC. Erityinen rikastaminen MC noin haimansisäisen hermot neuropaattista kipua johtuen PCa ja CP viittaa läsnäolo MC aiheuttaman sisäelinten yliherkkyyttä haimassa. Siksi haiman ja enteerisen neuropatiat näyttävät jakaa samantyyppinen neuro-immuuni vuorovaikutuksen sukupolven viskeraalisen kivun.

Citation: Demir IE, Schorn S, Schremmer-Danninger E, Wang K, Kehl T, Giese NA, et ai. (2013) hermoa syöttösolut Erityisesti Rikastettu haiman neuriitti ja neuropatiakipu in Haimasyöpä ja krooninen haimatulehdus. PLoS ONE 8 (3): e60529. doi: 10,1371 /journal.pone.0060529

Editor: Anthony WI. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu 15 joulukuuta 2012 Hyväksytty: 27 helmikuu 2013; Julkaistu: 28 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Demir et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Nämä kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

tulehdus ja syöpä kietoutuvat sukupolveen, kurssi ja tulos ihmisen syöpäsairauksia. Erityinen ja ainutlaatuinen alatyyppi syöpään liittyvien tulehdus kohdataan ympärille hermot haimatuumorien, erityisesti haimasyövän (PCA) ja tulehdussairauksien haiman pään kasvaimeen liittyvä krooninen haimatulehdus (CP). Itse asiassa molemmat näistä kasvaimista sisältävät usein polttoväli tulehdussolujen klustereiden haimansisäisen hermoja [1], [2]. Hänen uraauurtava elektroni-mikroskooppinen tutkimus hermot CP, Dale Bockman kertoi läsnäolo vakavia vahinkoja niin hermoja, jotka oli erityisesti tunkeutunut tulehdussolujen [3]. Myöhemmät tutkimukset teki päättäessään panoksen liittyvät tämän merkitystä kohdennettuja hermo immuunisolujen infiltraatio kutsutaan

haiman tulehdus

PCA ja CP potilaat: Lisääntyvä taajuus ja vakavuus haiman tulehdus on osoitettu kantamaan suuren korrelaation vakavuuden vatsakipu tunne ja neuroplastic muutoksia PCa ja CP potilailla [1], [4], [5].

mekanismit haiman tulehdus on vielä selvittämättä. Mitä tulee tulehduksen välittäjäaineiden mukana haiman tulehdus, interleukiini-8 (IL-8), neuronaalisen kemokiinin fraktalkiini n ja sen reseptorin CX3CR1 on osoitettu yliekspressoituvan hermoja CP kudoksessa, ja lisääntynyt endoneural fraktalkiini läsnäolo havaittiin korreloivan vakavuus haiman tulehdus, kudosten makrofagien tunkeutuminen ja kivun tunne [6] – [8].

tarkka alatyyppejä ja ominaisuuksista immuunisolujen soluttautuminen haiman hermot ovat vielä tuntemattomia. Ainoassa tutkimuksessa liittyvät tähän kysymykseen, Keith et al. osoitettiin puolikvantitatiivinen muoti lisääntyneestä läsnäolosta eosinofiilien noin hermoja CP ja yhdistyksen välillä kivun tunne ja laajuus hermoa eosinofiilinen tunkeutumisen [9].

parempi ymmärtäminen ominaisuuksista hermoa tulehdussolujen infiltraatiota PCA ja CP todennäköisesti mahdollistaa syvällisesti mekanismeja haiman tulehdus. Siksi tässä tutkimuksessa, me pyritään tarjoamaan järjestelmällistä kvantitatiivinen luonnehdinta haiman neuriitti liittyvän tulehdussolujen klustereita PCA ja CP. Tätä tarkoitusta varten olemme määrällisesti peri- ja endoneural leukosyyttien normaaleissa ihmisen haiman (NP), PCa ja CP. Lisäksi olemme tutkineet määrällisen jakautumisen suuren paneelin leukosyyttien osajoukon merkkiaineiden PCa ja CP kudoksen, mukaan lukien CD68 (makrofagit), CD8- (sytotoksiset T-lymfosyytit), CD4 (auttaja-T-solut), CD20 (B-lymfosyytit), NCL-PC (plasma-solut), neutrofiilielastaasi, proteogylcan 2 /PRG2 (eosinofiilien) ja anti-syöttösolujen (MC) tryptaasi- ja kymaasia sisällä hermo tulehduksellinen klustereita. Lopuksi korreloi määrä näitä hermo tulehdussolujen subsets, ja ilmaisu kahden mahdollisesti kärsivät (proteaasi-aktivoitu-reseptori /PAR-1 ja PAR-2) MC-johdettuja proteaaseja on neuropaattista kipua tunne Eturauhassyövän ja CP potilaiden .

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus hyväksyi eettisten komiteoiden ja Technische Universität München, Munich, Saksa ja University of Heidelberg, Saksa.

potilaille ja kudosten

haiman kudosnäytteitä immunohistokemiaan kerättiin potilailta Haimaleikkauksen pään resektio haimasyövän (PCA, n = 20; mies /nainen = 8/12, mediaani-ikä = 66 vuotta ) ja krooninen haimatulehdus (CP, n = 20; mies /nainen = 13/7, mediaani-ikä = 51 vuotta). Kaikki potilaat ilmoitettiin, ja kirjallinen suostumus saatiin kudoksen keräämistä. Mukaan kansainvälisen luokituksen UICC (2009) kaikilla potilailla oli vaiheen IIb haimasyöpä. Etiologia CP oli alkoholi- kaikilla potilailla. Johtuen usein havaittu samanaikaisen tulehduksellinen prosessi on resektio marginaalit haiman kudosnäytteiden, normaali haiman kudosnäytteet saatiin terveiltä elinluovuttajien (NP, n = 10; mies /nainen = 6/4, mediaani-ikä = 38 vuotta) silloin, kun on ei sopiva vastaanottaja elinsiirtoihin käytettävissä. Kudos kokoelma hyväksyi eettisen valiokuntien Technische Universität München, Munich ja University of Heidelberg, Saksa. Resektoitua haiman kudosnäytteitä jaettiin osiin, jotka välittömästi kiinnitettiin 4% paraformaldehydi seurasi parafiini-embedding, kuten aiemmin on kuvattu [1], [10].

vatsakipu

Kaikissa Eturauhassyövän ja CP potilailla, yksittäiset kiputilanne (Pain vs. No Pain) ja yksittäisen kipupisteet (kivun voimakkuus ja taajuus) on takautuvasti rekisteröity ennen toimenpidettä, kuten aiemmin on kuvattu [2]. Kivun voimakkuutta luokiteltiin käyttäen lyhyt asteikko: 0 = ei mitään, 1 = lievä, 2 = kohtalainen ja 3 = voimakas kipu. Kipu taajuus luokiteltiin 3 = päivittäin, 2 = viikoittain ja 1 = kuukausittain. Laskea vakavuus, kipu voimakkuuden ja kivun taajuuden kunkin yksittäisen oli kerrottu. Mukaan lopulliseen kipupisteet, potilaat jaettiin kolmeen alaryhmään: Pain I (0) edustaa potilaiden ryhmässä ilman kipua, Pain II (1-3) potilailla, jotka kärsivät lievää kipua ja Pain III (4-9), kohtalaista tai vaikeaa kipua.

immunohistokemia kaksinkertainen immunofluoresenssilla merkinnät

Peräkkäisen 3 um: n osia parafinoidut NP PCA ja CP analysoitiin yleiseurooppalaisen hermosolujen markkeri Protein Gene Product 9,5 (PGP 9,5) ja tulehdussairauksien solunpintamarkkereiden lukien klusterin eriyttäminen 45 (CD45) kuten yleiseurooppalainen leukosyyttien markkeri, CD8 merkkirokotteina sytotoksisia T-lymfosyyttejä, CD4 leimaamiseen auttaja-T-lymfosyytit, CD68 merkkirokotteina makrofagien, neutrofiilien elastaasi (NE) varten neutrofiilisia granulosyyttien, CD20 B-lymfosyyttien, NCL-PC plasman soluja, PRG2 varten eosinofiilien ja anti-syöttösolujen (MC) tryptaasi- ja anti-MC kymaasia tunnistamiseksi syöttösoluja. Proteaasi-aktivoidun reseptorin tyypin 1 (PAR-1) ja tyyppi 2 (PAR-2) on immunomerkatut ylimääräisiä peräkkäisissä leikkeissä. Leikkeet inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla on osoitettu laimennoksia yön yli kosteassa kammiossa 4 ° C: ssa (taulukko 1). Negatiivisia kontrolleja inkuboitiin samalla IgG- tai IgM-alaluokan ei-immunisoiduista vasta-aineita. Primaarisen vasta-aineen laimennukset suoritettiin normaalia vuohen seerumia. Kaikki antigeenejä havaittiin kautta DAKO Envision System-HRP (Hampuri, Saksa) tai Alexa Fluor

® 488 ja 594 vasta-aineita (Invitrogen, Saksa) varten vastaavia lajeja. DAB käytettiin kromogeenina. Digitaalinen kuvantaminen suoritettiin Keyence Biorevo BZ-9000-järjestelmä (Keyence, Neu-Isenburg, Saksa).

kvantitatiivinen analyysi tulehdussolujen jakelu ympäri hermoja

Jotta määrittämiseksi määrä tulehdussolujen alatyyppiä ympäri haimansisäisen hermoja, The immunovärjättiin pinta-ala kunkin solun alatyypin sisällä hermo tulehdussolujen klustereita mitattiin kautta ImageJ ohjelmisto (ImageJ 1.36b, Wayne Rasband). Tätä varten kustakin osa potilaan välillä kolme-viisi hermoja osoittavat haiman tulehdus ensin tunnistaa ja sen jälkeen valokuvattu avulla peräkkäisen PGP9.5-värjätään osa ja peräkkäisen hematoksyliini- eosiini-värjättyä osassa. Haiman tulehdus oli histologisesti määritelty ja tunnistettu ”klusterin hermosolujen tulehdussolujen, joka on kosketuksessa perineurium ja /tai endoneurium ja voidaan selvästi rajattu jäljellä yleistä kudoksen inflammatoristen solujen infiltraatiota”. Konversion jälkeen RGB-kuvan 8-bittinen kuva, kynnys funktiota käytetään määrittelemään vaiheeseen avulla ennalta asetetun kynnysarvon, joka ainoastaan ​​etikettejä alueelle viemä immunovärjättiin hermo tulehdussolujen ja ohjelmisto automaattisesti määritetty absoluuttista ja prosenttia alueen tämän vaiheen kunkin kuvan, kuten myös aiemmin on kuvattu [10]. Absoluuttinen alueet mitataan jokaisesta kuvan immunoreaktiivisuus CD8, CD4, CD68, CD20, NCL-PC, PRG2, NE, anti-MC-tryptaasi- ja -chymase sitten liittyvät että CD45 koska yleiseurooppalainen leukosyyttien merkki määrittää jakelu tulehdussolujen osajoukkoja haiman tulehdus solupopulaation. Kuvauksia ja myöhemmät kvantitatiivinen analyysi suoritettiin kolme tarkkailijaa (SS, IED ja ESD) sokeita kliiniset ja immunohistokemiallista dataa, kuten aiemmin on kuvattu [1].

Reaaliaikainen Light Cycler® Quantitative-polymeraasi-ketju- reaktio (QRT-PCR) B

uuttaminen mRNA haiman kudos valmistettiin käyttämällä TissueLyser II ja RNeasy plus (Qiagen /Hilden) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Tämän jälkeen, RNA-määrä ja puhtaus määritettiin käyttäen Nanodrop ND1000 (Peqlab /Erlangen). Ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi suoritettiin Transcriptor-First-Strand cDNA Synthesis kit (Roche /Mannheim) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Expression of proteaasi-aktivoidun reseptorin tyypin 1 (PAR-1, GeneBank, GeneID: 2149), proteaasi-aktivoidun reseptorin tyypin 2 (PAR-2, GeneBank, GeneID: 2150) ja viite housekeeping-geeni syklofiliini-B (CypB , GeneBankissa, GeneID: 5479) mitattiin Roche LightCycier-480 Real-Time PCR System ja LightCyclerTM-480 SYBR Green I Master kit. Mukaisesti Pfaffl menetelmällä [11], suhteellinen ilmentyminen perustui keskimääräisen rajanylityspaikalla välinen poikkeama 3 näytettä normalisoitu keskimääräinen rajanylityspaikasta poikkeama ohjearvon geeniä, kun tehokkuus korjauksen PCR reaktiot. Suhteellinen ilmentyminen PAR-1 ja PAR-2 ​​näytteissä oli sitten normalisoitu tasolle normaaleissa ihmisen haimassa (NP). Kaikki alukkeet saatiin Sigma-Aldrich.

kvantifiointi hermo immunoreaktiivisuus PAR-1 ja PAR-2 ​​

Jokaisessa osassa keskimääräinen hermo immunoreaktiivisuus PAR-1 ja PAR-2 ​​oli määritetään kautta ImageJ-pohjainen kolorimetrisesti, kuten myös esitetty aiemmin [10]. Lyhyesti, immunomerkatut hermot haiman tulehdus kustakin osiosta PCA tai CP tehtiin photomicrographed ja alistettiin kynnys ohjelmiston toiminnot muuntamisen jälkeen 8-bittinen kuva. Prosentuaalinen immunovärjättiin alue kussakin hermo määritettiin ohjelmiston asettamisen jälkeen määrätyn kynnyksen hermot kiinnostavat alueet kullekin värjäytymistä (eli PAR-1 ja PAR-2) ja vastasi hermo immunoreaktiivisuus. Keskimääräinen immunoreaktiivisuus kunkin potilaan laskettiin määrittämällä keskimääräinen hermo immunoreactivitiy kaikkien hermojen haiman tulehdus kullekin potilaalle.

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä GraphPad Prism 5 Software (La Jolla, CA, USA). Monimuuttujille ja koska keskinäinen riippuvuus mitatun soluosajoukon alueilla ja prosenttiosuudet tietyn neuriitti väestö, Friedmanin testi seuraa Dunnin post hoc testillä. Erityisesti tämä koe sovellettiin vertailun immunoreaktiivisia alueita tulehduksellisten solualaryhmiä, ja myös vertailua niiden suhteellinen (prosenttia) osuus kussakin neuriitti väestöstä. Analysointia varten PAR-1 ja PAR-2: n ilmentymisen välillä NP PCA ja CP, sekä korrelaatio hermo hyökkäyksen hermoa syöttösolujen infiltraatio, Kruskal-Wallis-testi yhdessä Dunnin post hoc testillä. Vertailun of immuunivaikutukset kunkin tulehdussolujen alatyyppi, ja PAR-1 ja PAR-2 ​​neuro-immuunivaikutukset ja ekspressiotasot potilaiden välillä kipua ja potilaille ilman kipua, U-testi on sovellettu. Näiden kahden ryhmän kipu analyysejä, paritonta t-testiä käytettiin lisäksi vahvistamaan havaittuja eroja. Maston soluosajoukon analyysissa tryptaasi–kymaasia kolokalisaation taajuus, Fisherin testiä käytettiin. Tulokset ilmaistaan ​​mediaani (minimiin Maximum) lukuun ottamatta mRNA ekspressiotietojen jotka esitettiin keskiarvona ± keskivirhe keskiarvon (SEM). Kaksipuolinen p-arvot olivat aina laskea, ja vaikutus oli tilastollisesti merkitsevä

p

-arvo ≤ 0,05.

Tulokset

haimansisäisen hermot PCa ja CP ovat pääasiassa tunkeutunut sytotoksisten T-lymfosyyttien, makrofagien ja syöttösolut

Koska päätavoitteena Tässä tutkimuksessa olemme määrällisesti määrä valkosoluja ja valkosolujen osajoukkojen haiman tulehdus. Tätä tarkoitusta varten varatun tilan kunkin leukosyyttien alatyypin kvantifioitiin kautta kolorimetrinen ja ilmaistaan ​​um

2. PCA, haiman tulehdus immuunisolujen populaation sijassa CD68

+ makrofagien [39.87% (10,15; 64,88) kaikkien hermoa tulehdussolujen, 2545 pm

2 (665,9; 22012)], sen jälkeen CD8

+ T-lymfosyyttejä [33.20% (21.06, 54.11), 2623 pm

2 (586,5; 21092)] ja syöttösolut [MC, 14,46% (0,28; 52,10), 1106 pm

2 (21.51; 16090), kuvio 1A-C]. Mikä tärkeintä, kaikki muut suuret tulehdussolujen populaatiot olivat läsnä tuskin havaittavia määriä [CD20

+ B-lymfosyyttien: 0,79% (0,10; 13,84) ja 76,84 um

2 (3,06, 2598); CD4

+ T-auttajasolujen: 1,61% (0,39; 28,45) ja 83.03 pm

2 (13,55, 2962); NCL-PC

+ plasman soluja: 1,87% (0,01; 10,54) ja 140,9 um

2 (0,31; 986,9); PRG2

+ eosinofiilit: 0,49% (0,10; 19,77) ja 38.71 pm

2 (9,93; 888,8); Kuva 1A-C)]. Prosentuaalinen jakautuminen valkosolujen osajoukkojen haiman tulehdus PCA on esitetty kuviossa 1C.

(A) Haiman neuriitti tunnistettiin avulla hematoksyliini- vasta- kohta, joka immunomerkatut kanssa yleiseurooppalaisen hermosolujen merkki PGP9. 5 tai avulla hematoyxlin-eosiinilla (H 78,97) ja 2064 um

2 (142,7; 11334)], CD68

+ makrofagien [34.40% (1,562, 54,22) ja 1852 um

2 (126,9; 11667)] ja syöttösoluista [24.16% (1,78; 56,63) ja 2339 um

2 (221,1; 10155)] oli yleisintä haiman tulehdus vaurioita (kuva 2A-C). Loput tulehduksellinen solualatyyppien olivat vain satunnaisesti havaittu noin haimansisäisen hermoja [CD20

+ B-lymfosyyttien: 0,57% (0,07; 3,19) ja 21,93 um

2 (1,27; 293,9); CD4

+ T-auttajasolujen: 0,56% (0,16; 6,22) ja 27,77 um

2 (5,38, 1325); NCL-PC

+ plasman soluja: 1,20% (0,05; 17,44) ja 121,3 um

2 (2,08; 474,3); PRG2

+ eosinofiilit: 0,61% (0,13; 6,24) ja 23,33 um

2 (2,41, 1384); Kuvio 2A-C]. Prosentuaalinen jakautuminen valkosolujen osajoukkojen haiman tulehdus CP on esitetty kuviossa 2C.

krooninen haimatulehdus, haiman tulehdus oli samanlainen koostumus haimasyöpä, joka sisältää CD68 + makrofagien, CD8

+ sytotoksisten T-lymfosyyttien ja syöttösolujen (MC). ”N” tarkoittaa tunnistettujen hermo. Välillä kolme-viisi hermot haiman tulehdus analysoitiin kunkin potilaan. Kaikki kuvat 200x suurennuksella. Scale palkit osoittavat 50 pm.

Neuropaattinen kipu PCA liittyy nimenomaan lisääntynyt syöttösolujen infiltraatio noin haimansisäisen hermot

Yksi tärkeimmistä tavoitteista Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli verrata jakelu edellä mainittujen leukosyyttien alapopulaatioiden joukossa PCa potilailla, joilla on ilman vatsakipua. Tarkasteltaessa koko summa leukosyyttien hermo tulehdussolujen infiltraatit PCA potilaalla on kipua ei osoittanut mitään eroa koko tulehdussolujen väestö kohti hermo [7574 pm

2 (3121; 36358)] verrattuna PCa potilaat ilman kipua [7320 pm

2 (1155; 33793)]. Analyysi tulehdussairauksien solualatyyppien paljasti, että oli muutos jakelu vain yhden tulehduksellinen solualaryhmään keskuudessa PCa potilaalla on kipua määrä hermoa syöttösolujen oli nimenomaan lisääntynyt PCa potilaiden kipua [pcap, 30.96% (10,75; 52,10) ja 3081 um

2 (21.51; 16090)], kuin potilailla ilman kipua [p voivat, 13,41% (6,64; 26,29) ja 777,6 um

2 (69,93; 3228),

p

0,05 Kuvio 3A-C]. Kaikki muut tulehduksellinen solualatyyppien ei osoittanut mitään merkittävää vaihtelua kanssa kiputilanne PCa potilaista [CD8

+ T-lymfosyyttejä in pcap: 32,22% (22,62; 42,07) ja 2802 um

2 (116; 10933) vs . 39.57% (21.06, 54.11) ja 2208 um

2 (586,5; 21092) in p voivat; CD68

+ makrofagit: 38.74% (21,21; 64,88) ja 2628 um

2 (1214, 22012) in pcap vs. 40,99% (10,15; 53,00) ja 2486 um

2 (665,9; 8097) in p voivat; CD20

+ B-lymfosyyttien: 0,77% (0,23; 5,11) ja 70,64 um

2 (3,36; 2598) in pcap vs. 1,1% (0,10; 13,84) ja 83.04 pm

2 (3,06; 418,8) in p voivat; CD4

+ T-auttajasolujen: 1,42% (0,39; 15,13) ja 82.62 pm

2 (30,62; 562,9) in pcap vs. 1,79% (0,41; 28,45) ja 83.03 pm

2 (13,55; 2962 ) in p voivat; NCL-PC

+ plasman soluja: 2,08% (0,01; 8,61) ja 245,4 um

2 (0,31; 986,9) in pcap vs. 1,46% (0,20; 10,54) ja 69.83 pm

2 (9,50; 597,9) in p voivat; PRG2

+ eosinofiilit: 0,50% (0,14; 19,77) ja 48.98 pm

2 (10,75; 888,8) vuonna pcap ja 0,53% (0,10; 2,44) ja 26,99 um

2 (9,93; 156,6) in p voivat ; Kuvio 3A-C). Prosentuaalinen jakautuminen valkosolujen osajoukkojen haiman tulehdus keskuudessa PCa potilailla, joilla on verrattuna ilman kipua esitetään kuviossa 3C.

Pain tila Eturauhassyövän potilaista ei vaikuttanut suhteellisen jakauman enemmistön hermoa tulehduksellisten solualaryhmiä PCA , mutta se oli vain syöttösoluista, jotka nimenomaan rikastettu noin haimansisäisen hermoja Eturauhassyövän potilaalla on kipua verrattuna potilaisiin, joilla ei kipua. ”N” tarkoittaa tunnistettujen hermo. Välillä kolme-viisi hermot haiman tulehdus analysoitiin kunkin potilaan. Kaikki kuvat 200x suurennuksella. Scale palkit osoittavat 50 pm.

Neuropaattinen kipu CP on ominaista lisääntynyt hermoa syöttösolujen infiltraatio ja tukahduttaminen hermoa sytotoksisten T-lymfosyyttien haiman tulehdus

Vaikka haiman tulehdus oli ensimmäinen kuvattu CP noin uraauurtava tutkimuksissa [5], [9], vaikutus kivun kun jakelu tulehduksellisten solualaryhmiä CP-liittyvä haiman tulehdus ovat laajalti tuntemattomia. Kun verrataan määrään leukosyyttien noin haimansisäisen hermot CP potilailla, joilla vs. ilman kipua, oli kiinnostavaa pienempiä määriä hermoa tulehdussolujen keskuudessa CP potilailla, joilla on kipua [(CPP, mediaani hermoa CD45-immunoreaktiivisia ala: 4333 pm

2 (1118; 10375)] kuin keskuudessa CP potilailla ilman kipua [(CPN, mediaani hermoa CD45-immunoreaktiivisia ala: 9831 pm

2 (1687; 25685)]. Tämä kutistuminen hermoa tulehdussolujen tunkeutumaan sisään CPP oli mukana erityistä nousua suhteellisen osuuden syöttösolujen tässä tulehdussolujen osuus [CPP: 36.93% (10,92; 56,63) vs. CPN: 20.25% (1,78; 37,22)], mutta ei absoluuttiset määrät hermoa syöttösolujen [CPP: 1546 um

2 (455,8; 3129) vs. CPN: 2833 pm

2 (221,1; 7396)]. Lisäksi sekä absoluuttinen että suhteellinen määrä CD8

+ T-lymfosyytit olivat vähentyneet kivulias CP [CPP: 22,35% (12,27; 78,97) ja 768,6 um

2 (142,7; 11334) vs. CPN: 37.32% (28,31; 48,09) ja 3628 um

2 (653,0; 7365)]. Ei ollut muita merkittäviä muutoksia suhteellisen tai absoluuttisen määriä muita tulehdussolujen alatyyppeihin keskuudessa CP potilaiden kipua [CD68

+ makrofagit: 34.40% (5,57; 54,22) ja 1409 um

2 (546,8; 4811) in CPP vs. 34,29% (1,56; 51,03) ja 3129 um

2 (126,9; 6613) in CPN; CD20

+ B-lymfosyyttien: 0,50% (0,07; 1,65) ja 7,07 um

2 (1,27; 40,86) CPP vs. 0,76% (0,08; 3,19) ja 61,42 um

2 (2,57; 293,9) in CPN; CD4

+ T-auttajasolujen: 0,50% (0,16; 4,10) ja 14,47 um

2 (5,38; 208,3) CPP vs. 0,87% (0,28; 6,22) ja 46,73 um

2 (21,97; 351,2 ) in CPN; NCL-PC

+ plasman soluja: 1,06% (0,05; 6,32) ja 49,05 um

2 (2,08; 264,0) CPP vs. 2,38% (0,45; 17,44) ja 151,5 um

2 (8,58; 474,3) in CPN; PRG2

+ eosinofiilit: 0,42% (0,15; 5,48) ja 16,22 um

2 (2,41; 174.1) CPP ja 0,94% (0,13; 6,24) ja 39,42 um

2 (3,34; 1384) in CPN ; Kuva 4A-C)]. Prosentuaalinen jakautuminen valkosolujen osajoukkojen haiman tulehdus keskuudessa CP potilailla, joilla on verrattuna ilman kipua on kuvattu kuviossa 4C.

PCA: n tavoin, myös CP, potilailla, joilla kipu osoittivat suuremman suhteellinen määrä syöttösolujen (MC ) ympärillä haimansisäisen hermoja kuin potilailla ilman kipua. Lisäksi tämä kasvu määrä hermoa MC rinnastettiin Alentamismäärät sytotoksisten CD8

+ T-lymfosyyttien noin haimansisäisen hermoja. ”N” tarkoittaa tunnistettujen hermo. Välillä kolme-viisi hermot haiman tulehdus analysoitiin kunkin potilaan. Kaikki kuvat 200x suurennuksella. Scale palkit osoittavat 50 pm.

hermoa syöttösolujen infiltraatio ei korreloi hermostoputken hyökkäystä haimasyövän

Neural invaasiota (NI) on yksi histopatologisen tunnusmerkkejä PCa ja kohdataan jopa 100% Eturauhassyövän yksilöt [12]. Koska havaitsimme erityistä nousua määrän hermoa MC kivulias PCa, yksi tärkeä kysymys, jotka ovat syntyneet tässä vaiheessa, oliko hermoa MC tunkeutumisen myös korreloi parannetun syövän leviämisen hermoja. Tätä varten me luokiteltu vaikeusasteen NI PCA yksilöt kolmeen luokkaan ( ”0 /no invaasio”, ”I /peri-hermo invaasio” ja ”II /endo-hermostoputken Invasion” [1]) ja korreloivat NI vakavuus suhteellinen määrä hermoa MC. Täällä ei ollut korrelaatiota hermoa MC soluttautuminen ja vakavuusasteen kasvaessa NI PCA [no invaasio /luokka 0: 15.73% (3,08; 65,16), peri-hermostoputken invaasio /Grade I: 14,79% (0,34; 51,71) ja endo hermo invaasio /Grade II: 37.67% (17,65; 60,05),

p

= 0,08, kuvio 5].

haimansisäisen hermoja PCA kudoksissa arvioitiin läsnäolon hermo invaasion (NI) ja luokitellaan NI astetta ”0 /no invaasio”, ”1 /peri-hermo invaasio” ja ”2 /endo-hermo hyökkäystä). Meidän kohortti suhteellinen hermoa syöttösolu määriä ei eroa eriasteisia NI ihmisen PCa. Tulokset esitetään mediaani (minimi, maksimi).

Expression ja hermoston immunologista PAR-1 ja PAR-2 ​​PCA ja CP

neuronit voivat tulla herkistyneet jonka toiminta trombiinin kun par-reseptori tyypin 1 (PAR-1) tai MC-johdettujen proteaasit (esimerkiksi tryptaasi-) kun par-reseptori tyypin 2 (PAR-2) [13]. Kuten havaitsimme merkittävästi kohonneet mastsolun määriä ympäri haimansisäisen hermoja PCA ja CP, myös määrällisesti tasot PAR-1 ja PAR-2 ​​näissä kudoksissa sekä lisäksi haimansisäisen hermoja. Tässä vertailussa mRNA ilmaisun PAR-1 ja PAR-2 ​​NP PCA ja CP eivät osoittaneet merkittäviä eroja tasojen näiden reseptorien (kuvio 6A). Vastaavasti kun PCa ja CP potilasta kerrostuu ”No Pain” ja ”Pain” ryhmien mRNA-tasot näiden reseptorien ei ollut eroa näiden ryhmien (kuvio 6B-C). Kun hermo immuunivaikutukset näiden reseptorien verrattiin potilaiden välillä ja ilman kipua, PCa kipupotilailla taipumus näytteille hieman suurempi immunoreaktiivisuus PAR-1 [3,272% (0,20; 9,44)] kuin ilman kipua [1,22% (0,14; 5,57), kuvio 6D]. Kuitenkin, ei ollut eroa PAR-2 ​​immunoreaktiivisuus PCA kipupotilailla [11,06% (4,45; 17,23)] versus kivuttomasti [11.90% (1,843; 28,64), (kuvio 6D)]. Samoin kiputilanne CP potilaista ei ollut vaikutusta hermo immunoreaktiivisuus PAR-1 tai PAR-2 ​​meidän kohortin (kuvio 6E).

(A) ilmentyminen PAR-1 ja PAR-2 ​​oli verrataan normaalin ihmisen haiman (NP), CP ja PCa kudosten kautta qRT-PCR ja ei eronnut näiden kolmen yhteisöjä. Expression normalisoitui ensin taloudenhoito geeni syklofiliini B ja sitten NP. (B) PCA, kudosten tasojen PAR-1 ja PAR-2 ​​ei ollut eroa potilaiden välillä, joilla kipu verrattuna potilailla ilman kipua. (C) Vastaavasti myös CP, ei ollut eroa mRNA-tasot PAR-1 ja PAR-2 ​​potilailla, joilla ei kipua vastaan ​​kipua. (D) haimansisäisen hermot PCA analysoitiin immunoreaktiivisuus PAR-1 ja PAR-2 ​​ja korreloi kipua potilaan asemaan. Täällä, kivun tunne ei liittynyt eroja immunoreaktiivisuus haimansisäisen hermot PAR-1 tai PAR-2. (E) Yhdenmukaisesti PCA, myös CP, potilailla, joilla on kipua näytteillä samanlainen immuunivaikutukset in hermot PAR-1 ja PAR-2 ​​potilaina kivuttomasti.

Neuropatiakipua liittyvä hermoa syöttösoluja in Eturauhassyövän ja CP ovat MC

TC syöttösoluja

ihmisillä MC voidaan luokitella perustuu niiden välittäjänä sisällöstä kahteen luokkaan: MC

T-tyyppinen syöttösoluista, jotka sisältävät hepariinia ja tryptaasi, ja MC

TC syöttösoluja, jotka lisäksi sisältävät proteolyyttisen entsyymin ”kymaasia” [14]. Määrittämään vallitseva syöttösolu fenotyyppi PCA, CP ja NP, suoritimme double-immunof- merkintöjen haiman kudoksissa vastaan ​​syöttösolujen tryptaasi- ja maston kymaasista. NP, syöttösolut olivat lähes ole todettavissa lainkaan noin haimansisäisen hermoja. Kaikissa NP potilaalla, jotka analyysissä, voimme vain löytää kolme hermoja, jotka osoittivat läheisen spatiaalisen yhdessä tulehdussolujen. Kaksinkertainen immunoleimaus näiden syöttösolujen osoitti, että kaikki nämä solut sisälsivät sekä tryptaasi ja kymaasin [100% (100, 100)], jolloin niitä luokitellaan MC

TC syöttösoluja (kuvio 7A). Toisaalta, sekä PCA ja CP, MC

TC syöttösoluja olivat jälleen hallitseva hermoa syöttösolu fenotyyppiä (81,7 ± 4,9% ja 77,0 ± 4,0%, vastaavasti), mutta molemmat sairaus yksiköiden sisälsi lisäksi hermoa MC

T-tyypin (tryptaasi-only) syöttösolujen (18,3 ± 4,9% ja 23,7 ± 4,0%, vastaavasti). Alaryhmä analyysi harkitsee kiputilanne potilaiden oli samanlainen jakauma hermoa MC

TC ja MC

T syöttösoluja PCA kipupotilailla (MC

TC: 85,6 ± 6,4% ja MC

T: 14,4 ± 6,4%) verrattuna niihin ilman kipua (MC

TC: 77,4 ± 7,4% ja MC

T: 22,6 ± 7,4%, kuvio 6A). Sitä vastoin CP potilaalla on kipua esiintyi merkitsevästi suuremmalla osalla hermoa MC

TC syöttösoluja (MC

TC: 86,9 ± 4,4% ja MC

T: 13,1 ± 4,3%,

p

0,0001) kuin CP potilasta ilman kipua (MC

TC: 62,9 ± 6,4% ja MC

T: 37,1 ± 6,4%, kuvio 6A).

(A) Ihmisen haimakudoksesta näytteitä NP PCA ja CP oli kaksinkertainen immunomerkatut varten hermoa MC-tryptaasi- (punainen) ja MC-kymaasia (vihreä). Kaikissa kolmessa yhteisöjä, valtaosa hermoa MC osoitti kaksinkertainen immunoreaktiivisuus (keltainen overlay) MC-tryptaasi- ja -chymase. Vuonna CP oli merkitsevästi suurempia suhteellisia määriä tupla-immunoreaktiivisia MC potilailla, joilla on kipua kuin niillä, ilman kipua. Valkoiset asteikko palkit osoittavat 100 pm.