Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

KRAS

mutaatioita kolorektaalisyövässä primaarikasvainten ennustaa vastustuskykyä epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR) monoklonaalinen vasta-aine hoito metastasoituneen kolorektaalisyövän syöpä, ja edustavat siten todellinen indikaattori EGFR-reitin aktivoinnin tilan.

Menetelmät /Principal havainnot

KRAS

mutaatiot jälkikäteen tutkittiin polymeraasiketjureaktioilla ja myöhempi sekvensointi kodonien 12 ja 13 (eksoni 2) in 110 metastasoituneen Kolorektaalituumorien. Nämä tutkimukset suoritettiin käyttäen kudosnäytteitä sekä primaarikasvaimen ja niihin liittyviä etäpesäkkeitä (93 maksa, 84%, 17 keuhkoissa, 16%). Kaikki potilaat saivat adjuvanttia 5-fluorourasiili-pohjainen polychemotherapy resektion jälkeen etäpesäkkeitä. Ei ole saanut anti-EGFR hoitoa. Mutaatiot

KRAS

havaittiin 37 (34%) primaarikasvainten ja 40 (36%) liittyvien etäpesäkkeiden, jolloin saatiin 94%: n vastaavuustaulukkoa (kappa-indeksi 0,86). Primaarisessa kasvaimia, joilla

KRAS

mutaatioita oli lyhyempi tautivapaan elinajan ajan jälkeen etäpesäke resektio (12,0 vs. 18,0 kuukautta; p = 0,035) kuin ne, jotka eivät. Suurempi osuus

KRAS

mutaatioita havaittiin ensisijainen kasvaimia patiens keuhko etäpesäkkeet kuin maksan metastaaseja (59% vs. 32%; p = 0,054). Arvioida enempää havainto analysoimme 120 muulla potilaalla leikkaushoitoon metastasoitunut kolorektaalisyöpä jotka aiemmin niiden ensisijainen kasvaimia arvioitiin

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta kliinisiin tarkoituksiin. Erikseen analyysi näistä 120 potilasta osoitti taipumusta korkeampaan

KRAS

mutaatioiden ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet, vaikka se ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Yhdessä ryhmässä 230 potilasta osoitti, että

KRAS

mutatoitiin merkitsevästi useammin primäärikasvaimissa sairastavien potilaiden keuhkojen metastaaseja (57% vs. 35%; P = 0,006).

Johtopäätökset /merkitys

tulokset viittaavat rooli

KRAS

mutaatioita rasituksilta ensisijaisen peräsuolen kasvaimia etäpesäkkeitä keuhkoihin.

Citation: Cejas P, López-Gómez M, Aguayo C, Maderon R, de Castro Carpeño J, Belda-Iniesta C, et ai. (2009)

KRAS

Mutaatiot Ensisijainen peräsuolen syövän kasvaimet ja Related Etäpesäkkeitä: Mahdolliset Rooli ennustaminen keuhkometastaasitestissä. PLoS ONE 4 (12): e8199. doi: 10,1371 /journal.pone.0008199

Editor: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Espanja

vastaanotettu: 1. syyskuuta 2009; Julkaistu: 18 joulukuu 2009

Copyright: © 2009 Cejas et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ sai apurahan tukea Amgen, Red Temática de Investigación Cooperativa en syöpä (RTICC, RD06-0020-1022), Fundación mutua Madrileña ja Fundación para la Investigación BioMedica del Hospital Universitario La Paz (FIBHULP), Madrid, Espanja. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on yksi yleisimmistä pahanlaatuisia kasvaimia ja yksi johtavista syövän syiden liittyvän kuoleman kehittyneissä maissa [1]. Etäpesäkkeiden on tärkein kuolinsyy CRC potilailla. Vaiheesta riippuen primaarikasvaimen, metastaaseja esiintyy 20%: sta 70%: lla potilaista, ja keuhkometastaasien 10%: sta 20%: lla potilaista [2]. Kirurginen resektio on ainoa mahdollisesti parantava vaihtoehto metastasoituneen CRC. Kuitenkin parantava resektio on mahdollista alle 25%: lla vaiheen IV tauti [3], ja alle 5%: lla leikkaushoitoon metastasoitunut CRC ovat elossa 5 vuoden kuluttua. Suuret ponnistellaan parantaa ennustetta metastasoituneen CRC, erityisesti uusien hoitostrategioiden. Epidermaalisen kasvutekijän (EGFR) signalointireitin on tullut keskeinen tavoite terapeuttisen intervention koska kaksi monoklonaalisia vasta-aineita vastaan ​​suunnattuja EGFR on tullut tärkeitä välineitä hallinnassa taudin pitkälle edenneen: setuksimabin ja panitumumabipitoisuus [4], [5]. EGFR aktivoi proliferatiivisia ja antiapoptoottisten signalointireittejä, kuten fosfatidyyli-3 ’kinaasi /Akt ja Ras /Raf /-mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasin (MAPK) polkuja [6]. Poikkeava aktivaatio EGFR-polun CRC voi johtua joko EGFR yli-ilmentyminen tai mutaatiokaavojen aktivoitumista alavirran elementtien EGFR-reitin [7].

KRAS

on pieni GTP-sitovaa proteiinia, joka transdusoi signaaleja aktivoituu solun pintareseptoreihin tumaan. Konstitutiiviset

KRAS

aktivoitumisen pistemutaatioita kodoneissa 12 ja 13: n eksonin 2 on kuvattu tärkeänä syynä EGFR koulutusjakson yliaktivoituminen [7], [8]. Ilmaantuvuus

KRAS

mutaatioita Kolorektaalituumorien vaihtelee 35%: sta 45% [9], ja

KRAS

mutaatioita näyttävät tapahtua aikaisin karsinogeneesis- [10]. Niinpä korkea yhteneväinen

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta välillä ensisijainen kasvaimia ja niihin liittyvät maksametastaaseista on raportoitu [11], [12]. Viimeaikaiset tiedot ovat osoittaneet yhdistyksen välillä

KRAS

mutaatiostatuksesta asema primaarikasvaimen ja kestävyys setuksimabi ja panitumumabin metastasoituneen CRC [13], [14]. Kuitenkin yhdistyksen välillä

KRAS

mutaatiostatuksesta tila ja ennuste on kiistanalainen metastasoituneen CRC, joita ei ole hoidettu anti-EGFR-vasta-aineita, Eräiden tutkimusten välillä on yhteys

KRAS

mutaatioita ja huono ennuste [15] ja jotkut raportointi mitään yhteyttä [12]. Mielenkiintoista, suurin monikeskustutkimus suoritettiin yhdistyksen välillä

KRAS

mutaatio ja ennuste, johon kuului 3439 CRC potilasta, osoitti, että läsnä on glysiinin-to-valiini kodonissa 12

KRAS

merkittävästi vähentynyt etenemisestä vapaa ja yleinen eloonjäämisluvut riippumatta saadusta hoidosta [16].

pyrki selvittämään korrelaatio

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta, ennusteeseen viittaavia tekijöitä, ennusteeseen, etäpesäke malli ja välistä yhdenmukaisuutta primaarikasvaimen ja sovittaa etäpesäkkeitä metastasoituneen CRC.

tulokset

Potilastiedot

takautuvasti analysoitiin näytteet 110 ensisijainen kasvaimia ja 110 vastaavat metastaasien varten läsnäolo

KRAS

mutaatiot kodoneissa 12 ja 13. yleisin metastaattinen sivusto oli maksaan, joka oli metastaattinen sivuston 93 näytettä (84%). Keuhkojen oli metastaattinen sivuston jäljellä 17 näytettä (16%). Etäpesäkkeet ilmestyi synkronoidusti ensisijainen vaurio 57 tapauksissa ja metachronously 53 tapauksessa. Primaarikasvaimen sivusto oli paksusuolen 79 potilasta ja peräsuolen 31 potilaalla. Potilas ryhmään kuului 32 naista ja 78 miestä. Mediaani-ikä oli 64 vuotta (29-86). Kaikki syövät olivat adenokarsinomia ja luokiteltiin mukaan WHO: n kriteerien (taulukko 1).

KRAS

mutaatiot ja Histopatologisten parametrit

Mutaatiot

KRAS

havaittiin 37 (34%) ensisijainen kasvaimia ja 40 (36%) liittyvät etäpesäkeleesioita, jossa on 94% luokan vastaavuutta välillä ensisijaisen ja metastaattinen näytteet (kappa-indeksi 0,86). Eripuraisuus havaittiin 7 potilaalla. Viisi potilasta oli

KRAS

mutaatioita etäpesäkkeitä (neljä maksametastaaseihin ja yksi keuhkometastaaseista) ja villityypin

KRAS

vuonna primaarikasvaimen, kun taas kaksi muuta potilaalla oli

KRAS

mutaatiot vain primaarikasvaimen (1 maksametastaaseihin ja 1 keuhkometastaaseista).

oli vähän välinen varianssi mutaation tyyppi läsnä primaarikasvaimen ja sen etäpesäkkeitä: kaikki paitsi neljä potilasta oli sama mutaatio sekä ensisijainen ja metastaattinen näytteitä. Mutaatioiden tyypistä on esitetty taulukossa 2. Ei ollut mitään suhdetta mutaatioiden tyyppi ja kaikki kliinis-parametri.

o assosiaatioita

KRAS

mutaatioiden ja histopatologisia ominaisuuksia havaittiin ( taulukko 3).

KRAS

mutaatiot ja prognoosi

Tuloksemme osoittavat alhaisempi tautivapaan elinajan jälkeen etäpesäke resektio potilaille, joiden kasvaimet oli

KRAS

pistemutaatio primaarikasvaimen; mediaani tautivapaan elinajan oli 12 kuukautta potilailla, joilla

KRAS

mutaatiot niiden kasvaimia ja 18 kuukautta, joilla ei ole

KRAS

mutaatioita (p = 0,035) (kuvio 1). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että merkittävin riippumaton ennustaja tautivapaan elinajan oli

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta (monimuuttuja HR = 2,068; 95% CI, 1,136-3,766, P = 0,018) (taulukko 4). Ei assosioitunut eloonjäämiseen ja

KRAS

mutaatiostatuksesta tila (kuva 1).

käyrät tautivapaan elinajan (A) ja kokonaiseloonjääminen (B) mukaan

KRAS

tila.

KRAS

mutaatiot ja Metastaattinen Site

mutaation

KRAS

havaittiin suurempi osuus primaarikasvainten of patiens keuhko etäpesäkkeet kuin niillä, joilla maksametastaaseihin (59% vs. 32%, P = 0,054). Kun ositettu alkuperän primaarikasvaimen (paksusuolen tai peräsuolen), että 10

KRAS

-mutated ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet, 7 oli paksusuolen alkuperältään (70%), kun taas muut 3 alkunsa peräsuoli (30%). Tilastollinen analyysi osoitti, että paksusuolen ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet olivat huomattavasti todennäköisemmin

KRAS

mutaatioita kuin paksusuolen ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden maksametastaaseja (P = 0,046), kun taas peräsuolen esivaaleissa oli samanlainen taajuus

KRAS

mutaatioita potilailla, joilla on keuhkojen tai maksan etäpesäkkeiden (taulukko 5). Tutkimiseksi edelleen läsnä

KRAS

mutaatioita ennustajana keuhkometastaasitestissä, tutkimme myös sarjan 120 potilasta, joilla leikkaushoitoon metastasoitunut CRC. Primäärikasvaimissa näistä potilaista oli analysoitu läsnäolon

KRAS

mutaatioiden keskeinen laboratoriossa ennen setuksimabia antoa. Niistä 120 metastaattista potilaista, 86 oli maksassa etäpesäkkeitä ja 34 oli keuhkometastaaseista. Lisäksi oli taipumusta suurempi osuus

KRAS

mutaatioiden ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet kuin niillä, joilla maksametastaaseista, vaikka se ei ollut tilastollisesti merkitsevä (56% vs. 38%; P = 0,1027). Kun olemme analysoineet joukko 230 potilasta, taajuus

KRAS

mutaatioita primäärikasvaimissa sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet oli merkittävästi suurempi verrattuna maksan metastaaseja (57% vs. 35%; P = 0,006). Kun potilaat olivat ositettu primäärikasvain alkuperän, vain potilaille, joilla on paksusuolen primaarikasvaimen alkuperää, oli huomattavasti korkeampi taajuus

KRAS

mutaatioiden ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet kuin niitä, joilla maksametastaaseihin (59% vs. 34 %; P = 0,019) (taulukko 6).

keskustelu

ennuste metastasoituneen CRC on parantunut käyttöönoton jälkeen uusia terapeuttisia aineita kuten anti- EGFR-vasta-aineita [17]. Tämä terapeuttinen menestys korostaa torjumaan EGFR polku hallita kehittyneen taudin. Poikkeava aktivaatio EGFR reitin esiintyy joskus mutaationaalisella aktivoituminen

KRAS

. Viimeaikaiset kliiniset kokeet ovat osoittaneet, että läsnäolo aktivoivia mutaatioita

KRAS

tunnistaa potilaat, jotka eivät ole vastetta setuksimabista [13] tai panitumumabipitoisuus [14]. Itse asiassa näiden tulosten perusteella, mutaatioanalyysiin

KRAS

on nyt suosittelema Yhdysvalloissa Food and Drug Administration (FDA) ennen setuksimabista tai panitumumabipitoisuus annettavaksi Metastasoivassa CRC. Mutaatioanalyysiin

KRAS

on yleisesti suoritetaan primaarikasvaimen, koska se on usein saatavilla vain kudoksen. Lisäksi arvo tämän analyysin suorittamiseksi on primaarikasvaimen tukee lisäksi näyttöä siitä, että

KRAS

pistemutaatioita esiintyä alussa CRC karsinogeneesissä [10]. Kuitenkin tuoreet tiedot ovat osoittaneet useammin mutaatioiden imusolmukemetastaaseja verrattuna niihin liittyvät primaarikasvainten [18]. Tässä mielessä, mahdollinen tarve rebiopsy ja analysointi

KRAS

että etäpesäkkeet on ehdotettu [9]. Muut viimeaikaiset tutkimukset ovat raportoineet korkea yhteneväinen

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta välillä ensisijainen kasvaimia ja niihin liittyvät maksametastaaseista [11], [12], [19]. Tulokset meidän sarjassa 110 potilasta ovat täysin samaa mieltä näiden raporttien sekä taajuus

KRAS

mutaatioita primaarikasvaimia, mikä oli 34% tutkimuksessamme ja suurta välistä yhdenmukaisuutta ensisijaisen kasvaimia ja niihin liittyviä etäpesäkkeitä. Kaikki nämä havainnot vahvistavat, että analyysi

KRAS

mutaatiostatuksesta asema primaarikasvaimen on riittävä korvikemarkkerilta

KRAS

mutaatiostatuksesta tilaansa etäpesäkkeitä. Tutkimuksemme sisältää analyysin sekä maksan ja keuhkojen etäpesäkkeet. Sikäli kuin tiedämme, tämä on ensimmäinen analysoidaan ensisijaisesti Kolorektaalituumorien ja niihin liittyvät keuhkojen etäpesäkkeet ja korreloivat

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta perustuu sekä kliinis-ja Eloonjääntitulokset. Maksa ja keuhkoissa ovat yhteisiä sivustoja CRC etäpesäkkeitä. Toissijainen niiden anatominen verisuonten jakelu, keuhkoetäpesäkkeet ovat yleisempiä peräsuolen syöpiä ja maksametastaaseista useammin paksusuolen syöpiin. Kuitenkin jotkut paksusuolen syöpäpotilaat kokevat keuhkoetäpesäkkeet ilman näyttöä aikaisempien maksametastaaseja. Tämä selittämätön anatominen malli etäpesäkkeitä, havaittiin yhä useammin johtuen täsmällisemmät diagnoosit perustuvat erittäin tehokas TT [20], ehdottaa erikoinen biologinen mekanismi syövän tai erityinen alttius keuhkoparenkyymistä kasvainten näillä potilailla. Tuloksemme osoittavat suurempaa prosenttiosuutta

KRAS

mutaatioiden ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeet kuin niitä, joilla maksametastaaseihin (59% vs. 32%). Lisäksi kun ositettu tuloksemme perustuu primaarikasvaimen sivusto, vain kasvaimet paksusuolen alkuperä oli huomattavasti korkeampi taajuus

KRAS

mutaatioiden ensisijainen kasvaimia sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeitä. Sen sijaan, peräsuolen primaarikasvainten osoitti samanlaista taajuus

KRAS

mutaatiot potilailla, joilla keuhkoetäpesäkkeet kuin ne, joilla maksametastaaseihin. Tarkempaa analysointia tämä havainto tutkittiin itsenäinen sarja primaarikasvainten potilaista, joilla leikkaushoitoon metastasoitunut CRC ja tutki suhde

KRAS

mutaatiostatuksesta asema primaarikasvaimen ja sivuston tuumorimetastaasin. Näillä potilailla,

KRAS

mutaatiostatuksesta asema primaarikasvaimen aiemmin analysoitu kliinisiin tarkoituksiin ennen setuksimabista antoa. Tilastollinen analyysi koko sarja (230 potilasta) paljasti, että

KRAS

on useammin mutatoitunut primäärikasvaimissa sairastavien potilaiden keuhkojen etäpesäkkeitä verrattuna maksan metastaaseja (57% vs. 35%, P = 0,006). Kun tulokset ositettu mukaan sivuston primaarikasvaimen, analyysi suoritimme lukien kaikki 230 potilasta vahvistivat tulokset saimme pienemmän näytteen 110 potilasta: että huomattavasti useammin

KRAS

mutaatioita primaarikasvaimille potilailla, joilla on keuhkojen etäpesäkkeiden ainoastaan ​​sellaiset ensisijainen kasvaimia, jotka ovat peräisin paksusuolessa. Tämä havainto viittaa siihen, että EGFR-polku aktivointi voi sallia paksusuolen tuumorisolut pesä edullisesti keuhkojen parenkyymissä välttää ensimmäisen vaiheen maksan etäpesäke. Aiemmassa tutkimuksessa, jossa arvioitiin

KRAS

tilaansa ensisijainen Kolorektaalituumorien ja ei-Hyväksytty maksan ja keuhkojen etäpesäkkeet osoittivat yhdenmukaisia ​​tuloksia tutkimuksemme ja paljasti suurempi ilmaantuvuus

KRAS

mutaatioita keuhkoetäpesäkkeet kuin metastaaseja (57% vs. 50%) [21]. Kuitenkin tässä tutkimuksessa, suuri ero

KRAS

aktivoinnin välillä ensisijainen ja etäpesäkkeitä olisi voitu naamioida puuttuminen liittyvän ensisijaisen ja metastaattinen näytteitä. Tämä havainto on kliinistä merkitystä, koska se saattaa pystyä tunnistamaan potilaat, jotka ovat todennäköisesti kehittää keuhkoetäpesäkkeet perustuu

KRAS

analyysi primaarikasvaimen. Näiden potilaiden tulee mahdollisesti saada tarkempi kliininen workup, kuten rintakehän scan, joka ei aina sisälly normaaliin kliiniseen jatkokäsittely CRC.

Tuloksemme osoittavat myös, että läsnäolo

KRAS

mutaatioita on itsenäinen ennustetekijä ennustamisessa tautivapaan elinajan (oli tilastollisesti merkittävä). Konstitutiivisen aktivaation Ras-Raf-MAP-kinaasi polku tiedetään, että annetaan proliferatiivisia ja levityksen etuna kasvainsoluihin. Kuitenkin kiistaa olemassa koskien ennustetekijöiden roolia KRAS mutaatioiden CRC. Suurin kliininen tutkimus, jossa analysoidaan ennusteen arvioinnissa on

KRAS

tila oli RASCAL tutkimus, joka osoitti, että glysiini-to-valiini mutaatio kodonissa 12 lisäsi riskiä toistumisen ja kuoleman 30%, riippumatta tyyppi-hoitoa [16]. Kuitenkin tuoreessa tutkimuksessa suoritetaan pieni määrä potilaita ei toistamaan tämän tuloksen ja ei osoittanut mitään vaikutusta

KRAS

mutaatiot eloonjäämiseen [12]. Siten ennustetekijöiden arvo

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta edelleen kiistanalainen. Tuloksemme ovat yhteisymmärryksessä RASCAL tutkimus ja ehdottaa huonompi ennuste potilaille, joilla on

KRAS

-mutated primaarikasvaimia, joilla on merkittävä yhdistyksen välillä

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta ja lyhyempi tautivapaan elinajan . Sitä vastoin ei assosioitunut

KRAS

tila ja kokonaiselossaolo. Tämä selittyy kemoterapian jälkeen uusiutumisen. Monimuuttuja-analyysi osoittaa, että läsnä on

KRAS

mutaatioita on itsenäinen ennustetekijä ennustamisessa tautivapaan elinajan (oli tilastollisesti merkittävä), mikä korostaa merkitystä

KRAS

mutaatiostatuksesta tilaansa esillä sarjan potilaista. Mitä tulee mahdollinen vaikutus mutaation tyypin ennusteeseen, meidän tulokset, toisin kuin RASCAL tutkimus on osoittanut mitään eroja suhteessa mutaation tyyppi. Tietenkin, mahdollinen arvo

KRAS

mutaatioita kuin ennustetekijä esitetään tässä tutkimuksessa on otettava varovasti, rajallisen ja erityisesti sarja potilaiden arvioitiin.

Yhteenvetona havaintomme viittaavat siihen, että

KRAS

-mutated ensisijainen CRC kasvaimet yleensä etäpesäkkeitä useammin keuhkoihin ja liittyy korkeampi uusiutumisen jälkeen resektio etäpesäkkeitä. Tämä havainto saattaa olla kliinistä merkitystä suhteessa seurannan sairastavien potilaiden

KRAS

-mutated ensisijainen CRC kasvaimia, ja siten ansaitsee lisätutkimuksia.

Methods

Ethics Statement

Eettinen komitea La Paz yliopistollisessa sairaalassa Madridissa hyväksytyn nykyisen tutkimuksen. Kaikki potilaat ilmoitettiin ja suostumuksensa kirjallisesti.

hyväksyttävät Potilaat

Sata ja kymmenen Metastasoivassa CRC saatavilla primaarikasvaimen ja pariksi metastasoitunut näytteet valittiin tietokannan potilaita La Paz University sairaala Madrid. Tutkimus hyväksyi sairaalan eettisen komitean. Potilaat diagnosoitu metastaattinen CRC vuosien 1997 ja 2007 Niistä 326 tapausta metastaattisen CRC diagnosoitu tänä ajanjaksona, tutkia sisällyttäminen oli rajattu kanssa parantava etäpesäkkeitä resektioon, käytettävissä kudosnäytteet (molemmat primaarikasvaimen ja liittyvät etäpesäkkeet), käytettävissä seurantatietoa jälkeen etäpesäke poiston, ja onnistunut

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta analyysi. Mediaani seuranta-leikkauksen jälkeen oli 10 kuukautta (vaihteluväli: 0-144 kuukautta). Kaikki olivat histologisesti varmistettuja olemaan peräsuolen adenokarsinooman. Lisäksi, patologiaraporteista sisälsivät tietoa kasvaimen, kasvaimen koko, patologinen vaiheessa kasvaimen (asteen perusteella histologisten erilaistumisen), läsnä ollessa tai ilman imusolmuke etäpesäke, kasvaimen kasvun malli (infiltratiivinen tai laaja), läsnä tai poissa verisuonten ja imusuonten invaasio, ja läsnäolo tai puuttuminen kasvaimen lymfosyyttisen infiltraattien. Ensisijainen vaihe on luokiteltu 4 vaiheisiin mukaan WHO: n kriteerien. Lukumäärä ja koko etäpesäkkeitä määritettiin diagnostisen kuvantamisen, joko vatsan ja lantion tietokonetomografiaa tai magneettikuvausta. Etäpesäke resektio suoritettiin, kun ei ollut näyttöä extra-maksasairaus, varmistaen riittävän toiminta jäljellä maksan resektion jälkeen (noin 25% -30% normaalista maksasta tilavuudesta), jolloin maksan toiminta postoperatively, säätyvät nykyisten maksasairaus kuten maksakirroosi tai hepatiitti. Metastaattinen näytteet on saatu joko maksaan tai keuhkoihin. Nämä metastaattinen näytteet on saatu joko synkroninen tai metachronous vaurioita. Potilaat saivat yhden kolmesta solunsalpaajahoitojen jälkeen etäpesäke resektio (kuvattu taulukossa 1).

Kun löytö ristiriita välillä

KRAS

mutaatiot maksassa ja keuhkoetäpesäkkeet ylimääräinen sarja 128 metastaattinen CRC potilasta (86 maksan etäpesäkkeitä, 34 keuhkojen etäpesäkkeiden ja 8 muunlaisiin mutaatioiden (nämä viimeiset 8 potilaita ei sisälly tilastollinen analyysi) La Paz Hospital otettiin takautuvasti kerättiin vuosina 2007 ja 2009, vahvistaa olettamusta of korkeampi

KRAS

mutaatioita potilailla, joilla keuhkometastaaseista. Näillä potilailla oli leikkaushoitoon etäpesäkkeitä.

KRAS

asema primaarikasvaimen määritettiin kliinisiin tarkoituksiin ennen setuksimabista antoa. ainoa kliinis kerättyjä näille potilaille oli paikalla primaarikasvaimen (paksusuolen vs peräsuoli).

KRAS

analyysi suoritettiin käyttäen TheraScreen K-RAS mutaatio testipakkauksen (DXS Diagnostic Innovations) riippumattoman keskeinen laboratorio Madrid seuraten valmistajan ohjeita.

DNA Extraction

Parafiini-upotettu primaarikasvaimen yksilöiden (n = 110) ja metastaattista kasvaimen yksilöiden (n = 110), joka sisältää vähintään 70% tuumorisoluja, valittiin kunkin potilaan. Kudosblokeista olivat makro-leikeltiin käyttäen turvallisuus terää, kun näytteet olivat alle 70% rikastettua kanssa kasvainsolujen. Metastaattiset kasvaimet sijaitsivat maksassa (n = 93) ja keuhkoissa (n = 17). DNA eristettiin 15 7 um parafiinileikkeet. Kudosleikkeet vahat poistettu kanssa xilol ja nesteytyksestä on alennettu alkoholien. Kudokset digestoitiin proteinaasi K: lla, ja DNA eristettiin käyttämällä MasterPure DNA Kit (Epicentre, Biotechnologies). Kussakin tapauksessa negatiivisia kontrolleja monistettiin PCR: llä ja kokeilussa mukana.

KRAS

Mutaatioanalyysi

polymeraasi-ketjureaktio (PCR) suoritettiin vahvistamaan 139 bp eksonista 2 KRAS käyttämällä spesifisiä alukkeita (ystävällisesti lahjoitti Dr. Laurent-Puig laboratoriossa) ja alle PCR olosuhteissa kuvattu aiemmin [15]. PCR-sekvenssit /ehdot ovat saatavilla pyynnöstä. Tehokkuutta ja laatua monistuksen PCR vahvistettiin ajamalla PCR-tuotteet on 2% agaroosigeelillä. Negatiivinen kontrolli, joka sisältää kaikki komponentit PCR paitsi templaatti sisällytettiin kuhunkin PCR-reaktioon. DNA Amplified-tuotteet puhdistettiin käyttäen QuickStep TM 2 96-Well PCR Purification Kit (Edge BioSystems, Gaithersburg, MD), mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Monistustuotteet kaksisuuntaisesti sekvensoitiin kautta fluoresenssi väriterminaattorireaktioita menetelmä usean kapillaarisen DNA sekvensseri palveluja hyödyntävät tieteellisen puiston Madrid (Madrid, Espanja). Läsnäolo mutaation hyväksyttiin, kun se huippuun korkeus oli 25% tai korkeampi huippu villityypin viittaus.

TILASTOANALYYSI

Fisherin testiä käytettiin tutkimaan yhdistyksen välillä

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta ja eri kliinis. Välistä yhdenmukaisuutta primaarikasvaimen ja siihen liittyvien etäpesäkkeiden analysoitiin käyttäen kappa-indeksi, ja discordance analysoitiin käyttäen McNemar testi symmetria. Tautivapaa elossaolo ja kokonaiselossaoloaika analyysit laskettiin Kaplan Meier menetelmällä, ja selviytyminen käyrät verrattiin käyttäen log-rank-testi. Tautivapaa eloonjääminen määritettiin aika kirurginen resektio etäpesäkkeiden asti dokumentoitu taudin etenemiseen tai kuolemaan. Coxin suhteellisen vaarat monimuuttuja regressioanalyysi suoritettiin. P 0,05 pidettiin merkittävänä. Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS versio 12.0 (Chicago, IL, USA).

Kiitokset

Kiitämme Ester Díaz ja María de Miguel asiantuntija teknistä apua.