Krooninen sairaus

tiivistelmä

PLZF on transkriptio repressorin, joka on keskeisessä asemassa kehityksessä, spermatogeneesin ja syövän synnyn. Down-regulation PLZF on todettu erilaisissa kasvainsolulinjoissa. On ollut käytännössä lainkaan kudoksen tutkimuksen ilmaus PLZF eturauhassyövässä (PCA). PCa on heterogeeninen tauti, joista useimmat ovat veltto ja ei-tappava. Tällä hetkellä ei ole biomarkkerit, jotka erottavat veltto aggressiivinen PCa; Siksi on kiireellinen tarve tällaiselle markkereita tarjota kliinisen päätöksenteon tueksi. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää ilmaus PLZF immunohistokemiallisesti eri luokalla sekä metastaattisen PCa ja korreloivan muuttaminen PLZF ilmaisun PCA aggressiivisuus. Tutkimme yhteensä 83 ensisijaisen PCa päässä koepaloja, 43 metastaattisen PCa ja 8 pariksi primaarinen ja metastaattinen PCa radikaalien prostatectomies kanssa imusolmukedissektiossa. Tuloksemme osoittivat, että PLZF voimakkaasti ilmaistu lähes kaikki (~ 100%), hyvänlaatuinen onteloerityssolut (n = 77), ja huono laatu (Gleason kuvio 3) PCa (n = 70) ja heikko tai puuttuu (100%), tyvisoluissa ( n = 70). Vähentynyt tai kadonnut ilmaisua PLZF oli osoituksena 26% korkea-asteen (Gleason 4 ja 5) ensisijaisen PCa (n = 70) ja 84% metastasoituneen PCa (n = 43). Ensisijainen korkealuokkaisesta PCa että prostatectomies siinä samoilla PLZF menetys /vähennys ja histomorphology kuin pariksi rinnakkaisia ​​imusolmukemetastaaseja. Nämä tiedot osoittivat, että alas-säätely PLZF on tärkeä molekyyli prosessi kasvaimen etenemisen ja menetys PLZF ilmaisun havaita rutiini immunohistokemiallisesti on lupaava ja arvokas biologisten merkkiaineiden PCA aggressiivisuus ja etäpesäkkeiden yksilölliseen hoitoon Eturauhassyövän.

Citation: Xiao GQ, Unger P, Yang Q, Kinoshita Y, Singh K, McMahon L, et al. (2015) menetys PLZF Expression in Eturauhassyöpä immunohistokemiallisesti korreloi kasvaimen aggressiivisuus ja Metastasis. PLoS ONE 10 (3): e0121318. doi: 10,1371 /journal.pone.0121318

Academic Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 02 joulukuu 2014; Hyväksytty: 30 tammikuu 2015; Julkaistu 25 maaliskuuta 2015

Copyright: © 2015 Xiao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoittajat: Nämä kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisin syöpä miehillä Yhdysvalloissa [1]. Kun yleisen tietoisuuden lisääminen PCA laajaa käyttöä eturauhasen antigeenin (PSA) pitoisuus seerumissa kuin seulonta komodaalisuudessa ja trans-peräsuolen ultrasonography kohdistaa tiettyyn vaurioita, eturauhasen neula ydin koepaloja ovat lisänneet kliinisissä syövän havaitseminen. PCa on heterogeeninen tauti, joista suurin osa on veltto käytös [2,3]. Huolimatta parannuksista varhaiseen havaitsemiseen, ei tällä hetkellä ole luotettavia biomarkkerit tehokkaasti erottaa miehet, joilla on suuri riski taudin veltto enemmistön ja on väitetty, vuosikymmeniä, että suuri määrä Eturauhassyövän saattanut overtreated [2,4,5]. Siksi on kiireellinen tarve tällaiselle biomarker, jota voidaan käyttää tunnistamaan aggressiivinen PCa ja aloittaa aikaisin parantava hoito.

promyelosyyttileukemian sinkkisormipolypeptidiin proteiini (PLZF), joka tunnetaan myös Zbtb16 tai Zfp145, ensimmäinen tunnistettu potilaan akuutti promyelosyyttinen leukemia, on sinkkisormipolypeptidiin transkriptiotekijä, joka kuuluu POZ-Kruppel (POK) perhe, joka sitoutuu spesifisiin DNA-sekvensseihin sen karboksipään sinkkisormia ja tukahduttaa transkriptio rekrytoimalla yhteistyössä repressors sen aminoterminaalisen POZ domain [ ,,,0],6,7]. Toimivat tumassa, PLZF vaikuttaa monipuolinen signalointi kuten solukierron, erilaistumista ja ohjelmoidun solukuoleman hematopoieettisten solujen [7] sekä nyttemmin kiinteä kasvain [8-10], ja sen on osoitettu olevan mukana suurissa kehitys- ja biologisten prosessien, kuten spermatogeneesin ja kantasolujen ylläpito, takaraajan muodostumista, hematopoieesin, immuuni asetus, ja oncogenesis [6,7,11,12]. Menetys PLZF on liittynyt lisääntynyt leviäminen, invasiivisuus ja liikkuvuus, ja kestävyys apoptoosin eri syöpätyyppien solulinjojen [8]. Äskettäin PLZF on todettu olevan alassäädetty ei-pienisoluisen keuhkon [13], pahanlaatuinen mesoteliooma [9] ja pahanlaatuisen melanooman [8,10]. N yli-ilmentyminen PLZF ihmisen kohdunkaulan solulinjoissa ja mesothelial solulinjat estää solujen kasvua aiheuttamalla apoptoosin [14]. Tietääksemme ilmentymisen PLZF on käytännössä ei ole tutkittu eturauhassyövän kudoksen. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia ilmaus PLZF perusterveydenhuollossa sekä metastaattisen PCa immunohistokemiallisesti ja korreloivan muuttaminen PLZF ilmaisun PCA luokalla, aggressiivisuutta sekä etäpesäkkeiden.

Materiaalit ja menetelmät

1. Kudosnäytteet

Tämä tutkimus suoritettiin hyväksynnän jälkeen Institutional Review Board ja mukaisesti takeet jätetty ja hyväksytty eettinen komitea /Institutional Review Board of Rochesterin yliopistossa ja Mount Sinai School of Medicine. Tämä on vapautettua immunohistokemiallinen tutkimus arkistoidaan näytteitä eikä sisällä mitään tunnistettavia potilastietojen ja tarve kirjallinen suostumus luovuttiin. Eturauhanen on kiinteä fibromuskulaarinen elin kanssa kasvamisen rauhas epiteeli, jota se ei ole helposti läpäisevä formaliiniin kiinnitystahnat. Jotta vältettäisiin mahdollinen vaikutus epätasainen ja optimaalinen kudoksen kiinnittymistä antigeenin säilyttämistä ja haku sekä myöhemmin immunohistokemiallinen tuloksia, biopsialaitteet ensiarvoisen sekä metastaattisen eturauhassyövän valittiin tätä tutkimusta varten, lukuun ottamatta kahdeksan tapausta radikaalien prostatectomies kanssa lantion imusolmuke leikkelyn. Kaikki eturauhasen kudosnäytteistä ja prostatectomies ja valtaosa metastaattisen eturauhassyövän Ca kudosta kerättiin ja opiskellut yliopistossa Rochester Medical Center, NY. Kaksikymmentä prosenttia metastaattisen PCa tapauksista oli Mount Sinai Medical Center, New York. Kaikki tapaukset olivat eri potilailla. Näytteet rutiininomaisesti kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin ja parafiiniin upotettuja.

Oli yhteensä 83 eturauhasen koepaloja, joista jokaisella on kasvaimen tilavuuden välillä 10 100%, joista 13 tapauksessa oli yhteensä Gleason n pisteet 6, 57 tapauksessa oli pisteet 7, 7 tapauksia on pistemäärä 8 ja 6 tapauksia oli pisteet 9/10. Hyvänlaatuinen rauhas epiteeli oli läsnä 77 83 eturauhasen koepaloja ja puuttuivat jäljellä 6 koepaloja. Neljäkymmentä kolme tapausta oli metastaattinen eturauhassyöpä, jossa on tuumorin tilavuus vaihtelee 5%: sta 95%, joista 22 oli luun etäpesäkkeitä, 11 imusolmukkeiden etäpesäkkeiden, 7 maksametastaaseihin ja 3 keuhkometastaaseja. Kahdeksan pariksi PCa peräisin eturauhasen yksilöitä ja niiden rinnakkain imusolmukkeet olivat myös mukana tutkimuksessa. Kahdeksan ensisijainen eturauhasen karsinoomat radikaali prostatectomies oli yhteensä Gleason pisteet vaihtelee 7-9 Kasvaimelle vaiheessa PT3A tai pT3b. Imusolmuke etäpesäkkeet vaihteli 1 mm 3 mm: in suurin mitta. Tapaus jakelu on koottu taulukkoon 1.

2. Immunohistokemia

jälkeen deparaffinization ja nesteytys, veloitetaan diat 5-um: n paksuisia leikkeitä kudoksen käsiteltiin 3% vetyperoksidilla (H

2O

2) poistamiseksi endogeenisen peroksidaasin, sitten käsitellään antigeenin haku 10-mM sitraattipuskuria, pH 6,0 käyttäen painekattilaa (Pascal, Dako Cytomation, Glostrup, Tanska) 1 minuutin ajan 125 ° C: ssa, jonka jälkeen hidas jäähdytys. Loput menettelyn tehtiin Dako automatisoitu väline. Kaikki leikkeet huuhdeltiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (137 mM NaCl, 2,7 mM kaliumkloridia, 4,2 mM natriumfosfaattia, 1,5 mM kaliumfosfaatti) ja sen annettiin reagoida hiiren anti-PLZF-vasta-ainetta (D-9, sc-28319, Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz, CA) 1,5 tunnin ajan 1: 500 laimennus fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, joka sisälsi 1% naudan seerumin albumiinia (BSA) ja 5% normaalia vuohen seerumia huoneenlämmössä. Sitten leikkeitä inkuboitiin 20 minuuttia EnVision + System piparjuuriperoksidaasileimattua polymeeri on konjugoitu biotinyloidun anti-hiiri-vasta-aine ja 3,3′-diaminobentsidiini substraattina. Kaikki objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä, kuivattu, ja kansi liukastui.

3. Analyysi immunohistokemiallisella värjäyksellä

Eturauhasen adenokarsinooma, strooman sekä onteloerityssolut ja tyvisoluihin hyvänlaatuista eturauhasen rauhaset analysoitiin PLZF immunoreaktiivisuus on semikvantitatiivinen tavalla. Vain tumavärjäystä of PLZF pidettiin positiivisena. Perustuen laajuudesta ja intensiteetti immunoreaktiivisuus, värjäys luokiteltiin omaisuuserän (negatiivinen /poissa), +1 (heikko), +2 (kohtalainen) tai +3 (voimakas /voimakas). Jokainen yksittäinen Gleason kuosi arvioitu erikseen niiden ydin- leimausta PLZF varten kasvain eturauhasen ja yksinkertaisuuden, Gleason n malli 4 (G4) ja Gleason n kuvio 5 (G5) yhdistettiin analyysiä. Gleason pisteet ei ole käytetty metastaattinen PCa. Vahva lunimal solujen värjäytymisen ja heikko tai ei-reaktiivinen tyvisolujen (katso tulokset osasta yksityiskohta) käytettiin positiivisina ja negatiivinen kontrolli, vastaavasti.

4. Tilastollinen analyysi

Jockheere-Terpstra Test [15] käytettiin arvioimaan suuntaus välillä proteiinin ilmentymisen pisteet ja syövän tyyppi. Testi määritetty, jos odotettu riveissä proteiinin ilmentymisen tulokset ja syöpätyyppeihin muuttunut monotonisesti. Sen jälkeen testi trendi, pairwise vertailut tarkasteltiin romahtamassa proteiinin ilmaisun Negative /Heikko (Negative ja +1) ja Kohtalainen /Strong (+2 ja +3) ja liittämällä tätä paria syöpätyyppien käyttäen 2-tailed Fisherin tarkka testit . Kaikki analyysit tehtiin käyttäen SAS /STAT-ohjelmisto, versio 9.3 SAS System (Copyright © heinäkuuta, 2011, SAS Institute Inc.) Windows 7 alustalla.

Tulokset

1. Expression of PLZF hyvänlaatuisen eturauhasen rauhas epiteeli

Niistä 83 eturauhasen koepaloja, seitsemänkymmentäseitsemän sisälsi hyvänlaatuinen eturauhasen rauhas epiteelin. PLZF on kohtalaisesti tai voimakkaasti ilmaistu ytimet onteloerityssolut eturauhasen hyvänlaatuisen rauhaset, mutta heikosti tai ei lainkaan ekspressiota havaittiin joko ytimet tai sytoplasmaan tyvisolujen tai strooman solujen kaikissa 77 tapauksessa (Fig. 1A).

. Eturauhasen hyvänlaatuinen rauhaset vahvojen ydin- imunoreactivity in onteloerityssolut (nuoli) ja heikko tai negatiivinen merkintöjä tyvisoluissa (nuolenkärki). B. Voimakas tahra Gleason kuosi 3 + 3 PCa rauhaset. C. Vahva tahra G3 PCa rauhaset (nuoli), mutta heikko tai negatiivinen tahra G4 PCa rauhaset (nuolenkärki). D. menetys PLZF G4 rauhaset Gleason n malli 4 + 4 PCa (nuoli). Hyvänlaatuinen rauhaset vahvojen tahra onteloerityssolut (nuolenkärki). E. Vahva tahra G3 PCa rauhaset (nuoli) ja poissa tahra G5 PCa rauhaset (nuolenkärki) Gleason n malli 3 + 5 PCa. F. Negatiivinen tahra Comedo tyyppi PCa (G5). G. Negatiivinen tahra yhdessä edustavassa tapauksessa luun etäpesäke Eturauhassyövän. H. Negatiiviset tahra yhdessä edustavassa tapauksessa imusolmuke etäpesäke Eturauhassyövän. I. Negatiivinen tahra yhdessä edustavassa tapauksessa maksan etäpesäke. Hyvänlaatuisia osoittaa myös ydin- PLZF tahra. J. Negatiivinen tahra yhdessä edustavassa tapauksessa keuhkometastaasitestissä. K. PLZF ilmaistuna G3 mutta ei G4 rauhaset ensisijaisen PCa peräisin eturauhasen. L. Rinnakkainen imusolmuke etäpesäke Samantapainen morfologia ja negatiivinen PLZF tahra G4 PCa rauhaset ensisijaisen G4 PCa rauhaset K.

2. Expression of PLZF perusterveydenhuollossa eturauhasen syöpä eturauhasen koepalan

Yksi ensisijainen PCa eturauhasen koepaloja, oli yhteensä 70 yksittäisen Gleason kuvio 3 ja 70 yksilön Gleason n malli 4/5. Gleason kuviot 4 ja 5 analysoitiin yhdessä lähinnä niiden kaltaiset biologinen käyttäytyminen sekä puuttuminen ilmeinen Immunovärjäyksen ero Näistä kaksi kuvioita. PLZF ilmaistiin differentiaalisesti intensiteetiltään ensisijainen eturauhasadenokarsinoomaa Gleason malleja 3 ja 4/5. Samanlainen onteloerityssolut eturauhasen hyvänlaatuisen rauhaset, PLZF oli kohtalaisesti tai voimakkaasti ilmaistu kaikissa kasvain rauhaset Gleason n malli 3 (Fig. 1 B): 45 osoitti +3 immunoreaktiivisuus ja 25 osoittivat +2 positiivisuutta. 3 tapausta, valtaosa G3 PCa rauhaset esittelyyn vahva PLZF tahra, mutta vähemmistö kanssa polttoväli heikko tai negatiivinen PLZF reaktiivisuus. Sen sijaan joukossa 70 ensisijainen PCa Gleason kuosi 4/5, 24 (34%) osoitti +3, 28 (40%) ja +2 ja 12 (17%), joilla on heikko (+1) immunoreaktiivisuus. Täydellinen menetys PLZF: n ilmentymisen nähtiin 6 (9%) näistä tapauksista (Fig. 1 D-F). Oli 5 tapauksissa, joissa suurin osa G4 /5 PCa rauhaset esittelyyn heikko tai negatiivinen PLZF tahra, mutta vähemmistö oli keskeinen kohtuullisesta voimakkaaseen PLZF reaktiivisuus. Nämä PCA heikko tai kadonnut ilmaisua PLZF osuus 18/83 (22%) kaikista ensisijaisen PCa tapauksissa ja 18/70 (26%) korkealaatuista (Gleason 7-10) ensisijainen PCa.

3. Expression of PLZF metastaattisessa eturauhassyöpä

Suurin osa metastaattisen PCa ei tai oli vain heikosti PLZF lauseke (Kuva. 1G-J). Niistä 43 metastaattinen PCA 29 puuttui PLZF lauseke (15 luu, 8 imusolmuke, 5 live ja 1 keuhko), 7 osoitti heikkoa PLZF lauseke (5 luu, 1 maksa ja 1 keuhko), kohtalainen tai voimakas immunoreaktiivisuus PLZF nähtiin 7 tapausta (2 luu, 3 imusolmuke, 1 maksa, 1 keuhko). Kaiken menetys tai merkittävästi vähentynyt ilmentyminen PLZF nähtiin 84% metastasoituneen eturauhasen adenokarsinooman riippumatta metastaattisen sivuston.

4. Tilastollisen analyysin

Jockheere-Terpstra Test paljasti negatiivinen suuntaus (Z = -9,1568, p 0,0001), mikä osoittaa, että aggressiivisempi metastaattinen oli alhaisin proteiinin ilmentymisen tulokset, kun taas Gleason tulokset 3 tai 4 /5 oli korkeampi proteiinin ilmentymisen tulokset. Samoin erittäin merkittävä negatiivisesti havaittiin, kun sortuneen proteiini pisteet verrattiin välillä G3 ja G4 /5, G3 ja metastaattisen syövän, ja G4 /5 ja metastaattinen (kaikki p 0,0001, taulukko 2, kuva. 2).

5. Expression of PLZF metastaattisessa PCa imusolmukkeiden ja sen rinnakkaisia ​​ensisijainen PCa

tutkia mitään korrelaatiota PLZF ilmaisua ensisijainen PCa ja metastaattinen PCA kahdeksan pariksi ensisijainen PCA prostatektomia näytteiden ja sen vastaavien metastaattisen PCA imusolmukkeiden solmut tutkittiin immunohistokemiallinen ilmaus PLZF. Tulokset osoittivat, että ilmentyminen PLZF eturauhasen vaihteli eri laadut, joilla on kohtalainen kalleimpaan ilmaisua huono laatu (G3) PCa ja vähentynyt tai kadonnut ilmaisua tarkennus /pesäkkeitä korkealuokkaisesta (G4 /5) (PCA Fig. 1K) painopiste /pesäkkeitä ensisijaisen PCA vähentynyt tai kadonnut ilmaisua PLZF vastasi pariksi metastaattista PCa imusolmukkeissa jakamalla vastaavia PLZF menetys /pienentää sekä vastaavia morfologisia kaavoja (Fig. 1 I). Immuunihistokemialliset tulokset ja patologisten tietojen ensisijaisen ja metastaattinen PCa Kahdeksan radikaali prostatectomies lantion imusolmuke leikkelyn on koottu taulukkoon 3.

Keskustelu

Vaikka valtavasti työtä on omistettu etsimään tehokkaita prognoosi- biomarkkereita, jotka pystyvät ennustamaan aggressiivisuus eturauhassyöpää, vähän edistystä on tapahtunut kohti käytännössä. Ylivoimaisesti eniten tutkittu biomarkkereiden tähän tarkoitukseen on PTEN, tunnettu tuumorisuppressoriproteiinia [16-23]. Genominen deleetioita PTEN lokusta 10q23, yleisimmin tunnistetaan FISH, esiintyy 10%: sta 70% eturauhasen syöpiä tutkimuksesta riippuen väestöstä tutkitaan [16-23]. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet genomisen menetys PTEN liittyvän enemmän aggressiivista käyttäytymistä, kasvainprogression ja varhain etäpesäkkeitä, mutta toiset eivät löydä niin yhdistys [23-25]. Koska FISH testi on hankala ja ei havaitse epigeneettisellä sekä posttranskriptionaalisen muutos liittyvien geenien ilmentymistä, immunohistokemiallinen testit on viime aikoina käytetty arvioitaessa ilmaisua PTENin eturauhassyövässä ja sen suhdetta kasvaimen aggressiivisuus. Ristiriitaisia ​​tuloksia, mutta on raportoitu [21, 23, 26-33]. Ole luotettavia vasta-aineita PTEN on pidetty yhtenä merkintäviranomaiset tekijöistä. PTEN immunoreaktiivisuus on osoitettu tumissa ja sytoplasmassa epiteelisolujen sekä stroomaan soluissa eturauhasessa [28] ja ei ole yksimielisyys immunovärjäyty- pisteytyksen sekä tulkinnasta PTEN immunohistokemiallinen tulokset; Kun korrelaatio ennusteeseen viittaavia parametreja suoritetaan, sytoplasminen PTEN värjäys käyttävät eräät kirjoittajat [27, 34], kun taas ydinreaktiivisuus käyttävät toisten [23]. Lisäksi, promiscuous immunovärjäytyminen tumassa ja sytoplasmassa epiteelisolujen sekä strooman solut voivat myös olla ollut vaikeaa erottaa tiettyjä epäspesifisestä reaktioita. Lisäksi laatu kudoksen säilyttämisen, usein unohdetaan tekijä, on tunnettu vaikuttaa immunohistokemiallinen tulokset [35, 36]. Jotta korreloida tuloksiin PTEN ilmaisun kasvain vaiheessa suurin osa edellisen tutkimuksissa käytettiin eturauhasen näytteitä, kuten eturauhasen kudosta johdettu TMA (kudos microarray). Kuten edellä on mainittu, eturauhanen on pääasiassa kiinteä fibromuskulaarinen elin, jolla on alhainen läpäisykyky fiksatiivi; Siksi, ellei erityistä huomiota kiinnitetään, optimaalinen kudos kiinnitys on yleinen ongelma eturauhasen näytteen, joka myöhemmin voi vaikuttaa kudosten antigeenin säilymisen ja saattaisi ainakin osittain selittää ristiriitaisia ​​tuloksia joissakin immunohistokemiallinen tutkimuksia PTEN PCA. Tämän seurauksena, kliininen arvo immunohistokemiallisella PTEN arvioitaessa eturauhassyövän aggressiivisuuden on edelleen arvioinnin.

PLZF, geeni modulaattorin samanlainen PTEN, toimii transkription repressori. Aiemmat tutkimukset PLZF on lähinnä sen rooliin spermatogeneesin, kantasolu- huolto- ja promyelosyyttinen leukemia [6,7,11,12]. Tutkimuksemme eturauhasessa osoitti, että verrattuna kohtuullisesta voimakkaaseen immunohistokemiallisella ilmentymisen hyvänlaatuinen onteloerityssolut eturauhasen rauhaset ja huono laatu (Gleason n kuvio 3) eturauhassyöpä, ilmaus PLZF väheni huomattavasti tai hävisi valtaosa (84%) metastaattinen eturauhassyöpä ja 26% korkean asteen ensisijainen PCa. Nämä tulokset osoittivat, että menetys PLZF oli tärkeä askel kasvainprogression ja etäpesäkkeitä. Osa siitä (26%) ensisijaisen korkealuokkaisesta (G4 /5) eturauhassyövän esittelyyn merkittävän menetyksen PLZF ilmaisun myös tuntui sopivan todellisessa kliinisessä skenaario, jossa vain osa korkean Gleason PCa edistymistä ja kehittää etäpesäke pitkin kursseja . 26% näistä ensisijaisen korkealaatuista PCA merkittävä lasku tai menetys PLZF ilmaisun tutkimuksessamme saattaisi siis todella edustaa osaa aggressiivinen PCa jotka kehittävät etäpesäke myöhempinä ajankohtina. Oli ajoittain tapauksia vaihtelevalla PLZF ilme samalla Gleason ”pisteet PCa rauhaset saman koepala, joka on sopusoinnussa kasvaimensisäisellä heterogeenisyys PCa.

Selventämään lisäksi onko heikkeneminen tai PLZF ilmaisun perus PCa korreloi että metastaattisen PCA tutkimme immunohistokemiallinen ekspressiokuviota PLZF että perus- PCA eturauhasen ja pariksi metastaattisen PCA leikellään lantion imusolmukkeiden saman potilaan. Tuloksemme osoittivat muutoksia PLZF ilmaisun sekä morfologian painopiste /pesäkkeitä ensisijaisen korkealuokkaisesta PCA eturauhasen korreloi kuin lantion imusolmuke metastaattisen PCa. Tämä havainto vahvisti yhdistys PLZF menetyksen PCA etenemisen ja sekaantunut ennustetyövälineenä arvo PLZF menetys ensisijainen PCA ennustamista sen metastaattisen potentiaalia. Vuonna pariksi prostatektomia ja imusolmukedissektiossa, muuttuja PLZF lauseke (- /+ 1 /+ 2 /+ 3) ensisijaisen G4 /5 PCa rauhaset voi heijastaa vaihtelevuutta antigeenin esittelyä vuoksi optimaalinen kiinnitys eturauhasen yksilöitä, silti suhteellisesti, PLZF että pesäkkeitä G4 /5 PCa vähemmän ilmaistaan ​​kuin pesäkkeitä G3 PCa.

Kuten osoitettu tässä tutkimuksessa, PLZF lähes yksinomaan ilmaistu ytimet onteloerityssolut ja heikko tai poissa in tyvisoluista ja stroomasolujen eturauhasen. Tämä puhdas tausta ei vain oli helppo tulkita Immunovärjäyksen tuloksia, mutta toimi myös erinomainen positiiviset ja negatiiviset kontrollit. Nämä olivat ilmeisiä etuja PLZF yli PTEN. Lisäksi verrattuna menetys PTEN vuonna 10-70% Eturauhassyövän [16-23], herkkyys PLZF tappio metastasoineeseen PCa oli 84% tutkimuksessamme, kun taas spesifisyys PLZF menetyksen ennustamisessa ei etäpesäkkeitä alkaen huono laatu (Gleason 3) oli 70/70 (100%) tai vähintään, 67/70 (94%), kun otetaan huomioon vähäiset polttovälin menetys. Tarkasti, kuinka monta korkealaatuista (G4 /5) PCa epäonnistuu kehittää etäpesäke on lähes mahdotonta varmistaa ihmisen tapauksissa; kuitenkin, jos oletetaan, että koko ryhmä 52 (74%) ensisijainen G4 /5 PCa tapauksia, jotka eivät näy PLZF menetys puuttuu metastaattinen potentiaali, spesifisyys PLZF vuonna ennustamista etäpesäkkeitä olisi huomattavasti suurempi kuin ilmoitettu 50% PTEN [ ,,,0],37].

Olemme tutkineet ilmaus PLZF käyttäen Oncomine (Life Technologies) sekä taustalla GEO tiedot viidessä eturauhassyövän aineistoja ositettu Gleason. Ei näennäinen yhdistys on ilmeinen, ei tutkiessaan kerrostunut lauseke rasiakuvaajien (S1 Kuva.), Eikä taustalla olevat tiedot, kun puettu kuin vesiputous tontit (S2 Kuva.). Samoin tutkiessaan viisi julkisesti saatavilla tietokokonaisuuksien cBioPortal [38, 39], ei vahvan yhteyden Gleason (S3 kuvassa., Top kolme sarjaa) tai T-vaiheen (S3 kuvassa., Alhaalla kaksi) ja homotsygoottinen poisto, vahvistus, eikä mutaation koodaavan geenin PLZF (ZBTB16) voidaan havaita. Lisäksi, ei ole selvää yhdistyksen välillä havaittiin oletetun kopioluvun muutoksia ja PLZF mRNA: n ilmentymisen näissä aineistot pääsee läpi cBioportal (tuloksia ei ole esitetty). Ristiriita genomisen ja ekspressiotietojen ja meidän immunohistokemiallisella värjäyksellä tuloksia ehdottaa osallistumista epigenetic ja /tai posttranskriptionaalisella muutoksia aggressiivinen eturauhassyöpä ja tukee entistä informatiivinen rooli immunohistokemiallista Proteomiikan analyysi lopputuotteen geenin selvittämisessä sen funktio /biologinen seuraus ymmärtämistä ja ennustamista kasvaimen käyttäytymisen.

Vaikka tarkkaa roolia PLZF eturauhasen epiteelin ei tunneta, perustava ilmentyminen PLZF vuonna onteloerityssolut ja poissa tyvisoluissa eturauhasen rauhaset muistuttaa androgeenireseptorin reseptoriin, ja voimakkaasti päättelee yhdistys PLZF kanssa androgeenireseptorin. Itse asiassa, käytettäessä

in vitro

tutkimuksessa PCa solulinjojen, PLZF on havaittu olevan eturauhasen androgen reagoiva geenin [40]. PLZF on voimistuvan androgeenin androgeenisäädellyn reagoiva LNCaP, mutta ei androgeenireseptorin negatiivinen solulinja DU145 [41]. Yliekspressio PLZF että LNCaP-solulinjasta inhiboi soluproliferaatiota sekä puuttuessa ja androgeenien läsnäolon [40]. Endogeeninen PLZF ilmentyminen puuttuu androgeenista riippumattoman PCa solulinja DU145 ja sen ilmentymistä voidaan palauttaa ektooppinen ilmentyminen androgeenireseptorin, mutta tämä ei ole totta androgeeni- riippuvaista LNCaP [41, 42]. Tulokset näistä in vitro solulinjassa tutkimukset tukevat suhde PLZF ja androgeenireseptorin aktiivisuutta, ja osoittavat, että tasapaino pro-proliferatiivinen androgeenireseptorin ja estovaikutuksen PLZF voi olla ratkaiseva rooli ylläpito homeostaasiin hyvänlaatuinen eturauhasen epiteelissä. Menetys PLZF aktiivisuuden PCA saattaa johtaa valitsematta androgeenireseptorin aktiivisuutta, joka johtaisi proliferatiivisten kasvuun. Vaikka taustalla olevien mekanismien PLZF menetys ja niihin liittyvät kasvaimen etenemiseen sekä sen roolia PCa androgeeniriippumattomuuteen ovat vielä tutkimatta, nämä tiedot motivoi meitä tutkimaan PLZF ilmaisun eturauhassyövissä eri laadut (Gleason n tulokset) sekä metastaattisen eturauhassyövän syöpiä.

Yhteenvetona Tutkimuksemme osoittaa, että immunohistokemiallista menetys PLZF on herkkä ja spesifinen biomarkkereiden havaitsemisessa aggressiivinen ja metastaattinen PCa. Silti haluamme myös korostaa, että kuulu tämän tutkimuksen on rajallinen ja suuremmassa mittakaavassa tutkimuksen tulosten validointiin tarvitaan. Jos vielä validoitu johtuen yksinkertaisuus ja kustannustehokkuus, immunohistokemiallinen testaus PLZF ilmaisun PCA tulee olemaan merkittävä vaikutus ja olla kliinistä käytettävyyttä hallinnassa ja yksilöllistä hoitoa Eturauhassyövän potilaiden päivittäisessä työssä. PLZF immunohistokemia voidaan myös yhdistää PTEN antamaan lisääntynyt ennusteita progressiivinen PCa. Takautuvasti palauttamaan PLZF näissä aggressiivinen PCa voivat myös olla mahdollisia terapeuttisia arvoja vaihtamalla niiden kursseja.

tukeminen Information

S1 Kuva. Ei muutoksia PLZF mRNA eturauhassyövän.

PLZF (ZBTB16) ilmentyminen tutkittiin viidessä eturauhassyövän aineistoja ositettu Gleason pisteet, käytettävissä Oncomine. Vain aineistot vähintään 10 tapausta Gleason pisteet 8 ja 9 analysoitiin. Laatikko kuvaajat kuvaavat tarkoittaa ilmaisua, stratifioituna Gleason pisteet. Kerrostuneisuus sarakkeet Gleason osoitettu legenda alla (jossa tapausten määrä ilmoitetaan suluissa). Huomaa, että asianmukainen vertailu on välillä Gleason pisteet 7 ja alempi vs. Gleason pisteet 8 ja tai 9, ja ole ensimmäinen sarake sarjaa 1-4, joka kuvaa näytettä, jolle pisteet ei ollut saatavilla.

Doi: 10,1371 /journal .pone.0121318.s001

(TIFF)

S2 Kuva. Ei useammin tapauksia pienentää PLZF mRNA: n ekspression korkealaatuista eturauhassyöpää.

PLZF (ZBTB16) ilmentyminen tutkittiin viidessä eturauhassyövän aineistoja ositettu Gleason pisteet, käytettävissä Oncomine. Vain aineistot vähintään 10 tapausta Gleason pisteet 8 ja 9 analysoitiin. Vesiputous tontteja kuvata taustalla yksittäisiä tietoja analysoidaan S1 kuvassa. ja kuvaavat keskimääräisen ilmaisun stratifioituna Gleason pisteet. Kerrostuneisuus sarakkeet Gleason osoitettu legenda alla (jossa tapausten määrä ilmoitetaan suluissa). Huomaa, että asianmukainen vertailu on välillä Gleason pisteet 7 ja alempi vs. Gleason pisteet 8 ja tai 9, ja ole ensimmäinen sarake sarjaa 1-4, joka kuvaa näytettä, jolle pisteet ei ollut saatavilla.

Doi: 10,1371 /journal .pone.0121318.s002

(TIFF)

S3 Fig. Ei PLZF geenimutaatioita tai muutoksia eturauhassyövän.

Häiriöitä koodaavan geenin PLZF (ZBTB16) tutkittiin osoitettuun viiden aineistojen saatavilla cBioportal. Muutokset on merkitty tonttien alla tutkimuksessa nimi: homozyogous poisto (siniset palkit); vahvistus (punaiset palkit); mutaatio (vihreät palkit). Summa kaikkien havaittujen muutosten on 0%, 4%, 1%, 2%, ja 4% (ylhäältä alas) tutkimuksissa kuvattu.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0121318.s003

(TIFF ) B

Kiitokset

kiitos Mr. Xing Qiu on Biostatistics Program-University of Rochester hänen apua tilastollinen analyysi.