Krooninen sairaus

tiivistelmä

epidermaalisen kasvutekijän reseptorin tyrosiinikinaasin (EGFR-TK: n) estäjät ovat käyttökelpoisia hoidettaessa erilaisia ​​kehittyneitä ihmisen syövissä; kuitenkin niiden kliininen teho vaihtelee. Tutkimuksessa havaittiin

K-ras

mutaatioiden ennustaa teho EGFR-TK-estäjä Setuksimabihoitoa Kiinan Metastasoivassa kolorektaalisyövässä (metastasoituneen kolorektaalisyövän). Kaikkiaan 87 potilaalla on metastasoitunut kolorektaalisyöpä hoidettiin setuksimabia 2-16 kuukautta, yhdessä kemoterapian välillä elokuussa 2008 ja heinäkuuta 2012, ja kudosnäytteet käytetään havaitsemaan

K-ras

mutaatioita. Tiedot osoittivat, että

K-ras

mutaatiota esiintyi 27/87 (31%). Tavoitteena hoitovasteet ja tautien torjuntaan korko

K-ras

villityypin ja mutantti potilasta oli 42% (25/60) verrattuna 11% (3/27) (p 0,05) ja 60% (36 /60) verrattuna 26% (7/27) (p 0,05), tässä järjestyksessä. Potilaat, joilla on villin tyypin

K-ras

oli merkittävästi korkeammat mediaanielinajassa kertaa ja ilman taudin etenemistä, kuin potilailla, joilla on muuntunut

K-ras

(21 kuukautta vs. 17 kuukautta, p = 0,017 ; 10 kuukautta versus 6 kuukausi, p = 0,6). Nämä havainnot viittaavat siihen, että tiheä

K-ras

mutaatioita esiintyy Kiinan metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilailla ja että

K-ras

mutaatio on valittava potilaille saamisen setuksimabihoito. Lisäksi prospektiiviset tutkimukset käyttäen suurta otoskoko tarvitaan vahvistusta alustavia havaintoja.

Citation: Li Z, Liu XW, Chi ZC, Sun BS, Cheng Y, Cheng LW (2015) havaitseminen

K -ras

Mutaatiot ennustaminen tehokkuus kasvutekijän reseptorityrosiinikinaasin (EGFR-TK) estäjä metastasoituneen peräsuolen syövän. PLoS ONE 10 (5): e0101019. doi: 10,1371 /journal.pone.0101019

Academic Editor: Laszlo Buday, Unkarin tiedeakatemian, Unkari

vastaanotettu: 27 syyskuu 2013; Hyväksytty: 2 kesäkuu 2014; Julkaistu: 7. 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Rahoitus: Kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin diagnosoitu syöpä maailmassa ja on yksi merkittävimmistä terveysongelmia Kiinassa [1]. Vaikka ilmaantuvuus CRC käytetään olla alhaisempi Kiinassa kuin länsimaissa, se on kasvanut nopeasti viime vuosina [2]. Leikkaus on paras hoitovaihtoehto CRC, kuten useimmat muut syövät, mutta metastaattisen CRC tarvitsee yhdistelmähoitoa, kuten leikkaus ja solunsalpaajahoitoa tai kohde terapiassa. Viime vuosikymmenten aikana, 5-fluorourasiilin (5-Fu) hoito ovat tuottaneet mediaanielossaolosta noin 12 kuukauden pitkälle CRC, kun taas kalsiumfolinaatin (CF) plus 5-Fu pidentää eloonjäämismediaani 14 kuukauteen [3]. Lisäksi oksaliplatiinia ja irinotekaania ovat lisänneet mediaani eloonjäämisaste potilaiden yli 20 kuukautta [4]. Viimeksi kohdistaa hoito, mukaan lukien anti-kasvutekijän reseptori tyrosiinikinaasin (EGFR-TK) on osoitettu parantavan yleistä eloonjäämistä potilailla, joilla on villin tyypin KRAS (v-Ki-ras2 Kirsten rat sarkooma viruksen onkogeenin homologi) metastaattinen CRC [ ,,,0],5]. Kuitenkin anti-EGFR-TK terapia gefitinibi, erlotinibi tai setuksimabi tuottaa erilaisia ​​tuloksia eri ihmisen syövissä. Syynä voi olla, koska anti-EGFR-potilailla, joilla mutatoitunut

K-ras

voi paitsi tehottomia vaan myös haitallisia [5]. Siten 2011 suuntaviivat National Kattava Cancer Network (NCCN) ovat suositelleet setuksimabin ensilinjan hoitoa potilaille, joilla on villin tyypin

K-ras

koska EGFR ja

K-ras

mutaatioiden eivät sisällä [6].

K-ras

geeni koodaa 21 kDa: n proteiini, joka on GTP /GDP sitovan proteiinin kanssa GTPaasina aktiivisuutta ja osallistuu transduktiota mitogeenisen signaaleja liittää reseptoriin tyrosiinikinaasiaktivaation loppupään efektoreja. Sen jälkeen BKT sitoutuu p21 RAS proteiini, se muuntaa sen ei-aktiiviseen muotoon, menettää sen funktio signaalin siirtoon. Mutaatiot RAS-geenin yleensä aiheuta konstitutiivisen aktivaation RAS GTPaasi, aktivoitumiseen johtavat loppupään signalointireittien ja johtaa solun transformaatiossa ja kasvaimen kehittymisen [7-9]. CRC, yli 90%

K-ras

mutaatioita esiintyy

K-ras

eksoni 1 kodonin 12 ja kodonin 13 [7,8].

Setuksimabi on kimeerinen hiiren /ihmisen monoklonaalinen vasta-aine EGFR-TK kehittämistä ja käyttöä setuksimabin ovat parantuneet eloonjäämisen metastasoituneen kolorektaalisyövän potilaista. Edelliset tulokset osoittivat, että vaikutus setuksimabia tiukasti liittyy

K-ras

mutaatioita, joten Yhdysvaltain elintarvike- ja lääkevirasto suositteli potilaille tulee tehdä

K-ras

mutaation analyysi ennen kuin saivat Setuksimabihoitoa . Kuitenkin kaikki potilaat villin tyypin

K-ras

hyötyvät Setuksimabihoitoa, koska ei ollut yhdistyksen välillä EGFR ja setuksimabi tehoa. Yleinen hoitovaste potilaiden villin tyypin

K-ras

setuksimabista on vain 40-60%, mutta vastausprosentti sairastavien potilaiden

K-ras

mutaatiot oli vain 10% tai vähemmän [10,11], joten tässä tutkimuksessa havaitsimme

K-ras

mutaatioiden ennustaa teho EGFR-TK-estäjä setuksimabin Chinese Metastasoivassa kolorektaalisyöpä.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat

tässä tutkimuksessa, rekrytoimme yhteensä 87 potilasta, joilla on histologisesti vahvistettu metastasoitunutta kolorektaalisyöpää Jilin maakunnan Cancer sairaalan välillä tammikuussa 2008 ja elokuu 2010, jotka saivat viikoittain setuksimabi (400 mg /m

2 niin aloitusannos, ja 250 mg /m

2 seuraava annos) yhdessä kemoterapian (vakio annos). Erityisesti 55 potilasta sai setuksimabia plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa ja lisäksi 32 potilasta sai setuksimabia plus irinotekaania sisältävien kemoterapiaa 2-16 kuukautta. Setuksimabia annosteltiin ensivaiheen hoitona kaikilla 87 potilaalla viikoittain taudin etenemiseen saakka tai tutkimuksen lopussa. Syöpä sairaalan Jilin Review Board hyväksyi tämän tutkimuksen ja kirjallinen tietoon perustuva suostumus saatiin kaikista potilaista. Kuitenkin potilaat jätettiin pois tästä tutkimuksesta, jos he eivät ole saaneet leikkauksen jälkeisen kemoterapiaa, tai jos he olivat 25 tai 80-vuotias.

arviointi hoitovasteen ja eloonjäämisen potilaiden

Hoitovaste arvioitiin joka toinen kuukausi tietokonetomografia (CT) ja paikalle etäpesäke (maksan ja keuhkojen) mukaan Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST) [12]. Potilaat luokiteltiin täydellinen vaste (CR), osittainen vaste (PR), vakaa tauti (SD), tai etenevä sairaus (PD). Objektiivinen vaste määriteltiin (CR + PR) /Total, kun tauti tarkastusmäärään määriteltiin (CR + PR + SD) /yhteensä. Kokonaiselossaoloaika määriteltiin aika histopatologinen diagnoosi kuolemaan mistä tahansa syystä. Vakaa tauti syytteeseen että hoidon jälkeen, tauti jatkuisivat vähintään neljä viikkoa ilman merkittäviä muutoksia leesioiden. Viimeinen seurantaa näistä potilaista oli heinäkuussa 2012. Kuitenkin kaikki aiheet tässä tutkimuksessa oli vaiheen IV tauti ja jos tauti edetessä setuksimabihoidon olisi lopetettava. Siten tutkimus esittää ilman taudin etenemistä data.

DNA: n eristämisessä ja havaitseminen K-ras-mutaatioiden

Parafiini korttelin päässä tuumorikudokset arvioitava uudelleen käyttämällä H 1 mM etyleenidiamiinitetra-etikkahappoa; 0,5% Tween 20, 2% natriumdodekyylisulfaattia) 24 tuntia. Seuraavana päivänä, reaktiot sentrifugoitiin 15 000 g 15 minuutin ajan ja DNA uutettiin käyttämällä QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Saksa) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Tämän jälkeen DNA: n konsentraatio spektrofotometrisesti arvioitiin käyttäen aallonpituudella 280/260 nm ja säädettiin lopulliseen pitoisuuteen 100 ug /ml ja varastoitiin -20 ° C: ssa käyttöön asti.

havaitsemiseksi

K -ras

mutaatioita, polymeraasiketjureaktio-yksijuosteisen konformaatiopolymorfismi- (PCR-SSCP) suoritettiin käyttäen alukkeita ja PCR (Takara Biotechnology (Dalian) Co. Ltd, Dalian, Kiina). Lyhyesti, 50-pl PCR-seos valmistettiin kullekin näytteelle, joka sisälsi 2 ui genomista DNA: ta, 1 ui 10 pmol /l kutakin aluketta ja 25 ui esiseos (1,5 U Takara Taq-polymeraasia, 10 x PCR-puskuria, 3,0 mmol /l Mg2 +, 0,4 mmol /l deoxynucleotidetriphosphate). Alukkeet havaita

K-ras

mutaatio kodoneissa 12 ja 13 olivat 5′-AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATA-3 ’ja 5′-CTGTATCAAAGAATGGTCCTGCAC-3’, kuten aiemmin on kuvattu [14]. PCR suoritettiin 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), jonka alkuperäinen denaturointi vaiheessa 94 ° C: ssa 5 min, jota seurasi 30 sykliä 94 ° C 30 sekuntia, 60 ° C 30 s, ja 72 ° C 30 sekuntia, lopullinen 72 ° C: ssa laajennus 5 min, ja sitten säilytettiin 4 ° C: ssa loputtomiin. Tämän jälkeen PCR-tuotteet erotettiin 1,5% agaroosigeeleillä ja puhdistettiin käyttämällä QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Venlo, Alankomaat) ja lähetetään DNA-sekvenssianalyysi, että

K-ras

mutaatioita Shanghai Generay Biotech Co Ltd (Shanghai, Kiina).

tilastollinen

välinen yhteys

K-ras

mutaatioiden ja vaste Setuksimabihoitoa analysoitiin Fisherin tarkka testi. Kaplan-Meier käyrät ja Log-rank-testiä käytettiin analysoitaessa yhdistyksen välillä

K-ras

mutaatioiden ja kokonaiselinaika (OS) ja ilman taudin etenemistä (PFS) potilaista. Coxin suhteellinen vaara mallia käytettiin määrittämään liittyvien tekijöiden kokonaiselinaikaa. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Tässä tutkimuksessa käsittelimme yhteensä 87 metastasoitunutta kolorektaalisyöpää sairastavilla potilailla setuksimabia plus oksaliplatiinipohjaisen (55 potilasta) tai irinotekaania sisältävien (32 potilasta) solunsalpaajahoitoa 2-16 kuukautta. Kasvainkudoksessa alistettiin havaitsemiseen

K-ras

mutaatioita. Löysimme 27 potilasta, joilla on mutatoitunut

K-ras

ja yleinen

K-ras

mutaatio oli 31%. Yksityiskohtaiset Potilaan ominaisuudet esitetään taulukossa 1.

Potilaat villin tyypin

K-ras kasvain

oli parempi ORR ja DCR kuin potilailla, joilla on muuntunut

K -ras kasvain

eli DCR, 60% vs. 26% (χ

2 = 23,582, p 0,05), ORR, 42% vs. 11% (χ

2 = 24,669, p 0,05, taulukko 2), mikä osoittaa, että havaitseminen

K-ras

mutaatio voi ennustaa vastetta potilaiden setuksimabista plus kemoterapia. Niistä 32 tapauksesta sai irinotekaani, yhdeksässä tapauksessa oli

K-ras

mutaatio, kun taas joukossa 55 tapausta sai oksaliplatiini, 18 tapauksessa oli

K-ras

mutaation; kuitenkin, ei ollut merkittävää eroa

K-ras

mutaation välillä potilailla, jotka saivat irinotekaania saaneilla oksaliplatiinin (p 0,05, taulukko 3). Lisäksi Setuksimabihoitoa saaneilla potilailla ja irinotekaania kemoterapian oli parempi ORR ja DCR kuin Setuksimabihoitoa saaneilla potilailla plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa, eli DCR, 66% vs. 40% (χ

2 = 13,569, p 0,05, taulukko 3).

Lisäksi huomasimme, että keskimääräinen elinaika oli 21 kuukautta potilaille, joilla on villin tyypin

K-ras

, kun taas keskimääräinen elinaika oli 17 kuukautta potilailla, joilla on muuntunut

K-ras

. Tämä ero oli tilastollisesti merkitsevä (χ

2 = 5,703, P = 0,017; kuvio 1). Etenemisen elinaika oli 10 kuukautta potilailla, joilla on villin tyypin

K-ras

, kun taas ilman taudin etenemistä oli 6 kuukautta potilailla, joilla mutatoitunut

K-ras

. Tämä ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä.

Lisäksi Keskimääräinen elinaika oli 22 kuukautta Setuksimabihoitoa saaneilla potilailla ja irinotekaania kemoterapian, kun taas Keskimääräinen elinaika oli 18 kuukautta potilailla, joita hoidettiin Setuksimabihoitoa plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa ero oli tilastollisesti merkitsevä (χ

2 = 3,957 p = 0,047; Kuva 2). Sen jälkeen kun CT ja magneettikuvaus kuvantamisessa metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilasta sai setuksimabia plus irinotekaanin tai setuksimabi plus oksaliplatiinia kemoterapiaa ja neljä metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilasta kuvassa 3. Erityisesti tapauksessa 1, CR (täysin vaste) Potilasta hoidettiin neljä kierrosta setuksimabin plus irinotekaania kemoterapian. Tapaus 2 oli CR potilas käsiteltiin kolme sykliä setuksimabin plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa. Tapaus 3 oli PR (osittainen vaste) potilaalla, joka sai neljä sykliä Setuksimabin plus irinotekaania kemoterapian. Tapaus 4 oli myös PR potilas käsiteltiin neljä kierrosta setuksimabin plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa. Maksan painopiste katosi asiassa 1 ja 2, ja painopiste pieneni suuresti asiassa 3 ja 4. yhden muuttujan analyysi osoitti, että

K-ras

mutaatioiden ja hoidon valinta oli yhteydessä huonoon ennusteeseen CRC potilailla (

p

= 0,017 ja

p

= 0,047, tässä järjestyksessä), kun taas monimuuttuja-analyysi osoitti, että

K-ras

mutaatio, hoidon valinta, ja huono kasvain eriyttäminen olivat riippumattomia tekijöitä potilaiden selviytymiseen metastasoituneen kolorektaalisyövän (

p

= 0,004,

p

= 0,006 ja

p

= 0,015, vastaavasti, taulukko 4).

näitä potilaita hoidettiin irinotekaania sisältävien (n = 32) ja oksaliplatiinipohjaisen (n = 55).

Case 1 on CR potilas käsiteltiin neljä kierrosta setuksimabin plus irinotekaania sisältävien kemoterapiaa. Tapaus 2 on CR potilas käsiteltiin kolme sykliä setuksimabin plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa. Tapaus 3 on PR potilaalla, joka sai neljä sykliä Setuksimabin plus irinotekaania kemoterapian. Tapaus 4 on myös PR potilas käsiteltiin neljä kierrosta setuksimabin plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa. CR, täysin vastaus; PR, osittainen vaste.

Keskustelu

Nykyisessä tutkimuksessa havaitsimme

K-ras

mutaatioiden tuumorikudoksissa ennustaa vastetta Kiinan Metastasoivassa kolorektaalisyöpä setuksimabista plus oksaliplatiinia tai irinotekaania sisältävien kemoterapiaa. Olemme havainneet, että potilailla, joilla on villin tyypin

K-ras

jälkeen nämä hoidot oli parempi ORR ja DCR kuin potilailla, joilla on muuntunut

K-ras

(42% vs. 11% ja 60% vs. 26%: lla.) Lisäksi huomasimme, että mediaani elinaika potilailla, joilla on villin tyypin

K-ras

oli 21 kuukautta, kun 17 kuukautta potilailla, joilla on muuntunut

K-ras

(p = 0,017). Lisäksi mediaani elinaika potilailla, joita hoidettiin Setuksimabia plus irinotekaania kemoterapian oli 22 kuukautta verrattuna 18 kuukautta Setuksimabihoitoa saaneilla potilailla plus oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa (p = 0,047). Tämä tutkimus tukee havainto, että havaitseminen

K-ras

mutaatio on hyödyllinen ennustaja anti-EGFR-TK hoito metastaattisessa kolorektaalisyövässä. Edelleen tutkimus pitäisi tutkia taustalla molekyylitason mekanismi vastaa mutatoitunut

K-ras

etenemisessä kehittyneiden peräsuolen syövän.

Paksusuolisyöpä usein metastasizes maksaan, joka johtaa vaikeus kontrolloida sitä kliinisesti . Tutkimuksessamme oli 65 87 potilasta (74,7%), joilla oli etäpesäkkeitä maksassa, jonka jälkeen etäpesäke keuhkojen, munasarjojen, ja iho. Ilman progressiivinen käsittely, metastasoivaa tautia sairastavaa potilasta on erittäin huono ennuste [15]; Näin, edistysaskeleet metastasoituneen kolorektaalisyövän pelastaa ihmishenkiä ja parantaa potilaiden elämänlaatua. Tässä tutkimuksessa arvioimme

K-ras

mutaatioiden 87 metastasoitunutta kolorektaalisyöpää potilailla ennustaa vastetta potilaiden setuksimabista plus oksaliplatiinia tai irinotekaania sisältävien kemoterapiaa. Löysimme 27 potilaalla on mutatoitunut

K-ras

(31%), mikä oli yhdenmukaisia ​​Länsi CRC potilailla [16] ja Kiinan CRC potilaille [17]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että potilailla, joilla on villin tyypin

K-ras

oli parempi vaste Setuksimabihoitoa kuin ne, joilla on muuntunut

K-ras

[10,11]. Nykyisessä tutkimuksessa olemme myös vahvistaa nämä havainnot [10,11,18]. Molekyylitasolla, muut ei-tyrosiinikinaaseilla voi myös aktivoida EGFR signalointireitin, joka voisi selittää, miksi

K-ras

mutaatio on hyödyllinen, mutta ei täydellinen ennustamisessa vastustuskykyä setuksimabia. Lisäksi olemme tai muita, vain havaitut yleisimmät mutaatiot

K-ras

(eli eksoni kodonissa 12 ja 13), mutta muut

K-ras

voi myös olla rooli anti-EGFR-TK vastus. Lisäksi on syytä tutkia, onko alatyyppejä tai sivuston metastaattisen kolorektaalisyövän rooli vastauksena anti-EGFR-TK-hoidon, kuten setuksimabi.

Lisäksi nykyinen tutkimus yhdistettynä Setuksimabia oksaliplatiinia tai irinotekaania kemoterapian, joka voi myös vaikuttaa vaste potilailla. Ero osoitamme tässä tutkimuksessa voi johtua lääkkeen vuorovaikutusta setuksimabin ja irinotekaanin tai oksaliplatiini; Näin, lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään tätä kysymystä. Kuitenkin, Van Cutsem et ai. tutkittiin kemoterapiaa lopputulos K-

ras

Metastasoivassa kolorektaalisyöpä ja osoitti, että ei ollut merkittävää eroa ilman taudin etenemistä tai eloonjäämisaste potilaiden välillä, jotka saivat setuksimabia plus irinotekaanin, fluorourasiili, ja leukovoriinin (FOLFIRI) tai FOLFIRI yksin [19]. Siksi on mahdollista, että eri kemoterapiahoidon voivat johtaa erilaisiin hoitovasteita.

Aktivoidut K-ras-proteiini on vuorovaikutuksessa fosfatidyyli-3 kinaasi (PI3K) aktivoimiseksi sen loppupään efektoreja (esimerkiksi nisäkkään rapamysiinin kohde ) epäsuorasti moduloida solujen eloonjäämistä. Lisäksi kautta Braf /mitogeeniaktivoidut (MAPK) reitti, aktivoitu K-ras-proteiini vaikuttaa myös soluproliferaatiota [20]. Tähän mennessä on useita kohdistettujen hoitojen vastaan ​​EGFR signalointi on perustettu, ja setuksimabin on ihmisen /hiiren kimeerinen IgG1 monoklonaalinen vasta-aine, joka sitoutuu solunulkoiseen domeeniin EGFR ja estää EGFR-välitteistä signalointia, [21]. Tuore tutkimus osoitti, Setuksimabihoitoa oli tehokas villityypin

K-ras

ja EGFR Kiinan CRC potilaita, jossa säädettiin näyttöä tehon ennustamiseksi EGFR kohdistaminen hoitostrategioita [22,23].

kuitenkin paljon enemmän tarvitaan onnistuneen setuksimabihoito kehittyneiden CRC potilaiden klinikalla. Voisimme ensimmäinen arvioida

K-ras

mutaatioita valitsemaan potilaat oikeutettuja Setuksimabihoitoa ja sitten tutkia, miten mutatoitunut

K-ras

antagonisoi Setuksimabia tehoa tai ohittaa EGFR-TK esto. A novel lääkeyhdistelmä voi olla tarpeen estää aktiivisuus mutatoidun K-ras-proteiini.